Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder 1R01EY022901, o Prêmio de Desenvolvimento de Carreira de Investigação para Prevenir Cegueira (RPB), CMReeves &amp; MA Reeves Foundation, E. Matilda Ziegler Foundation for the Blind, Cavaleiros Templários Fundação Eye, e um donativo incondicional ao Departamento de Oftalmologia na Universidade de Utah do RPB. Agradecemos Balamurali Ambati para assistência técnica no Spectralis Multi-Modalidade Imaging System e Zhang Tao para discussões e comentários sobre o manuscrito.

1. Preparação de Instrumentos <ol><li> O procedimento é realizado numa sala de procedimentos numa instalação para animais. </li><li> Usar máscaras, gorros de cabelo, aventais cirúrgicos estéreis, pé-capas, luvas e antes de iniciar o experimento. </li><li> Aquecer a água numa proveta de ~ 40 ° C numa placa de aquecimento. </li><li> Colocar uma almofada azul estéril em cima de uma almofada de aquecimento que vai ser usado mais tarde para manter a temperatura do corpo do rato durante o exame. Ligue a almofada de aquecimento. </li><li> Prepare o Sistema de Imagem: <ol><li> Retire a tampa protetora contra poeira e ligar o laser. </li><li> Retire a lente de 55 ° e montá-lo na máquina. </li><li> Abra o software de imagem do computador e insira as informações do mouse para a imagem latente sob a folha de um novo paciente (por exemplo, genótipo, idade, etc.). Em &quot;Tipo de dispositivo&quot;, escolha o modo de infravermelho (IR). </li></ol></li></ol> Nota: Foi relatado que o uso of uma lente asférica dupla externa pode melhorar a qualidade de imagem 17-20 embora tenhamos nenhum problema na obtenção de imagens de alta qualidade pelo IV-AIV sem o uso de lentes externas (ver resultados representativos, Figuras 1-4). 2. Cauda Veia Injeção de AIV <ol><li> Dilatar rato olhos com 1% de solução oftálmica Tropicamida e esperar 5 min. </li><li> Pesar o mouse para determinar a quantidade de anestesia (ketamina / xilazina / acepromazina 65-100/10-20/1-3 mg / kg) necessário. </li><li> Recuperar uma seringa estéril de 1 ml, juntamente com uma agulha G 32. Injectar o rato por via intraperitoneal com os anestésicos (13 mg / ml de cetamina, 2,6 mg / ml de xilazina 0,3 mg / ml de acepromazina, em PBS estéril). Aguarde até que o mouse é totalmente anestesiado (~ 5 min). </li><li> Coloque a cauda do rato em 40 ° C de água quente para causar vasodilatação da veia. </li><li> Recuperar uma seringa de 1 ml com uma agulha G 32. Retirar a quantidade desejada de ICL, tipicamente 50 ul de 1 mg / mL de ICG, a qual é esterilizada por filtração com um filtro de seringa de 0,2 uM para um tubo estéril para um ratinho de 25 g (2 mg / kg). Tenha cuidado para não introduzir qualquer ar dentro da seringa. </li><li> Seque a cauda com um algodão embebido em álcool para esterilizar a área a ser injectado. </li><li> Segurar a cauda com uma mão, de modo que a veia lateral da cauda é ascendente. Com o bisel da agulha virada para cima, a agulha de injectar ~ 2 milímetros para dentro da veia com um ângulo mínimo. Tenha cuidado para não perfurar a veia. Retire-se a seringa ligeiramente e procurar vestígios de fluxo de sangue para dentro do cubo da agulha, o que indica que a agulha foi inserida dentro da veia com sucesso. </li><li> Lentamente injetar ICG na veia. Deve haver resistência mínima ao injetar. Retire a agulha e aplique uma compressa de álcool diretamente ao local da injeção para ~ 5-10 seg para evitar qualquer sangramento. O mouse está pronto para a imagem latente. No fim de pegar a primeira fase (0-4 min após a injeção), é ESSEntial a imagem com o mouse rapidamente. </li></ol> Nota: Mouse olhos podem facilmente ficar seca e pode desenvolver catarata sob anestesia. É importante manter o olho húmido através da aplicação de PBS estéril, durante o procedimento. Limpe o excesso de PBS com um cotonete estéril antes da gravação AIV. Outros laboratórios têm usado uma lente de contato para evitar a desidratação da córnea 17-20. 