Bu çalışma Körlük (RSB) Önlemek için NIH hibe 1R01EY022901, Research Kariyer Geliştirme Ödülü ile desteklenmiştir, CMReeves &amp; MA Reeves Vakfı, Körler E. Matilda Ziegler Vakfı, Tapınak Şövalyeleri Göz Vakfı ve Bölümü&#39;ne sınırsız hibe RSB Utah Üniversitesi Oftalmoloji. Biz el yazması üzerinde tartışmalar ve yorumlar için Spectralis Multi-Modality Görüntüleme Sistemi ve Tao Zhang teknik yardım için Balamurali Ambati teşekkür ederim.

1.. Araçların hazırlanması <ol><li> Prosedür, bir hayvan tesisinde bir prosedür odada gerçekleştirilir. </li><li> Deney başlamadan önce facemasks, saç bone, cerrahi önlük, steril ayak örtüleri, ve eldiven giyin. </li><li> Bir ocak üzerinde bir behere ~ 40 ° C ısı su. </li><li> Görüntüleme sırasında fare vücut ısısını korumak için daha sonra kullanılacak bir ısıtma yastığı üstüne steril bir mavi yastık yerleştirin. Isıtma pedi açın. </li><li> Görüntüleme Sistemi hazırlayın: <ol><li> Toz kapağını çıkartın ve lazer açın. </li><li> 55 ° lens dışarı atın ve makine üzerine monte. </li><li> Bilgisayar ve girdi yeni bir hastanın sayfanın altında görüntüleme için fare bilgiler (örn. genotip, yaş, vb.) Gelen görüntüleme yazılımını açın. &quot;Cihaz türü&quot; altında, Kızılötesi (IR) modunu seçin. </li></ol></li></ol> Not: Bu rapor edildiğini kullanım oBiz (temsilcisi sonuçlarını görmek, 1-4 Şekiller) harici lens kullanmadan IV-ISYA yüksek kaliteli görüntüler elde hiçbir sorun olmasına rağmen f Harici çift asferik lens görüntü kalitesini 17-20 artırabilir. 2. ISYA Kuyruk Ven Enjeksiyon <ol><li> 1% Tropikamid oftalmik solüsyonu ile fare gözleri dilate ve 5 dakika bekleyin. </li><li> Anestezi gerekli (Ketamin / Ksilazin / Acepromazine 65-100/10-20/1-3 mg / kg) miktarını belirlemek için, fare tartılır. </li><li> Bir 32 G iğne ile birlikte steril 1 ml şırınga al. Anestezi (13 mg / ml ketamin, 2.6 mg / ml Xylazine, steril PBS içinde 0.3 mg / ml Acepromazine) ile periton kesesi içine enjekte fare. Fare tamamen uyuşturulduktan kadar bekleyin (~ 5 dk). </li><li> Venin vazodilatasyona neden 40 ° C ılık suyun içine fare kuyruğu yerleştirin. </li><li> Bir 32 G iğne ile bir 1 ml şırınga al. IC istenilen miktarda geri çekG, tipik haliyle, bir 25 g fare (2 mg / kg) için, bir steril tüp içine, bir 0.2 uM şırınga filtresi ile filtre edilmiş, steril, 1 mg / ml ICG, 50 ul. Şırınga içine herhangi bir hava tanıtmak için dikkatli olun. </li><li> Enjekte edilecek bölgeyi sterilize etmek için bir alkollü bez ile silin kuyruk. </li><li> , Yanal kuyruk damarı yukarı doğru olacak şekilde, bir el ile kuyruk tutun. Yukarı bakacak şekilde iğnenin eğim ile, en az bir açı ile damar içine yaklaşık 2 mm iğne enjekte edilir. Ven delmek için dikkatli olun. Biraz şırınga geri çizin ve iğne başarıyla damar içine yerleştirilen olduğunu gösterir iğne hub, içine kan akımının izleri arayın. </li><li> Yavaş yavaş damar içine enjekte ICG. Enjekte ederken minimal direnç olmalıdır. İğneyi çıkarın ve herhangi bir kanamayı durdurmak için ~ 5-10 saniye enjeksiyon yerinde doğrudan bir alkol bez uygulayın. Fare görüntüleme için hazırdır. Erken faz (enjeksiyondan sonra 0-4 dakika) yakalamak amacıyla, bu esse olduğuhızlı görüntü fareyi ntial. </li></ol> Not: Fare gözler kolayca kuru alabilir ve anestezi altında katarakt gelişebilir. Bu işlem sırasında, steril PBS uygulayarak nemli göz tutmak önemlidir. ISYA Kayıttan önce steril pamuklu çubukla aşırı PBS silin. Diğer laboratuarları kornea 17-20 dehidratasyonu önlemek için bir kontakt lens kullandım. 