카 렌 M. 창족의 라이스 대학에 조지 J. Schroepfer 연구 수상 2016 받는 했다. Fanli 주 라이스 대학에서 가르치는 화목의 받는 사람입니다. 블루밍턴 초파리 재고 센터, 하버드 여행 시설 서비스 비엔나 초파리 리소스 센터는 기꺼이 인정 했다.

1입니다. 애벌레의 준비
<ol><li>분석 결과, 시작 하기 전에 두 개 이상의 일 십자가의 원하는 실험 설정 하 고 Wieschaus 및 Nusslein Volhard 13 하지만 50ml 폴 리 프로필 렌을 사용 하 여 설명 대로 계란-누워 요리 조합 (최소 20 여성 및 남성 10 각) 제어 비 커 및 6.0 cm 일회용 접시 포도 agar를 포함 하 고 누 룩 얼룩져 그냥 사용 하기 전에 붙여 넣습니다. 계속 계란-누워 요리에 필요할 때까지 실 온에서 어둠 속에서 난다.</li>
	<li>포도 한 천 제조 법-결합 냉동 100 mL 100% 포도 주스 농축, 350 mL deioinized 물, 5 mL 빙하 아세트산 및 13 g D. melanogaster 천 1 L 유리 비 커에. 1-2 분 버스트, 버스트, 한 천이 모두 녹는 때까지 사이의 교 반에 전자 레인지. 솔루션을 몇 분 기다린 다음 95% 에탄올에 Nipagen (메 틸-p-hydroxybenzoate)의 10% (w/v)의 10 mL를 추가 합니다. 믹스, 다음 일회용 6.0 cm 배양 접시에 접시 당 7 mL 피 펫 젤과 4에서 3-4 h. 저장소에 대 한 실 온에서 건조 수 있도록 비닐 봉지에 0 C.</li>
	<li>효 모 제조 법-7 g 건조 효 모, 10 mL 이온된 물 붙여넣기 유니폼 일관성 때까지 주걱으로 섞는다.</li>
	<li>타임된 계란 모음 생성 실험 하 고 애벌레를 제어. 를 사용 하 여 새로운, 효 모 얼룩져, 포도 접시는 아침 시간 동안 어둠 속에서 4 시간 실내 온도에 계란 수집 합니다. 이러한 4 h 컬렉션 접시를 제거 하 고 신선한 접시를 바꿉니다. 25에서 하룻밤 4 h 컬렉션 접시를 품 어 때 애벌레의 대부분은가 부 화 다음 날 오후까지 0C. 이러한 첫 번째 탈피 애벌레를 수집 하 고 그들을 사용 하 여 설정 실험.</li>
</ol>2. 분석 결과 판 설정
<ol><li>분석 결과 접시의 준비입니다. 분석 결과의 단일 실행에 대 한 5 분석 결과 각각의 접시 10 실험 애벌레와 10 제어 애벌레의 5 접시를 준비 합니다. 1.5 cm 코르크 송곳을 사용 하 여 음식에 대 한 구멍을 만드는 각 접시에서 agar의 중앙 코어를 제거. 효 모 반죽 (0.8-0.9 g)를 구멍에 넣고 구멍을 채우고 마운드 있도록 주걱으로 부드럽게 두 드려.</li>
	<li>한 접시 준비-16 g D. melanogaster agar 2 L 유리 비 커에 물 700 mL 이온된 결합 하 고 전자 렌지 전자 레인지에서 5 분 제거 솔루션으로 소화 agar를가지고 유리 막대와 저 어. 10% (w/v) Nipagen 95% 에탄올, 믹스, 17.5 mL을 추가 다음 30 s 파열에 마이크로파 난방 뒤 모든 agar 완전히 녹아 때까지 저 어. 1 분 또는 2에 대 한 멋진 다음 플라스틱 15 mL aliquots 10 cm 플라스틱 접시에. 한 천 젤, 뚜껑 접시 커버 몇 시간 동안 실 온에서 건조 또는 하룻밤 사이 그들을 허용 합니다. 플레이트 18 ° c.에 봉인 된 비닐 봉투에 저장 참고 1: 때문에 초과 dessiccation 격판덮개의 표면에 Nipagen 결정의 형성을 방지 하려면 접시를 사용 하 여 준비의 몇 일 이내. 필요한 경우, 그들에 95% 알코올 약간 microliters 떨어지고 결정을 다시 해산 수 있습니다. 참고 2: agar의 배치는 다른 고 속성이 있을 수 있습니다. 건조 젤 판 접촉에 확고 한 천의 깨끗 하 고 그대로 원 코르크 송곳을 사용 하 여 음식 구멍 (위 참조)을 만들 때 제거 될 수 있다 충분히 탄력 해야 합니다.</li>
	<li>분석 결과 접시에 애벌레를 설정합니다. 기계적 압력을 사용 하 여 곡선의 플라스틱 microspatula의 팁을 제공 하는 "접착제" 애벌레를 따기 위해 효 모 붙여넣기 팁을 찍어. 첫번째 탈피 애벌레를 개별적으로 선택 하 고 음식 마운드에 가까운 한 접시에 그들을 배치. 모두 실험 10 애벌레와 제어 genotypes의 적어도 5 개의 복제 접시를 준비 합니다. 완료 되 면, 모자 및 라벨 각 접시와 접시 (뚜껑 쪽) 실 온에서 어두운 공간에서 설정할 수 있습니다. (우리 실험실에서이 22 ° C).</li>
</ol>3. 모니터링 분석 결과 플레이트
<ol><li>해 현미경 매일 번호판을 검사 하 고 애벌레는 음식 위에 또는 한 천 표면에 수를 기록 합니다. 어떤 눈에 보이는 죽은 또는 죽어가는 애벌레 note 때, 그리고 세 번째 탈피에 애벌레 이동 본은 한 층으로 터널링 하는 경우 note. 참고 날짜는 pupae 형태를 시작 하 고 어떤 번데기 이상이 참고. 모든 애벌레가 죽거나 pupated 때까지 매일 관찰을 계속 합니다.</li>
	<li>Pupae 신중 하 게에서 제거 접시 휘어 바늘과 포도 접시에 괴 롭 히 고. 원하는 경우, 계속 성인으로 얼마나 많은 eclose를 결정 하는 번데기를 모니터링.</li>
</ol>4. 이미징에 대 한 번호판 시험 준비
<ol><li>조심 스럽게 제거 하 고 각 격판덮개의 중앙 우물에서 모든 효 모 식품 폐기.</li>
	<li>부드럽게 수돗물으로 각 접시 홍수 하 고 부드러운 예술가 페인트 브러시를 사용 하 여 한 천 표면에 추적 된 파편을 조심 스럽게 문질러. 교체 물 여러 번 하 고 각 플레이트는 완전히 깨끗 한 때까지 부드러운 솔 질 계속 합니다. 플레이트 이온된 수와 최종 린스, 그들 모자 주고 건조 하룻밤 실 온에 둡니다. 참고: 한 천으로 터널링 하는 것은 음식 마운드 주위 가장 강렬 (그림 2 참조). 그 결과, 음식 구멍의 변죽은 일반적으로 초기 1.5 cm 직경 넘어 확장 됩니다. 또한,이 지역에서 일된 한의 취약성 작은 조각의 터널링된 천 청소 하는 동안 구멍의 둘레에서 손실 될 수 발생할 수 있습니다. 이러한 문제를 도울 수 젤 agar 농도 증가 하지만 이미지 J 정량 단계 (아래 참조) 중 수정 가능.</li>
</ol>5입니다. 터널링의 정량
<ol><li>판 이미지. 밝은 흰색 선으로는 agar에 터널을 보기 위하여 검은색에 찍은 각 판의 이미지를 준비 합니다. 참고: 우리 DNA 젤이이 단계에 대 한 이미지를 일반적으로 사용 되는 시스템을 사용 하 여 참조 테이블의 재료 및 시 약. 대안 영상 디지털 카메라 또는 휴대 전화 카메라와 같은 tiff 파일을 생성할 수 있는 시스템 적당 한 이미지를 생산 하기 위해 조정 될 수 있습니다.</li>
	<li>애벌레 터널링 quantitate을 퍼블릭 도메인 프로그램 NIH 이미지 J를 사용 합니다. Http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html에서 프로그램을 다운로드. 프로그램에 대 한 자세한 내용은 http://imagej.nih.gov/ij/docs/intro.html에가 서. 참고: 다른 이미징 시스템 quantitate 터널링에 사용 될 수 있습니다. NIH 이미지 제이에 아래의 지침 적용</li>
	<li>터널링 플레이트의 tiff 파일 이미지를 연 후 정량 전체 agar 표면 나타냅니다 하지만 접시의 플라스틱 가장자리 밖으로 작물에 대 한 영역을 정의 하는 타원형 도구를 사용 합니다.</li>
	<li>검은 선으로 보여주는 터널와 접시의 반전 이미지를 생산 하는 자동 임계값을 적용 합니다. 색상 선택기 및 흰색 페인트 브러시 도구를 사용 하 여 한 천 보다는 터널에 손상을 나타내는 어떤 블랙 영역 밖으로.</li>
	<li>분석 풀 다운 메뉴에서 선택 세트 규모 | 규모를 제거 하려면 클릭 다음 (또한 아래 분석) 측정을 설정 창에서 지역 및 임계값 한도확인 하 고.</li>
	<li>Cntrl 키 + M 키 픽셀에서 검은 영역 (터널)을 표시를 누릅니다.</li>
	<li>복사 및 붙여넣기 (예: Excel) 정량 분석을 허용 하는 스프레드시트 프로그램으로 각 접시에 대 한 픽셀 값이입니다.</li>
	<li>중앙 구멍은 일반적으로이 지역에서 강렬한 터널링으로 확장 됩니다. Quantitate 누락 된 터널링, "임계값 제한"을 취소 하 고 자동 선택 도구 사용 하 여 중앙 구멍을 정의. Cntrl 키 +이 영역의 픽셀 값을 가져오기 위해 M 키를 누릅니다. 1.5 c m 구멍의 픽셀 값이이 값에서 뺍니다 고 단계 5.6에서에서 얻은 터널링 값 차이 추가 합니다.</li>
