우리는 비행 주식에 대한 블루밍턴 Drosophila 주식 센터 감사드립니다; C. Gahr, JT Alkema 및 S. van Hasselt가 가압 공기 분석법 개발 초기 시도 재스퍼 보스 만 (Jasper Bosman) : 효모 배양에 대한 조언; 원래는 Drosophila 교배 행동의 저속 모니터링을 개발 한 Rezza Azanchi와 Joel Levine입니다. JA Gorter는 Neuroscience Research School BCN / NWO 대학원 프로그램 지원금으로 지원되었습니다. 이 작업은 JC Billeter에 대한 네덜란드 연구 기관 (NWO) (참고 : 821.02.020)이 부분적으로 지원했습니다.

<ol>
	<li>Hileman, S. M., Pierroz, D. D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+nutrition,+and+reproduction:+timing+is+everything.">Leptin nutrition, and reproduction: timing is everything.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2), 804-807 (2000).</li><li>Grosjean, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+olfactory+receptor+for+food-derived+odours+promotes+male+courtship+in+Drosophila.">An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila.</a> Nature. 478 (7368), 236-240 (2011).</li><li>Harshman, L. G., Hoffman, A. A., Prout, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+effects+on+remating+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental effects on remating in Drosophila melanogaster.</a> Evolution. 42 (2), 312-321 (1988).</li><li>Fricke, C., Bretman, A., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+nutritional+status+determines+the+magnitude+and+sign+of+responses+to+a+male+ejaculate+signal+in+Drosophila+melanogaster.">Female nutritional status determines the magnitude and sign of responses to a male ejaculate signal in Drosophila melanogaster.</a> J. Evol. Biol. 23 (1), 157-165 (2010).</li><li>Gorter, J. A., Jagadeesh, S., Gahr, C., Boonekamp, J. J., Levine, J. D., Billeter, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nutritional+and+hedonic+value+of+food+modulate+sexual+receptivity+in+Drosophila+melanogaster+females.">The nutritional and hedonic value of food modulate sexual receptivity in Drosophila melanogaster females.</a> Sci. Rep. , 1-10 (2016).</li><li>Wigby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signalling+regulates+remating+in+female+Drosophila.">Insulin signalling regulates remating in female Drosophila.</a> Proc. Biol. Sci. 278 (1704), 424-431 (2011).</li><li>Ribeiro, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dilemmas+of+the+gourmet+fly:+the+molecular+and+neuronal+mechanisms+of+feeding+and+nutrient+decision+making+in+Drosophila.">The dilemmas of the gourmet fly: the molecular and neuronal mechanisms of feeding and nutrient decision making in Drosophila.</a> Front. Neurosci. 7, 1-13 (2013).</li><li>Walker, S. J., Corrales-Carvajal, V. M., Ribeiro, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postmating+circuitry+modulates+salt+taste+processing+to+increase+reproductive+output+in+Drosophila.">Postmating circuitry modulates salt taste processing to increase reproductive output in Drosophila.</a> Curr. Biol. 25 (20), 2621-2630 (2015).</li><li>Hussain, A., &#220;&#231;punar, H. K., Zhang, M., Loschek, L. F., Grunwald Kadow, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptides+modulate+female+chemosensory+processing+upon+mating+in+Drosophila.">Neuropeptides modulate female chemosensory processing upon mating in Drosophila.</a> PLoS Biol. 14 (5), e1002455-e1002428 (2016).</li><li>Avila, F. W., Sirot, L. K., LaFlamme, B. A., Rubinstein, C. D., Wolfner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+seminal+fluid+proteins:+identification+and+function.">Insect seminal fluid proteins: identification and function.</a> Annu. Rev. Entomol. 56 (1), 21-40 (2011).</li><li>Laturney, M., Billeter, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenetics+of+female+reproductive+behaviors+in+Drosophila+melanogaster.">Neurogenetics of female reproductive behaviors in Drosophila melanogaster.</a> BS:ADGEN. 85, 1-108 (2014).</li><li>Liu, H., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-peptide+is+the+molecular+basis+of+the+sperm+effect+in+Drosophila+melanogaster.">Sex-peptide is the molecular basis of the sperm effect in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 100 (17), 9929-9933 (2003).</li><li>Ram, K. R., Wolfner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+post-mating+response+in+Drosophila+melanogaster+requires+multiple+seminal+fluid+Proteins.">Sustained post-mating response in Drosophila melanogaster requires multiple seminal fluid Proteins.</a> PLoS gen. 3 (12), 2428-2438 (2007).</li><li>Yapici, N., Kim, Y. -. J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour.">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li><li>Yang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+the+postmating+behavioral+switch+in+Drosophila+females+by+internal+sensory+neurons.">Control of the postmating behavioral switch in Drosophila females by internal sensory neurons.</a> Neuron. 61 (4), 519-526 (2009).</li><li>H&#228;semeyer, M., Yapici, N., Heberlein, U., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neurons+in+the+Drosophila+genital+tract+regulate+female+reproductive+behavior.">Sensory neurons in the Drosophila genital tract regulate female reproductive behavior.</a> Neuron. 61 (4), 511-518 (2009).</li><li>Rez&#225;val, C., Pavlou, H. J., Dornan, A. J., Chan, Y. -. B., Kravitz, E. A., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+circuitry+underlying+Drosophila+female+postmating+behavioral+responses.">Neural circuitry underlying Drosophila female postmating behavioral responses.</a> Curr. Biol. , 1-11 (2012).</li><li>Haussmann, I. U., Hemani, Y., Wijesekera, T., Dauwalder, B., Soller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+pathways+mediate+the+sex-peptide-regulated+switch+in+female+Drosophila+reproductive+behaviours.">Multiple pathways mediate the sex-peptide-regulated switch in female Drosophila reproductive behaviours.</a> Proc. Biol. Sci. 280 (1771), 20131938-20131938 (2015).</li><li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster.">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr. Biol. 18 (18), 1373-1383 (2008).</li><li>Billeter, J. C., Jagadeesh, S., Stepek, N., Azanchi, R., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+females+change+mating+behaviour+and+offspring+production+based+on+social+context.">Drosophila melanogaster females change mating behaviour and offspring production based on social context.</a> Proc. Biol.l Sci. 279 (1737), 2417-2425 (2012).</li><li>Krupp, J. J., Billeter, J. -. C., Wong, A., Choi, C., Nitabach, M. N., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pigment-dispersing+factor+modulates+pheromone+production+in+clock+cells+that+influence+mating+in+Drosophila.">Pigment-dispersing factor modulates pheromone production in clock cells that influence mating in Drosophila.</a> Neuron. 79 (1), 54-68 (2013).</li><li>Imhof, M., Harr, B., Brem, G., Schl&#246;tterer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+mating+in+wild+Drosophila+melanogaster+revisited+by+microsatellite+analysis.">Multiple mating in wild Drosophila melanogaster revisited by microsatellite analysis.</a> Mol. Ecol. , 915-917 (1998).</li><li>Ochando, M. D., Reyes, A., Ayala, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+paternity+in+two+natural+populations+(orchard+and+vineyard)+of+Drosophila.">Multiple paternity in two natural populations (orchard and vineyard) of Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 93 (21), 11769-11773 (1996).</li><li>Becher, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast,+not+fruit+volatiles+mediate+Drosophila+melanogaster+attraction,+oviposition+and+development.">Yeast, not fruit volatiles mediate Drosophila melanogaster attraction, oviposition and development.</a> Func. Ecol. 26 (4), 822-828 (2012).</li><li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+visual+transduction.">Drosophila visual transduction.</a> Trends Neurosci. 35 (6), 356-363 (2012).</li><li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+for+courtship+suppression+in+Drosophila.">Assay for courtship suppression in Drosophila.</a> Cold Spring Harbor Prot. 2011 (2), 5575 (2011).</li><li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+Dopaminergic+and+GABAergic+Neurons+Control+the+Duration+and+Persistence+of+Copulation+in+Drosophila.">Opposing Dopaminergic and GABAergic Neurons Control the Duration and Persistence of Copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li><li>Bretman, A., Fricke, C., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plastic+responses+of+male+Drosophila+melanogaster+to+the+level+of+sperm+competition+increase+male+reproductive+fitness.">Plastic responses of male Drosophila melanogaster to the level of sperm competition increase male reproductive fitness.</a> Proc. Biol. Sci. 276 (1662), 1705-1711 (2009).</li><li>Dukas, R., Jongsma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Costs+to+females+and+benefits+to+males+from+forced+copulations+in+fruit+flies.">Costs to females and benefits to males from forced copulations in fruit flies.</a> Anim. Behav. 84 (5), 1177-1182 (2012).</li><li>Yorozu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+sensory+representations+of+wind+and+near-field+sound+in+the+Drosophila+brain.">Distinct sensory representations of wind and near-field sound in the Drosophila brain.</a> Nature. 457 (7235), 201-205 (2009).</li></ol>