3. ICG Anjiyografi <ol><li> Retina ve koroid tirajları maksimum parlaklık (0-4 dk) kadar görüntüleri koroid dolum erken faz yakalama izin verir ICG enjeksiyondan sonra 30-40 sn almaya başlar. Retinal damar iyi odak ~ 35-45 dioptri ve koroid damar 10-15 diyoptrilerinde görüntülenmiştir de görüntülenmiştir. Not: bir hayvan modelinin ilk inceleme sırasında, olası tüm abno tanımlamak için tüm açılardan (nazal, temporal, dorsal ve ventral) görüntüleri yakalamak için tavsiye edilirvaskülatürde rmalities. Erken dönemde, orta ve büyük koroid arterler ve venler hem de görüntülenmiştir. Bu protokolde kullanılan hayvan modelinde, koroid lezyonlar (örn. polipoidal dilatasyonlarında) erken fazına 1 dk görünmeye başlayabilir. </li><li> Damar üzerindeki görüntü odak ayarlayın. Parlaklık için Kontrol ve sırasıyla, kontrol modülü ve odak düğmesini kullanarak odaklanır. Bu değerler, ayarlanabilir sayısal olarak ve kolayca sabit tutulur. Aşağıdaki tekniği kullanılarak görüntü kalitesi tekrarlanabilir sağlamak için kamera lensi sabiti fare göz mesafe bırakın. Not: cihaz sadece görüntü, biz kamera lensi ve sürekli fare göz arasındaki odak, parlaklığı ve mesafe tutmak için posterior gözün bir kısmı deneyebilirsiniz beri görüntü farklı açılardan tüm posterior göz gibi. Bunun anahtarı vie alanı ile göz yoluyla ICG tarafından yayılan daire şeklindeki lüminesans hizalamak içinKameranın w. Tüm görüntü karanlık alanları vardır kadar bu, sol-sağ yaparak kamera pozisyonu yukarı ve aşağı, ve-ve-out ayarlamalar yapılır. Kameranın görüş alanında parlaklık ve dizilmiş zaman, lens için göz arasındaki mesafe kaliteli görüntüleme için optimal bir mesafede bir sonraki resim grubu hem de için tekrarlanabilir. </li><li> Damar odak sonra, satın alma modülü üzerinde yuvarlak siyah düğmeye basarak görüntü kareleri yakalamak. Yuvarlak siyah düğmesi de en iyi görüntü kalitesi için ICG sinyalini azaltmak veya artırmak için kullanılabilir. </li><li> Görüntü koroid lezyonların uygun görüş açısını ve odaklama derinliği belirler. Bu gözün konumunu, odaklama derinliği, ve tüm zaman-ders ISYA için sabit diğer cihaz ayarları tutmak için önemlidir. Görüntüler tespit modülüne dokunmatik ekran panelinde acquire düğmesine basarak kaydedilir. </li><li> 6-15 dk kıç orta fazda görüntüler eldeer enjeksiyon. Not: koroid ve retina damarları Hem daha az belirgin hale gelir. Koroid damar gibi yaygın floresan görünür. Hiperflöresansı sergileyen koroid lezyonlar normal bir arka plan floresan çevreleyen solma aksine ortaya. </li><li> Enjeksiyondan sonra 17-25 dk geç fazda görüntü kazanır. Not: hiperflöresansı kaybolur. Hem koroid ve retina damarları artık görünür. Optik sinir başı siyah olur. Hiperfloresan koroid lezyonlar solan arka plan ile maksimum kontrast var. </li><li> Görüntülerin satın bitirdikten sonra, fare gözleri açık bir yağ göz jeli uygulayın ve kurtarma için bir ısıtma pedi üzerinde fareyi bırakın. </li><li> Kafeslerinde tutarak alana fareler dönün. Daha fazla analiz için TIFF ya da JPEG dosyaları olarak dışa aktarın. </li></ol> Not: her bir faz zamanlaması kesin değildir. Bulduğumuz adet zamanlamasıch faz enjekte ICG miktarına bağlı olarak değişebilir. Daha ICG her aşamasını uzatmak için eğilimindedir. Bir faz tanımlamak için en iyi yol, yukarıda listelenen her fazın anahtar özelliklerine göre olduğunu.

