This work was supported by the National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (RO1 AA014925 awarded to Dr. Patricia H. Janak at University of California, San Francisco, CA, USA), Fonds de recherche du Quebec &#8211; Sant&#233; (NC) and the Natural Sciences and Engineering Research Council (NC, 387224-2010). The open-access publication of this article was made possible by sponsorship from Med Associates Inc.

모든 절차는 콩 코디 아 대학에서 동물 연구 윤리위원회의 승인 및 동물 관리에 캐나다위원회의 추천과 동의합니다. 1 동물 <ol><li> (- 도착 240 g을 220) 남성 긴 에반스 쥐를 얻습니다. </li><li> 오전 7:00 조명 12 시간 명암주기에 온도 (21 ° C)와 습도 (44 %) 제어 동물 보호 시설에서 쥐에 유지한다. </li><li> 도착시 페어 - 집 쥐. 삼일 후, 개별적으로 베타 - 칩 침구, 나일론 뼈, 표준 쥐 차우와 물을 무료로 이용할 플라스틱 신발 상자 케이지의 집 쥐. 물병에 더하여, 제 병의 후속 배치를 허용하는 두 고리가 케이지 뚜껑을 사용한다. 참고 : 개별적으로 즉시이 동물 보호 시설에 도착 쥐를 수납 할 수있다. </li><li> 매일 쥐를 처리하기 시작합니다. 참고 : 가이드로 취급 일주는 파이 인에게 적응 충분합니다최대 cked 및 실험자에 의해 처리. </li></ol> 홈 케이지에서 2 간헐적 에탄올 액세스 참고 : 홈 케이지에서 실시 간헐적 에탄올 접근을 쥐 실험의 행동 훈련 단계는 17 ~ 19을 시작하기 전에 에탄올의 생리 학적으로 관련 양을 마실 수 있도록. 이 밝거나 어두운주기 동안 언제든지 초기화 할 수 있지만, 빛 단계에서이 절차를 시작합니다. <ol><li> 각 쥐​​에 대한 두 병을 준비합니다. <ol><li> 100 ml의 플라스틱 에탄올 병 473 ㎖의 표준 플라스틱 물병으로 실린더를 졸업 사용합니다. 때문에 누설 및 증발에 에탄올의 손실을 최소화하기 위해, 거의 최대 볼륨 용량을 가득 상대적으로 작은 용량의 에탄올 병을 사용합니다. </li><li> 수돗물에 95 % 에탄올을 희석하여 만든 15 % 에탄올, 한 병을 채 웁니다. NOTE : 다른 에탄올 농도, 예컨대 10 % 또는 20 %로, 15 % 에탄올 대신에 사용될 수도있다. </li><li> 인터넷수돗물 제 병 것이다. </li><li> 각 병에 누설을 최소화하기 위해 볼 베어링을 포함하는 sipper 튜브, 고무 마개를 삽입합니다. </li></ol></li><li> 제어 케이지 쥐 또는 침구 류를 포함하지 않는 제외하고 홈 케이지와 동일하게 취급이 제어 케이지를 설정합니다. <ol><li> 2.1.4 - 2.1.1 단계에 지정된대로 제어 케이지 에탄올과 물을 병을 준비합니다. </li><li> (- 2.8.2 단계 2.8.1에 설명 된대로) 에탄올 액세스 세션의 과정을 통해 발생할 수있는 유출 및 / 또는 증발 제어하는​​ 제어 케이지에서 얻은 방법을 사용하십시오. </li></ol></li><li> 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 모든 쥐의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 에탄올 병 및 각 가정 케이지의 물 한 병을 놓고 동시에 케이지를 제어 할 수 있습니다. 24 시간 동안 케이지에 두 병을 둡니다. </li><li> 24 시간주기의 끝에서, 두 병에서 제거동시에 케이지. </li><li> 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 이를 24 시간 이전에 각 래트의 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 24 시간 동안 소비 된 양의 에탄올과 물을 결정하기 위해, 각각의 병의 중량을 뺀다. <ol><li> 이 제어 케이지에 대한 동일한 작업을 수행하고 각 유체에 대한 유출의 평균 금액을 계산합니다. </li><li> 각 쥐​​에 해당하는 에탄올과 물 소비 측정에서 각각 에탄올과 물 유출의 평균 금액을 뺍니다. </li><li> g / kg, 물의 소비 및 에탄올 선호도 에탄올 소비량을 계산하기 위해 이러한 차이 유출 제어 수단을 사용한다. </li></ol></li><li> 에탄올 소비량 (g / kg), 제 전체 용액 (에탄올 + 물 성분)의 농도에 기초하여 부피 (㎖) 에탄올로 소비 된 용액의 중량 (g)으로 변환을 계산하기있어서식 볼륨 (ML) = 무게 (g) / 밀도 (g / ㎖). NOTE : 용액의 에탄올 농도는 농도의 함수로서 변할 것이다. <ol><li> 다음으로, 소비 중량 (g) 에탄올을 수득하기 위해 사용되는 특정 비율 솔루션 스케일링 에탄올의 밀도 (g / ㎖)에 의해 소비 에탄올 용액의 양 (ml)에 곱한다. </li><li> 에탄올 소비량 g / kg 측정 값을 얻기 위해 래트 체중 (kg)에 의해 소비되는 에탄올의 중량 (g)을 나눈다. </li></ol></li><li> 에탄올 선호도를 계산하기 위해, 전체 유체 (에탄올 + 물, ML) 흡기의 비율로 에탄올 섭취 (ml)로 표현한다. </li><li> 쥐의 홈 케이지 만 다시 물병을 돌려줍니다. 다음 24 시간 동안 물에 쥐에 대한 액세스 권한을 부여하지만, 에탄올 없습니다. 대신 에탄올 병의 홈 케이지에 미리 무게 초 물병을 배치합니다. </li><li> 24 시간주기의 끝에서, 동시에 케이지에서 모두 물병을 제거. </li><li> 물 병의 두 세트의 무게를. 녹음 모든 웨이ghts. </li><li> 이 단계 2.8.1에서 설명 된 바와 같이 제어 케이지에서 얻은 평균 유출 측정 값을 감산하는, 24 시간 이전 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 각각의 병의 중량을 빼기 - 2.8.2. </li><li> 물 소비를 계산하기 위해이 유출 제어 차이 방법을 사용하십시오. </li><li> 2.14 단계 2.1에 기재된 바와 같이, 래트를 에탄올과 물 병 모두를 제공하여 다시 사이클을 시작한다. <ol><li> 에탄올 소비의 높은 안정적인 수준을 유도하는 다수의 (약 12) 세션이주기를 반복합니다. 