저자는 공개 할 경쟁적 이익이 없습니다.

이 프로토콜은 짝짓기 커플이 짝짓기 빈도를 결정하는 데 사용하도록 가정 된 환경 신호를 지속적으로 제어하면서 24 시간 동안 짝짓기 행위를 테스트하는 분석을 설명합니다. 배지에 효모가 들어있을 때 가압 공기 시스템을 통해 전달되는 효모 공기에 반응하여 결합 빈도를 높일 수 있습니다 ( 그림 2B ). 또한 짝짓기 빈도의 비슷한 반응은 배지에서 한천, 펩톤 및 아세트산 냄새만을 포함하는 간략한 식품 배지에서 관찰 할 수 있습니다 ( 그림 3B ) 여기에서 실험을 통해, 남녀가 동일한 환경 조건에 노출되기 때문에 부부의 일반적인 교미 행동에만 결론을 이끌어 낼 수 있습니다. 그러나 이전 연구에서 우리는 교미 빈도의 47 %가 여성에 의해 결정되지만 남성 기여는 단지 11 %에 불과하다는 것을 알고 있습니다20 . 따라서 관찰 된 교미 빈도의 변화의 대부분은 여성의 성적 수용성의 결과 일 수 있습니다. 증가 된 남성 성인 D.이 여성이 성공적으로 짝짓기 (29)를 시도 편향 수 melanogaster의로 여전히 그대로 사용하거나 짝짓기를 거부 할 수있는 여성 잎 구애. 확고한 결론을 내리고 여성의 성적 수용성과의 교미 빈도의 차이를 구체적으로 밝히기 위해서는 여성의 유전형이 다양하지만 남성의 유전형이 일정하게 유지되는 추가 교미 부부를 시험 할 필요가 있습니다. 이 프로토콜은 가압 공기 시스템 또는 식품 매체에 직접적으로 부부에게 향기로운 화합물을 전달하는 두 가지 방법을 입증했습니다. 가압 공기 시스템은 어떤 효과가 공기를 통해 전달되는 화합물에 기인 할 수있는 이점이 있지만, 화합물이 식품 매체에 직접 투입 될 때 결론 지을 수는 없습니다. 반면에, w암염 효과가 가압 공기 시스템에서 발견되면 자동으로 신호가 행동에 영향을 미치지 않는다는 의미는 아닙니다. 또한 화합물이 가압 공기 시스템을 통해 효율적으로 전달되지 않는다는 것을 의미 할 수도 있습니다. 공기 공급 시스템의 출구에서의 공기 조성은 탄화수소 필터를 배치하고 질량 분석기와 결합 된 가스 크로마토 그래피로 포획 된 공기 함량을 분석함으로써 분석 될 수있다. 가압 공기 시스템은 장거리에서 쉽게 공기 중으로 만들 수있는 화합물을 시험하기위한 훌륭한 분석법입니다. 휘발성이 적은 화합물은 식품 매체에 직접 넣어 야합니다. 가압 공기 시스템의 또 다른 단점은 공기 속도가 파리의 행동에 영향을 미칠 수 있다는 것입니다. 공기 유속이 30 (0.7-1.6 m / s 이상)이 너무 높은 경우에는 파리의 움직임이 정지. 또한 가압 공기 시스템은 식품 매체를 건조시켜 간단하고 낮은 품질의 환경을 견딜 수 없게합니다. 두 경우 모두, 파리는 빠르지 않을 수 있습니다오메가도 똑같이 잘 나타나기 때문에 테스트 한 특정 화합물에 대한 결론을 내릴 수 없습니다. 이러한 분석법을 최적으로 수행하기위한 준비 중에 몇 가지 단계가 필수적입니다. 주의를 요하는 첫 번째 단계는 매체 준비입니다. 아세트산과 같은 냄새가 나는 휘발성 화합물을 포함한 매질은 증발을 피하기 위해 실험 당일에 조제되어야하며 조만간 조제하는 것이 중요합니다. 또한, 공기 흐름이 악취의 증발을 자극 할 수 있기 때문에 매체가 여분의 공기 흐름이없는 표면에서 단단해야합니다 (퓸 후드 사용을 피하십시오). 특별한주의가 필요한 두 번째 단계는 압축 공기 시스템을 확립하는 것입니다. 기류는 아레나에 액체를 옮기지 않고 부드럽게 거품을 일으킬만큼 충분히 높아야합니다. 이 프로토콜은 짝짓기 행동과 함께 효모 냄새를 이용한 행동 분석을 보여줍니다. 그러나이 시스템은냄새의 유형뿐만 아니라 다른 유형의 행동. 다른 냄새에이 시스템을 사용하려면 기류와 냄새 매체를 조정하여 화합물을 접시에 옮기는 것을 최적화해야합니다. 그러나 일반적으로 공기로 옮겨지는 화합물은이 시스템으로 테스트 할 수 있습니다. 또한, 남녀 모두에서 동일한 유형의 요리를 사용하거나 더 크거나 작은 테스트 영역에 도달하고 연결할 수 있도록 튜빙을 조정하여 모든 유형의 행동을 테스트 할 수 있습니다. 또한 더 자세한 동작을 테스트 할 때 사용되는 카메라의 프레임 속도와 해상도를 다시 고려해야합니다. 어떤 경우 에라도, 시험 냄새가 있거나없는 두 가지 실험이 동시에 그리고 동일한 공기원에서 실행되면, 한 실험에서 다른 실험으로의 압력 또는 농도의 변화에 ​​관계없이 환경 큐에 대한 반응을 감지 할 수 있습니다. 마지막으로, 여기에 설명 된 분석법은 f (F)가 가능한 한 다른 LD 사이클 (최대 48 시간) 동안 연장 될 수 있습니다.ood 공급이 마르지 않습니다.