	<li>일부 번호판에 대 한 중앙 구멍 untunneled agar 구멍에 인접 한 영역을 포함 하는 터널링 된 한 천 조각을 누락 수 있습니다. 이러한 판 사용에 대 한 중앙 구멍을 quantitating 때 색상 선택기 및 페인트 브러시 터널링 된 영역을 정의 하 여 정량에서 터널링 비 지역 제외 누락 지역에 걸쳐 검정색 막대를 추가 하려면 도구. 참고 1: 실험적인 애벌레 어떤 터널링을 수행 하는 경우이 정량 평균 터널링 격판덮개의 세트 및 제어의 통계 비교에 대 한 값과 실험 값의 계산을 허용 한다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+responses+to+oxygen+deprivation.">Conserved responses to oxygen deprivation.</a> J. Clin. Invest. 107 (6), 671-673 (2001).</li><li>Lavista-Llanos, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+the+hypoxic+response+in+D.+melanogaster+by+the+basic+helix-loop-helix+pas+protein+Similar.">Control of the hypoxic response in D. melanogaster by the basic helix-loop-helix pas protein Similar.</a> Mol. Cell. Biol. 22 (19), 6842-6853 (2002).</li><li>Reiling, J. H., Hafen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxia-induced+paralogs+Scylla+and+Charybdis+inhibit+growth+by+down-regulating+S6K+activity+upstream+of+Tsc+in+D.+melanogaster.">The hypoxia-induced paralogs Scylla and Charybdis inhibit growth by down-regulating S6K activity upstream of Tsc in D. melanogaster.</a> Genes Dev. 18 (23), 2879-2892 (2004).</li><li>Gorr, T. A., Gassmann, M., Wappner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+and+responding+to+hypoxia+via+Hif+in+model+invertebrates.">Sensing and responding to hypoxia via Hif in model invertebrates.</a> J. Insect Physiol. 52 (4), 349-364 (2006).</li><li>Romero, N. M., Dekanty, A., Wappner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+developmental+adaptations+to+hypoxia:+A+D.+melanogaster+perspective.">Cellular and developmental adaptations to hypoxia: A D. melanogaster perspective.</a> Meth. Enzymol. 435, 123-144 (2007).</li><li>Dijkers, P. F., O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+hypoxia-induced,+nitric+oxide-mediated+signaling+cascade.">Dissection of a hypoxia-induced, nitric oxide-mediated signaling cascade.</a> Mol. Biol.Cell. 20 (18), 4083-4090 (2009).</li><li>Zhou, F., Qiang, K. M., Beckingham, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+to+burrow+and+tunnel+reveals+roles+for+jim+lovell+in+the+growth+and+endoreplication+of+the+D.+melanogaster+larval+tracheae.">Failure to burrow and tunnel reveals roles for jim lovell in the growth and endoreplication of the D. melanogaster larval tracheae.</a> PLOS ONE. 11, e0160233 (2016).</li><li>Wingrove, J. A., O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+contributes+to+behavioral,+cellular,+and+developmental+responses+to+low+oxygen+in+D.+melanogaster.">Nitric oxide contributes to behavioral, cellular, and developmental responses to low oxygen in D. melanogaster.</a> Cell. 98 (1), 105-114 (1999).</li><li>Zhang, L., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uninflatable+encodes+a+novel+ectodermal+apical+surface+protein+required+for+tracheal+inflation+in+D.+melanogaster.">Uninflatable encodes a novel ectodermal apical surface protein required for tracheal inflation in D. melanogaster.</a> Dev. Biol. 336 (2), 201-212 (2009).</li><li>Langlais, K. K., Stewart, J. A., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+characterization+of+two+atypical+soluble+guanylyl+cyclases+in+the+central+and+peripheral+nervous+system+of+D.+melanogaster+melanogaster.">Preliminary characterization of two atypical soluble guanylyl cyclases in the central and peripheral nervous system of D. melanogaster melanogaster.</a> J. Expt. Biol. 207 (13), 2323-2338 (2004).</li><li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+responses+to+hypoxia+and+hyperoxia+in+D.+melanogaster+larvae.">Behavioral responses to hypoxia and hyperoxia in D. melanogaster larvae.</a> Fly. 5 (2), 119-125 (2011).</li><li>Brand, A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Wieschaus, E., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Looking+at+embryos.">Looking at embryos.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li><li>Callier, V., Shingleton, A. W., Brent, C. S., Ghosh, S. M., Kim, J., Harrison, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reduced+oxygen+in+the+developmental+physiology+of+growth+and+metamorphosis+initiation+in+D.+melanogaster.">The role of reduced oxygen in the developmental physiology of growth and metamorphosis initiation in D. melanogaster.</a> J. Expt. Biol. 216 (23), 4334-4340 (2013).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hif-+and+non-Hif-regulated+hypoxic+responses+require+the+estrogen-related+receptor+in+D.+melanogaster.">Hif- and non-Hif-regulated hypoxic responses require the estrogen-related receptor in D. melanogaster.</a> PLoS genetics. 9 (1), e1003230 (2013).</li><li>Grifoni, D., Sallazzo, M., Fontana, E., Froldi, F., Pession, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+strategies+of+oxygen+supply+in+Drosophila+malignancies+identify+tracheogenesis+as+a+novel+cancer+hallmark.">Multiple strategies of oxygen supply in Drosophila malignancies identify tracheogenesis as a novel cancer hallmark.</a> Scient. Rep. 5 (9061), (2015).</li></ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

