α-Synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법

파킨슨병은 알파 시누클레인 응집체의 프리온과 같은 증식을 통해 진행되고 진행되도록 제안되었습니다. 이번 연구에서는 파킨슨병의 후각구에서 알파 시누클레인 병리학의 기원을 연관시키려고 노력하고 있습니다. 최근에, 알파 synuclein 병리학은 더 큰 시냅스의 후각 전구 또는 등쪽 핵에서 출발 prion과 같은 방식으로 전파하는 것으로 믿어졌습니다.

후각구의 기원 알파 시누클레인 응집체는 불분명하지만, 최근 연구는 후각 점막에서 번식할 수 있음을 시사합니다. 우리는 쥐 모형에 있는 알파 synuclein 응집체의 다른 투여로 후각 전구에 있는 알파 synuclein 병리학을 유도했다. 이 간단한 방법은 수술 기법 없이 후각 점막에서 후각구까지 알파 시누클레인 전파를 평가하는 또 다른 방법을 제공합니다.

알파 synuclein 응집체의 비강 내 투여는 매우 간단하고 간단한 방법입니다. 시작하려면 일회용 장갑, 마스크, 안전 고블과 같은 개인 보호 장비를 착용하십시오. PBS에 있는 쥐 알파 synuclein 섬유 해결책을 밀리리터 당 4 밀리그램의 농도로 준비하고, 오염을 방지하기 위하여 투명한 필름으로 관을 감쌉니다.

그런 다음 초음파 발생기의 초음파 욕조에 물을 채우고 얼음 조각을 넣어 섭씨 4도까지 식히십시오. 200마이크로리터의 피브릴 용액을 초음파 처리하여 5분 동안 알파 시누클레인 프리포밍 피브릴을 생성합니다. 마취된 마우스를 종이 타월 위에 누운 자세로 놓고 머리를 약간 아래로 기울입니다.

다음으로, 밀리리터당 4밀리그램 알파 시누클레인 용액 1마이크로리터를 P10 피펫에 넣고 피펫 팁을 마우스의 코 근처에 놓아 피펫 팁 끝에 둥근 방울을 형성합니다. 이제 편측 콧구멍에 용액을 비강 내로 투여합니다. 마우스가 용액을 자연스럽게 흡입할 때까지 30초에서 1분 동안 기다립니다.

20마이크로리터의 알파 시누클레인이 투여될 때까지 이 과정을 반복합니다. 알파 synuclein 투여 후에, 해결책으로 어떠한 오염라도 생기는 경우에 상업적인 세제를 가진 벤치를 청소하고 장갑을 버리고, 그 후에 회복을 촉진하기 위하여 복강내 주입에 의해 킬로그램 당 3 밀리그램에 atipamezole를 투여하십시오. 완전히 회복된 후 마우스를 케이지로 되돌립니다.

시작하려면 알파 시누클레인 프리폼 피브릴을 마우스에 비강 내 투여합니다. 쥐를 안락사시킨 후 메스로 두피를 2cm 절개합니다. 가위를 사용하여 두개골 뼈를 기저부에서 코까지 옆으로 절개합니다.

후각구를 얻으려면 후각구를 덮고 있는 두개골 뼈를 완전히 제거한 다음 머리를 뒤집어 뇌 신경을 절단해야 합니다. 집게로 조심스럽게 뇌를 제거하고 후각구는 손상되지 않도록 합니다. 구근을 보존하려면 두개골 뼈에 붙어 있는 후각 신경을 조심스럽게 잘라냅니다.

뇌 샘플을 PBS에서 준비된 4%파라폼 알데히드에 넣고 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 보관합니다. 알파 시누클레인 병리학은 3개월에서 1개월 후에 치료된 측의 후각구에서 관찰되지 않았지만, 6개월과 12개월 후에 치료된 측의 사구체에서 루이 뉴라이트와 같은 P 알파 시누클레인 응집체가 관찰되었습니다. 이러한 응집체는 대조측의 전구에는 없었습니다.

Lewy neurite-like alpha synuclein 응집체의 수는 12개월 동안 처리된 측의 후각구에서 크게 증가한 반면, 대조군 측에는 이러한 응집체가 거의 없었습니다.