홈 케이지에서 에탄올 소비의 대표적인 결과 (g / kg)는 그림 1을 참조하십시오. </li><li> 사이드 환경의 발달을 방지하기 위해 세션을 통해 케이지 뚜껑에 에탄올과 물을 병의 공간적 위치를 교대. </li><li> 걸쳐 정확하고 안정적​​인 에탄올 농도가되도록 일주일에 한 번씩 신선한 에탄올 용액을 만들기세션. 이 방법을 사용하는 시간의 연장 기간 동안 에탄올을 증발의 영향을 최소화한다. </li></ol></li></ol> 3 장치 <ol><li> 통풍, 사운드 감쇠 부스 내부 하우스 각 조절 실. </li><li> 각 조절 스테인레스 스틸 금속 막대 바닥의 실, 명확한 폴리 카보네이트 천장, 명확한 폴리 카보네이트 다시 벽과 현관 문, 알루미늄 금속 패널 측벽을 구축합니다. <ol><li> 중앙에서 오른쪽 금속 측벽의 기지 근처에 유체 포트를 설치합니다. 포트에 항목을 감지하는 적외선 광전지와 유체 포트에 입구를 착용. </li><li> 뭉툭한 팁 바늘을 사용하여 에탄올을 포함하는 20 ML의 주사기에 유체 포트의 뒷면에서 폴리에틸렌 튜브를 연결합니다. 음향 감쇠 부스 밖에있는 주사기 펌프에 주사기를 놓습니다. 파블로프 차별 교육 세션의 경우, 펌프로 배치하기 전에 주사기로 에탄올을로드합니다. 프라임 튜브 나y를 수동으로 펌프를 진행하고 유체 포트에서 초과 에탄올을 닦아. </li><li> 왼쪽 사이드에서 챔버의 천장 근처 중앙 흰색 houselight를 설치합니다. </li><li> 식자 (2 Hz에서 사이클)와 왼쪽 사이드의 왼쪽 상단 모서리에 스피커와 화이트 노이즈 발생기를 설치합니다. </li></ol></li><li> 독특한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극의 특정 구성으로 각 조절 챔버 복장. <ol><li> 두 개의 서로 다른 문맥, 상황에 맞는 하나와 문맥이 같은 다른 절반 조절 실의 지정된 컨텍스트 일​​ 및 상황에 맞는 2 구성의 절반을 사용합니다. </li><li> 페트리 접시에 검은 마분지 천장과 전면을 통해 패널과 후면 챔버의 벽 (수돗물에 희석 레몬 오일로 만든 10 % V / V) 스프레이 레몬 냄새를 배치하고 중앙에 배치, 상황에 맞는 하나를 만들려면 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이, 그리고 금속 R 위에 투명한 폴리 카보네이트 층 패널을 삽입외경 층. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. </li><li> 상황이를 만들려면, 그들은 분명 있도록 페트리 접시에 (수돗물 벤즈알데히드를 희석하여 만든 10 % V / V) 아몬드 냄새 스프레이 중앙 배치, 발견 챔버의 천장과 전면 및 후면 벽을두고 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이 및에 금속봉 위에 바닥 천공 금속 플로어 패널을 삽입한다. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. </li></ol></li></ol> 4 습관화 행동 훈련 방에 쥐 습관화 및 공기 챔버 내에서이 컨텍스트의 각. 실험이 단계의 경우, 20 ml의 주사기로 에탄올을로드하지 않습니다. <ol><li> 이 짧은 습관화 세션의 실험실에서 행동 훈련 방에 동물 보호 시설에서 이송되는 과정에 쥐를 길들. <ol><li> 첫 번째 세션에서, 래트를로드 나n은 그들의 집 동물 관리 시설에서 휠 카트 상 케이지, 및 실험실 행동 트레이닝 실에 전송. , 실내 조명을 밝히는 각 사운드 감쇠 부스에서 팬을 켜고 방을 종료하고, 문을 닫고 카트에 자신의 홈 케이지에 남아있는 동안 쥐가 20 분 동안이 새로운 환경에 적응 할 수 있습니다. 이 20 분의 기간이 종료되면, 동물 관리 시설에 쥐를 반환. </li><li> 두 번째 세션에서, 실험실에서 행동 훈련 방에 쥐를 가지고. 이전으로, 객실의 조명과 칸막이 팬을 둡니다. 문이 혼란을 최소화하기 위해 폐쇄와 함께 방에 남아 있고, 처리하고 행동 훈련 방에 각각 쥐의 무게. 무게를 기록하고 동물 보호 시설로 쥐를 반환합니다. </li></ol></li><li> 이 짧은 습관화 세션에서 조절 챔버에 쥐를 길들. <ol><li> , 행동 훈련 방에 쥐를 운반 각 쥐의 체중을 기록,그리고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. </li><li> 첫번째 습관화 세션에서 절반 상황 1과 챔버와 문맥이 같은 나머지를 설정합니다. </li><li> 제 습관화 세션에서 이전 세션에서 사용하지 않은 콘텍스트 각 챔버를 설정. </li><li> , 쥐의 이러한 절반은 제 이상적 상황 1이어서 제 문맥이 노출되는 상황이, 다른 절반이어서, 콘텍스트 (1)에 노출되어, 카운터 방식 습관화 세션을 수행 모두 습관화 세션을 수행 필요한 경우가 이일에 분산 될 수 있지만 같은 날. </li><li> 습관화 세션의 경우, 프로그램이 실행 된 후 1 분 houselight을 조명하는 컴퓨터 프로그램을 사용한다. 20 분 세션 중에 유체 포트 항목의 총 수를 기록한다. 세션의 끝에서, 해제 houselight 프로그램. 습관화 세션 중에 에탄올 또는 단서를 제공하지 마십시오. </li></ol></l난&gt; <li> , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. </li><li> 장비 (예를 들면, 플로어 패널, 폐기물 운반, 페트리 접시)를 청소합니다. 자세한 내용은 단계 5.7를 참조하십시오. </li></ol> 5 파블로프 차별 교육 (PDT) 행동면에 기차 쥐 에탄올이 아닌 초 청각 신호와 결합되어 한 청각 신호를 구별합니다. 실험이 단계의 경우, 15 % 에탄올로 20 ml의 주사기를 입력합니다. <ol><li> 단계 3.3.2 및 3.3.3에 기술 된 바와 같이, 특유의 콘텍스트를 생성하는 시각적, 후각의 특정 구성, 및 촉각 자극과 각 조절 실을 옷 <ol><li> 에탄올 소비 및 선호도에 따라, 컨텍스트 1과 카운터 방식이 문맥에 나머지 절반에 쥐의 절반이 할당 홈 케이지 에탄올 액세스 과정의 마지막 2 세션에서 평균화. 계속 참조내선 상황에 맞는 A. 참고로 PDT 동안 사용 : 각 쥐은 훈련이 단계에서 하나의 상황을 경험해야합니다. </li><li> 후각 자극이 각 조절 실에 추가 할 수있는 마지막 상황에 맞는 자극이 있는지 확인합니다. 