Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Belirli fare doku işleme için fare histopatolojik analiz insan numuneler ile karşılaştırıldığında kalitesini azaltır. Burada, robot sistemleri işleme ve insan örnekleri katıştırma için rutin olarak kullanılan fizibilite göstermek için fare iltihaplı ve uninflamed kolon dokularında histopatolojik incelenmesi gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut.
İnsan hastalıkları anlayış hayvan modelleri çalışma sayesinde büyük ölçüde genişletti. Yine de, deneysel modeller histopatolojik değerlendirilmesi olarak insan örnekler için uygulanan sıkı olması gerekiyor. Nitekim, güvenilir ve doğru kararınızı eleştirel doku bölümü hazırlık kalitesi ile etkilenir. Burada, biz yordam, parafin gömmenin fare örnekleri ilk hazırlanması sırasında birkaç otomatik adımları uygular histopatolojik analiz fare dokuların bir protokol tanımlamak. Metodolojik değişkenler üzerinden titiz Protokolü standardizasyon otomatik yordamlar gelen azalma artan genel güvenilirliğini fare patolojik analiz için katkıda bulunur. Özellikle, bu iletişim kuralını otomatik işleme kullanımını açıklar ve robot sistemleri, gömme rutin olarak doku işleme ve parafin insan örnekleri katıştırma için fare bağırsak iltihabı örnekleri işlemek için kullanılan. Biz standart ve otomatik teknikleri getirilmesi fare dokuların histopatolojik muayene güvenilirliğini önemli ölçüde arttığını sonucuna.
Son yıllarda, insan hastalıkları1,2için önde gelen patojenik mekanizmaları incelemek için çeşitli modeller geliştirilmiştir. Bir hastalığın şiddetini değerlendirmek için araştırmacılar bir tedavinin etkisini değerlendirmek ve çalışma saytolojik ve histolojik mimari farklılıklar veya iltihap3miktarı. Bu modeller üzerinde gerçekleştirmek için detaylı histopatolojik analizler, fare ve insan örnekleri4,5kez karşılaştırma ihtiyaç vardır.
Ayrıca, insan örnekleri yaygın olarak işlenir ve histopatoloji çekirdek özellikleri tarafından attı ve histopatolojik kriterleri ve yöntemleri ile deneyimli insan patologlar standart. Bunun tersi olarak, fare dokular genellikle sabit, gömülü ve histopatolojik iletişim kurallarının sınırlı deneyimi olan araştırmacılar tarafından incelendi. Histopatolojik inceleme güvenilirliğini ve kalitesini yüksek kaliteli doku bölümleri hazırlanması ile başlar. Çeşitli faktörler eleştirel artmak ya da azalmak fiksasyon, makroskopik dahil olmak üzere son tahlilde kalitesini kesit, işleme, alkol gömme ve örnekleri6,7/ katıştırma için katkıda bulunur.
Manipülasyon örneği içeren bu pasajlar el ile hataları el ile gömme örnekleri de dahil olmak üzere ve daha az bir ölçüde, kesit ve boyama el ile microtome tabi tutulmaktadır. Şu anda, tüm fare doku hazırlık histolojik değerlendirme için Laboratuvar Laboratuvar farklı protokolleri ve el ile iletişim kuralları üzerinde dayanır. Bu çalışmanın amacı hatalar ve fare histopatolojik Muayene değişkenliği azaltmak için standart otomatik iletişim kuralları uygulamaktır.