우리 여기에 D. melanogaster 애벌레 조직 hypoxia을 감지 하도록 설계 된 간단한 분석 결과 제시 했습니다. 진단 초기 애벌레 생활 및 애벌레 생활에서 늦게 터널링 하는 층의 부재에 음식 고 분으로 감소 내 기반으로 합니다. 애벌레 크롤 링 음식 소스에서 조 마이그레이션을 발생할 수 있으며 따라서 분석 결과의 하나의 중요 한 측면은 적은 수 애벌레의 큰 초과 음식 존재 분석 됩니다. 균 메 틸-p hydroxyl benzoate (Nipagen)의 한 천 배지를 포함 분석 결과 중 곰 팡이 성장을 방지 하기 위해 필수적 이기도 합니다.
보면 한 천 배지 분석 결과 있는 가변성의 원천이 될 수 있습니다. 일반적으로, 애벌레, 애벌레의 다른 컬렉션 또는 부모의 다른 배치에서 동일한 유전자의 분석 결과에 그들의 행동에 비교적 제한 된 변화를 보여줍니다. 반면, 한 천 배지 또는 다른 일에 만들어진 agar의 다른 배치와 터널링에 차이 얻을 수 있습니다. 한 규정 따라서 제어 하 고 실험적인 애벌레 모두 테스트 해야 동일한 배치 준비에서 한 천 배지를 사용 하 여. 다른 제조 업체에서 한 천 또는 동일한 제조에서 심지어 출하 고 그들의 힘에 다를 수 있습니다 하 고 그래서 여기 최적의 젤을 달성 하는 데 사용 하는 2.2%에서 위쪽으로 agar 농도 조정 해야 할 수 있습니다. 우리는 야생 타입 애벌레 3% 한 천 젤을 통해 쉽게 뚫 수 있습니다 나타났습니다.
이 분석 결과의 가치를 입증, 우리는 그것를 사용의 억제 기능을 가진 애벌레에 잠재적인 조직 hypoxia 조사 uninflatable . 기관에 우리의 발견이이 유전자의 tracheal 식의 손실 산소를 생산할 수 있는 가설에 대 한 강력한 지원을 제공: btl-Gal4 > UAS-uif RNAi 애벌레 음식과 층 동안 터널링의 완전 한 부재에 뚫으 보여 세 번째 탈피입니다. 우리의 이전 연구에서 다른 genotypes의, 우리는 hypoxia 유발 손실 음식 내 층 터널링의 손실 및 btl로 완전 하지 않습니다 관찰-Gal4 > UAS-uif RNAi 애벌레 공부 여기 유사 하 게 행동. 이 분석 결과의 실패 한 터널링 구성 요소는 그러므로 산소의 강한 표시를 제공 한다.
비록 btl-Gal4 > uif RNAi 애벌레 행동 특성을 보였다는 잘라(ue) 저 산소 증의 진단-Gal4 > UAS-uif RNAi이이 이상이 전시 하지 않았다. Btl 고 잘라(ue) Gal4 드라이버 다른 단계에서 그리고 애벌레 기관 내 다른 패턴에 표시 됩니다. Btl-Gal4 드라이버 embryogenesis에 그것의 개발에서 시작 하 고 애벌레 생활을 통해 계속 tracheal 시스템을 통해 표현 된다. 반면,는 잘라(ue)에서 Gal4 식-Gal4 드라이버만 한다의 morphogenesis 후 미 발달 생활의 끝에 시작 하 고 지 느 러 미 줄기의 주요 경도 혈관의 극단적인 후부 섹션으로 제한 됩니다 tracheal 시스템입니다. uif 최저 Gal4 줄으로 줄일 수 없습니다 따라서 uif 식 일찍 충분히 또는 광범위 하 게 동작을 실행 하는 데 필요한 산소의 일부 임계값을 생성 하기에 충분이 분석 결과 측정.
이전 연구 3 탈피 애벌레 (10%) 산소의 저급에 노출 감소 성장을 보여을 발견 하 고 pupariation 14의 발병을 지연. Btl-Gal4 > 세 번째 탈피에 UAS-uif RNAi 애벌레 여기 공부 진행 하지만 그들의 성장과 pupation 요금에 효과 더 발음 했다: 그들은 컨트롤과 아래 아주 작은 지방 조직 보다 상당히 작은 표 (그림 3) 피와 유일한 작은 분수 (~ 10%)는 pupariation을 시도 했다. 이 차이 제안 btl-Gal4 > uif 최저는 기관에 그들의 전체 애벌레 생활 내내 존재 했다 또는 그것을 더 생산 하기 때문에 UAS-uif RNAi 애벌레 hypoxia의 훌륭한 정도 경험 세 번째 탈피에 심각한 산소 박탈 합니다. 어떻게 uif 함수는 기관에서의 손실 되지 않도록 산소 운반은 불분명이 시점에서. Btl의 기관-Gal4 > UAS-uif RNAi 애벌레 표 피 (그림 3), 그들은 공기를 포함 하 고 액체 항목 기능 손상 지점 손상 되지 했다 표시를 통해 쉽게 볼 수 있었다. 그것은 공식적으로 가능한 그러므로 uif 기능의 손실에 의해 만들어진 tracheal 손상 hypoxia 하지만 오히려 몇 가지 다른 결함 억제 터널링을 유도 하지 않는. Genotypes 이전 공부, 우리가 늦은 제 3 탈피 애벌레 15에 터널 실패는 LDH mRNA7의 높은 수준, 분해 하 고 산소의 정식 표시기와 관련 된 결정. Btl에 대 한 산소의 따라서, 최종 확인-Gal4 > UAS-uif RNAi 애벌레 (와 나중에 검사 하는 애벌레에서이 분석 결과의 사용) RT-PCR LDH mRNA 수준 또는 측정 하는 상업적으로 사용할 수 있는 표시기의 사용을 평가 하기 위해 포함 세포내 산소 수준 (예를 들어 참조 16).