생식 행동은 일반적으로 남성보다 큰 배우자를 생산하고 개발하는 자손을 키우기위한 조건을 신중하게 선택해야하는 여성에게 특히 높은 에너지 비용을 초래합니다. 에너지 비용 때문에 재생산이 영양 상태와 관련이 있다는 것은 놀라운 일이 아닙니다. 이것은 포유류를 포함한 대부분의 동물에서 마찬가지입니다. 포유 동물은 영양 부족으로 사춘기가 늦어 질 수 있으며 성행위가 식량 제한으로 인해 부정적인 영향을받을 수 있습니다 1 . 유전 모델 유기체 Drosophila melanogaster 의 번식은 영양 상태에 의해서도 영향을받습니다. 식품 휘발성이의 존재에 높은 수준의 남성 코트, 그리고 여성보다 성적 효모, 계란 생산 및 자손의 생존 3, 4, 5의 주요 영양소의 존재에 수용된다. 이진화 보존 된 식품에 대한 생식 적 반응은 환경 친화적 인 식품 이용 가능성을 유 전적으로 다루기 쉽고 시간이 절약되는 유기체에서 성 생식에 연결시키는 메커니즘을 연구 할 기회를 제공합니다. 실제로 D. melanogaster 에서의 연구는 인슐린 경로가 음식과 교미 행동 사이의 연관성에 대한 중요한 조절 자라는 것을 의미합니다 6 . 또한 자체를 정합하는 단계는 암컷의 음식 선호도뿐만 아니라 관련된 화학 감각 뉴런 7, 8, 9를 변경하는 것으로 나타났다. D. melanogaster 에서 음식 단서가 생식 행동에 영향을주는 것은 분명합니다. 이러한 효과는 주로 여성, 특히 이미 5를 짝 지어 준 여성에게 영향을 미치는 것으로 보입니다. 그러나 환경 조건의 급성 영향을 시험하기 위해 여성의 행동에 고전적으로 사용되는 분석법이짝짓기 에피소드 간의 오랜 중단으로 인해 적합하지 않습니다. 클래식 remating 분석에서 처녀 여성 먼저 남성과 짝짓기, 즉시 격리하고 새로운 남성과 함께 24 ~ 48 시간 후에 제공됩니다. 이 고전적 분석법은 여성의 행동과 여성 반응을 수정하는 남성 사정의 구성 요소를 확인하는 데 큰 성공을 거두었습니다 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 . 따라서 여기에서 입증 된 연속 교미 분석은 재생산 행동에 대한 환경 조건의 급성 효과를 연구하는 데 사용할 수있는 고전적 교미 분석법에 추가 된 것입니다. 여기에 설명 된 짝짓기 행동에 대한 연속 분석법을 사용하여 이전에 효모에 노출 된 한 쌍의 파리가24 시간 관찰 기간 5, 19, 20, 21 배 이상 everal, 파리만이 remate 한번 음식 (5)에 노출되지 않는 상태. 이 발견은 D. melanogaster 문헌의 많은 부분에 비추어 수수께끼 일 수 있습니다 . 암컷은 초기 교미 후 며칠 동안 remate하지 않는다는 것을 나타냅니다 (참고 문헌 10 , 11 에서 검토 됨). 그러나 이러한 불일치는 새로운 교미 기회가 제공되기 전에 암컷이 1 일에서 며칠 동안 격리 된 분석 조건에 의해 쉽게 설명 될 수 있습니다. 쌍이이 1 시간의 관측 기간에 짝짓기하지 않으면 암컷은 감수성이없는 것으로 특징 지어진다. 더욱이, 야생 잡힌 파리의 자료에 따르면 암컷에 저장 기관에 4 ~ 6 마리의 수컷이 들어있는 정자가 있다는 것을 감안할 때, 높은 교미 빈도는 놀랄만 한 일이 아니어야한다. 따라서여성 자연스럽게, 23 차례 (22) remate 것을 dicating. 여기에서 우리는 파리가 어떻게 모여지고 환경 조건에 대한 정보를 결합하여 짝짓기 빈도를 조절하는지에 대한이 연속 교배 분석법의 사용을 입증합니다. 이 분석을 통해 유전자 연구를 위해 비교적 많은 수의 교미 부부를 시험하고 휘발성 및 비 휘발성 환경 단서의 영향을 시험 할 수 있습니다. 이 분석은 일반적으로 24 시간 동안 실행되지만 48 시간까지 연장 될 수있어 명암주기 (light-dark, LD)주기와 같은 사이클링 환경 큐를 테스트 할 수 있습니다. 우리는 식품 기질에서 비 휘발성 효모 영양소의 가용성과 함께 가압 공기 시스템 내에서 효모 배양으로부터 휘발성 신호의 영향을 시험함으로써이 분석을 입증합니다. 가압 공기 시스템은 지속적으로 휘발성 큐를식품 기질 및 시험 커플 (그의 교미 행동이 모니터 됨). 효모가 짝짓기에 영향을주는 세부 사항을 더 결정하기 위해, 우리는 효모의 주요 휘발성 화합물, 즉 아세트산 24 를 펩톤 (아미노산)의 형태로 식품 기질의 효모에 상응하는 아미노산 함량과 함께 시험한다 동물성 단백질의 효소 소화에서 유래 된 산). 이 실험들은 함께 D. melanogaster 의 교미 작용에 대한 환경 신호의 영향이이 분석법으로 시험 될 수 있음을 보여줍니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel kitchen cabinet</td>
			<td>Horecaworld</td>
			<td>7412.0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White LEDs</td>
			<td>Lucky Light</td>
			<td>ll-583wc2c-001</td>
			<td>Cold white, 20 mAmp and 2 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red LEDs</td>
			<td>Lucky Ligt</td>
			<td>ll-583vc2c-v1-4da</td>
			<td>Wavelength between 625 nm, 20 mAmp and 6 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resistor</td>
			<td>Royal Ohm</td>
			<td>CFR0W4J0561A50</td>
			<td>560 ohm, 0.25 W, 250 V and 5 % tolerance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone light meter app</td>
			<td>Patrick Giudicelli</td>
			<td></td>
			<td>Light/Lux Meter FREE, version 1.1.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power timer</td>
			<td>Alecto</td>
			<td>TS-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal brackets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sharp angle 5 by 5 mm,&#160; 2 x 5450 and 1 x 1100 mm long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted glass plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1190 x 545 x 5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper sheets</td>
			<td>LEE filters</td>
			<td>220</td>
			<td>White frost</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small fan</td>
			<td>Nanoxia Deep silence</td>
			<td>4260285292828</td>
			<td>80 mm Ultra-Quiet PC Fan, 1200 RPM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big fan</td>
			<td>Nanoxia Deep silence</td>
			<td>4260285292910</td>
			<td>120 mm Ultra-Quiet PC Fan, 650-1500 RPM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcam camera</td>
			<td>Logitech</td>
			<td>950270</td>
			<td>B910 HD WEBCAM OEM, Angle: 78-degree, resolution: 5-million-pixel&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera software</td>
			<td>DeskShare</td>
			<td></td>
			<td>Security monitor pro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly rearing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly rearing bottles</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>32-130</td>