Bilgimizi, burada ilk iletişim kuralları işleme ve fare dokuların histolojik değerlendirme için gömme tam otomatik dokusu için tanımlamak; Bunlar düzenli olarak insan numune analizleri için patoloji birimlerinde kullanılır. Yöntem fizibilite pratik bir örnek olarak, bağırsak iltihabı fare modeli, yani analiz edilmiştir, kronik kolit modeli tarafından neden yinelenen yönetim dextran sodyum sülfat (DSS) içme suyu8 ,9. DSS-tedavi hayvanlar Örneğin, kilo kaybı, gevşek dışkı veya ishal ve kolon gibi fibrozis kısalma bağırsak iltihabı belirtileri sergileyen bu yana bu deneysel ayarı yakından benzer insan iltihabi bağırsak hastalıkları (IBD)10 8,9,11. İnsan IBD hastalar için gözlemlediği gibi DSS tedavi karmaşık hastalık sahası oluşturur. Bu bağlamda, ayrıntılı histolojik değerlendirme doku mimari derin İLETİMLERİNİZE anlamak için gereklidir. Bu nedenle, örnek hazırlık kalitesini artırmak için açıklanan protokoller uygulanması histolojik yorumlanması güvenerek araştırmacılar yararlanabilir ve immunohistokimyasal için fare deneysel ayarları inceliyor. İnsan hastalıkları doku mimari değişiklikler içeren fare deneysel modelleri, hücresel doku sızmak ya da farklı doku ve organların (bağırsak, beyin, karaciğer, cilt) iltihabı varlığı artan kalitesini kullanabilirsiniz histopatolojik inceleme için örnek hazırlanması.
Hayvan yordamlar İtalyanca (auth 127/15, 27/13) Sağlık Bakanlığı tarafından kabul edildi ve onkoloji IACUC (kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi) Avrupa Enstitüsü ve hayvan bakımı kuralları takip
1. kronik kolit indüksiyon tekrarlayan DSS yönetim tarafından
2. fare doku fiksasyon
3. kolon kesit ve doku hazırlık
4. doku işleme
5. doku gömme
6. mikrometre kesit
7. Hematoksilen ve eozin (H & E) boyama
8. immunohistokimyasal boyama
İçme suyundaki DSS yinelenen yönetim tarafından indüklenen deneysel kronik kolit bağırsak iltihabı yakından benzeyen insan IBD8,9fare bir modeldir. Şekil 1 kısalma iki nokta üst üste (Şekil 1A), DSS kaynaklı inflamasyon varlığı ve pro-inflamatuar genlerin CXCL10 dahil olmak üzere kolon ifade puanı için yaygın olarak kullanılan parametre de dahil olmak üzere DSS tedavisinin etkileri açıklar , tnf ve mcp-1 (Şekil 1B). İnflamatuar hücre infiltrasyonu büyük ölçüde DSS tedavi, işe alım bağışıklık yanıtının gösteren bağırsak lamina propria içinde cytofluorimetry (Şekil 1 c) tarafından analiz gibi tarafından geliştirilmiş oldu.
Şekil 2 gösteriyor nasıl kolon dokularında kesitli ve odaklı kaset eklenmiş. Bu kasetler bir kılavuz doku ekleme dikey olarak ve uygun yönlendirmeyi ile yani izin haddelenmiş ipuçları ile, iç kısım ve duvar Lümen ile harici içerecek şekilde tasarlanmıştır (Şekil 2A, 2B, 2 C ). Kasetleri kapandıktan sonra doku yönlendirme ne geleneksel histolojik kaset (Şekil 2B) ile olur aksine ızgaralar tarafından korunur.
Doku işleme otomatik bir işlemci (Şekil 3A-3 M ve Tablo 1), gömme sırasında gerçekleştirilir müdahalede bir otomatik embedder ile (Şekil 4A-4 M ve Tablo 2). İkinci alet bir robot kasetleri toplar ve parafin doğru miktarda dağıtır. Son olarak, bir microtome kullanarak, bölümler parafin blokların kesilir. Slaytları sonra daha ayrıntılı bir çözümleme için hazırlanır.