후각 자극을 포함하는 서로 다른 냄새의 comingling을 최소화하기 위해 챔버와 음향 감쇠 부스의 문을 닫습니다. </li></ol></li><li> , 행동 훈련 방으로 쥐를 가져와 각 쥐의 체중을 기록하고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. </li><li> 각 PDT 세션 동안 다음과 같은 일련의 이벤트를 제어하는​​ 컴퓨터 프로그램을 시작합니다. <ol><li> 프로그램 후 5 분가 발급 된에서, houselight을 밝히는. </li><li> 백색 잡음 자극을 제시하고 리모콘은 16 회를 자극. CS +로 이러한 청각 자극 중 하나를 지정하고 다른 두 컨텍스트 걸쳐 카운터 방식, CS-한다. </li><li> 각 CS + 및 CS - 시험 리터를 확인대서양 표준시 10 초. </li><li> CS +의 마지막 6 초 동안 유체 포트에 0.2 ㎖의 에탄올을 제공합니다. CS- 중에 에탄올을 제공하지 마십시오. </li><li> 각 PDT 세션 평균 마지막 58 분을합니다. 변수 시간 67 초 일정에 CS + 및 CS - 각을 제시한다. </li><li> 10 초 CS 간격 동안 기록 유체 포트 항목 (CS 프레 젠 테이션 도중 10 초), 10 초 미리 CS 간격 (직전 CS 발병에 10 초), 그리고 10 초 후 CS 간격 (즉시 10 초 다음 CS는 CS + 및 CS - 프리젠 테이션뿐만 아니라, 전체 세션에 대한 총 유체 포트 항목 모두에 대해) 오프셋 (offset). 또한 이러한 간격 중에 각 포트 항목의 지속 시간을 기록한다. </li><li> 세션의 끝에, houselight을 해제. </li></ol></li><li> , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. </li><li> 쥐가 각 PDT의 배달 에탄올 3.2 ml의 소비되도록 유체 포트 확인ession. </li><li> 소량의 물을 함유하는 60 ml의 시린지로 폴리에틸렌 튜브에서 에탄올 세척. 그리고, 건조 있는지 확인하기 위해, 둘째, 빈 주사기를 사용하여 튜브를 통해 공기의 60 ML을 전달합니다. </li><li> 장비를 청소합니다. 매일 청소를 들어, 바닥 패널, 폐기물 트레이 및 배양 접시를 씻으십시오. 주되면 전체 조절 챔버 청소. 실험 장치에 원치 않는 냄새를 도입 피하기 위해 향수 청소 제품을 사용하지 마십시오. </li><li> 쥐 CS- 대 CS +에 자신의 포트 항목 응답 안정적 차별을 표시 할 때까지 매일 PDT 세션을 계속합니다. 참고 : CS-에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 낮게 유지해야하는 반면 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 세션을 통해 증가 할 전망이다. 필요한 PDT 세션의 정확한 수는 가이드로에 약 20 세션을 계획 다를 수 있습니다 응답 조건 차별, 그러나 달성하기 위해. </li></ol> 6 소멸 <ol><li> 각 조절을 참 복장BER 시각, 후각, 촉각 자극으로 쥐 PDT 세션 동안 경험 한 별개의 컨텍스트를 만들 수 있습니다. 컨텍스트 1 PDT에 사용 된 경우, 예를 들어, 소쇠 세션 문맥이 같은 챔버를 구성. B. 콘텍스트로서 흡광 동안 사용 컨텍스트를 참조 </li><li> 동일 PDT 세션에 멸종 세션을 실시하지만, 연사 + 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. <ol><li> CS +와 CS-을 제시 PDT 동안 사용 된 동일한 컴퓨터 프로그램을 사용합니다. </li><li> 실험 단계에 걸쳐 일관성을 유지하기 위해, 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고, 펌프를 온 떠난다. 폴리에틸렌 튜브 멸종 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 쥐가 더 이상 쇼 CS + 및 CS - 사이에 응답 차별까지 매일 멸종 세션을 계속합니다. 참고 : 더 differe이 없을 때까지 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목은 점차 멸종 세션에 걸쳐 감소 할 전망CS-에 대한 응답으로 만든 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목 및 포트 항목 사이 후부. 다를 수 있습니다 응답 이었지만, 가이드로에 약 8 세션을 계획 소화 필요한 멸종 세션의 정확한 숫자. </li><li> 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 각 세션의 끝에 장비를 청소한다. </li></ol> 7 컨텍스트에 의한 갱신 테스트 <ol><li> PDT 세션 동안 경험 한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극 각 조절 챔버를 착용. 예를 들어, 주어진 쥐 PDT 세션에서 문맥을 경험 한 경우, 테스트 세션 컨텍스트 한 그의 챔버를 구성. 컨텍스트 A와 갱신 테스트 중에 사용되는 컨텍스트를 참조하십시오 </li><li> 동일 PDT 세션에 상황에 의한 갱신 시험을 실시하지만, 갱신 테스트 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. 제시 에탄올을 보류 CS +와 PDT 세션 동안 이전과 CS-하지만. <ol><li> 같은 컴퓨터의 홍보를 사용하여CS + 및 CS -을 제시 PDT 동안 사용되었다 ogram. </li><li> , 단계에 걸쳐 일관성을 유지 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고 나가려면 펌프가 켜져. 폴리에틸렌 튜브 테스트 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 맥락에 의한 갱신을 준수하십시오. 주 :이 갱신 효과는 CS + 및 CS- 상대적 CS-에 응답하여 만들어진 포트 엔트리 동작 변경없이, CS +에 응답하여 만들어진 포트 항목의 수를 선택적 증가에 의해 명백 할 것이다는 관찰이 응답 멸종 훈련의 끝. </li><li> 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 세션의 끝에서 장비를 청소한다. </li></ol>