<ol>
	<li>Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , (2002).</li><li>Alfaro, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , (2006).</li><li>Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+angiography:+a+perspective+on+use+in+the+clinical+setting.">Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting.</a> Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).</li><li>Destro, M., Puliafito, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+videoangiography+of+choroidal+neovascularization.">Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).</li><li>Scheider, A., Schroedel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+indocyanine+green+angiography+with+a+scanning+laser+ophthalmoscope.">High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).</li><li>Guyer, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+indocyanine-green+angiography+in+chorioretinal+disorders.">Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders.</a> Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).</li><li>Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+indocyanine+green+videoangiography+and+choroidal+neovascularization.">Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization.</a> Retina. 12, 191-223 (1992).</li><li>Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+angiography+and+occult+choroidal+neovascularization.">Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).</li><li>Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+subretinal+neovascular+membranes+with+indocyanine+green+and+an+infrared+scanning+laser+ophthalmoscope.">Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).</li><li>Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+occult+subretinal+neovascularization+in+age-related+macular+degeneration+by+infrared+scanning+laser+videoangiography.">Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography.</a> Retina. 13, 36-39 (1993).</li><li>Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy:+a+review.">Polypoidal choroidal vasculopathy: a review.</a> Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).</li><li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).</li><li>Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+videoangiography+of+idiopathic+polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Retina. 15, 100-110 (1995).</li><li>Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy,+diagnosis+and+management.">Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management.</a> Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).</li><li>Tsujikawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pigment+epithelial+detachment+in+polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).</li><li>Jones, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+multifunctional+serine+protease,+HTRA1,+in+retinal+pigment+epithelium+induces+polypoidal+choroidal+vasculopathy+in+mice.">Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).</li><li>Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+fundus+imaging+in+mouse+models+of+retinal+diseases.">Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases.</a> Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).</li><li>Seeliger, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+confocal+imaging+of+the+retina+in+animal+models+using+scanning+laser+ophthalmoscopy.">In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy.</a> Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).</li><li>Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).</li><li>Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+optical+coherence+tomography+for+in+vivo+mouse+retinal+imaging.">Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging.</a> J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).</li><li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).</li><li>Sasahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+with+choroidal+vascular+hyperpermeability.">Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability.</a> Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).</li><li>Silva, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+and+photodynamic+therapy+with+verteporfin.">Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).</li><li>Yannuzzi, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+masquerading+as+central+serous+chorioretinopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy.</a> Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).</li><li>Janssen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+vessel+formation+in+the+choroid+of+mice+lacking+tissue+inhibitor+of+metalloprotease-3.">Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).</li><li>Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathology+of+age-related+macular+degeneration.">Molecular pathology of age-related macular degeneration.</a> Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).</li><li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization.">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li><li>Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+age+related+macular+degeneration.">Animal models of age related macular degeneration.</a> Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).</li><li>Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+age-related+macular+degeneration.">Mouse models of age-related macular degeneration.</a> Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).</li></ol>

YF Bu çalışmada kullanılan AMD fare modeli ile ilgili iki patent bekleyen bir mucididir. SK, ZB, ve ADJ ifşa hiçbir şey yok.

