실험용 쥐의 우유 샘플링을 위한 효율적인 1인 기법

이 연구는 수유 연구, 특히 생쥐에서 우유 샘플링 기술을 개선하는 데 중점을 둡니다. 우리는 샘플 손실, 제한된 부피 및 노동 집약적인 프로세스와 같은 문제를 극복하는 방법을 제시하여 설치류 우유 수집을 위한 간소화된 솔루션과 해당 분야의 연구자를 위한 유용한 도구를 제공합니다. 생쥐를 대상으로 연구를 수행할 때 가장 큰 어려움 중 하나는 특히 우유와 같은 생체 유체를 샘플링할 때 생쥐의 크기가 작다는 것입니다.

샘플을 풀링하거나 두 사람이 수동으로 수집하지 않고는 충분한 양을 얻기 어렵기 때문에 많은 경우 프로세스가 실용적이지 않습니다. 당사의 프로토콜은 한 사람이 쉽게 구할 수 있는 실험실 도구를 사용하여 10분 이내에 충분한 양을 수집할 수 있도록 하여 모유 수집을 단순화합니다. 다른 방법과 달리 지속적인 흡입으로 시료 손실을 최소화하고, 우유를 수집 튜브로 직접 끌어당겨 시간을 절약하고, 분석을 위한 부피를 보존합니다.

시작하려면 5/32인치 내경 PVC 튜브의 한쪽 끝을 진공 펌프에 연결하고 테이프로 부착물을 고정합니다. 가시가 있는 직선 커넥터를 사용하여 5/32인치 내경 PVC 튜브의 다른 쪽 끝을 1/8인치 내경 PVC 튜브에 연결합니다. 그런 다음 커넥터를 사용하여 1/8인치 내경 PVC 튜브의 다른 쪽 끝을 18게이지 피하 주사 바늘에 연결합니다.

가위를 사용하여 P200 피펫 팁의 끝을 약 0.2cm 잘라 더 큰 구멍을 만듭니다. 팁이 위쪽을 향하도록 수정된 P200 피펫 팁을 셉텀 스토퍼의 입구를 통해 삽입하고 셉텀 스토퍼를 멸균 수집 튜브에 부착합니다. 18게이지 피하 주사 바늘을 사용하여 중격 마개에 구멍을 뚫습니다.

이제 진공 펌프를 켜서 피펫 팁 개구부에 장갑을 낀 손가락을 올려 흡입 압력을 확인하십시오.착유하는 날에는 댐을 새끼와 분리하여 땀샘에 모유가 축적될 수 있도록 합니다. 둥지에서 새끼들을 따뜻하게 유지하십시오. 댐을 마취한 후 댐의 발을 단단히 쥐어 동물의 감각과 고통에 대한 인식을 평가합니다.

그런 다음 마취 상태에서 건조를 방지하기 위해 댐의 눈에 수의학 안과 연고를 바르십시오. 마취된 댐을 단단한 작업 표면에 그녀의 등에 놓습니다. 멸균 알코올 준비 물티슈로 댐의 유방 부분을 부드럽게 청소하십시오.

주사를 맞지 않은 복막강 측면에 있는 네 번째와 다섯 번째 젖꼭지 사이에 1-2단위의 옥시토신을 복강내로 투여합니다. 주로 사용하지 않는 손으로 댐의 목 부분을 부드럽게 긁습니다. 그런 다음 우유 구슬이 보일 때까지 젖꼭지 바닥에서 젖꼭지 끝까지 유방 조직을 짜냅니다.

전원 버튼을 눌러 진공 장치를 켭니다. 착유를 시작하려면 거꾸로 된 P200 피펫 팁을 젖꼭지에 부드럽게 바르고 부드럽게 당기는 동작을 사용하여 우유를 끌어냅니다. 충분한 양의 우유가 수집될 때까지 모든 젖꼭지에 우유를 짜십시오.

그 후, 마취된 댐을 케이지로 되돌려 놓고 마취 회복 기간 동안 따뜻하게 유지되도록 합니다. 0.1-0.5 밀리리터의 우유를 각 댐에서 10분 이내에 편안하게 수집할 수 있습니다. 유지방 농도는 출산 후 둘째 날 리터당 174.4g에서 출산 후 10일차 리터당 224.4g으로 크게 증가했습니다.

유당과 총 단백질 농도는 출산 후 2일차와 출산 후 10일차 사이에 유의한 차이를 보이지 않았다. 알파-S1-카제인과 유청 산성 단백질의 상대적 풍부도는 출산 후 2일차 우유에 비해 출산 후 10일차 우유에서 더 높았으며, 베타 카제인은 출산 후 10일차 우유보다 출산 후 2일차 우유에서 더 풍부했습니다. 전기영동 겔의 단백질 밴드 강도는 개별 우유 단백질의 상대적 풍부도의 차이를 시각적으로 확인했습니다.