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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+seeking+triggered+by+environmental+context+is+attenuated+by+blocking+dopamine+D1+receptors+in+the+nucleus+accumbens+core+and+shell+in+rats.">Ethanol seeking triggered by environmental context is attenuated by blocking dopamine D1 receptors in the nucleus accumbens core and shell in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). 207, 303-314 (2009).</li></ol>

모든 실험 절차는 콩 코디 아 대학 (Concordia University) 동물 연구 윤리위원회의 승인 및 동물 관리에 캐나다 협의회 지침에 따라 아르되었다.이 기사의 오픈 액세스 출판은 메드 어소 시에이 츠 주식 회사에서 후원에 의해 가능하게되었다

이 절차의 결과는 정기적으로 알코올 배달을 함께 분리 된 환경 자극은 알코올 추구 행동을 구동 할 수있는 능력을 획득 할 수 있음을 알 수있다. 그들은 또한 유용성 또는 알코올의 부재와 관련된 문맥 자극 이산 알코올 예측 신호에 행동 반응을 조절 안내 할 수 있음을 보여줍니다. 프로토콜 내에서 중요한 단계 본 작업의 컨텍스트는 쥐 외부의 자극을 통합합니다. 그러나 시험에서 쥐의 interoceptive 상태도 갱신 (20)에 영향을 미칠 수있는 &#39;맥락&#39;을 구성 할 수있다. 그것은 두개 내 미세 주입하거나 전신 주사처럼, 갱신 시험 전에 발생과 interoceptive 상태를 변경할 수있는 절차에 쥐 습관화하는 것이 중요하다. 또한, 미세 주입하거나 전신 주사에 습관화 멸종와 PDT의 모두 이전에 수행되어야한다essions는 실험의 하나의 특정 단계와 연관되는 것을 같은 절차를 방지합니다. 이러한 CS 기간, CS-US 간격 및 intertrial 간격 (ITI)와 같은 시간적 매개 변수는, 긴 에어컨 패러다임 21-26의 다양한 반응 조절에 영향을 미칠 것으로 알려져있다. 마찬가지로, 시간 매개 변수는 우리의 절차의 갱신 효과의 관찰에 영향을 미칠 수있다. 계획서에 명시되지 않은 매개 변수의 세트는 실험적으로 더 큰 수사를 고용하기 전에 파일럿 연구에서 검증해야합니다. 수정 및 문제 해결 이전 연구는 쥐 홈 케이지 소비 에탄올의 양은 17,27 쥐를 구입하는 보조 장비의 기능에 따라 달라질 수 있다는 것을 발견했다. 공급자는 따라서이 단계의 연구를위한 중요한 고려 사항이다. 유사하게, 랫트 균주의 선택은 협력해야에탄올 소비 28 ~ 31의 변형 차이의 수많은 보고서가있는 한,주의 깊게 nsidered. 혐오 에어컨 패러다임의 이전 작업은 쥐의 발달 연령은 파블로프 조건화 된 공포 반응 (32)의 갱신의 관찰에 영향을 미치는 것으로 나타났습니다. (생후 20 일 미만) 아주 어린 쥐의 갱신 효과의 부족으로 인해 문맥 정보 (33)의 장애인 인코딩으로 제시되고있다. 본 절차에 사용되는 래트의 발달 나이 따라서 고려해야한다. 10 % 9,16, 15 % 14, 또는 20 ~ 15 % 에탄올 솔루션은 홈 케이지 에탄올 접근과 실험의 PDT 단계 동안 사용했을 때 파블로프의 조건화 알코올 추구 행동의 연장이 관찰되었다. 연구자들은 실험 실용에서이 절차를 확립 할 목적으로 이러한 에탄올 농도 중 하나를 사용할 수도이거 야. 파블로프 차별 교육의 취득시는 전달 된 모든 에탄올 소비되었는지 확인하기 위해 각 세션 후에 유체 포트를 확인하는 것이 중요합니다. 추가로 10에 대한 조절 챔버에서 쥐를 떠나 - 각 세션 후 15 분은 세션 동안 소비되지 않은 모든 에탄올의 소비를 장려하기 위해 초기 PDT에서 수행 할 수 있습니다. PDT이 진행됨에 따라 사용되지 않은 포트에 에탄올을 떠나는 쥐의 수는 감소한다. PDT 쥐의 말에 어느 경우 () 모든 에탄올을 소비하지 및 / 또는 (b)는이 주제는 연구에서 제외해야 다음 CS +에 응답하지 않습니다. 대부분의 쥐 안정적으로 CS-보다 연사 +에 더 반응한다. 그러나 일부 쥐함으로써 차별의 증거를 보여주는하지, 두 신호에 높은 수준에 응답 할 수 있습니다. 높은 PDT 동안 CS + 및 CS - 모두에 반응 보여 쥐 연구에서 제외되지 않습니다. 우리의 경험에 의하면,이 주제는 현저한 차별을 보여PDT시 CS- 응답의 높은 수준의 유체 포트에서 에탄올의 존재에 의해 구동되는 것을 시사 에탄올의 부재하에 제 소등 세션 동안. 이 과목은 강력한 재생 효과를 표시하는 경향이있다. 절차의 한계 내구성 시험은 에탄올의 부재하에 수행되기 때문에, CS +에 의해 유도 된 조건 포트 항목 서서히 테스트 세션에 걸쳐 감소. 따라서, 행동의 전체 양이 실험적으로 유발 된 변화가 평가 될 수있는에 대해 테스트에서 생성 상당히 낮습니다. 응답이 태스크에 테스트 세션의 단부 대 시작에서 높게되는 경향이 있기 때문에 시험 별 시험 기초 응답 조건화 실험 조작에의 영향을 조사하는 것이 중요하다. 유체 콘센트에 항목이 작업의 주요 종속 측정을 제공합니다. 그러나, 잘못된 포트 항목은 REGI 수 있습니다동물의 수염이 유체 개항에 걸쳐 적외선 빔을 깰 유체 용기에 충분히 가까운 경우 st​​ered. 자주, 잘못된 응답이 분명하지만 전체 포트의 극적인 증가는 이전 세션에서 피사체의 동작을 기준으로 항목으로. 동물을 동영상으로 녹화하는 것은 가능합니다 잘못된 응답의 검출을 용이하게하고, 교육 및 테스트를 통해 쥐에 의해 전시 된 행동의보다 세분화 된 분석을 허용합니다. 기존의 / 대안적인 방법에 대한 기술의 중요성 약물 추구 행동의 상황에 의한 갱신은 대부분 이러한 레버를 눌러 8,34 또는 12 코를 찌를으로 차 종속 변수가 조작 적 반응 인 수단 조절 작업을 사용하여 연구되고있다. 본 절차에서, 약물 - 추구 응답의 프레젠테이션에 의해 유도되는 유체 포트 &#39;방식은 에어컨&#39;이다CS의 +. 이 응답은 가능성이 환경 자극과 인간의 남용 약물의 약리 효과 사이의 연결의 형성을 매개하는 학습 과정이다 파블로프 학습을 통해 획득된다. 미래의 응용 프로그램 이 작업은 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동 16의 상황에 의한 재생에 관여하는 신경 메커니즘을 연구하는 신경 약리학, optogenetics 및 신경 화학과 함께 사용할 수 있습니다. 또한, 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 수집 및 멸종을 조절 행동 및 신경 메커니즘을 조사 할 수 있습니다. 마지막으로,이 작업은 인간의 ADDI의 큐 노출 치료 후 약물 예측 신호에 반응에 환경 상황을 관련 약물의 영향을 감소하기위한 중개 연구를위한 중요한 방향을 갱신하지 못할 수 있습니다 멸종의 조작을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다CTS.