3. ICG Angiografia <ol><li> Comece a tirar fotos de 30-40 segundos após a injeção ICG, o que permite a captura da fase inicial de enchimento de coróide até circulações da retina e coróide são com brilho máximo (0-4 min). A vasculatura da retina é melhor visualizado em foco ~ 35-45 dioptrias e vasculatura coroidal é visualizado em 10-15 dioptrias. Nota: Durante o primeiro exame de um modelo animal, recomenda-se a captura de imagens de todos os ângulos (nasal, temporal dorsal e ventral) para identificar todos abno possívelrmalities na vasculatura. Durante a fase inicial, ambas as artérias e veias da coróide médias e grandes são bem visualizados. No modelo animal usado neste protocolo, as lesões da coróide (por exemplo polipoidal dilatações) podem começar a aparecer 1 min para a fase precoce. </li><li> Defina o foco da imagem na vasculatura. Controle de brilho e foco usando o módulo de controle e botão de foco, respectivamente. Estes valores são ajustáveis ​​digitalmente e são facilmente mantidos constantes. Mantenha a distância do olho do rato para a lente da câmara constante para assegurar uma qualidade de imagem é reprodutível utilizando a técnica que se segue. Nota: Uma vez que o dispositivo só pode uma imagem de parte do olho posterior, vamos tentar manter o foco, o brilho, ea distância entre a lente da câmera eo olho do rato constante à medida que a imagem inteira do olho posterior a partir de ângulos diferentes. A chave para isso é alinhar a luminescência em forma de círculo emitida pelo ICG através do olho com o campo de view da câmara. Isto é realizado, fazendo da esquerda para a direita, os ajustes para cima e para baixo, e em-e-para fora da posição da câmera até que a imagem inteira não tem áreas escuras. Quando o luminescência e do campo de visão da câmara estão alinhados, a distância do olho para a lente vai ser reprodutível para o próximo conjunto de imagens, bem como a uma distância óptima para a imagem de qualidade. </li><li> Uma vez que a vasculatura está em foco, capturar os quadros de imagem, premindo o botão preto redonda sobre o módulo de aquisição. O botão redondo preto também pode ser usado para reduzir ou aumentar o sinal de ICG para a melhor qualidade de imagem. </li><li> Determine o ângulo de visão ideal e profundidade de focagem para lesões coróide imagem. É importante manter a posição do olho, a profundidade de focagem, e outras configurações de dispositivos fixos de todo o curso de AIV-tempo. As imagens são salvas pressionando botão adquirir no painel da tela de toque do módulo de aquisição. </li><li> Adquirir imagens na fase intermediária de 6-15 min popainjeção er. Nota: Tanto a coróide e vasos da retina tornam-se menos distinta. Vasculatura coróide aparece fluorescência difusa. Lesões da coróide expositoras hiperfluorescência emergir em contraste com o desvanecimento circundante normal, a fluorescência de fundo. </li><li> Adquirir as imagens da fase tardia de 17-25 minutos após a injeção. Nota: hiperfluorescência desaparece. Ambos os vasos da coróide e da retina não são mais visíveis. A cabeça do nervo óptico torna-se preto. Lesões coróide hiperfluorescente tem contraste máximo com o fundo desaparecendo. </li><li> Depois de terminar a aquisição de imagens, aplicar um gel lubrificante ocular claro para rato olhos e deixar o mouse em uma almofada de aquecimento para a recuperação. </li><li> Retornar ratos para suas gaiolas e área de espera. Exportar imagens como arquivos TIFF ou JPEG, para posterior análise. </li></ol> Nota: O tempo de cada fase não é absoluta. Descobrimos que o tempo de eAfase ch pode mudar, dependendo da quantidade de ICG injetado. Mais ICG tende a prolongar a cada fase. A melhor maneira de definir uma fase é de acordo com as principais características de cada uma das fases acima.