Şekil 5 otomatik H & E (Şekil 5A-5E ve Tablo 3) boyama ana pasajlar açıklar ve nasıl slaytları H & E (Şekil 5F) boyama sonra görünür. Şekil 6 ve 7 nasıl otomatik işleme ve Gömme iletişim kurallarının uygulanması önemle fare kolon örneklerin histopatolojik analizleri kalitesini artırmak göster. Tedavi edilmemiş fareler (Şekil 6A) türetilmiş otomatik protokolleri ile hazırlanan örnekleri H & E stainings bu tedavi DSS fareler (Şekil 6B) karşılaştırıldı. Histopatolojik puanları değişik parametrelerle bağırsak mukoza inflamatuar dahil olmak üzere hücreleri infiltrasyon, epitelyal değişiklikler ve değişikliklerin açıklandığı gibi mukozal mimarisinin meydana gelen değişiklikler değerlendirerek değerlendirildi Tablo 4. Şekil 6C bir temsilcisi H & E bir kolon doku el işleme ve geleneksel kaset dahil boyama gösteriyor. Şekil 7' de, fare doku hazırlık ve otomatik aletler gerçekleştirilen katıştırma kalitesini Ayrıca IHC tarafından doğrulandı CD20 ve Mallory trichrome boyama8,9 kolon içinde boyama tedavi edilmemiş (Şekil 7A, 7 C) ve DSS tedavi (Şekil 7B, 7 D) fareler.
Şekil 8 bu yöntemin pratik alaka açıklar. Aynı iki nokta üst üste örnekleri işleme ve el ile veya otomatik yöntemlerle gömülü. Her örnek (her iki denetim veya DSS tedavi) 2 eşit parçaya kesin ve manuel veya otomatik yöntemleri ile paralel olarak işlenir. H & E boyama sonra gerçekleştirilen ve tam bir microscopical değerlendirme hitaben bütün patolojik parametreler ile ilgili değişiklikler mukozal mimarisi, taneciklik, bağışıklık hücre sızmak, mukozal kalınlığı, salgı rarefaction normalde yapıldı. bağırsak iltihabı sırasında gözlenen, her örnek, her ikisi belgili tanımlık elle yapılan için için değerlendirildi ve otomatik Protokolü (Şekil 8A ve Tablo 4). Otomatik Protokolü örnekleriyle hazırlanması sürekli olarak yüksek oranda histolojik parametreleri elle yapılan yöntem daha değerlendirilmesi izin. Ayrıca, farklı histolojik parametreleri ayrı bir analizini gerçekleştirildi (Şekil 8B). Mimari ve bazal infiltrat değerlendirme olumlu, özellikle tedavi edilmezse farelerde, otomatik yöntemi ile numune hazırlama tarafından etkilendi.
İşleme ve şu anda insan histopatolojik analiz için kullanılan katıştırma örnek için otomatik yöntemi başarıyla fare numuneler analiz için uygulanabilir. Yüksek kaliteli örnekler mimarisi değerlendirilmesi ve fare kolon dokuların bazal bağışıklık infiltrat el ile yöntemi üzerinde üstünlük gösterir otomatik yöntemi ile oluşturulur.