깨어 남은 알코올 남용 장애로 고통 개인이 직면 상당한 도전이다. 금욕은 파블로프 조절을 통해 취하게 1, 2와 관련 될 수있는 일상적으로 음주를 함께 환경 적 자극의 행동 심리학 적 및 생리 학적 영향에 대한 취약성의 시간입니다. 알코올 예측 단서에 노출되면 재발 3,4을 촉진 알코올을 추구하는 행동을 촉진 할 수 있습니다 알코올 갈망과 같은 조건 반응을 유도 할 수 있습니다. 알코올 소비로 이어질 행동의 틀에 박힌 순서는 자극의 특정 유형의 일상적 알코올 섭취의 약리 효과되기 직전에 발생 될 수 있습니다. 예를 들어, 시각, 냄새와 알코올의 맛이 확실하게 중독 앞에 알코올의 감각 속성입니다. &#39;불연속&#39;또는 &#39;PROXIMA로 지칭되는 이러한 신호 이외에리터 &#39;큐, 마약 정기적으로 또한 갈망 5,6을 자극 할 수 있습니다 사용되는 환경 상황. 약이 이전에 따라서 재발 칠위한 중요한 트리거 될 수 있습니다 사용되어왔다있는 물리적 위치에 노출. 동물 모델은 약물 - 추구 행동 8-13 약물에 관련된 컨텍스트의 영향을 중재 신경 기전을 연구하기 위해 개발되었다. 여기에 설명 된 절차는 알코올 소비와 관련된 상황은 이산, 알코올 예측 파블로프 큐에 의해 유발되는 알코올 추구 행동을 조절하는 방법의 조사를 할 수 있습니다. 파블로프 차별 교육은 쥐가 행동면이 청각 조건 자극, 알코올과 짝을 이루는 CS의 +, 그리고 아닌 CS-을 구별하는 훈련 특정 환경 컨텍스트에서 수행된다. 멸종 세션은 다음 CS에 응답하는 다른 문맥에서 실시하고 있습니다알코올의 결과 보류 된 것으로 +는 줄어든다. 그 후, 알코올 관련, 파블로프 교육 컨텍스트에 재 노출은 CS-에 응답에 변화와 CS +에 의해 유도 된 알코올 추구 행동의 선택적 증가를 트리거합니다. 우리는 지속적으로 9,14-16를 복제 한이 결과는, 약물 컨텍스트 약물 전달 10,13와 관련된 조작 적 반응의 재생을 촉진하는 것으로 밝혀졌다있는 수단이 조절 절차에서 연구 결과를 확장합니다.