분자 유전 도구 D. melanogaster 에서 사용할 수 있는 정교한 배열 진화론 보존된 생물 학적 과정의 연구에 대 한 귀중 한 유기 체 게. 주요 분자 응답 산소 가용성을 진화에 걸쳐 보존을 입증 하 고 신호 경로 1,2, 이들의 보편적인 구성 요소에 대 한 통찰력을 생성 하는 D. melanogaster 사전 연구 3,4,,56.
D. melanogaster 애벌레에 감각 신경 기능 해 부 하기 위한 연구의 일환으로, 우리는 정상적인 산소 수준 7에서 조직 저 산소 증에 의해 활성화 될 입증 하는 두 행동 응답 확인. 음식, 뚫으, 이들 중 하나는 매우 Wingrove와 O'Farrell 8보고 낮은 산소 수준에 응답 관련. 두 번째 동작, 후반 3 탈피 단계, 방황 하는 동안 부드러운 층에 터널을 실패 하지 되었습니다 이전 발견 했다로 hypoxia 관련. 우리는 7, 터널링 하는 층을 억제 또한 낮은 산소 수준에 야생 타입 방황 애벌레를 노출 따라서 모두 hypoxia에서 발생 한 이러한 행동-중 유도 조직 손상 또는 낮은 산소 섭취 수준 수립 결정. 여기는 관측 애벌레 부 화 후 즉시 시작 되 분석 결과 우리는이 두 hypoxia 유발 행동을 quantitate를 개발에 대해 설명 합니다.
초기 애벌레 단계에 있는 hypoxic 응답 이전 검사 하지는 및 따라서 애벌레 생활 내내 분석을 수행 하는 것입니다 우리의 분석 결과의 중요 한 구성 요소. -느린 개발, 불 쌍 한 성장, 및 운동 부진-저 산소 증의 확실 한 발현의 대부분 겹칠 애벌레 고기 많은 돌연변이 의해 생산. 하지만 우리 hypoxia로만 세 번째 탈피 애벌레 터널 7완전 한 실패 보여 것으로 나타났습니다. 따라서, 우리는 심지어 애벌레 우리의 hypoxic 애벌레 보다 더 성장 및 운동 손상, 여전히 수행 몇 가지 터널링 hypoxic 애벌레는 결코 7터널링 반면 결정. 이 분석 결과의 또 다른 중요 한 요소가입니다 따라서 때 산소는 다 면 발현 성 고기 몇 가지 다른 스트레스 나 변화 고장 아닌 특정 집합의 소스를 설정 하는 방법을 제공 합니다. 분석 결과의 데모, 여기 우리가 특성화의 감소 tracheal 식이 애벌레의 응답에 사용 설명 uninflatable, 애벌레 항공 9에서 작동 하는 유전자.
우리는이 분석 결과 가난한 성장 및 느린 동작을 포함 하는 애벌레 고기 특성화에 종사 하는 연구자에 게 가치가 있을 것입니다 정시. 결과, 유통, 사용, 또는, 응답을 좌우 하는 새로운 유전자를 몸 전체에 산소 수 식별 합니다. 추가, 프로토콜을 차단 하는 돌연변이에이 분석 결과 통합 산소를 생산 하는 돌연변이 확인 하는 직접적인 경로 제공할 것 이다. 이 분석 결과 또한 여기에 설명 된 hypoxia 유발 타고 난 행동 elicits 회로 분석에 귀중 한 것입니다. 이러한 종류의 신경 네트워크 분석은 많은 현재 연구의 초점 고 D. melanogaster 유 충의 간단한 신경 시스템은 자동화 된 동작 개 해 부에 대 한 중요 한 시스템. 감각 뉴런 애벌레 산소 인식에 관련 된 이미 확인 되었습니다, hypoxia 유발 응답 10,11에 대 한 완전 한 회로 정의 향한 첫 번째 단계를 제공 하. 우리의 분석 결과 사용 하 여 선택적 신경 최저 GAL4 UAS 시스템12 을 통해 함께 묘사 또한 신경 네트워크의 구성 요소에 대 한 명확한 경로입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="890">
	
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">REAGENTS</td>
			<td style="width:223px;"></td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dehydrated yeast&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Frozen grape juice concentrate</td>
			<td>Welch&#39;s</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Available at most large supermarkets</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glacial acetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Drosophila agar</td>
			<td>Apex Bioresearch Products</td>
			<td>66-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl-para-hydroxybenzoate</td>
			<td>Apex Bioresearch Products</td>
			<td>20-658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml polypropylene beakers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6.0 cm disposable Petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08757100B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 cm disposable plastic Petri dishes</td>
			<td>E+K Scientific</td>
			<td>EK-24104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic microspatulas</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bent teasing needle</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>S08848MH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any microscope with 10-30X magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a burrowing/tunneling assay for detection of hypoxia in drosophila melanogaster larvae

동물에 산소 박탈 산소 분포와 방해 하는 내부 조직 손상 또는 낮은 대기 산소 수준에 노출에서 발생할 수 있습니다. 그것은 또한 산소 감지 뉴런의 탈 선 행동 정상적인 산소 수준 존재 hypoxia-같은 동작을 유도 수 가능. D. melanogaster, 낮은 산소 수준에서 개발 억제 성장 및 느린 동작의 애벌레 단계 동안에 발생합니다. 그러나, 산소 적자의 이러한 설립된 발현 상당히 많은 변이 성장, 스트레스 반응 또는 운동 조절의 고기와 중복. 결과, 현재 아무 분석 결과 돌연변이 나 비정상적인 신경 행동에 의해 유도 된 때 ii) hypoxia-같은 동작에 의해 유도 된 i) 세포 저 산소 증을 식별 하기 위해 사용할 수 있다.
우리는 최근 두 가지 독특한 동작이 D. melanogaster 애벌레 hypoxia의 내부 탐지에 대 한 응답의 정상적인 산소 수준에서 발생 하는 확인 했습니다. 첫째, 모든 단계에서 같은 애벌레 음식 근원에서 멀리 떨어져 straying 종종 음식으로 내 피하. 둘째, 부드러운 층으로 터널링, 방황 3 탈피 단계 동안 일반적으로 발생 하는 완전히 폐지 애벌레 hypoxic 있다면. 여기서 설명 하는 분석 결과 감지 하 여 이러한 동작을 quantitate 설계 및 따라서 내부 손상 보다는 낮은 외부 산소에 의해 유도 된 산소를 감지 하는 방법을 제공 하. 천 층 및 효 모 반죽의 중앙 플러그 분석 결과 접시 애벌레 생활을 통해 동물을 지원 하기 위해 사용 됩니다. 위치와 애벌레의 상태 추적 매일으로 그들은 제 3 먼저 탈피에서 진행 합니다. 방황 단계 천 층으로 터널링의 NIH ImageJ를 사용 하 여 pupation 후 quantitated입니다. 분석 결과 것입니다 결정에 때 hypoxia 돌연변이 표현 형의 구성 요소 값의 되며, 따라서 문제의 유전자의 행동의 가능한 사이트에 대 한 통찰력을 제공.

이 분석 결과의 값의 데모로 서 우리는 그것을 사용 애벌레는 유전자의 장애인 기능에 잠재적인 hypoxia 조사 uninflatable (uif)는 기관에. uif 애벌레 tracheal 셀의 꼭대기 표면에 강하게 표현 되는 큰 막 횡단 단백질을 인코딩합니다. Uif 의 돌연변이 tracheal 오작동 9인 조직 hypoxia 나타낼 수 있는 탈 선 행동을 전시 하 이전 지적 했다. 우리는 특별히 Gal4 UAS 시스템을 사용 하 여 애벌레 기도에 uif 식 억제. 두 Gal4 라인 사용 되었다: i) 숨 (btl)-Gal4 그들의 배아 개발 및 ii의 시작 부분에서 기관에 강하게 표현) (ue)를 잘라-Gal4 식의 작은 후부 지역에서 시작 embryogenesis의 끝에 주요 지 트렁크 한다 애벌레 생활 7에 걸쳐이 지역에 강한 식 계속 됩니다. UAS-uif RNAi 라인 비엔나 초파리 연구 센터 (VDRC ID #1050)에서 얻은 했다.
위의 프로토콜에 설명 된 대로 5 애벌레 설정 4 십자가의 각 다음과 같이 새로 부 화 첫 탈피의 번호판을 복제 합니다.
실험 1 1) 제어 1-(ue)를 잘라-Gal4 구획-S (+) x 2) 실험 1-(ue)를 잘라-Gal4 x UAS-uif RNAi
실험 2 3) 제어 2- btl-Gal4 구획-S (+) x 4) 실험 2- btl-Gal4 x UAS-uif RNAi
컷(ue)의 동작-Gal4 > 실험 1의 UAS-uif RNAi 애벌레는 컨트롤 컷(ue)의 비교 되었다-Gal4 > + 내, 터널링 및 pupation, (그림 1 생존 동물 및 그림 2). 대조적으로, 초기에 개발 (실험 2)에서 전체 tracheal 시스템 전체 다운 규제 uif 식 생산 현저 하 게 다른 응답. Btl-Gal4 > UAS-uif RNAi 애벌레 표시 모두 행동 발현의 조직 hypoxia-식품 내 고 나중에 애벌레(그림 1 및 그림 2 터널링 하는 층의 총 부재 감소 ). 실험적인 애벌레 또한 눈, 얇은 및 컨트롤 (그림 3) 보다 더 부진 했다 고 분석 결과의 과정 동안 높은 사망률을 보였다. 위에서 설명 했 듯이, 감소 성장 부진, organismal 죽음 애벌레 저 산소 증의 증상으로 알려져 있습니다. 또한, 실험 애벌레 pupation 시도를 실패 하 고 남아의 대부분으로 3 탈피 애벌레 긴 후 제어 애벌레 pupated 했다. 일부 애벌레는 결국 용 (그림 1A) 없이 죽기 전에 15 일 이상 살아 남았습니다. 실험적인 애벌레의 몇 가지 pupate 했지만 모든 경우에 비정상적인 pupae 가능한 성인을 생성 하지 않았다 형성 되었다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig1.jpg"> 그림 1입니다. 음식 내와 애벌레 개발의 정량입니다. (A) 4 genotypes 여기에 공부에 대 한 음식 고 분 외부 라이브 애벌레의 백분율입니다. 5 분석 결과 번호판 각 유전자 형에 대 한 사용에 대 한 평균을 표시 됩니다. Btl의 ~ 70% 부 화 후 3 일-Gal4 > 음식 또는 다른 3 genotypes agar 표면에 아무 애벌레 발견 된 반면 UAS uif RNAi 애벌레는 음식 밖에 있었다. Btl-Gal4 > UAS uif RNAi 애벌레 죽을 천천히 살아 그들의 ~ 15 %4-20 일 사이 부 화 후 15 일. X 축 따라 검은색 화살표 여기 고 (B)에 3 개의 다른 genotypes의 모든 애벌레 pupated 했다 하루를 나타냅니다. (B) 죽은 애벌레 4 genotypes 위해 외부 표시의 백분율입니다. 각 유전자 형에 대 한 분석 결과 5 판에 대 한 평균을 표시 됩니다. 죽은 btl-Gal4 > UAS uif RNAi 애벌레 대부분 죽어 시간이 지남에 축적 음식 밖에. 모든 다른 genotypes pupation 생존 (C) 비율 생존 pupation 4 genotypes에 대 한 공부. 각 유전자 형에 대 한 분석 결과 5 판에 대 한 평균을 표시 됩니다. Btl의 정상적인 pupae 없음-Gal4 > UAS uif RNAi 유전자 형이 생산 되었다. 그림을 통해 오차 막대 SEMs를 나타냅니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57131/57131fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig2.jpg"> 그림 2입니다. 애벌레 터널링의 정량입니다. (A) 모든 4 개의 genotypes에 대 한 분석 결과 번호판의 예 정량 터널링에 대 한 준비 후 공부. Btl에 대 한 터널링의 완전 한 부재를 참고-Gal4 > UAS uif RNAi 애벌레. 분석 결과 플레이트는 10 cm 배양 접시. (B) 터널링 정량 4 genotypes에 대 한 이미지 J에서 파생 된. 각 유전자 형에 대 한 분석 결과 5 판에 대 한 픽셀 값을 평균입니다. Btl에 대 한 관찰 되었다 아니 터널링-Gal4 > UAS uif RNAi 애벌레. 오차 막대 SEMs =. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57131/57131fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig3.jpg"> 그림 3입니다. Btl의 비교-Gal4 > UAS uif RNAi 및 btl-Gal4 > + 애벌레 Btl에 대 한 비슷한 나이 (부 화 후 6 일)의 애벌레-Gal4 > UAS uif RNAi (A) 및 btl-Gal4 > + genotypes (B). 빨간색 화살표 등 트렁크 한다 가리킵니다. 두 애벌레 같은 배율에서 몇 군데입니다. 눈금 막대 = 0.5 m m. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57131/57131fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

프로토콜 정상적인 대기 산소 수준에서 산소를 발생 하는 초파리 melanogaster 애벌레를 식별 하는 간단한 분석 결과를 설명 합니다. 이 프로토콜에 hypoxic 애벌레를를 겹치는 고기 느린 성장 부진 등을 보여 주는 다른 돌연변이 구별 될 수 있습니다.

초파리 melanogaster 애벌레에서 Hypoxia의 검출에 대 한 분석 결과 내/터널링

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

a-burrowingtunneling-assay-for-detection-hypoxia-drosophila

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

7.7K 조회수.  Rice University. 프로토콜 정상적인 대기 산소 수준에서 산소를 발생 하는 초파리 melanogaster 애벌레를 식별 하는 간단한 분석 결과를 설명 합니다. 이 프로토콜에 hypoxic 애벌레를를 겹치는 고기 느린 성장 부진 등을 보여 주는 다른 돌연변이 구별 될 수 있습니다.

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A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

연구

행동분석학

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations supportive behavior of other people as well as positive social relationships can act as powerful resources to cope with stress. In order to study the interplay between these variables, this protocol describes two effective experimental manipulations of social relationships and supportive behavior in the laboratory. In the present article, these two manipulations are implemented in the Trier Social Stress Test (TSST)&#8212;a standard stress induction paradigm in which participants are subjected to a simulated job interview. More precisely, we propose (a) a manipulation of the relationship between different protagonists in the TSST by making a shared social identity salient and (b) a manipulation of the behavior of the TSST-selection committee, which acts either supportively or unsupportively. These two experimental manipulations are designed in a modular fashion and can be applied independently of each other but can also be combined. Moreover, these two manipulations can also be integrated into other stress protocols and into other standardized social interactions such as trust games, negotiation tasks, or other group tasks.

Previous research on the social dimension of stress has focused on two important variables: social identity and social support. This protocol introduces an effective experimental manipulation of these two social variables and describes their implementation in a standard stress induction paradigm (Trier Social Stress Test).

스트레스의 사회적 차원 : 트리어 사회에서 사회적지지와 사회적 정체성의 실험 노는 시험 스트레스

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

Automatic Detection of Highly Organized Theta Oscillations in the Murine EEG

Theta activity is generated in the septohippocampal system and can be recorded using deep intrahippocampal electrodes and implantable electroencephalography (EEG) radiotelemetry or tether system approaches. Pharmacologically, hippocampal theta is heterogeneous (see dualistic theory) and can be differentiated into type I and type II theta. These individual EEG subtypes are related to specific cognitive and behavioral states, such as arousal, exploration, learning and memory, higher integrative functions, etc. In neurodegenerative diseases such as Alzheimer&#39;s, structural and functional alterations of the septohippocampal system can result in impaired theta activity/oscillations. A standard quantitative analysis of the hippocampal EEG includes a Fast-Fourier-Transformation (FFT)-based frequency analysis. However, this procedure does not provide details about theta activity in general and highly-organized theta oscillations in particular. In order to obtain detailed information on highly-organized theta oscillations in the hippocampus, we have developed a new analytical approach. This approach allows for time- and cost-effective quantification of the duration of highly-organized theta oscillations and their frequency characteristics.

Theta activity in the hippocampus is related to specific cognitive and behavioral stages. Here, we describe an analytical method to detect highly-organized theta oscillations within the hippocampus using a time-frequency (i.e., wavelet analysis)-based approach.

쥐 EEG에서 매우 조직 된 세타 진동의 자동 감지

Theta activity is generated in the septohippocampal system and can be recorded using deep intrahippocampal electrodes and implantable ...

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. To understand the mechanism of these cellular events, and their causal relationships with each other, Drosophila melanogaster, with its sophisticated genetic tools and diverse behavioral features, are used as disease models for assessing neurodegenerative phenotypes. Here we describe a high-throughput method to analyze Drosophila adult negative geotaxis behavior, as an indication for possible motor defects associated with neurodegeneration. An automated machine is designed and developed to drive fly synchronization using an initial electric impulse, later allowing the recording of negative geotaxis behavior over a course of secs to mins. Images from the digitally recorded video are then processed with the self-designed RflyDetection software for statistical data manipulation. Different from the manually controlled negative geotaxis assay based on single fly, this precise, fast, and high-throughput protocol allows data acquisition from more than hundreds of flies simultaneously, providing an efficient approach to advance our understanding in the underlying mechanism of locomotor deficits associated with neurodegeneration.

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

This step-by-step protocol analyzes Drosophila negative geotaxis behavior using an automated multi-cylinder system that hosts hundreds of flies and synchronizes their action by an electric motor. Upon synchronization, fly negative geotaxis behavior is assayed, digitally recorded, and analyzed using the self-designed RflyDetection software.

Neurodegeneration의 초파리 모델에서 성인 등반 동작을 분석 하기 위한 자동화 된 신속한 반복 부정적인 Geotaxis 분석 결과

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human populations, the Drosophila model allows strict control over genetic background, and virtually unlimited numbers of individuals of the same genotype can be reared rapidly under well-controlled environmental conditions without regulatory restrictions and at relatively low cost. Flies exposed to ethanol undergo physiological and behavioral changes that resemble human alcohol intoxication, including loss of postural control, sedation, and development of tolerance. Here, we describe a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The assay is based on video recording of single flies introduced without anesthesia in 24-well cell culture plates in a set-up that enables synchronous initiation of alcohol exposure. The system enables a single person to collect individual ethanol sedation data on as many as 2,000 flies within an 8 h work period. The assay can, in principle, be extended to assess the effects of exposure to any volatile substance and applied to measure effects of acute toxicity of volatiles on other insects, including other fly species.

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Current methods to measure alcohol sensitivity in Drosophila are designed to test groups of flies. We present a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The method does not require specialized tools and can be performed in any laboratory using common materials.

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human ...

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila larvae, customized metal nickel-titanium alloy (nitinol) filaments. These mechanical probes are similar to the von Frey filaments used in vertebrates to measure mechanical nociception. Here, we demonstrate how to make and calibrate these mechanical probes and how to generate a full behavioral dose-response from subthreshold (innocuous or non-noxious range) to suprathreshold (low to high noxious range) stimuli. To demonstrate the utility of the probes, we investigated tissue damage-induced hypersensitivity in Drosophila larvae. Mechanical allodynia (hypersensitivity to a normally innocuous mechanical stimulus) and hyperalgesia (exaggerated responsiveness to a noxious mechanical stimulus) have not yet been established in Drosophila larvae. Using mechanical probes that are normally innocuous or probes that typically elicit an aversive behavior, we found that Drosophila larvae develop mechanical hypersensitization (both allodynia and hyperalgesia) after tissue damage. Thus, the mechanical probes and assay that we illustrate here will likely be important tools to dissect the fundamental molecular/genetic mechanisms of mechanical hypersensitivity.

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

The goal of this protocol is to show how to perform an improved assay for mechanical nociception in Drosophila larvae. We use the assay here to demonstrate that mechanical hypersensitivity (allodynia and hyperalgesia) exists in Drosophila larvae.

드로소필라 애벌레의 기계적 고치절 측정을 위한 향상된 분석 및 도구

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental factors, and the toxicological and pharmacological effects of numerous substances. Few methods currently implemented are amenable to high throughput measurement. The Microplate Feeder Assay (MFA) was developed for quantifying the consumption of liquid food for individual flies using absorbance. In this assay, flies consume liquid food medium from select wells of a 1536-well microplate. By incorporating a dilute tracer dye into the liquid food medium and loading a known volume into each well, absorbance measurements of the well acquired before and after consumption reflect the resulting change in volume (i.e., volume consumed). To enable high throughput analysis with this method, a 3D-printed coupler was designed that allows flies to be sorted individually into 96-well microplates. This device precisely orients 96- and 1536-well microplates to give each fly access to up to 4 wells for consumption, thus enabling food preference quantification in addition to regular consumption. Furthermore, the device has barrier strips that toggle between open and closed positions to allow for controlled containment and release of a column of samples at a time. This method enables high throughput measurements of consumption of aqueous solutions by many flies simultaneously. It also has the potential to be adapted to other insects and to screen consumption of nutrients, toxins, or pharmaceuticals.

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

The microplate feeder assay offers an economical, high throughput method for quantifying liquid food consumption in Drosophila. A 3D-printed device connects a 96-well microplate in which flies are housed to a 1536-well microplate from which flies consume a feeding solution with a tracer dye. The solution volume decline is measured spectrophotometrically.

드로소필라에서 소비의 정량화를 위한 높은 처리량 마이크로 플레이트 피더 분석

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental ...

A Procedure to Study Stress-Induced Relapse of Heroin Seeking after Punishment-Imposed Abstinence

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with drug-taking. This model has been implemented in experiments using different types of substances of abuse such as methamphetamine, cocaine, and alcohol. However, punishment-induced abstinence in heroin-trained animals has not been demonstrated. Furthermore, acute stress is a key trigger for relapse in humans and animal models. It was previously demonstrated that acute food deprivation robustly induced reinstatement of extinguished cocaine and heroin seeking. The procedure described here can be used to assess the effects of acute stress exposure on heroin seeking after punishment-imposed abstinence. A total of 8 rats were implanted with chronic intravenous (i.v.) catheters and trained to self-administer heroin (0.1 mg/kg/infusion) for 18 days under a seek-take chained schedule. Completing the seek link gave access to the take lever, which was paired with a heroin infusion. The seek lever was programmed with a variable interval 60 schedule of reinforcement (VI60), and the take lever was programmed with a fixed-ratio 1 reinforcement schedule (FR1). Following self-administration training, a mild foot shock was delivered on 30% of the completed seek links instead of the extension of the take lever. Footshock intensity was increased by 0.1 mA per daily session from 0.2 mA to 1.0 mA. Heroin-seeking tests were performed after 24 h of food deprivation (FD) or sated conditions. Rats under acute food deprivation condition robustly increased heroin seeking after punishment-imposed abstinence.

A procedure that demonstrates a robust acute food deprivation-induced relapse to heroin seeking after punishment-imposed abstinence is described. A punishment-imposed abstinence model was successfully implemented using the seek and take chain schedule for heroin self-administration. Heroin-seeking tests are then performed following 24 h of food-deprivation stress.

처벌 부과 금욕 후 헤로인의 스트레스로 인한 재발을 연구하는 절차

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with ...