Şekil 1: kronik bağırsak iltihabı değerlendirme. (A)iki nokta üstüste uzunluk ölçüm. (B) kolon ifade genlerin pro-inflamatuar (cxcl10, tnf, mcp-1) DSS tedavi (Siyah barlar, n = 12) ve tedavi edilmezse fareler (beyaz barlar, n = 6). (C) Immunophenotyping kolon lamina propria ve hücreleri DSS tedavi (kapalı sembolleri, n = 12) ve tedavi edilmezse fareler (açık sembolleri, n = 6). CD11b + Ly6G + nötrofil, CD11b + F4 / 80 + makrofajlar (sol kapı aynası), CD4 + ve CD8 + T hücreleri (doğru kapı aynası) infiltrasyon denetimlerindeki (açık sembolleri, n = 10) ve fareler DSS tedavi (kapalı sembolleri, n = 10). İstatistiksel anlamlılık Wilcoxon eşleşen çiftleri ile imzalanan rütbe t testi hesaplanır. p ≤ 0,05 ** p ≤ 0,01. SEM bildirilen değer ± demek. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: numune hazırlama açıklaması. (A)bir dış kaset (beyaz) tarafından oluşan doku hazırlık ve resim odaklı kaset için aletleri gerekli ve iç kılavuzla kalıptan çekilmiş Yönlendirme ipuçları. (B, C) Fare iç ızgaralar kaset (B) önce iki nokta üst üste yerleştirilmesi ve Kılavuzlar (C) kapatılması sonra. Masası'nda B tasvir edilir (solda) odaklı kaset veya geleneksel kaset (sağda). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: otomatik işlem açıklaması. (A, B) işlemci otomatik. (C) simgesi erime sıcaklığı doğru parafin açıklayan. (D, E) Metal sepet (D) ve (E) kapatılması kasete ekleme. (F, G, H) İmbik metal sepete ekleme. (I, J, K) İşlem protokolü seçimi. Protokolü'nün (L) çalışan. İmbik sepet formunun (M) kaldırma. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: otomatik katıştırma açıklama . Otomatik embedder(a)resmi. (B, C) Ekleme rafa kaset. (D, E) (D) açılış ve kapanış kapağı (E). (F) sinyal bir raf varlığı makine için. (G, H) Raf giriş konut içine ekleme. (I, J) kapağı kapanışı. Gömme Protokolü (K) başlar. (L) çıkış konut kapak açılması. Çıkış konut raf formunun (M) kaldırma. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: otomatik H & E stainer açıklaması. (A)resim slayt tutucusunun. (B, C) Slayt tutucusunun içinde belgili tanımlık makine ekleme. (D) kapanış makine. Boyama Protokolü'nün (E) Başlat. (F) Exemplificative resmi bir slayttan sonra microtome kesme ve H & E boyama. Doğru kapı aynası, H & E örnek yönünü gösteren boyama. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6: H & E stainings kolon örnekleri formu tedavi edilmezse ve DSS tedavi fareler. H & E tedavi edilmemiş (A) ve DSS tedavi (B) örnekleri boyama hazırlanan (işlenen, gömülü, lekeli) ile (A, B) otomatik veya el ile (C) yöntemleri. Ölçek çubuğu = 100 nm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 7: Mallory trichrome (A, B) ve CD20 + hücreler (C, D), sızmak, IHC stainings tedavi edilmezse (A-C) ve (B, D) tedavi DSS fareler. Mallory boyama: mavi, kollajen, koyu pembe, çekirdek, koyu kırmızı, sitoplazma. Ölçek çubuğu = 100 nm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 8: el ile ve otomatik iletişim kuralları ile histopatolojik analizler arasında karşılaştırma. (A)toplam histopatolojik parametrelerinde değerlendirilebilir Kılavuzu (beyaz çubukları) veya otomatik yöntemi (mor çubuk) ile hazırlanan tüm bölümleri. (B) yüzdesi Kılavuzu (beyaz çubukları) veya tedavi edilmemiş (düz çubuk) veya DSS tedavi fareler (noktalı çubuk) otomatik yöntemi (mor çubuk) ile hazırlanan örneklerde belirtilen parametreler. İstatistiksel anlamlılık Wilcoxon eşleşen çiftleri ile imzalanan rütbe t testi hesaplanır. p < 0,05; p < 0.005. SEM bildirilen değer ± demek. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Reaktif | Süresi (dk) | sıcaklık (° C) | basınç |
NBF | 1 | RT | ortam |
Etanol %95 | 1 | RT | ortam |
Etanol %95 | 1 | RT | ortam |
Etanol %95 | 1 | RT | ortam |
Mutlak etanol | 1 | 45 | ortam |
Mutlak etanol | 11 | 45 | ortam |
Mutlak etanol | 30 | RT | ortam |
Ksilen | 1 | RT | ortam |
Ksilen | 1 | 45 | ortam |
Ksilen | 28 | 45 | ortam |
Parafin mumu | 5 | 65 | Vakum |
Tablo 1: otomatik doku işleme protokolü.