<table><tbody><tr><td>Heavy-duty utility cart</td><td>Rubbermaid</td><td>#4520-88</td><td>Used to transport rats in their home cage from the colony room to the behavior room or other facilities</td></tr><tr><td>Rats, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>Rats weighed 220-240 g on arrival</td></tr><tr><td>Ohaus scale</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>For weighing rats; tare the bottom of a plastic container first, then put the rat in it to weigh it</td></tr><tr><td>Beta-chips, aspen</td><td>Harlan</td><td>#7090A</td><td>Bedding for home cage</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>Enrichment provided in the home cage</td></tr><tr><td>Autoclavable rodent chow</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>For feeding rats</td></tr><tr><td>Wire bar cage lid</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td><td>Custom made with two slots for&amp;nbsp; bottles</td></tr><tr><td>Cage bottom</td><td>Ancare</td><td>#R20PC</td><td>To house rats</td></tr><tr><td>Stoppers</td><td>Ancare</td><td>#8.5</td><td>Rubber stoppers to occlude opening in water bottles &amp;amp; graduated cylinders; goes with ball point sipper tubes&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Ball point tubes, 1.5&quot; length</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>Inserted in stoppers, enables rats to drink from water bottles and graduated cylinders</td></tr><tr><td>Water bottles</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>473 ml (16 oz) capacity, needs to be occluded with stopper</td></tr><tr><td>Graduated cylinders, 100 ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>To contain ethanol during alcohol exposure in the home cage; spouted end needs to be cut off to enable occlusion with stoppers</td></tr><tr><td>Mettler scale</td><td>Mettler Toledo</td><td>#MS6001S</td><td>For weighing water bottles and ethanol cylinders</td></tr><tr><td>Polyethylene tubing, 1/32&quot; inner diameter,&amp;nbsp; 1/32&quot; wall thickness, 3/32&quot; outside diameter</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>To connect 20 ml ethanol syringe to fluid port</td></tr><tr><td>Needle, 18 g, 1.5&quot; length</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>To connect polyethylene tubing to ethanol syringes; needs to be filed</td></tr><tr><td>Syringes, 20 ml, Luer-Lok non-sterile</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>To contain ethanol on the fluid pumps; needs to be connected to the polyethylene tubing by a 18 G 1 1/2 needle</td></tr><tr><td>Syringes, 60 ml, Luer-Lok non-sterile</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td><td>To flush polyethylene tubing after PDT sessions</td></tr><tr><td>Single speed syringe pump, 3.33 rpm</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>To hold 20 ml ethanol syringes and deliver ethanol</td></tr><tr><td>Fluid port</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-254-CB</td><td>To enable ethanol delivery during PDT sessions; connected to ethanol syringes with polyethylene tubing</td></tr><tr><td>Port entry infrared detector</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>Fixed on both sides of&amp;nbsp; fluid port; need 2 per fluid port</td></tr><tr><td>Houselight, 28 V, 100 mA</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>Provides general lighting in conditioning chamber</td></tr><tr><td>Clicker module</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>Auditory stimulus for conditioning chamber</td></tr><tr><td>White noise generator with speaker</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>Auditory stimulus for conditioning chamber</td></tr><tr><td>Bar floor</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>To go with modular test chamber</td></tr><tr><td>Bench coat, absorbent</td><td>VWR</td><td>#89126-790</td><td>Absorbent paper to put in metal tray, needs to be cut to fit the metal tray</td></tr><tr><td>Polycarbonate sheet, 1/8&quot; thick, 12-5/8&quot; x 10&quot;</td><td>Johnston Plastics</td><td>#30102515</td><td>To make smooth transparent floor insert used for context 1. Needs to be cut in 11.5&quot; x 12.25&quot; pieces</td></tr><tr><td>Aluminium sheet perforated, 0.063&quot; thick, 48&quot; x 96&quot;, 0.250&quot; holes x 0.375&quot; centers</td><td>Anica Steel</td><td></td><td>To make perforated floor insert used for context 2. Needs to be cut in 11.5&quot; x 12.25&quot; pieces</td></tr><tr><td>Black cardboard, 0.053&quot; thick, 28&quot; x 44&quot;</td><td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>To construct panels covering the ceiling, door and back wall of the conditioning chamber in context 1. Needs to be cut to size. Each chamber needs three panels measuring approximately 11.5&quot; x 13.25&quot;. The panels can be joined by the narrower side using duct tape.</td></tr><tr><td>All-purpose strength duct tape, 1.88&quot; x 45 yd.</td><td>Duck Tape</td><td></td><td>Adhesive material to connect the black cardboard panels used to cover the back wall, ceiling and door in context 1.</td></tr><tr><td>Modular test chamber</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A</td><td>Conditioning chamber</td></tr><tr><td>Sound attenuating cubicles</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>Comes with installed 28 V DC fan (#ENV-025F)</td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>Bottom only, to contain the sprayed solution that provides the odor stimulus; needs to be centered in the metal tray in conditioning chambers</td></tr><tr><td>PCI interface package</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>Connects tabletop interface cabinet to computer; includes 1 interface card, 1 Decode card, 1 ribbon cable and 1 28 V DC power cable</td></tr><tr><td>Large tabletop cabinet and power supply</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>Used to contain the 12 cards included in the SmartCrtrl 8 Input, 16 Output package</td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 Input, 16 Output package</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-716P2</td><td>Used to connect and control the devices in the conditioning chamber. The package includes all the cables, the interface module and the connection panel.</td></tr><tr><td>Med PC IV software</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>Software to run programs. Needs to be installed on the computer.</td></tr><tr><td>Monitor LG, 19&quot; LCD</td><td>Concordia computer store</td><td>#W1942TQ-BF</td><td>Computer monitor; to go with computer running Med PC IV</td></tr><tr><td>HP Z200 tower workstation</td><td>Concordia computer store</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Computer on which Med PC IV is run</td></tr><tr><td>Benzaldehyde, &amp;ge;99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc.</td><td>#B37-50</td><td>Dilute in tap water for almond context odor</td></tr><tr><td>Lemon oil, cold pressed, California</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>Dilute in tap water for lemon context odor</td></tr><tr><td>Ethyl alcohol, 95%</td><td>Commercial Alcohols</td><td></td><td>Dilute in tap water to desired concentration</td></tr></tbody></table>

a procedure to observe context-induced renewal of pavlovian-conditioned alcohol-seeking behavior in rats

환경 상황은 학대의 약물 갈망, 절제 약물 사용자의 약물 추구 행동과 프롬프트 재발을 촉진 할 수있는 주관적인 파블로프 에어컨 반응을 일으킬 수 있습니다 소비된다. 우리는 쥐에서 알코올을 추구하는 행동의 내용이 영향을 중재하는 행동 및 신경 프로세스를 연구하기위한 절차를 개발했다. 맛에 순응하고 홈 케이지에서 15 % 에탄올의 약리학 적 효과에 따라, 남성 롱 에반스 쥐 조절 챔버에서 파블로프 차별 교육 (PDT)를받을 수 있습니다. 각 매일 (월 - 금) PDT 세션에서 16 시험이 다른 10 초 청각 조건 자극의 각이 발생합니다. 한 자극 중에 + CS는, 15 % 에탄올 0.2 ㎖를 경구 섭취 유체 포트에 전달된다. 두 번째 자극, CS-에탄올와 연결되어 있지 않습니다. 세션에 걸쳐, CS- 동안 항목 반면 CS + 증가하는 동안 유체 포트에 항목, predi 것을 나타내는 낮은 수준에서 안정CS + 에탄올 간의 연관은, 중지 취득한다. PDT 동안 각 챔버는, 시각 후각 및 촉각 상황에 맞는 자극의 특정 구성을 갖추고있다. PDT에 따라, 멸종 훈련은 지금 상황에 맞는 자극의 다른 구성을 갖추고 동일한 챔버 내에서 수행된다. CS + 및 CS -는 이전과 같이 제시되어 있지만, 에탄올은 CS +시 포트 항목의 점진적인 감소가 발생하는 원천 징수된다. 시험에서 쥐 PDT 컨텍스트에 다시 배치됩니다 및 이전과 CS + 및 CS - 제시하지만, 에탄올없이. 이 조작은 CS- 동안 응답에 변화와 예측 CS + 알코올 중에 포트 항목의 수를 강력하고 선택적 증가를 트리거합니다. 문맥 유도 갱신이라고도이 효과는, 파블로프 알코올 큐에 응답하여 알코올 추구 행동을 자극하는 알코올 섭취와 관련된 컨텍스트의 강력한 능력을 나타낸다.