Bu çalışmada, HTRA1 transgenik farelerde görüntü koroid lezyonlara ISYA kullanımını göstermiştir. Bizim fare modelinde erken, orta ve ISYA geç fazların özellikleri insan çalışmaları 1 &#39;de de zaman süreci neticesinde. Bu, AMD olarak koroid ile ilgili koşulların patofizyolojik mekanizmaları ve tedavi stratejileri ile ilgili araştırmalar için çok değerli olan insan patolojisi ve hayvan fenotipleri arasında daha iyi karşılaştırma yapmak önemlidir. İlk olarak IP enjeksiyonu ile farelerde ISYA gerçekleştirilir ve zamana bağlı muhtemelen karın vücut boşluğuna (Şekil 3) &#39;den boya ICG değişken emme, fare fare oldukça değişken olduğunu ortaya koymuştur. Bu zor IV enjeksiyon tarafından gerçekleştirilen insan çalışmalarla karşılaştırmak için yapar. Buna ek olarak, IV-ISYA farklı evreleri anjiyografik özellikleri hayvanda koroid lezyonlar farklı ayırt etmek için çok kullanışlıdır<html> modelleri. Çoğu kişi nedeniyle kuyruk ven enjeksiyon (fare kuyruğu damarlar küçük) yerine teknik meydan fareler için IV enjeksiyon (örneğin FA) önlemek için seçin. Ancak çaba de bu tekniğin tekrarlanabilir doğasını ve elde edilen bilgilerin miktarı dikkate harcanmaktadır. Biz kuyruk damarından enjeksiyon tekniği hakim sonra, diğer adımları IP-ISYA oldukça benzerdir. Bu bir şeyi çok kısa bir erken faz (0-4 dk) yakalamak için (örneğin Görüntüleme Sistemi) önceden hazırlanmış almak zorunda söz faydalıdır. Çeşitli HTRA1 transgenik fareler çalışmak için IV-ISYA genel IP-ISYA karşılaştırıldı. Biz her yöntem için ~ 100 fareler yaptık. Sonuç IV-ISYA koroid lezyonları karakterize etmek için IP-ISYA üstün olmasıdır. Zaman ders IV-ISYA AMD fare modellerini incelemek için standart uygulama haline gelmiştir. Aynı nedenle, biz araştırmacılar hayvan araştırmaları için IV-FA yerine düşünmelisiniz öneririz. t &quot;enjeksiyon rota dışında&gt;, biz pigment rengi de ISYA kalitesini etkilediğini fark ettim. Önceki çalışmalarda da bu rapor&quot; pigmentasyon etkisi &quot;18,25. Ancak, hiçbir bilgi farklı üzerindeki kat renk etkisi mevcuttur ISYA aşamaları. Biz zaman ders IV-ISYA ile pigmentli farelerde (C57BL6) ve albino farelerin (CD1) arasında ISYA karşılaştırıldı. küçük gemiler keskin içinde olan, C57BL6 farelerde görmek zor iken Big koroid damarları bulanık ve daha az net görünür orta safha da etkilenir rağmen CD1 farelerde hem büyük ve küçük koroid damarları (Şekil 4) çok keskin görüntüler için kontrast. büyük fark erken dönemde gözlendi. geç faz ISYA hiçbir büyük fark nedeniyle var koroidal damarlarda ICG sinyalinin solma. Görünüşe göre, ICG floresan kısmen pigmentli farelerde koroidinde RPE ve melanositler tarafından bloke edilebilir. bir öneri olarak, bir b düşünebilirsinizyüksek çözünürlüklü ISYA elde etmek CD1 plana onların AMD modellerini reeding. FA daha geniş AMD hayvan modellerinde kullanılmış olmasına rağmen, ISYA koroid damar anormalliklerin tespit edilmesi gereklidir. Gerçek zamanlı olarak yüksek çözünürlükte fare koroid damarsal gözlemlemek için yeteneği büyük ölçüde AMD fare modellerini karakterize ve histopatolojik verilerle ilişkilendirerek araştırmacılar yardımcı olabilir. ISYA, FA ve Ekim kombinasyonu insan hastalarda AMD tanısında AMD modellerin fenotipini karakterize son derece faydalı olacaktır. Fare şu anda AMD araştırma 26-29 için en yaygın olarak kullanılan hayvan modeli olduğu için, zaman ders IV-ISYA araştırma toplumda daha geniş bir rol oynayabilir.

İndosiyanin yeşili anjiyografi (ISYA) gözün kan damarları ile ilgili görüntü sorunlarına bir tanı testidir. Emisyon spektrumu 770-880 nm ila 835 nm, 1 de tepe emisyon aralıkları sırasında ICG&#39;nin emilme tayfı 790-805 nm arasında değişir. Bu olan spektrum görünür aralığında yer alır, diğer popüler boya sodyum floresan, farklıdır. Kızılötesi spektrumu kolayca sodyum floresein tabanlı floresein anjiografi (FA) tarafından görselleştirme engelleyebilirsiniz bütün bunlar retina pigment epiteli (RPE), serosanguinöz sıvısı ve lipid eksuda yoluyla nüfuz ICG sağlar. ICG koroid damar ve koroid lezyonların 1,2 gelişmiş görüntüleme sağlayan,% 98 proteine ​​bağlı daha az ekstravazasyonu ile sonuçlanan damar bulunmaktadır. ISYA neredeyse RPE posterior koroid damarlarını görselleştirmek için tek seçenektir. Şekil 1 fare gözlerinde görüntüleme damarsal ISYA ve FA karşılaştırmasını gösterir. FA bGörüntünün retinal damar sistemi kuyu değil, koroid damar kullanılan e. Bunun aksine, ISYA retinal ve koroid damar hem de görüntü için kullanılabilir. ISYA birlikte bu çalışmada kullanacağı kızılötesi hassas video kameralar, yüksek çözünürlüklü dijital görüntüleme sistemleri veya tarayıcı laser oftalmoskobun (SLO) ile gerçekleştirilir. Klinikte, ISYA Polipoidal Koroid Vaskülopati (PCV), Retina Anjiomatöz Yayılmasının (RAP), angioid çizgiler, vitelliform maküler distrofi, SSK&#39;sı, hemanjiomun, kanamalar retina dahil koroidal vaskulatürünü kapsayan koriyoretinal bozukluklar bir dizi teşhis tavsiye edilmiştir Arteriyollerde makroanevrizmaları, koroid tümörleri, posterior ve belirli biçimleri 1,3 üveit. FA ve optik koherens tomografi (OCT) ile ISYA kombinasyonu eksudatif yaşa bağlı maküler tanı ve tedavisinde klinisyenler için güçlü araçlar sağlardejenerasyon (AMD) 4-10. ISYA koroid ilgili koşulların teşhis edilmesi için özellikle yararlıdır. Aslında, ISYA PCV, eksudatif AMD 11-13 bir varyantını teşhisi için altın standart olarak kabul edilir. PCV koroid damar 11-13 terminal polipoidal dilatasyon ile damarların dallanma bir ağ ile karakterizedir. PCV sık sık kaçak ve polipoidal bileşenlerinden 11,14,15 gelen kanama ile RPE ve retinanın tekrarlayan serosanguinöz müfrezeleri ile ilişkilidir. Yakın zamanda transgenik fare retinal pigment epitel (RPE) 16, insan HTRA1, çok fonksiyonlu bir serin proteazı ifade ile birinci PCV hayvan modelinin üretilmesini bildirdi. Bu artan HTRA1 PCV karakteristik özelliklerine sahip, örneğin polipoidal lezyonlar uyardığını göstermiştir. İşte bizim HTRA1 fare modeli kullanılarak AMD araştırma kuyruk damar enjeksiyonu zaman ders ISYA kullanımını gösterdi. Bizim verilerimiz öneririzIV-ISYA IP (ya da deri altına (SC)) güncel koroid lezyonları karakterize etmek için 17,18 alanında kullanılan-ISYA üstündür. Hayvan Araştırma Bildirimi Hayvan deneyleri Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış protokollere göre yapılmıştır ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım ARVO Tablosuna uygun olarak yapıldı.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="667">
	<tbody>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:216px;">Spectralis Multi-Modality Imaging System</td>
			<td style="width:152px;">Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td style="width:132px;">SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tropicamide ophthalmic solution (1%)</td>
			<td style="width:152px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:132px;">NDC 24208-585-64</td>
			<td>for dilation of pupils</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GenTeal Gel</td>
			<td style="width:152px;">Genteal</td>
			<td style="width:132px;">NDC 58768-791-15</td>
			<td>&#160;clear lubricant eye gel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:152px;">Vedco Inc</td>
			<td style="width:132px;">NDC 50989-996-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:152px;">Lloyd Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">NADA 139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:152px;">Vedco Inc</td>
			<td style="width:132px;">NDC 50989-160-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">32-G Needle</td>
			<td>Steriject</td>
			<td style="width:132px;">PRE-32013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1-ml syringe</td>
			<td style="width:152px;">BD</td>
			<td style="width:132px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Indocyanine Green</td>
			<td style="width:152px;">Pfaltz &#38; Bauer</td>
			<td style="width:132px;">I01250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography

Indosiyanin Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) koroid ve böyle yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) gibi çeşitli göz hastalıkları retina damar anormallikleri teşhis etmek için göz doktorları tarafından yapılan bir tekniktir. ISYA nedeniyle kızıl ötesi spektrum ile pigmentli tabakası içinden nüfuz kabiliyeti gözün posterior koroid damar görüntüye özellikle yararlıdır. ISYA zaman ders erken, orta ve geç evreye ayrılabilir. Üç aşama göz problemleri patoloji hakkında değerli bilgiler sunmaktadır. Intravenöz zaman ders ISYA (IV) enjeksiyonu yaygın koroid sorunlarının tanı ve tedavisi için klinikte kullanılan rağmen, ISYA intraperitoneal enjeksiyon (IP) tarafından genellikle hayvan araştırmalarda kullanılmaktadır. Burada kuyruk ven enjeksiyon ve konfokal tarayıcı laser oftalmoskopla farelerde yüksek çözünürlüklü ISYA zaman ders görüntüler elde etmek için teknik göstermiştir. Biz koroid le görüntü için bu tekniği kullanılıryaşa bağlı makula dejenerasyonu olan bir fare modelinde lezyonlar. IP tarafından fare damarsal ICG tanıtmak için çok daha kolay olmasına rağmen, bizim veriler IP-ISYA tarafından tekrarlanabilir ISYA zaman ders görüntüler elde etmek zor olduğunu göstermektedir. Buna karşılık, kuyruk ven enjeksiyon yoluyla ISYA insan çalışmalarında karşılaştırılabilir yüksek kaliteli ISYA zaman ders görüntü sağlar. Buna ek olarak, pigmentli ISYA fareler üzerinde gerçekleştirilen daha koroid damarlarının daha net resimler verir albino fareler üzerinde gerçekleştirilen gösterdi. Biz o zaman-ders IV-ISYA hayvan modellerinde dayalı AMD araştırma standart bir uygulama haline gelmelidir öneririz.

Biz, CD1 arka plan üzerinde, her ikisi de, HTRA1 transgenik fareler ve kontrol litermatlarında WT ISYA zaman süreci gerçekleştirildi. Albino CD1 plan indosiyanin yeşil anjiyografi (ISYA) görüntüleme (tartışma) kolaylaştırmak için seçildi. Dilatasyon gibi bazı anevrizma HTRA1 fare erken dönemde ortaya çıkmaya başladı (Şekil 2, kırmızı bir ok bir geminin ucunda dilatasyon gösteren ve kırmızı bir daire, bir küme tipi polipoidal lezyon gösterir). Koroid damarlarının sırasında WT ve HTRA1 farelerde hem de açıkça görülebilir, bu boya ICG aşamasında dolum erken. Orta evrede, erken evrede hiperfloresan lezyonlar net oldu ve koroid damarları (sarı daireler daha lezyonların görünümünü gösterir) HTRA1 fare solmaya başladı ederken daha lezyonlar görünmeye başladı. Tüm gemiler plana uzakta soluk olarak geç dönemde, HTRA1 fare koroid lezyonlar daha &quot;farklı&quot; oldu. Optik sinir<html> baş WT ve HTRA1 farelerde (yeşil oklar) hem de karanlıktı. 1 üç aşamadan temel özellikleri, insan AMD hastalarda (;, orta safha, 5-15 dakika geç faz, 18-22 dakika erken evre, 0-3 dk) ISYA zamanla benzer. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig1.jpg" /> Şekil 1. Görüntüleme fare retina ve koroid damar FA ve ISYA karşılaştırılması. WT CD1 fareler IV-FA ve Multi-Modality Görüntüleme Sistemi kullanılarak IV-ISYA tarafından görüntülendi. Retinal kaplar FA ve ISYA hem de görülebilir. Koroid gemiler sadece ISYA görülebilir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . / 51061fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51061/51061fig2.jpg &quot;/&gt; Şekil 2. IV enjeksiyonu ile HTRA1 transgenik farelerin ISYA zaman akışı. Bir WT kontrolü ve bir HTRA1 transgenik fare (kuyruk damar enjeksiyonu ile) ISYA tarafından görüntülendi. Bir kırmızı ok bir geminin ucunda dilatasyon (tek polip) belirtir ve kırmızı bir daire ortaya çıkan bir küme tipi polipoidal lezyon gösterir Erken faz. Sarı çevreler orta aşamasında ortaya çeşitli lezyonlar gösterir. Green oklar WT ve HTRA1 farelerde hem de karanlık optik sinir başı işaret etmektedir. Polipoidal lezyonlar ISYA erken fazında ortaya çıkan ve insan çalışmalarında 21-24 gibi orta fazda daha belirgin hale unutmayın. Ayrık nokta lezyonlar orta aşamasında görünür ve (üç nokta lezyonları gösteren, örneğin büyük sarı daire) geç evrelerinde netleşecektir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig2highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p&gt; <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig3.jpg" /> IP enjeksiyonu ile HTRA1 transgenik farelerin Şekil 3,. ISYA zaman süreci. HTRA1 transgenik farenin, 12, 5 görüntülenmiş ve ICG&#39;nin IP enjeksiyonundan sonra 20 dakika edilmiştir. Iki panel satır görüntüleri iki farklı HTRA1 transgenik farelerden alınmıştır. Koroid damar enjeksiyonu (alt panellerde fare için 12 dk). Bile 5 dakika sonra çoğunlukla görünmez olduğuna dikkat <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig3highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig4.jpg" /> Şekil 4. Bir pigmentin ISYA zaman dersed (C57BL6) ve IV enjeksiyon yoluyla bir albino (CD1) fare. pigmentli ve albino fareler arasında koroid damar netlik farkı unutmayın. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig4highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography at JoVE.com

Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Kuyruk ven enjeksiyon yoluyla gerçekleştirilebilir Indocyanine Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) fare koroidinde anormallikleri karakterize kaliteli ISYA zaman ders görüntüler sağlar.

Zaman kurs Indocyanine Yeşil Anjiyografi ile Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Fare Modeli Koroid vaskülatürüne anormallikleri tespit

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

detecting-abnormalities-choroidal-vasculature-mouse-model-age-related

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Görüntüleme.  University of Utah Health Sciences Center.  Kuyruk ven enjeksiyon yoluyla gerçekleştirilebilir Indocyanine Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) fare koroidinde anormallikleri karakterize kaliteli ISYA zaman ders görüntüler sağlar. 

Video: Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Tıp

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events of myocardial injuries, various mouse models of myocarditis have been widely used. This study involved experimental autoimmune myocarditis (EAM) induced with cardiac myosin heavy chain (Myhc)-&#945; 334-352 in A/J mice; the affected animals develop lymphocytic myocarditis but with no apparent clinical signs. In this model, the utility of magnetic resonance microscopy (MRM) as a non-invasive modality to determine the cardiac structural and functional changes in animals immunized with Myhc-&#945; 334-352 is shown. EAM and healthy mice were imaged using a 9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore scanner equipped with a 4 cm millipede radio-frequency imaging probe and 100 G/cm triple axis gradients. Cardiac images were acquired from anesthetized animals using a gradient-echo-based cine pulse sequence, and the animals were monitored by respiration and pulse oximetry. The analysis revealed an increase in the thickness of the ventricular wall in EAM mice, with a corresponding decrease in the interior diameter of ventricles, when compared with healthy mice. The data suggest that morphological and functional changes in the inflamed hearts can be non-invasively monitored by MRM in live animals. In conclusion, MRM offers an advantage of assessing the progression and regression of myocardial injuries in diseases caused by infectious agents, as well as response to therapies.

This study demonstrates the successful establishment of magnetic resonance microscopy imaging as a non-invasive tool to assess the cardiac abnormalities in mice affected with autoimmune myocarditis. The data indicate that the technique can be used to monitor the disease-progression in live animals.

Fare Manyetik Rezonans Görüntüleme Mikroskopi tarafından Deneysel Otoimmün Miyokardit Kardiyak anormallikler noninvaziv değerlendirilmesi