Her kaset için robot tarafından eylem perfomed |
Bir kaset rafa kaldırmak |
Kaset tanımlamak |
Kalıp ön ısı |
Üzerinde önceden ısıtılmış kalıp kaset yerleştirin |
Parafin kaseti için miktarı dağıtmak |
Kalıp serin |
Parafin kuvvetlendirmek izin |
Katılaşmış parafin blok kalıp kaldırma |
Engellemek için kalite sensörler mevcut |
Parafin blok çıkış kapı yerleştirin |
Tablo 2: iletişim kuralı gömme otomatik.
Kategori | Ölçüt | Tanımı | Puan değeri |
İnflamatuar hücre sızmak | Önem derecesi (lökosit yoğunluğu içinde sızmış lamina propria alanının hpf değerlendirilmesi) | Hiçbir sızmak | 0 |
En az akut (< % 10) | 0,25 | ||
Hafif kronik (% 10-25, dağınık nötrofil) | 0,5 | ||
Kronik (26-%50) orta | 0,75 | ||
İşaretli (> % 51, yoğun sızmak) | 1 | ||
Ölçüde (lökosit infiltrasyonu genişlemesi) | Mukozal | 0,5 | |
Mukozal ve submucosal | 0,75 | ||
Epitelyal değişiklikler | Hiperplazi (boyuna kriptalarının, crypt uzama görünür epitel hücre sayıları artış) | Hiçbir hiperplazi | 0 |
En az (< % 25) | 0,25 | ||
Hafif (26-%35) | 0,5 | ||
Orta (36-%50, mitoses crypt epitel üst üçüncü) | 0,75 | ||
İşaretli (> % 51, mitoses içinde crypt uzak epitel crypt temel üzerinden) | 1 | ||
Goblet hücre kaybı (goblet hücre sayıları temel goblet hücre sayıları crypt başına göre azalma) | Hiçbir kaybı | 0 | |
En az (< % 25) | 0,25 | ||
Hafif (26-%35) | 0,5 | ||
Orta (36-%50) | 0,75 | ||
İşaretli (> % 51) | 1 | ||
Mukozal mimarisi | Ülserasyon (epitel defekti muscolaris mucosae ulaşan) | Hiçbir ülser | 0 |
Ülser | 0,25 | ||
Granülasyon dokusu (bağ dokusu onarım ile yeni kılcal, hücreleri, infiltre tarafından çevrili alanlar hipertrofik) | Hiçbir granülasyon dokusu | 0 | |
Granülasyon dokusu | 0,25 | ||
Mukozal kalınlığı ve crypt derinliği | Hiçbir kalınlaşma | 0 | |
Kalınlaşma | 0,5 | ||
Salgı rarefaction | Yok rarefaction | 0 | |
Rarefaction | 0,5 | ||
Displazi | Displazi | 0 | |
Displazi | 0,5 | ||
MAX PUANI | 6 |
Tablo 3: Protokolü boyama otomatik.
Eylem perfomed her slayt için boyayıcı tarafından | Reaktif | zaman (s) | sıcaklık (° C) |
Essicate | 180 | 60 | |
Essicate | 180 | 60 | |
Deparaffinize | Ksilen | 120 | RT |
Deparaffinize | Ksilen | 120 | RT |
Hidrat | Etanol %96 | 120 | RT |
Hidrat | Etanol %96 | 120 | RT |
Yıkama | Distile wtaer | 240 | RT |
Leke hematoksilen | Carazzi'nın hematoksilen | 540 | RT |
Durulama | Musluk suyu | 360 | RT |
Eozin leke | Eozin Y % 1 aqueos çözüm | 60 | RT |
Durulama | Musluk suyu | 120 | RT |
Kurutmak | Etanol %96 | 20 | RT |
Kurutmak | Etanol %96 | 20 | RT |
Kurutmak | Mutlak etanol | 15 | RT |
Kurutmak | Mutlak etanol | 15 | RT |
Açık | Ksilen | 30 | RT |
Açık | Ksilen | 30 | RT |
Tablo 4: düzeni bağırsak iltihabı değerlendirme için Puanlama.