홈 케이지에서 간헐적 에탄올 액세스 : - 12 회 (그림 1) 에탄올 소비 (g / kg) 및 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스 세션에서 에탄올 선호도 증가는 일반적으로 8 내에서 안정적인 수준에 도달. 도 1에 도시 된 데이터 세트의 안정된 에탄올 소비량 홈 케이지 에탄올 액세스의 마지막 세션에 걸쳐 평균이 1.33에서 ranged - 개별 쥐 6.44 g / kg을. g / kg 소비 plateaued 일단 실험의 홈 케이지 에탄올 소비 단계는 중단 될 수 있고, 쥐의 세션 수를 마시는이 안정된 수준으로 유지된다. 이 단계에서 데이터를 분석하기 위해, 에탄올 소비 (g / kg)과 에탄올 기본 설정에 대한 세션의 피험자 내 요인에 걸쳐 분산 (ANOVA)의 별도의 회 반복 측정 분석을 실시하고 있습니다. 문맥 유도 갱신 절차의 개략도 : 각 위상실험 절차 (PDT, 소멸, 갱신 시험) 그림 2에 도시되어있다. 자세한 내용은 그림 캡션을 참조하십시오. 응답 방법 및 데이터 분석 : 아래 설명 된 모든 행동 단계에서는 CS + 및 CS- 중에 포트 엔트리 응답은 기준선 입항 응답-CS 사전을 참조하여 정규화된다. 정규화 된 CS 조치를 만들려면 사전 CS 기준 간격 중에 포트 항목의 수를 CS +와 CS-의 프리젠 테이션 중에 포트 항목의 수와 (CS 발병 직전 10 초)을 뺍니다. 행동의 지표가 기준선 수준 이상으로 상승 CS 프레 젠 테이션에 의해 구체적으로 도출으로 표준화 된 CS + 및 표준화 CS- 조치는 역할을한다. 별도의 회 반복 측정 ANOVA는 PDT 멸종 단계에 대한 세션 및 CS 유형 (CS-대 CS +)의 반복 피험자 내 요인으로 실시한다. 단계에 걸쳐 비교를 들어 (PDT는 멸종 갱신알 검사) 사용 데이터 PDT 및 소등의 마지막 두 세션 및 회 반복 측정 ANOVA의 내구성 테스트 데이터 중 하나의 세션에 걸쳐 평균화. 다중 비교를 위해 보정 독립적이거나 쌍 샘플에 대한 중요한 주 효과 및 상호 작용, 사용 후 임시의 t-테스트를 ​​추적합니다. 중요성에 대한 기준은 α = 0.05로 설정된다. PDT : PDT 세션에서 CS + 증가 포트 항목의 응답은, CS-포트 항목 응답은 전반적으로 낮고 안정적​​으로 유지하는 반면. PDT 훈련의 초기 세션에서 약간 증가 할 수 CS-에 해당 포트 항목의 응답을 참고; 그러나 CS-에 응답하여 만들어진 항목은 포트의 CS +에 응답하여 만들어진 것보다 더 낮은 수준에서 안정화. 성공적인 차별 CS 동안 포트 항목에서 통계적으로 유의 한 상승에 의해 입증 + CS- (그림 3)에 비교된다. 이 결과는 파블로프 에어컨 알코올을 추구하는 행위가 될 수 있음을 나타냅니다엉 CS-을 CS +에 설립 있지만. 멸종 : CS + 포트 항목의 응답이 점차 멸종 세션에서 거절합니다. CS-포트 항목의 응답은 멸종 세션에서 낮고 안정적​​으로 유지. 이상적으로, CS + 및 CS -에 포트 항목 사이에 통계적으로 유의 한 차이의 부족에 의해 입증, 멸종 훈련의 말에 폐지 응답 차별. 그러나, 심지어 흡광 트레이닝의 끝에서, 남아 응답 판별 어느 정도 드문 일이 아니다. 이 경우,이 소등 훈련, 소등의 시작에서 CS + 포트 엔트리 응답에 비해 통계적으로 더 낮뿐만 아니라 PDT의 끝의 끝에서 CS + 해당 포트 엔트리 응답을 확인하는 것이 중요하다 (도 3) . 결과의이 패턴은-파블로프 조절 알코올 추구 행동이 크게 소멸되었음을 나타냅니다. 상황에 의한 갱신 시험 : 포트흡광 트레이닝의 끝에서 관찰 CS + 포트 항목에 대하여 컨텍스트 유도 내구성 시험에서 CS + 증가에 진입 응답. CS-에 포트 항목이 변경되지 않고 남아있는이 증가는 CS +에 선택적이다. 또한, CS +에 포트 항목은 상황에 의한 갱신 시험에서 CS-에 포트 항목 (그림 4)에 비해 통계적으로 상승합니다. CS + 포트 멸종 및 테스트 사이의 항목뿐만 아니라 CS + 및 테스트 내 CS- 포트 항목의 비교 비교의 통계 확인이 테스트에서 알코올 관련 상황에 의해 유도 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 선택 갱신을 나타냅니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400" /> 에탄올 소비와 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스에 의해 유도 선호도 1 에스컬레이션 그림. 및 평균# 177; SEM (A) 에탄올 소비 (g / kg) 및 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스의 12 회에 걸쳐 (B) 에탄올 환경. 두 조치는 일반적으로 세션에 걸쳐 증가하고 안정. 개별 쥐 6.44 g / kg - 안정 에탄올 소비량은 1.33에서 원거리 홈 케이지 에탄올 액세스의 마지막 두 세션에 걸쳐 평균. 이 데이터는 15 % (v / v)로 에탄올을 마시는 남성 긴 에반스 쥐를 사용하여 얻을 수 있었다. <img alt="그림이" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400" /> . 그림 2 실험 절차의 개략적 인 절차는 세 단계로 구성 파블로프 차별 훈련 (PDT), 멸종 및 상황에 유도 갱신 시험. 각 PDT 세션 동안 쥐 에탄올의 제공 및 16 시련의 신호를 하나의 청각 조건 자극 (CS +)의 16 시련을받을에탄올 전달과 관련되지 않은 초 청각 자극 (CS-). PDT 세션은 시각, 후각의 특정 구성, 및 촉각 자극 이루어지는 문맥에서 일어난다. 시각 후각, 촉각 자극의 다른 세트로 구성 컨텍스트 B에서 수행되는 소등 세션 동안, CS + 및 CS- 제시되지만 에탄올을 보류한다. 상황에 의한 갱신 테스트를 위해 쥐 상황에 반환하고, CS + 및 CS - 에탄올을받지 않고있다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400" /> 그림 3 수집 및 차별 파블로프 에어컨 에탄올에 대한 응답. 평균 ± SEM 표준화 된 포트 항목의 m의 멸종컨텍스트 및 멸종 (세션 19-26) - PDT에서 CS + 및 CS - 동안 (18 세션 1) 에이드 컨텍스트 B의 이러한 데이터는 10 % 훈련, 남성 롱 에반스 쥐를 사용하여 얻을 수 있었다 (v / v)로 PDT 동안 CS의 +와 관련하여 제시 하였다 무조건 자극 (US) 에탄올. * p &lt;0.05, CS- 대 CS +. 그림은 원래 Chaudhri, Sahuque, 및 JANAK (2008)에서 출판. 엘스 비어의 허가와 함께 사용됩니다. <img alt="그림 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500" /> 그림 4 컨텍스트에 의한 문맥 A. 데이터에 파블로프 에어컨 에탄올에 대한 응답. 평균 컨텍스트에서 PDT 세션에서 CS + 및 CS - 중에 ± SEM 표준화 된 포트 항목, 컨텍스트 B에서 멸종 세션 및 갱신 시험의 갱신 아르 PDT와 멸종에 대해 마지막 두 세션에 걸쳐 평균; 내구성 시험은 단일 세션이다. 이데이터 PDT 동안 CS +와 관련하여 제시 하였다 무조건 자극 (US)로서 10 % (v / v) 에탄올로 훈련 수컷 롱 - 에반스 래트를 사용하여 수득 하였다. * p &lt;0.05; ** P &lt;0.001, CS- 대 CS +. #p를 &lt;0.05, CS + 멸종 대 CS + PDT. ^ P &lt;0.05, CS + 시험 대 CS + 멸종. 그림은 원래 Chaudhri, Sahuque, 및 JANAK (2008)에서 출판. 엘스 비어의 허가와 함께 사용됩니다.