<ol>
	<li>Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , (2002).</li><li>Alfaro, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , (2006).</li><li>Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+angiography:+a+perspective+on+use+in+the+clinical+setting.">Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting.</a> Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).</li><li>Destro, M., Puliafito, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+videoangiography+of+choroidal+neovascularization.">Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).</li><li>Scheider, A., Schroedel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+indocyanine+green+angiography+with+a+scanning+laser+ophthalmoscope.">High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).</li><li>Guyer, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+indocyanine-green+angiography+in+chorioretinal+disorders.">Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders.</a> Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).</li><li>Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+indocyanine+green+videoangiography+and+choroidal+neovascularization.">Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization.</a> Retina. 12, 191-223 (1992).</li><li>Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+angiography+and+occult+choroidal+neovascularization.">Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).</li><li>Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+subretinal+neovascular+membranes+with+indocyanine+green+and+an+infrared+scanning+laser+ophthalmoscope.">Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).</li><li>Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+occult+subretinal+neovascularization+in+age-related+macular+degeneration+by+infrared+scanning+laser+videoangiography.">Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography.</a> Retina. 13, 36-39 (1993).</li><li>Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy:+a+review.">Polypoidal choroidal vasculopathy: a review.</a> Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).</li><li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).</li><li>Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green+videoangiography+of+idiopathic+polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Retina. 15, 100-110 (1995).</li><li>Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy,+diagnosis+and+management.">Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management.</a> Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).</li><li>Tsujikawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pigment+epithelial+detachment+in+polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).</li><li>Jones, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+multifunctional+serine+protease,+HTRA1,+in+retinal+pigment+epithelium+induces+polypoidal+choroidal+vasculopathy+in+mice.">Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).</li><li>Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+fundus+imaging+in+mouse+models+of+retinal+diseases.">Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases.</a> Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).</li><li>Seeliger, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+confocal+imaging+of+the+retina+in+animal+models+using+scanning+laser+ophthalmoscopy.">In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy.</a> Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).</li><li>Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).</li><li>Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+optical+coherence+tomography+for+in+vivo+mouse+retinal+imaging.">Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging.</a> J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).</li><li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).</li><li>Sasahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+with+choroidal+vascular+hyperpermeability.">Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability.</a> Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).</li><li>Silva, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+and+photodynamic+therapy+with+verteporfin.">Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).</li><li>Yannuzzi, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polypoidal+choroidal+vasculopathy+masquerading+as+central+serous+chorioretinopathy.">Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy.</a> Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).</li><li>Janssen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+vessel+formation+in+the+choroid+of+mice+lacking+tissue+inhibitor+of+metalloprotease-3.">Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).</li><li>Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathology+of+age-related+macular+degeneration.">Molecular pathology of age-related macular degeneration.</a> Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).</li><li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization.">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li><li>Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+age+related+macular+degeneration.">Animal models of age related macular degeneration.</a> Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).</li><li>Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+age-related+macular+degeneration.">Mouse models of age-related macular degeneration.</a> Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).</li></ol>

YF é um inventor de duas patentes pendentes que são relevantes para o modelo do rato AMD utilizado neste trabalho. SK, ZB, e ADJ tem nada a revelar.