Histopatolojik analiz için fare doku hazırlanması sırasında farklı otomatik adımları kullanmak. Bu iletişim kuralı tekrarlanabilirlik ve böylece son histopatolojik değerlendirme genel kalitesini arttırmak tüm süreç standardizasyonu artırmak için teknik ipuçları sunmayı amaçlamaktadır. Biz otomatik aletler ve hazırlık ve rutin olarak insan örneklerin incelenmesi için patoloji çekirdek tesislerinde kullanılan dokuların katıştırma yöntemleri hayata.
Bu yöntemin potansiyel uygulanabilirliği göstermek için biz bağırsak iltihabı, DSS kaynaklı kronik kolit modeli olarak adlandırılan kronik fare deneysel ayarı seçti. Bu ayar kronik bağırsak iltihabı meydana gelen doku mimarisinin derin değişiklikler araştırmak için ayrıntılı histolojik değerlendirme gerektiren IBD hastalarda gözlenen karmaşık hastalık sahası benzer. Özet olarak, bu süreçlerin histolojik değerlendirme büyük ölçüde artan örnek hazırlama kaliteden yarar olabilir. Odaklı kaset olmadan bir lümen dokular için gerekli değildir o varlık notu için bu Protokolü (yani, dalağı, lenf bezleri, karaciğer, beyin), diğer fare doku ile tek fark uygulanır.
En önemli gözlem el ile hataları, azalma olduğunu (yani, örnek yönünü) verilen kaset Izgaralar ile kullanımı ve kaset (yaygın olarak el ile sırasında gerçekleştirilen bir adım gömmek için yeniden açılması kaldırılması iletişim kuralları), güçlü genel tekrarlanabilirlik Analizi gelişmiş. Deneyci odaklı kaset doku ekler, burada açıklanan protokol ile hazırlık, başlangıçta yalnızca örnek yönetilebilir. Bir kez kapalı, kasetleri asla, böylece doğru yönlendirmeyi bakım sağlanması ve el ile hataları3,11azaltarak tekrar hizmete vardır. Bu iki kritik adımı standardizasyon daha sonraki analizler tüm kalitesini arttırmak ve kayıp ya da değil değerlendirilebilir örnekleri, her ikisi de ve kaset yeniden açılması veya örnek3 yanlış yönünü bağlı sorunlar sayısı azaldı ,11.
Biz de çok sık deneysel bağırsak iltihabı, fare modellerinde otomatik protokolünün uygulaması tarafından hafife fibrozis (Şekil 7), gibi karmaşık bir biyolojik olay değerlendirilmesinde başarılı oldu. Protokol kurulumu sırasında biz kesinlikle biz doku değişiklikleri önlemek için 24 h'ü fark fiksasyon zamanı gibi teknik ayrıntılar standart. Böylece, sonraki immunohistokimyasal analizleri kalitesini korumak.
Otomatik yöntem ilişkilendirilmiş doku mimari, tedavi edilmemiş farelerde özellikle İLETİMLERİNİZE için bu parametrelerin değerlendirilmesi geliştirilmiş. Gerçekten de, sağlıklı bir muadili patolojik bir dokuyla doğru karşılaştırılması kritik deneysel model3son değerlendirme için önemlidir.