			<td>6oz Drosophila stock bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flypad</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>59-114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild-type flies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Canton-S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly rearing vials</td>
			<td>Dominique Dutscher</td>
			<td>789008</td>
			<td>Drosophila tubes narrow 25x95 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td>MIR-154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic hot plate</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>505-20000-00</td>
			<td>MR Hei-Standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Caldic Ingredients B.V.</td>
			<td>010001.26.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Gezond&#38;wel</td>
			<td>1019155</td>
			<td>Dextrose/Druivensuiker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Van Gilse</td>
			<td></td>
			<td>Granulated sugar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>62-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat germ</td>
			<td>Gezond&#38;wel</td>
			<td>1017683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soy flour</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>62-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molasses</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>62-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Active dry yeast</td>
			<td>Red Star</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegosept</td>
			<td>Flystuff</td>
			<td>20-258</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone (bacto)</td>
			<td>BD</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000631000</td>
			<td>Glacial, 100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small petridish</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>627102</td>
			<td>35 x 10 mm with vents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin film</td>
			<td>Bemis NA</td>
			<td></td>
			<td>Parafilm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast and pressurised air set-up</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big petridish</td>
			<td>Gosselin</td>
			<td>BP140-01</td>
			<td>140 x 20.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>Millipore corporation</td>
			<td></td>
			<td>MiliQ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>BD</td>
			<td>212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (pure)</td>
			<td>BD</td>
			<td>214530</td>
			<td>bacto</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (0(+)-glucose monohydrate)&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>18270000004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open caps</td>
			<td>Schott</td>
			<td>29 240 28&#160;</td>
			<td>GL45</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone septum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>548-0662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barbed bulkhead fittings</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>6149-0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large PVC tubing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter: outer 1.2 cm and inner 0.9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small PVC tubing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameters: outer 0.8 cm and inner 0.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquarium pump</td>
			<td>Sera precision</td>
			<td></td>
			<td>Sera air 110 plus, AC 220-240 V, 50/60 Hz, 3 W and pressure &#62;100 mbar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activated charcoal</td>
			<td>Superfish</td>
			<td>A8040400</td>
			<td>Norit activated carbon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposible filter unit</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>10462100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>300013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot glue</td>
			<td>Pattex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Whatman</td>
			<td></td>
			<td>FP 30/pore size 0.45 mm CA-S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistics software</td>
			<td>R</td>
			<td></td>
			<td>lme4 package</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method to test the effect of environmental cues on mating behavior in drosophila melanogaster