Neste estudo, demonstramos o uso de AIV a imagem lesões coróide em camundongos transgênicos HtrA1. As características do início, do meio e fases tardias da AIV no nosso modelo do rato corresponde ao longo do tempo bem em estudos humanos 1. Isso é importante para fazer melhores comparações entre patologia e animais fenótipos humanos, que são de valor inestimável para a pesquisa sobre mecanismos fisiopatológicos e estratégias de tratamento de condições relacionadas com a coróide como AMD. Primeiro, realizada AIV em ratinhos por injecção IP e descobriu que o curso de tempo foi altamente variável de ratinho de rato, provavelmente devido à absorção variável do marcador ICG da cavidade do corpo no abdómen (Figura 3). Isso torna difícil a comparação com estudos em humanos realizados por injeção IV. Além disso, as características angiográficas de diferentes fases de IV-AIV são muito úteis para a caracterização de diferentes tipos de lesões em animais coróide<html> modelos. A maioria das pessoas optam por evitar a injeção IV (por exemplo, em FA) para os ratos, devido ao desafio técnico de realização de injeção na veia da cauda (veias da cauda do rato são minúsculos). No entanto, o esforço é bem gasto, considerando a natureza reprodutível desta técnica e da quantidade de informações obtidas. Uma vez que domina a técnica de injeção na veia da cauda, ​​as outras etapas são bastante semelhante ao IP-AIV. Vale a pena mencionar que a pessoa tem que ter tudo preparado com antecedência (por exemplo, o Sistema de Imagem), a fim de capturar a fase inicial muito curto (0-4 min). Comparamos IP-AIV vs IV-AIV para estudar vários camundongos transgênicos HtrA1. Fizemos ~ 100 ratos para cada método. A conclusão é que a IV-AIV é superior a PI-AIV para caracterização das lesões na coróide. Curso-Time IV-AIV tornou-se nossa prática padrão para examinar modelos AMD do mouse. Pela mesma razão, sugerimos que os pesquisadores devem considerar a realização de IV-FA para a pesquisa animal. t &quot;&gt; Para além da rota injeção, percebemos que pigmento de cor também influencia a qualidade do AIV. Estudos anteriores também relataram esse&quot; efeito pigmentação &quot;18,25. No entanto, não há informações disponíveis sobre a influência da cor da pelagem em diferentes fases do AIV. Comparamos AIV entre ratos pigmentados (C57Bl6) e camundongos albinos (CD1) por curso de tempo IV-AIV. vasos da coróide Big aparecer difusa e menos clara, enquanto os pequenos vasos são difíceis de ver em ratos C57Bl6, que está em nítida contrastam com as imagens muito mais nítidas de grandes e pequenos vasos da coróide em camundongos CD1 (Figura 4). A maior diferença foi observada na fase inicial, embora a fase intermediária também é afetada. Não há grande diferença na AIV fase tardia devido a o desvanecimento do sinal ICG nos vasos da coróide. Aparentemente, ICG fluorescência pode ser parcialmente bloqueada pelo RPE e melanócitos na coróide em ratos pigmentados. Como sugestão, pode-se considerar breeding seus modelos da AMD para o fundo CD1 para obter alta resolução AIV. Apesar de FA é mais amplamente utilizado em modelos animais da AMD, AIV é essencial na detecção de anormalidades na vasculatura coróide. A capacidade de observar rato vasculatura coroidal em alta resolução em tempo real, pode ajudar muito os pesquisadores em caracterizar os modelos AMD de mouse e no relacionamento com os dados histopatológicos. A combinação de AIV, FA e outubro serão extremamente úteis para a caracterização do fenótipo de modelos AMD como no diagnóstico de AMD em pacientes humanos. Desde o mouse é atualmente o modelo animal mais utilizado para AMD pesquisa 26-29, curso de tempo IV-AIV pode desempenhar um papel mais amplo na comunidade de pesquisa.

