Этот протокол обеспечивает простой и надежный метод автоматического измерения диаметра сосудов сетчатки у мышей, находящихся под наркозом из-за генных мутаций или заболеваний сетчатки. Главное преимущество данной методики заключается в том, что написанная на заказ программа MATLAB здесь практична, проста в использовании, удобна и надежна. Изменения диаметра сосудов сетчатки обычно происходят при дегенеративных заболеваниях, таких как РП и других сосудистых заболеваниях сетчатки.
Мышиные модели дают представление об эффективности лечения и его влиянии на сосуды сетчатки. Метод может быть потенциально полезен в качестве количественных клинических маркеров после прогрессирования сосудистых нарушений в глазу, а также для мониторинга потенциальных методов лечения. Для начала приготовьте шприц с рабочим раствором флуоресцеина и введите его внутрибрюшинно животному, находящемуся под наркозом, и нанесите каплю 2%-ного геля метилцеллюлозы на поверхность роговицы.
Затем поместите животное на ступень позиционирования системы визуализации. Расположите объектив камеры для визуализации сетчатки так, чтобы он прямо и мягко касался роговицы мыши, и слегка отрегулируйте выравнивание, чтобы поместить головку зрительного нерва в центр поля зрения. Затем переключитесь на зеленый флуоресцентный канал на камере глазного дна и сфокусируйтесь на сосудах сетчатки для получения изображений.
Сделайте снимки в желаемых временных точках после инъекции флуоресцеина, чтобы определить идеальную временную точку и визуализировать изображение флуоресцеина глазного дна. Для начала откройте программу MATLAB. Затем скачайте и сохраните диаметр глазного дна.
m. Затем откройте папку анализа изображений глазного дна и перетащите диаметр глазного дна. m в папку анализа.
Перетащите изображение FFA в папку анализа изображений. В программе MATLAB дважды кликните по файлу кода, чтобы активировать его. Выберите опцию Выполнить.
Появится всплывающее меню для выбора изображения. Выберите изображение, и на экране появится всплывающее меню для анализа параметров. Задайте параметры анализа во всплывающем меню и нажмите OK. Выделите центр диска зрительного нерва, а затем выберите край диска зрительного нерва.
Анализ будет выполняться в фоновом режиме, а результаты анализа появятся на экране. Таблица содержит значения среднего, стандартного отклонения и стандартной ошибки для каждого судна. Сохраните таблицу.
А затем сохраняем рисунок со средней заданной толщиной. Откройте папку анализа с сохраненными файлами, а затем откройте сохраненный рисунок. Откройте сохраненную таблицу, скопируйте значения и вставьте их в файл Excel.
После введения флуоресцеина были получены изображения от контрольной мыши и мыши MITFMI-VGA9/мутантной, для которых было измерено кратчайшее расстояние от центра диска зрительного нерва до конечных точек на сосудах по часовой стрелке. Средний диаметр сосуда был получен в зависимости от номера сосуда для мышей дикого типа и мутантных мышей. Наиболее важными вещами, о которых следует помнить, являются расположение камеры глазного дна и центрирование диска зрительного нерва на изображении глазного дна.
В дополнение к этому методу могут быть выполнены молекулярные методы для изучения новых лекарств, диагностики различных сосудистых состояний в глазу и лучшего понимания функционирования сосудистой сети сетчатки.