개인의 성행위는 유전자형, 경험 및 환경 조건의 영향을받습니다. 이러한 요인들이 어떻게 상호 작용하여 성적 행동을 조절하는지는 여전히 잘 알려져 있지 않습니다. Drosophila melanogaster 에서는 식량 가용성과 같은 환경 적 단서가 성적 행동을 조절하는 메커니즘을 조사 할 수있는 다루기 쉬운 시스템을 제공하는 교미 활동에 영향을 미칩니다. D. melanogaster에서 , 환경 단서는 종종 화학 감각 기관과 후각 시스템을 통해 감지됩니다. 여기에서는 짝짓기 행동에 환경 화학 신호의 영향을 테스트하는 방법을 제시합니다. 이 분석법은 식품 매체와 짝짓기 커플을 포함하는 작은 짝짓기 경기장으로 구성됩니다. 각 커플의 교미 빈도는 24 시간 동안 지속적으로 모니터링됩니다. 여기서 우리는 가청 공기 시스템을 통해 외부 소스로부터 환경 화합물을 시험 할뿐만 아니라 짝짓기 경기장에서 환경 성분을 직접 조작하는이 분석의 적용 가능성을 제시합니다. 너는가압 에어 시스템은 매우 휘발성 인 화합물의 효과를 테스트하는 데 특히 유용하며, 상대방의 구성 요소를 직접 조작하는 것은 화합물의 존재를 확인하는 데 가치가 있습니다. 이 분석은 유전 적 및 환경 적 단서가 짝짓기 행동과 생식력 및 기타 남성과 여성의 생식 행동에 미치는 영향에 대한 질문에 대답 할 수 있습니다.

이 연속 분석법을 사용하여 실험적 환경 조건 하에서 교미 행동 및 특정 주파수에서의 교미 빈도를 결정할 수 있습니다. 환경 조건을 제어하기 위해 우리는 스테인리스 스틸 주방 캐비닛을 자체 광원 및 확산 장치를 사용하여 테스트 영역으로 변형 시켰습니다.이 캐비닛은 결합 영역의 상단에서 높은 광량과 눈부심을 보장합니다 ( 그림 1A ) . 내부 테스트 영역은 헥산이나 에탄올과 같은 유기 용제로 세척 할 수있는 스테인리스 스틸과 유리로 완전히 덮여 있습니다. 또한 캐비닛에는 튜빙 용 입구 역할을하는 구멍이있어 압축 공기 시스템의 휘발성 큐를 가져옵니다 ( 그림 1A 및 1B 참조). 효모 냄새에 맞게 조정 된 가압 공기 시스템은 4 개의 피펫 스플리터를 통해 시험장에 들어가기 전에 액체 효모 배양을 통해 안내되는 기류로 구성됩니다.각각 10 개의 콘센트 ( 그림 1C ). 전체 시스템은 밀폐되어 있으며, 효모 배양에 들어가기 전과 후에 여러 가지 입자 필터가 장착되어 혼란스러운 냄새 ( 그림 1B )로 인한 오염을 최소화합니다. 이 분석의 사용을 입증하기 위해, 우리는 효모 배양 물에서 휘발성 큐가 짝짓기 행동에 영향을 미칠 수 있는지 여부를 테스트했습니다. 공기는 24 시간 동안 액체 이스트 배양액을 통해 버블 링되었고 공기 배출구는 각 짝 지어주는 경기장의 입구에 배치되었습니다 ( 그림 2A 참조). 짝짓기 경기장의 절반에는 효모 (식품 + 효모)가 함유 된 플라이 음식이 들어 있고 나머지 절반에는 효모가 첨가되지 않은 플라이 음식 (식품 효모)이 들어 있습니다. 야생형 수컷과 암컷은 외부 효모 배양에서 유래 된 악취에 노출되었고, 그들의 교미 빈도가 기록되었다. 그래프로 표시된 결과를 설명하는 데 필요한 변수를 확인하기 위해 포함되거나 제외 된 혼합 효과 모델을 실행했습니다.식품 매개체, 효모 공기 및이 둘의 상호 작용에 대한 독립적 인 변수를 제공합니다. 그림 2B 의 데이터는 식품 매개체 (p = 0.001)와 효모 대기 (p = 0.061)의 독립 변수를 포함하는 모델로 가장 잘 표현되지만 상호 작용 효과를 설명하지는 않습니다. 효모 대기 변수가이 전체 데이터 세트에서 중요하지 않더라도 결과를 설명 할 필요가 있습니다. 식품 매개체로 분리 된 효모 공기의 분석은 식품 매체 (공기 : p = 0.992)에 존재하는 효모가 없을 때 교미 부부가 효모 냄새에 반응하지 않는 것을 보여 주지만, 효모가있을 때 효모 공기의 교미 빈도를 증가시킵니다 또한 식품 배지 (공기 : p = 0.018)에 첨가 하였다. 함께, 이러한 결과는 식품 매체 조건과 함께 환경 악취의 영향을 시험하기위한 가압 공기 시스템의 적용 가능성을 입증합니다. 우리는 또한 가압 공기 시스템이 어떻게 수행 될 수 있는지 보여줍니다시험장에 직접 환경 화학적 단서를 추가하면됩니다. 특정한 효모 화합물이 교미 빈도에 영향을 미치는지를 입증하기 위해 효모의 아미노산 함량이 효모가 한천에 공급하는 아미노산에 상응하는 펩톤 (가수 분해 된 단백질)의 복용량을 배치함으로써 교미에 미치는 영향에 필수적이라는 가설을 시험했다 매칭 아레나를 라이닝하는 기판. 우리는 또한 교미 빈도를 높이기 위해 효모의 주요 휘발성 발효 산물 중 하나 인 아세트산의 필요성을 테스트했습니다. 이것은 식품 매체에 아세트산을 직접 첨가하여 이루어졌습니다. 야생형 남성과 여성은 아세트산이 포함되거나 포함되지 않은 펩톤이 함유 된 한천 또는 한천을 함유 한 경기장에서 식품 배양액에서 직접 테스트를 받았다 ( 그림 3B ). 이것은 아주 간단한 음식 매체와 빈약 한 환경을 만듭니다. 따라서 평균 교미 빈도도 그림 2B와 비교하여 감소합니다. 그림 3B 의 데이터는식품 매개체 (p = 0.002), 아세트산 공기 (p = 0.001), 두 가지 상호 작용 (p = 0.022)의 독립 변수. 여성 수용체는 아세트산이 존재할 때 증가하지만, 펩톤이 배지에 존재하는 상태에서만 증가합니다. 이것은 파리가 짝짓기 빈도를 증가시키기 위해 아미노산과 아세트산을 동시에 감지해야 함을 보여줍니다 ( 그림 3B ). 이것은 시험장에 냄새가 나는 화합물을 직접 추가하면 짝짓기 행위에 영향을 미칠 수 있으며 이러한 영향은 매우 간단한 환경 조건에서 감지 될 수 있음을 보여줍니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55690/55690fig1.jpg" /> 그림 1 : 효모가있는 실험용 박스 및 압축 공기 시스템의 다이어그램. ( A ) 섹션 1에서 설명한 환경 제어 짝짓기 상자의 개략도. 주석이 달린 숫자와 화살표의 설명 : 1. al<html> 흰색과 붉은 빛을 ternating; 2. 작은 팬; 3. 3 층의 여과지, 2 층의 여과지로 구성된 각 층; 상자의 3면에 부착 된 브래킷 위에 놓인 유리 확산 판; 5. 큰 팬; 6. 관과 케이블을위한 구멍; 7. 실험 지역; 큰 화살, 유리 접시에 50cm; 가운데 화살표, 케이블 구멍 높이 35cm; 작은 화살표, 튜빙 구멍 용 높이 7cm. ( B ) 섹션 5, 6.4 및 6.5에서 설명한대로 공기 흐름과 액체 효모 문화의 도식 그림. 주석이 달린 번호의 설명 : 1. 일회용 필터 유닛; 2. 실리콘 셉텀과 아웃 및 인렛이있는 캡; 액체 매질; 및 4. 유리 섬유와 유리 튜브. ( C ) 6.7 절에 설명 된 공기 배출구의 개략도. 주석이 달린 숫자의 설명 : 1. 혈청 피펫; 2. 1 mL 주사기에서 자른 튜브 및 3. 1,000 μL 피펫 팁.target = &quot;_ blank&quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55690/55690fig2.jpg" /> 그림 2 : 효모 냄새는 식품 기질에서 효모의 존재 하에서 여성 수용성을 증가시킵니다. ( A ) 입구 구멍을 통해 들어가는 그림 1C의 공기 출구에서 한 남성과 한 여성과 피펫 팁을 가진 교배 경기장의 개략도. ( B ) Canton-S 교배 빈도에서 효모가 있거나없는 효모 악취에 대한 반응 빈도를 플라이 식품 배지 (식품 - 효모 : 중간 공기 n = 12, 효모 공기 n = 13 및 식품 + 효모 : 중간 공기 n = 24, 효모 공기 n = 23). SEM 오차 막대와 독립 변수로 공기를 사용하고 각 식품 매체에 대한 임의의 변수로 날짜를 독립적으로 포함하는 혼합 효과 모델의 통계 출력을 가진 선형 그래프. 주요 통계l 모델은 음식 (p = 0.001)과 누룩 공기 (p = 0.061)를 포함한다. 참고 문헌 5 에서 수정 됨. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55690/55690fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55690/55690fig3.jpg" /> 그림 3 : 플라이 음식 기질의 아세트산은 펩톤 존재 하에서 여성 수용성을 증가시킵니다. ( A ) 아세테이트 산을 함유 한 플라이 음식물과 진입 구멍을 막는 플라스틱 파라핀 필름 플러그가있는 결합 경기장의 개략도. ( B ) 한천 또는 펩톤 배지 (아세아 : - 아세트산 n = 52, + 아세트산 n = 40 및 펩톤 : - 아세트산)에서 아세트산에 대한 반응으로 Canton-S 교배 쌍의 교미 빈도를 그래프로 나타낸다. n = 28, + 아세트산 n = 25). SEM 오류 막대 및 통계가있는 선 그래프식품 매개체 (p = 0.002), 아세트산 공기 (p = 0.001), 식량 공기 (p = 0.022)를 독립 변수로 사용하고 혼합 변수 모델을 확률 변수로 사용한 통계적 결과 참고 문헌 5 에서 수정 됨. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55690/55690fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

a-method-to-test-effect-environmental-cues-on-mating-behavior

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

9.0K 조회수.  University of Groningen.  우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다. 

비디오: A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

연구

행동분석학

Measuring Sensitivity to Viewpoint Change with and without Stereoscopic Cues

The speed and accuracy of object recognition is compromised by a change in viewpoint; demonstrating that human observers are sensitive to this transformation. Here we discuss a novel method for simulating the appearance of an object that has undergone a rotation-in-depth, and include an exposition of the differences between perspective and orthographic projections. Next we describe a method by which human sensitivity to rotation-in-depth can be measured. Finally we discuss an apparatus for creating a vivid percept of a 3-dimensional rotation-in-depth; the Wheatstone Eight Mirror Stereoscope. By doing so, we reveal a means by which to evaluate the role of stereoscopic cues in the discrimination of viewpoint rotated shapes and objects.

We discuss a novel method forviewpoint-rotation of visual stimuli, and demonstrate using a mirror stereoscopethe three-dimensional percept of rotation-in-depth. The technique can be used to investigate the role of stereoscopic cues in encoding viewpoint-rotated figures.

The speed and accuracy of object recognition is compromised by a change in viewpoint; demonstrating that human observers are sensitive to this ...

The Use of the Puzzle Box as a Means of Assessing the Efficacy of Environmental Enrichment

Environmental enrichment can dramatically influence the development and function of neural circuits. Further, enrichment has been shown to successfully delay the onset of symptoms in models of Huntington&#8217;s disease 1-4, suggesting environmental factors can evoke a neuroprotective effect against the progressive, cellular level damage observed in neurodegenerative disorders. The ways in which an animal can be environmentally enriched, however, can vary considerably. Further, there is no straightforward manner in which the effects of environmental enrichment can be assessed: most methods require either fairly complicated behavioral paradigms and/or postmortem anatomical/physiological analyses. This protocol describes the use of a simple and inexpensive behavioral assay, the Puzzle Box 5-7 as a robust means of determining the efficacy of increased social, sensory and motor stimulation on mice compared to cohorts raised in standard laboratory conditions. This simple problem solving task takes advantage of a rodent&#8217;s innate desire to avoid open enclosures by seeking shelter. Cognitive ability is assessed by adding increasingly complex impediments to the shelter&#8217;s entrance. The time a given subject takes to successfully remove the obstructions and enter the shelter serves as the primary metric for task performance. This method could provide a reliable means of rapidly assessing the efficacy of different enrichment protocols on cognitive function, thus paving the way for systematically determining the role specific environmental factors play in delaying the onset of neurodevelopmental and neurodegenerative disease.

Environmental enrichment provides a potential protective effect against neurodegenerative disorders. Currently, however, there is no easy way of determining the efficacy of enrichment procedures. This protocol describes a simple &#8220;Puzzle Box&#8221; method for assessing an animal&#8217;s cognitive function, in order to reveal the effectiveness of environmental enrichment.

보충 환경의 효능을 평가하는 수단으로서 퍼즐 상자의 사용

Environmental enrichment can dramatically influence the development and function of neural circuits.  Further, enrichment has been shown to successfully ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations supportive behavior of other people as well as positive social relationships can act as powerful resources to cope with stress. In order to study the interplay between these variables, this protocol describes two effective experimental manipulations of social relationships and supportive behavior in the laboratory. In the present article, these two manipulations are implemented in the Trier Social Stress Test (TSST)&#8212;a standard stress induction paradigm in which participants are subjected to a simulated job interview. More precisely, we propose (a) a manipulation of the relationship between different protagonists in the TSST by making a shared social identity salient and (b) a manipulation of the behavior of the TSST-selection committee, which acts either supportively or unsupportively. These two experimental manipulations are designed in a modular fashion and can be applied independently of each other but can also be combined. Moreover, these two manipulations can also be integrated into other stress protocols and into other standardized social interactions such as trust games, negotiation tasks, or other group tasks.

Previous research on the social dimension of stress has focused on two important variables: social identity and social support. This protocol introduces an effective experimental manipulation of these two social variables and describes their implementation in a standard stress induction paradigm (Trier Social Stress Test).

스트레스의 사회적 차원 : 트리어 사회에서 사회적지지와 사회적 정체성의 실험 노는 시험 스트레스

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods require saccharin/sucrose fading, water deprivation and/or extended training to initiate operant responding in rats. This paper describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol that is convenient for experimenters and does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading, thus eliminating the potential confound of using sweeteners in ethanol operant self-administration studies. With this method, Wistar rats typically acquire and maintain self-administration of a 20% ethanol solution in less than two weeks of training. Furthermore, blood ethanol concentrations and rewards are positively correlated for a 30 min self-administration session. Moreover, naltrexone, an FDA-approved medication for alcohol dependence that has been shown to suppress ethanol self-administration in rodents, dose-dependently decreases alcohol intake and motivation to consume alcohol for rats self-administering 20% ethanol, thus validating the use of this new method to study the reinforcing properties of alcohol in rats.

This protocol describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol in rats that, contrary to standard methods, does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading to initiate responding.

물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article describes a rodent version of the PVT&#8212;termed the &#34;rPVT&#34;&#8212;that measures similar aspects of attention (i.e., performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention). Data are presented that demonstrate both the short- and long-term usefulness of the rPVT when employed with laboratory rats. Rats easily learn the rPVT, and learning to perform the basic procedure takes less than two weeks of training. Once acquired, rat performances in the rPVT show a high degree of similarity to these same performance measures in the human PVT, including similarities in, lapses in attention, reaction times, vigilance decrements across session time (i.e., the human &#34;time-on-task&#34; effects), and the response-stimulus interval (RSI) effect described for humans. Thus the rPVT can be an extremely valuable tool for assessing the effects of a wide range of variables on sustained attention quite similar to human PVT performances, and thus can be useful for developing novel treatments for neurobehavioral dysfunctions.

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

A rat version of the human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is described that measures aspects of attention similar to those measured with the human PVT, including aspects of human vigilance such as performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention.

설치류 심리 운동 경계 시험 (rPVT) : 쥐에서 신경 행동 학적 성능을 평가하는 방법

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Testing Animal Anxiety in Rats: Effects of Open Arm Ledges and Closed Arm Wall Transparency in Elevated Plus Maze Test

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral science, conflicting outcomes are often provided from different laboratories. To identify reasons for the different outcomes, we previously focused on arm features, which differ between laboratories, most notably the presence/absence of ledges at the sides of open arms and the transparency/opaqueness of closed arm walls. In a previous report, we used a custom designed container to compare rat behavior on different combinations of open and closed arm designs under otherwise identical experimental conditions, and showed that differences in arm features interfere with experimental outcomes. In brief, open arm ledges significantly increased anxiety-like behavior in rats, while transparent arms may also have decreased this behavior. Furthermore, we verified a higher detection sensitivity of the effect of an anxiolytic drug in a combination of no-ledged open arm + opaque walled closed arm compared with a combination of ledged open arm + transparent walled closed arm. In this report, we introduce our protocol for the elevated plus maze test, together with discussion of the key results from the previous report and our experimental experience. We believe this report will provide useful information for researchers who have employed or who plan to use the elevated plus maze in their studies.

Rats' anxiety-like behavior tested by the elevated plus maze varies highly depending on the testing environment. Here we show how apparatus settings, especially arm structure, affect behavior on the maze, and we explain a reliable protocol to detect effects of anxiolytic drugs. This report will contribute to anxiety research.

쥐에서 동물 불안을 테스트: 오픈 팔 레와 닫힌된 팔 벽 투명성 높은 플러스 미로 테스트

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral ...

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen distribution. It is also possible that aberrant behavior of oxygen-sensing neurons could induce hypoxia-like behavior in the presence of normal oxygen levels. In D. melanogaster, development at low oxygen levels results in inhibition of growth and sluggish behavior during the larval phases. However, these established manifestations of oxygen deficit overlap considerably with the phenotypes of many mutations that regulate growth, stress responses or locomotion. As result, there is currently no assay available to identify i) cellular hypoxia induced by a mutation or ii) hypoxia-like behavior when induced by abnormal neuronal behavior.
We have recently identified two distinctive behaviors in D. melanogaster larvae that occur at normal oxygen levels in response to internal detection of hypoxia. First, at all stages, such larvae avoid burrowing into food, often straying far away from a food source. Second, tunneling into a soft substratum, which normally occurs during the wandering third instar stage is completely abolished if larvae are hypoxic. The assay described here is designed to detect and quantitate these behaviors and thus to provide a way to detect hypoxia induced by internal damage rather than low external oxygen. Assay plates with an agar substratum and a central plug of yeast paste are used to support animals through larval life. The positions and state of the larvae are tracked daily as they proceed from first to third instar. The extent of tunneling into the agar substratum during wandering phase is quantitated after pupation using NIH ImageJ. The assay will be of value in determining when hypoxia is a component of a mutant phenotype and thus provide insight into possible sites of action of the gene in question.

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

The protocol describes a simple assay to identify Drosophila melanogaster larvae that are experiencing hypoxia under normal atmospheric oxygen levels. This protocol allows hypoxic larvae to be distinguished from other mutants that show overlapping phenotypes such as sluggishness or slow growth.

초파리 melanogaster 애벌레에서 Hypoxia의 검출에 대 한 분석 결과 내/터널링

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific responses to changing temperatures according to their physiological tolerance and adaptability. Drosophila flies also possess a temperature sensing system that has become fundamental to understanding the neural basis of temperature processing in ectotherms. We present here a temperature-controlled arena that permits fast and precise temperature changes with temporal and spatial control to explore the response of individual flies to changing temperatures. Individual flies are placed in the arena and exposed to pre-programmed temperature challenges, such as uniform gradual increases in temperature to determine reaction norms or spatially distributed temperatures at the same time to determine preferences. Individuals are automatically tracked, allowing the quantification of speed or location preference. This method can be used to rapidly quantify the response over a large range of temperatures to determine temperature performance curves in Drosophila or other insects of similar size. In addition, it can be used for genetic studies to quantify temperature preferences and reactions of mutants or wild-type flies. This method can help uncover the basis of thermal speciation and adaptation, as well as the neural mechanisms behind temperature processing.

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Here we present a protocol to automatically determine the locomotor performance of Drosophila at changing temperatures using a programmable temperature-controlled arena that produces fast and accurate temperature changes in time and space.

시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Elevated Plus Maze Test Combined with Video Tracking Software to Investigate the Anxiolytic Effect of Exogenous Ketogenic Supplements

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The purpose of the method is to document the effect of various potential anxiolytic treatments on laboratory rodent models. The EPM test is based on the rodents&#39; proclivity toward protected, enclosed dark spaces and unconditioned fear of open spaces and heights, and their innate intense motivation to explore novel environments. The EPM test is a widely used behavioral test for investigating the anxiolytic or anxiogenic responses of rodents given drugs that are known to affect behavior. Observation demonstrating a decreased proportion of time spent on closed arms, an increased proportion of time spent on open arms, a reduced number of entries to closed arms, and an elevated number of entries to open arms measured by the EPM test may reflect reduced anxiety levels. Using this method, the effect of exogenous ketone supplements on anxiety-related behavior is tested in Sprague Dawley (SPD) rats. Exogenous ketone supplements are chronically fed to the rats for 83 days or subchronically and acutely orally gavaged, daily for 7 days, before conducting the EPM test. Behavioral data collection is performed using the SMART video tracking system by a blinded observer at the end of the treatments. The main findings indicate that the EPM test is an effective method to detect the ketone supplement-induced anxiolytic effect and can be considered a sensitive measure to assess changes in anxiety behavior associated with drug- or metabolic-based therapies.

Here, we present a protocol to investigate changes in the anxiety level of rodent animal models. The elevated plus maze (EPM) test, used together with a video tracking software, provides a reliable method to document the effect of various potential anxiolytic treatments in preclinical laboratory scenarios.

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The ...