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death processes that are generally assumed to be intrinsically irreversible. Promoting anastasis could in principle rescue or preserve injured cells that are difficult to replace such as cardiomyocytes or neurons, thereby facilitating tissue recovery. Conversely, suppressing anastasis in cancer cells, undergoing apoptosis after anti-cancer therapies, may ensure cancer cell death and reduce the chances of recurrence. However, these studies have been hampered by the lack of tools for tracking the fate of cells that undergo anastasis in live animals. The challenge is to identify the cells that have reversed the cell death process despite their morphologically normal appearance after recovery. To overcome this difficulty, we have developed Drosophila and mammalian CaspaseTracker biosensor systems that can identify and permanently track the anastatic cells in vitro or in vivo. Here, we present in vivo protocols for the generation and use of the CaspaseTracker dual biosensor system to detect and track anastasis in Drosophila melanogaster after transient exposure to cell death stimuli. While conventional biosensors and protocols can label cells actively undergoing apoptotic cell death, the CaspaseTracker biosensor can permanently label cells that have recovered after caspase activation - a hallmark of late-stage apoptosis, and simultaneously identify active apoptotic processes. This biosensor can also track the recovery of the cells that attempted other forms of cell death that directly or indirectly involved caspase activity. Therefore, this protocol enables us to continuously track the fate of these cells and their progeny, facilitating future studies of the biological functions, molecular mechanisms, physiological and pathological consequences, and therapeutic implications of anastasis. We also discuss the appropriate controls to distinguish cells that undergo anastasis from those that display non-apoptotic caspase activity in vivo.

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis is technically challenging to detect in vivo because the cells that have reversed the cell death process can be morphologically indistinguishable from normal healthy cells. Here we describe protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis in live animals by using our newly developed in vivo CaspaseTracker biosensor system.

Anastasis Vivo içinde CaspaseTracker Biyoalgılayıcı tarafından tespit

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death ...

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to microperimetry (MY) in eyes affected by dry Age-related Macular Degeneration (AMD) over time through the production and secretion of growth factors (GFs) on surrounding tissue. Patients were randomly assigned to each study group. All patients were diagnosed with dry AMD and with BCVA equal to or greater than 1 logarithm of the minimum angle of resolution (logMAR). A suprachoroidal autologous graft by Limoli Retinal Restoration Technique (LRRT) was carried out on group A, which included 11 eyes from 11 patients. The technique was performed by implanting adipocytes, adipose-derived stem cells obtained from the stromal vascular fraction, and platelets from platelet-rich plasma in the suprachoroidal space. Conversely, group B, including 14 eyes of 14 patients, was used as a control group. For each patient, diagnosis was verified by confocal scanning laser ophthalmoscope and spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT). In group A, BCVA improved by 0.581 to 0.504 at 90 days and to 0.376 logMAR at 180 days (+32.20%) postoperatively. Furthermore, MY test increased by 11.44 dB to 12.59 dB at 180 days. The different cell types grafted behind the choroid were able to ensure constant GF secretion in the choroidal flow. Consequently, the results indicate that visual acuity (VA) in the grafted group can increase more than in the control group after six months.

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

The goal of this study is to assess whether the suprachoroidal graft of adipose-derived stem cells included in the stromal vascular fraction and platelets derived from platelet-rich plasma by the Limoli Retinal Restoration Technique can improve visual acuity and retinal sensitivity responses in eyes affected by dry age-related macular degeneration.

Rejeneratif tedavisi ile Suprachoroidal hücre otogrefti içinde Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu: ön Vivo içinde rapor

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Evaluation of Capillary and Other Vessel Contribution to Macular Perfusion Density Measured with Optical Coherence Tomography Angiography

Parafoveal circulation of the superficial retinal capillary plexus is usually measured with vessel density, which determines the length of capillaries with circulation, and perfusion density, which calculates the percentage of the evaluated area that has circulation. Perfusion density also considers the circulation of vessels larger than capillaries, although the contribution of these vessels to the first is not usually evaluated. As both measurements are automatically generated by optical coherence tomography angiography devices, this paper proposes a method for estimating the contribution of vessels larger than capillaries by using a coefficient of determination between vessel and perfusion densities. This method can reveal a change in the proportion of perfusion density from vessels larger than capillaries, even when mean values do not differ. This change could reflect compensatory arterial vasodilatation as a response to capillary dropout in the initial stages of retinal vascular diseases before clinical retinopathy appears. The proposed method would allow the estimation of the changes in the composition of perfusion density without the need for other devices.

We describe the evaluation of a coefficient of determination between vessel and perfusion density of the parafoveal superficial capillary plexus to identify the contribution of vessels larger than capillaries to perfusion density.

Optik Koherens Tomografi Anjiyografi ile Ölçülen Maküler Perfüzyon Yoğunluğuna Kılcal ve Diğer Damar Katkılarının Değerlendirilmesi

Parafoveal circulation of the superficial retinal capillary plexus is usually measured with vessel density, which determines the length of capillaries ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...