Angiografia com indocianina verde (AIV) é um teste de diagnóstico para problemas de imagem relacionados aos vasos sanguíneos no olho. O espectro de absorção de ICG varia 790-805 nm, enquanto que o espectro de emissão varia 770-880 nm, com o pico de emissão a 835 nm 1. Isto é diferente do outro corante popular, fluoresceína de sódio, cujo espectro cai na gama do visível. O espectro de infravermelho permite ICG para penetrar através do epitélio pigmentar da retina (RPE), fluido serosanguinolento, e exsudados lipídicos, os quais podem bloquear facilmente visualização por angiografia de fluoresceina baseado em fluoresceína de sódio (FA). ICG é de 98% na vasculatura, resultando em menos extravasamento ligado à proteína, permitindo reforçada imagiologia de vasos coroidais e lesões coróide 1,2. AIV é quase a única opção de visualizar vasos da coróide, que é posterior ao RPE. Figura 1 mostra a comparação de AIV e FA na vasculatura imagem em rato olhos. FA pode be utilizado para a imagem do bem vasculatura retiniana mas não a vasculatura de coróide. Em contraste, AIV pode ser utilizado para a imagem da retina e tanto vasculatura coróide. AIV é realizada com sistemas de imagem digital de alta resolução ou oftalmoscópios de varredura a laser (SLO) em conjunto com câmeras de vídeo infravermelho-sensíveis, que usaremos neste estudo. Na clínica, AIV tem sido recomendado para o diagnóstico de uma série de distúrbios coriorretinianas envolvendo a vasculatura coroidal incluindo polipoidal coróide vasculopatia (PCV), Retinal angiomatoso Proliferação (RAP), estrias angióides, viteliforme distrofia macular, coriorretinopatia serosa central, hemangioma de coróide, hemorragia da retina macroaneurysms arteriolares, tumores da coróide, e certas formas de uveíte posterior 1,3. A combinação de AIV com FA e Tomografia de Coerência Óptica (OCT) fornecem ferramentas poderosas para os médicos no diagnóstico e tratamento de macular relacionada à idade exsudativadegeneração (AMD) 4-10. AIV é especialmente útil para o diagnóstico de condições que envolvem a coróide. Na verdade, AIV é considerada o padrão ouro para o diagnóstico de PCV, uma variante da DMRI exsudativa 11-13. PCV é caracterizada por uma rede de vasos de ramificação com dilatações polipoidal terminais na vasculatura coróide 11-13. PCV é freqüentemente associada com destacamentos serossanguinolenta recorrentes do EPR ​​e retina com vazamento e sangramento das componentes polipoidal 11,14,15. Recentemente, relataram a geração do primeiro modelo animal PCV por expressar transgenicamente HTRA1 humano, uma serina-protease multi-funcional, no rato epitélio pigmentado da retina (RPE) 16. Nós mostramos que o aumento HTRA1 induzida características do PCV, por exemplo, lesões polipoidal. Aqui demonstramos o uso do curso de tempo AIV por injeção na veia da cauda em pesquisa AMD usando o nosso modelo HTRA1 mouse. Nossos dados sugerem queIV-AIV é superior a IP (ou subcutânea (SC))-AIV que são actualmente usados ​​no campo de 17,18 para a caracterização de lesões na coróide. Declaração em Pesquisa Animal Experimentos em animais foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use (IACUC) e foram realizados de acordo com a Declaração de ARVO para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="667">
	<tbody>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:216px;">Spectralis Multi-Modality Imaging System</td>
			<td style="width:152px;">Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td style="width:132px;">SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tropicamide ophthalmic solution (1%)</td>
			<td style="width:152px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:132px;">NDC 24208-585-64</td>
			<td>for dilation of pupils</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GenTeal Gel</td>
			<td style="width:152px;">Genteal</td>
			<td style="width:132px;">NDC 58768-791-15</td>
			<td>&#160;clear lubricant eye gel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:152px;">Vedco Inc</td>
			<td style="width:132px;">NDC 50989-996-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:152px;">Lloyd Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">NADA 139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:152px;">Vedco Inc</td>
			<td style="width:132px;">NDC 50989-160-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">32-G Needle</td>
			<td>Steriject</td>
			<td style="width:132px;">PRE-32013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1-ml syringe</td>
			<td style="width:152px;">BD</td>
			<td style="width:132px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Indocyanine Green</td>
			<td style="width:152px;">Pfaltz &#38; Bauer</td>
			<td style="width:132px;">I01250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography

Indocianina Verde Angiografia (ou AIV) é uma técnica realizada por oftalmologistas para diagnosticar anormalidades da coróide e da retina vasculatura de várias doenças oculares, como a degeneração macular relacionada à idade (DMRI). AIV é especialmente útil para a imagem da vasculatura coróide posterior do olho, devido à sua capacidade de penetrar através da camada pigmentada com o seu espectro de infravermelho. Curso de tempo AIV pode ser dividido em início, meio e fases tardias. As três fases fornecer informações valiosas sobre a patologia de problemas oculares. Apesar de curso de tempo AIV por via intravenosa (IV) de injeção é amplamente utilizado na clínica para o diagnóstico e tratamento de problemas de coróide, AIV por injeção intraperitoneal (IP) é comumente utilizado em pesquisas com animais. Aqui demonstramos a técnica para obter imagens de alta resolução do curso em tempo AIV em ratos por injeção venosa cauda e confocal de varredura a laser oftalmoscopia. Usamos essa técnica para a imagem da coróide lesões em um modelo de mouse relacionadas com a idade degeneração macular. Embora seja muito mais fácil de introduzir ICG para a vasculatura do rato por IP, os nossos dados indicam que é difícil obter imagens reprodutíveis do curso tempo ICGA por IP-AIV. Em contraste, AIV via injeção na veia da cauda fornece imagens de alta qualidade ICGA curso em tempo comparáveis ​​aos estudos humanos. Além disso, mostramos que AIV realizado em camundongos albinos dá imagens mais nítidas de vasos da coróide do que aquela realizada em ratos pigmentados. Sugerimos que curso a tempo IV-AIV deve tornar-se uma prática padrão na pesquisa AMD com base em modelos animais.

Foi realizado curso de tempo AIV em camundongos transgênicos HtrA1 e ninhada WT de controle, sendo que ambos estão no fundo CD1. O fundo CD1 albino foi escolhida para facilitar a angiografia com indocianina verde (AIV) imagem (ver discussão). Alguns aneurisma como dilatações começaram a aparecer na fase inicial do rato HTRA1 (Figura 2, uma seta vermelha indica a dilatação na ponta de um navio e um círculo vermelho indica uma lesão polipoidal tipo cluster). Os vasos coróides são claramente visíveis em ambos os ratinhos WT e HtrA1 durante este início de preenchimento fase do corante de ICG. Na fase intermediária, as lesões hiperfluorescentes na fase inicial tornou-se mais clara e mais lesões começaram a aparecer, enquanto os vasos da coróide começou a desvanecer-se no rato HTRA1 (círculos amarelos indicam o aparecimento de mais lesões). Na fase final, as lesões coróide do mouse HTRA1 tornou-se mais &quot;diferente&quot;, como todos os vasos se desvaneceu em segundo plano. O nervo óptico<html> cabeça estava escuro, tanto WT e camundongos HtrA1 (setas verdes). As principais características das três fases são semelhantes aos do curso de tempo AIV em pacientes humanos AMD (fase inicial, 0-3 min; fase intermediária, 5-15 min; fase tardia, 18-22 min) 1. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig1.jpg" /> Figura 1. Comparação da FA e AIV em retina do rato imagem e vasculatura coroidal. Camundongos WT CD1 foram fotografadas pela IV-FA e IV-AIV usando um Imaging System Multi-Modalidade. Os vasos retinianos pode ser visto em ambas AF e AIV. Vasos da coróide só pode ser visto na AIV. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig1highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> . / 51061fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51061/51061fig2.jpg &quot;/&gt; Figura 2. AIV curso de tempo de HTRA1 ratinhos transgénicos através de injecção IV. Um controle WT e um mouse HTRA1 transgênico foram fotografadas pela AIV (com injeção veia da cauda). Uma seta vermelha indica a dilatação na ponta de um navio (único pólipo) e um círculo vermelho indica uma lesão polipoidal tipo cluster, que apareceu na fase inicial. Os círculos amarelos indicam várias lesões que apareceram na fase intermediária. As setas verdes apontam para a cabeça do nervo óptico escuro, tanto WT e camundongos HtrA1. Note-se que as lesões polipoidal aparecem na fase inicial de AIV e tornar-se mais distinta na fase intermediária como em estudos com seres humanos 21-24. Lesões de pontos discretos aparecem na fase intermediária e tornar-se claro nas últimas fases (por exemplo, o maior círculo amarelo indicando três lesões ponto). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig2highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> . </p&gt; <img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig3.jpg" /> Figura 3. AIV curso de tempo de HTRA1 ratinhos transgénicos por injecção IP. Ratinhos transgénicos HtrA1 foram fotografadas 5, 12, e 20 min após a injecção IP do ICG. As imagens das duas linhas do painel foram tomadas a partir de dois ratinhos transgénicos HTRA1 diferentes. Note-se que a vascularização da coróide é quase invisível até 5 minutos após a injeção (12 min para o mouse nos painéis inferiores). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig3highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> . <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51061/51061fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51061/51061fig4.jpg" /> Figura 4. AIV curso de tempo de um pigmentoed (C57Bl6) e um albino (CD1) do rato por injeção IV. Observe a diferença na claridade da vasculatura coroidal entre os pigmentados e os ratos albinos. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51061/51061fig4highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography at JoVE.com

Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Indocianina Verde Angiografia (ou AIV), realizado pela injeção veia da cauda fornece imagens de alta qualidade do curso tempo AIV para caracterizar anormalidades no rato coróide.

Detectar alterações no coróide Vasculature em um modelo do rato de Degeneração Macular relacionada com a Idade de-curso Tempo Indocianina Verde Angiografia

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

detecting-abnormalities-choroidal-vasculature-mouse-model-age-related

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K visualizações.  University of Utah Health Sciences Center.  Indocianina Verde Angiografia (ou AIV), realizado pela injeção veia da cauda fornece imagens de alta qualidade do curso tempo AIV para caracterizar anormalidades no rato coróide. 

Vídeo: Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Multi-fotão imagem de invasão das células tumorais em um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma epidermóide oral

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Medicina

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Avaliar as alterações teratogênicos em um modelo de Zebrafish de exposição fetal ao álcool

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events of myocardial injuries, various mouse models of myocarditis have been widely used. This study involved experimental autoimmune myocarditis (EAM) induced with cardiac myosin heavy chain (Myhc)-&#945; 334-352 in A/J mice; the affected animals develop lymphocytic myocarditis but with no apparent clinical signs. In this model, the utility of magnetic resonance microscopy (MRM) as a non-invasive modality to determine the cardiac structural and functional changes in animals immunized with Myhc-&#945; 334-352 is shown. EAM and healthy mice were imaged using a 9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore scanner equipped with a 4 cm millipede radio-frequency imaging probe and 100 G/cm triple axis gradients. Cardiac images were acquired from anesthetized animals using a gradient-echo-based cine pulse sequence, and the animals were monitored by respiration and pulse oximetry. The analysis revealed an increase in the thickness of the ventricular wall in EAM mice, with a corresponding decrease in the interior diameter of ventricles, when compared with healthy mice. The data suggest that morphological and functional changes in the inflamed hearts can be non-invasively monitored by MRM in live animals. In conclusion, MRM offers an advantage of assessing the progression and regression of myocardial injuries in diseases caused by infectious agents, as well as response to therapies.

This study demonstrates the successful establishment of magnetic resonance microscopy imaging as a non-invasive tool to assess the cardiac abnormalities in mice affected with autoimmune myocarditis. The data indicate that the technique can be used to monitor the disease-progression in live animals.

Avaliação não invasiva da Cardiac Anormalidades em Experimental Auto-imune Miocardite por Ressonância Magnética Microscopia de imagem no Rato

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

Um modelo de rato para induzida por laser coróide Neovascularização

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

O Modelo Monoiodoacetate da osteoartrite Dor no mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death processes that are generally assumed to be intrinsically irreversible. Promoting anastasis could in principle rescue or preserve injured cells that are difficult to replace such as cardiomyocytes or neurons, thereby facilitating tissue recovery. Conversely, suppressing anastasis in cancer cells, undergoing apoptosis after anti-cancer therapies, may ensure cancer cell death and reduce the chances of recurrence. However, these studies have been hampered by the lack of tools for tracking the fate of cells that undergo anastasis in live animals. The challenge is to identify the cells that have reversed the cell death process despite their morphologically normal appearance after recovery. To overcome this difficulty, we have developed Drosophila and mammalian CaspaseTracker biosensor systems that can identify and permanently track the anastatic cells in vitro or in vivo. Here, we present in vivo protocols for the generation and use of the CaspaseTracker dual biosensor system to detect and track anastasis in Drosophila melanogaster after transient exposure to cell death stimuli. While conventional biosensors and protocols can label cells actively undergoing apoptotic cell death, the CaspaseTracker biosensor can permanently label cells that have recovered after caspase activation - a hallmark of late-stage apoptosis, and simultaneously identify active apoptotic processes. This biosensor can also track the recovery of the cells that attempted other forms of cell death that directly or indirectly involved caspase activity. Therefore, this protocol enables us to continuously track the fate of these cells and their progeny, facilitating future studies of the biological functions, molecular mechanisms, physiological and pathological consequences, and therapeutic implications of anastasis. We also discuss the appropriate controls to distinguish cells that undergo anastasis from those that display non-apoptotic caspase activity in vivo.