Doku işleme ile ilgili laboratuvarda olan otomatik işlemci çalıştırılmak üzere farklı protokolleri test ettik. Burada açıklanan protokol ses ve son derece tutarlı sonuçlar vermiştir. Biz de protokol için bir zaman uzunluğu hayata. Fare örnekleri insan küçük biopsic numuneler boyutunda karşılaştırılabilir yaşından beri bir daha kısa protokol antikorundan (Bu durumda bağırsak,) işlemek için yeterli doku. Son olarak, tüm otomatik işlemleri toplam deneysel zaman azaltılmış. Microtome kesme ve dilimleri hazırlık için işlem başlangıcından itibaren toplam zaman gerekli-5 h olduğunu hesaplanır. Aksine, operatör teknik yetenek bağlı olarak, aynı protokolleri tamamlanması el ile iki katından fazla miktarı saat, işlenmesi ve katıştırma özellikle sırasında gerektirebilir. Teknik bir sınırı otomatik işlemciler ve laboratuvarda olmak gerçekleştirilecek embedder gerektirmesidir.
Sonuç olarak, biz bu otomatik iletişim kurallarının uygulanması büyük ölçüde insan hastalıkları fare deneysel modelleri ile mücadele translasyonel araştırmacılar çalışmalarını iyileştirmek inanıyoruz.
Yazarlar ifşa gerek yok.
Biz IRCCS Policlinico hastane, Milan için teknik destek ve yardım için IEO hayvan tesisi patoloji bölümü Hayvancılık içinde teşekkür ederim.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Absolute Ethanol anhydrous | Carlo Erba | 414605 | reagent |
Absolute ETOH | Honeywell | 02860-1L | reagent |
Aluminium Potassium Sulfate | SIGMA | A6435 | reagent |
Aniline Blue | SIGMA | 415049 | reagent |
carbol Fuchsin | SIGMA | C4165 | reagent |
CD11b (clone M1/70) | TONBO biosciences | 35-0112-U100 | antibody |
CD20 IHC (clone SA275A11) | Biolegend | 150403 | antibody |
CD3 (17A2) | TONBO biosciences | 35-0032-U100 | antibody |
CD4 (GK1.5) | BD Biosciences | 552051 | antibody |
CD45.2 (clone 104) | BioLegend | 109837 | antibody |
CD8 (53-6.7) | BD Biosciences | 553031 | antibody |
Citrate Buffer pH 6 10x | SIGMA | C9999 | reagent |
Dab | Vector Laboratories | SK-4100 | reagent |
DPBS 1x | Microgem | L0615-500 | reagent |
DSS | TdB Consultancy | DB001 | reagent |
EDTA | SIGMA | E9884 | reagent |
EnVision Flex Peroxidase-Blocking Reagent | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex Substrate | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex/HRP | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex+ Rat Linker | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
Eosin | VWR | 1.09844 | reagent |
F4/80 (clone BM8) | BioLegend | 123108 | antibody |
Formalin | PanReac | 2,529,311,215 | reagent |
glacial acetic acid | SIGMA | 71251 | reagent |
Goat-anti-Rat-HRP | Agilent DAKO | P0448 | antibody |
Haematoxylin | DIAPATH | C0303 | reagent |
LEICA Rotary microtome (RM2255) | Leica | RM2255 | equipment |
Ly6g (clone 1A8) | BD Biosciences | 551459 | antibody |
Mercury II Oxide | SIGMA | 203793 | reagent |
Omnis Clearify Clearing Agent | DAKO | CACLEGAL | reagent |
Omnis EnVision Flex TRS | DAKO | GV80011-2 | reagent |
Orange G | SIGMA | O3756 | reagent |
Paraffin | Sakura | 7052 | reagent |
Peloris | LEICA | equipment | |
Percoll | SIGMA | P4937 | reagent |
RPMI 1640 without L-Glutamine | Microgem | L0501-500 | reagent |
STS020 | Leica | equipment | |
Tissue-Teck Paraform Sectionable Cassette | SAKURA | 7022 | equipment |
Tissue-Tek Automated paraffin embedder | Sakura | equipment | |
Xylene | J.T.Baker | 8080.1000 | reagent |
An erratum was issued for: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses. An author affiliation was updated.
The affiliation for Claudia Burrello and Federica Facciotti was updated from:
Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology
to:
Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır