이 절차의 전반적인 목표는 myelin oligodendrocyte 당단백질에 대하여 하위 임상 면역을 사용하여 쥐 모형에 있는 두 대뇌 반구의 피질의 광범위하게 탈모를 생성하는 것입니다, 이식한 카테터를 통해 사이토카인의 관심 대뇌 주입 에 선행. 이 방법은 다발성 경화증과 같은 뇌의 염증 성 탈근 질환의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 백색 물질 플러그로 이끌어 내지 않고 두 대뇌 반구의 피질에서 염증 유도 된 회색 물질 탈근을 생성 할 수 있다는 것입니다.
이 기술의 의미는 다발성 경화증의 진보적인 모형에서 주로 관찰되는 피질 탈근의 기계장치의 더 나은 이해로 확장합니다. 이 절차를 시작하려면 카테터와 카테터 캡을 입구로 조립합니다. 다음으로 카테터를 메스로 2밀리미터 길이로 자른다.
그런 다음 전기 면도기를 사용하여 귀 사이에 마취 된 쥐의 머리를 면도합니다. 쥐를 스테레오전술 프레임에 놓고 이어 바와 물린 접시를 사용하여 머리를 고정합니다. 머리가 수평인지 확인하고 손가락이나 집게로 압력을 가하여 안정성을 확인하십시오.
그 후, 윤활 점안액을 적용하여 수술 중 각막 건조를 방지하고 불투명한 재료로 눈을 가려 수술용 광 노출을 방지합니다. 다음으로, 70%에탄올과 10%의 포비도요오드 단지의 적용을 번갈아 가며 면도 영역을 청소한다. 카테터를 이식하려면 중간선을 따라 약 2센티미터 길이의 세로 절개를 합니다.
그런 다음 불독 클램프를 사용하여 피부를 옆으로 잡습니다. 면 팁 어플리케이터를 사용하여 혈액을 제거합니다. 그 후, 음막염을 제거하고 면 팁 어플리케이터로 조직을 청소하고 두개골을 노출시키고 약 1 분 동안 건조시키십시오.
다음으로 해부학적 랜드마크, 람다, 브레그마 및 내측 봉합사를 식별합니다. 드릴이 스테레오테틱 프레임에 설치되면 드릴 비트의 끝을 브레그마의 시작점으로 배치합니다. 브레그마에서 2밀리미터 후방을 이동하고, 2.4밀리미터를 후면으로 내측 봉합사로 옮습니다.
그런 다음, 이 위치에서 카테터에 대해 0.5 밀리미터 직경의 구멍을 뚫습니다. 첫 번째 구멍에서 몇 밀리미터 떨어진 곳에 앵커 나사를 위해 직경 1.3mm의 3개의 구멍을 더 뚫습니다. 멸균 PBS의 약 1 ~ 2 밀리리터와 관개에 의해 뼈 먼지를 제거하고 두개골을 청소합니다.
그 후 앵커 나사를 2~3회전으로 조입니다. 두개골 표면에 수직인 첫 번째 구멍을 통해 2밀리미터 길이카테터를 삽입합니다. 카테터를 들고 있는 동안 약간의 치과 시멘트를 바르고 카테터를 안정화하기 위해 치과 경화 광에 잠깐 노출되어 중합하게 하십시오.
그런 다음 카테터 주위에 더 많은 치과 시멘트를 적용하고 나사를 고정하고 치과 경화 광으로 치과 시멘트를 약 15~30초 동안 고화시키고 시멘트가 경화되었는지 확인합니다. 이식 후, 흡기 봉합사 앞쪽으로 피부를 닫고 카테터에 후방을 닫습니다. 그런 다음 해독제 혼합물을 피하로 주입합니다.
다음으로, 예방 항생제 치료를 위한 피하 주사로 2.5%의 엔로플로록사신을 투여한다. 변형 된 케이지에 동물을 반환하고 저체온증을 피하기 위해 적외선의 응용 프로그램과 함께 1 ~ 3 시간 동안 관찰에서 유지합니다. enrofloxacin 치료를 반복 하 고 수술 후 하루 주사에 의해 통증 완화를 위해 밀리 리터 당 1 밀리 그램에서 카프로펜을 관리.
예방 접종 혼합물을 준비하려면 10 밀리리터 하부 잠금 팁 유리 주사기 두 개를 3 방향 스톱콕의 짧은 팔에 연결하고 긴 팔로 세 번째 콘센트를 닫습니다. 다음으로, 파이펫 1 밀리리터 IFA와 함께 rMOG의 50 마이크로그램. 그리고 멸균 PBS와 두 밀리리터의 최종 볼륨에 혼합물을 조정합니다.
희석된 IFA 및 rMOG 혼합물을 열린 주사기에 넣은 다음 반대 쪽 피스톤에 느슨한 압력을 유지하면서 피스톤을 부드럽게 삽입합니다. 피스톤을 앞뒤로 밀어 흰색과 점성이 될 때까지 한 주사기에서 다른 주사기로 운전하여 접종을 유화합니다. 다음으로, 3 방향 스톱콕의 열린 짧은 팔에 밀리리터 하부 잠금 주사기를 고정하고 무분비로 채웁니다.
모든 접종을 1 밀리리터 주사기에 분배하고 주입 될 때까지 얼음에 보관하십시오. 이어서, 21 게이지 바늘을 사용하여 임시 이소플루란 마취 하에 꼬리 베이스에 IFA 및 rMOG 혼합물의 200 마이크로리터를 피하한다. 인트레이트 레브레브리 사이토카인 주입의 경우 커넥터 캐뉼라의 길이를 2밀리미터로 조정합니다.
사이토카인 혼합물로 1밀리리터 주사기를 채웁니다. 그런 다음 주사기를 커넥터 캐뉼라에 연결합니다. 다음으로, 사이토카인 혼합물로 캐뉼라를 채우고 거품을 일으키지 마십시오.
그런 다음, 주사기를 프로그래밍 가능한 주사기 펌프에 장착하고 분당 0.2 마이크로리터의 속도로 주입하도록 프로그래밍한다. 펌프를 시작하고 캐뉼라 의 끝에 기포 형성을 피하기 위해 작동 을 유지합니다. 그런 다음 입구가있는 카테터 캡을 제거합니다.
커넥터 캐뉼라를 카테터에 삽입하고 나사를 조이십시오. 그런 다음 펌프를 중지하기 전에 10 분 동안 주입을 진행할 수 있습니다. 캐뉼러를 카테터 내부에 20분 간 두어 주입된 부피가 완전히 확산되도록 합니다.
그 후 커넥터 캐뉼라를 풀고 진공 효과를 피하기 위해 천천히 제거합니다. 카테터 캡을 입구로 다시 부착하고 나사로 연결합니다. 동물이 케이지의 마취에서 회복하도록 허용하십시오.
피질 탈마일레네이션은 PLP에 대한 면역 히스토케케에 의한 사이토카인 주입 후 다른 시점에서 평가될 수 있다. 도 6A는 이식된 카테터를 통해 멸균 PBS만 수신한 모기 면역 대조군 동물에서 15일째에 온전한 PLP 면역 반응활성을 나타낸다. 사이토카인 주사 후 첫날, MOG 주요 동물에서 이미 탈민이 발견될 수 있었습니다.
이기는 하지만 카테터레화된 지역의 가까운 부근에서만 가능합니다. PLP 면역 반응성은 1일 후 사이토카인 주입후 반자 피질에서 그대로 유지됩니다. 셋째 날에는 IPsilateral 피질에서 확산되는 PLP 면역 반응성 손실이 점진적으로 증가하는 것을 관찰할 수 있었습니다.
3일째에 금트라측 피질 탈량도 감지될 수 있지만 앵커 나사 아래 영역으로 제한됩니다. 9일에서 15일 사이에, 탈량은 두 반구의 피질의 큰 부분에 영향을 미칩니다. 피질 탈마일레네이션은 부분적인 재마일레네이션만으로 두 반구에서 사이토카인 주사를 최대 30일 동안 지속합니다.
도 6J는 인트레이브레랄 사이토카인 주입 후 피질 회색 물질에서 PLP 손실의 정량화를 나타낸다. 이 비디오를 시청한 후, 당신은 myelin 단백질에 대한 임상 예방 접종을 사용하여 회색 물질의 탈취를 생성하는 방법의 좋은 이해를 가져야한다, 이식 카테터를 통해 사이토 카인의 추적 rebral 주입 다음. 이 동물 모형은 다발성 경화증의 진보적인 모형의 연구 결과에 있는 연구원을 도울 수 있었습니다, 층 회색 물질 탈근은 전체 표시입니다.
이식 된 카테터는 주사 유도 외상을 일으키지 않고 전임상 조사를 진행중인 잠재적 인 치료 약물의 여러 차례 탈근 또는 간 전달을 가능하게합니다.