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis is technically challenging to detect in vivo because the cells that have reversed the cell death process can be morphologically indistinguishable from normal healthy cells. Here we describe protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis in live animals by using our newly developed in vivo CaspaseTracker biosensor system.

Detecção de Anastasis na Vivo por CaspaseTracker Biosensor

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death ...

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to microperimetry (MY) in eyes affected by dry Age-related Macular Degeneration (AMD) over time through the production and secretion of growth factors (GFs) on surrounding tissue. Patients were randomly assigned to each study group. All patients were diagnosed with dry AMD and with BCVA equal to or greater than 1 logarithm of the minimum angle of resolution (logMAR). A suprachoroidal autologous graft by Limoli Retinal Restoration Technique (LRRT) was carried out on group A, which included 11 eyes from 11 patients. The technique was performed by implanting adipocytes, adipose-derived stem cells obtained from the stromal vascular fraction, and platelets from platelet-rich plasma in the suprachoroidal space. Conversely, group B, including 14 eyes of 14 patients, was used as a control group. For each patient, diagnosis was verified by confocal scanning laser ophthalmoscope and spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT). In group A, BCVA improved by 0.581 to 0.504 at 90 days and to 0.376 logMAR at 180 days (+32.20%) postoperatively. Furthermore, MY test increased by 11.44 dB to 12.59 dB at 180 days. The different cell types grafted behind the choroid were able to ensure constant GF secretion in the choroidal flow. Consequently, the results indicate that visual acuity (VA) in the grafted group can increase more than in the control group after six months.

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

The goal of this study is to assess whether the suprachoroidal graft of adipose-derived stem cells included in the stromal vascular fraction and platelets derived from platelet-rich plasma by the Limoli Retinal Restoration Technique can improve visual acuity and retinal sensitivity responses in eyes affected by dry age-related macular degeneration.

Terapia regenerativa pela célula Suprachoroidal Autograft em seco Degeneration Macular Age-related: relatório preliminar na Vivo

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Evaluation of Capillary and Other Vessel Contribution to Macular Perfusion Density Measured with Optical Coherence Tomography Angiography

Parafoveal circulation of the superficial retinal capillary plexus is usually measured with vessel density, which determines the length of capillaries with circulation, and perfusion density, which calculates the percentage of the evaluated area that has circulation. Perfusion density also considers the circulation of vessels larger than capillaries, although the contribution of these vessels to the first is not usually evaluated. As both measurements are automatically generated by optical coherence tomography angiography devices, this paper proposes a method for estimating the contribution of vessels larger than capillaries by using a coefficient of determination between vessel and perfusion densities. This method can reveal a change in the proportion of perfusion density from vessels larger than capillaries, even when mean values do not differ. This change could reflect compensatory arterial vasodilatation as a response to capillary dropout in the initial stages of retinal vascular diseases before clinical retinopathy appears. The proposed method would allow the estimation of the changes in the composition of perfusion density without the need for other devices.

We describe the evaluation of a coefficient of determination between vessel and perfusion density of the parafoveal superficial capillary plexus to identify the contribution of vessels larger than capillaries to perfusion density.

Avaliação da Contribuição Capilar e Outras Embarcações para Densidade de Perfusão Macular Medida com Angiografia de Coerência Óptica

Parafoveal circulation of the superficial retinal capillary plexus is usually measured with vessel density, which determines the length of capillaries ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Um modelo de rato BALB/c neonatal de Enterocolite Necrotizante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...