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A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

절차는 쥐에서 알코올 추구 행동의 갱신을 설명한다 트리거 알코올 연관된 환경 콘텍스트의 용량을 연구.

절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

12.8K 조회수.  Concordia University.  절차는 쥐에서 알코올 추구 행동의 갱신을 설명한다 트리거 알코올 연관된 환경 콘텍스트의 용량을 연구. 

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A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods require saccharin/sucrose fading, water deprivation and/or extended training to initiate operant responding in rats. This paper describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol that is convenient for experimenters and does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading, thus eliminating the potential confound of using sweeteners in ethanol operant self-administration studies. With this method, Wistar rats typically acquire and maintain self-administration of a 20% ethanol solution in less than two weeks of training. Furthermore, blood ethanol concentrations and rewards are positively correlated for a 30 min self-administration session. Moreover, naltrexone, an FDA-approved medication for alcohol dependence that has been shown to suppress ethanol self-administration in rodents, dose-dependently decreases alcohol intake and motivation to consume alcohol for rats self-administering 20% ethanol, thus validating the use of this new method to study the reinforcing properties of alcohol in rats.

This protocol describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol in rats that, contrary to standard methods, does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading to initiate responding.

물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

연구

행동분석학

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

흰쥐의 파블로프 조건 접근 교육

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

신경과학

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to acquire a conditioned place preference in a drug-paired compartment, and after the post-conditioning test, they perform several sessions to extinguish the established preference. The CPP permits the evaluation of the conditioned rewarding effects of drugs related to environmental cues. Then, the extinguished CPP can be robustly reinstated by the non-contingent administration of a priming dose of the drug, and by exposure to stressful stimuli. Both methods will be explained here. When the animal reinitiates the behavioral response, a reinstatement of the conditioned reward is considered to have taken place.
The main advantages of this protocol are that it is non-invasive, inexpensive, and simple with good validity criteria. In addition, it allows the study of different environmental manipulations, such as stress or diet, which can modulate relapse into drug seeking behaviors. However, one limitation is that if the researcher aims to explore the motivation and primary reinforcing effects of the drug, it should be complemented with self-administration procedures, as they involve operant responses of animals.

This protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse. This procedure permits the measurement of relapse in laboratory animals, considering the impact of drug-associated environmental cues as craving and relapse in abstaining addicts is currently the focus of drug-abuse treatment programs.

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

쥐에 갈망의 부 화를 측정 하기 위한 바른된 장소 설정 프로토콜

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

A Procedure to Study Stress-Induced Relapse of Heroin Seeking after Punishment-Imposed Abstinence

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with drug-taking. This model has been implemented in experiments using different types of substances of abuse such as methamphetamine, cocaine, and alcohol. However, punishment-induced abstinence in heroin-trained animals has not been demonstrated. Furthermore, acute stress is a key trigger for relapse in humans and animal models. It was previously demonstrated that acute food deprivation robustly induced reinstatement of extinguished cocaine and heroin seeking. The procedure described here can be used to assess the effects of acute stress exposure on heroin seeking after punishment-imposed abstinence. A total of 8 rats were implanted with chronic intravenous (i.v.) catheters and trained to self-administer heroin (0.1 mg/kg/infusion) for 18 days under a seek-take chained schedule. Completing the seek link gave access to the take lever, which was paired with a heroin infusion. The seek lever was programmed with a variable interval 60 schedule of reinforcement (VI60), and the take lever was programmed with a fixed-ratio 1 reinforcement schedule (FR1). Following self-administration training, a mild foot shock was delivered on 30% of the completed seek links instead of the extension of the take lever. Footshock intensity was increased by 0.1 mA per daily session from 0.2 mA to 1.0 mA. Heroin-seeking tests were performed after 24 h of food deprivation (FD) or sated conditions. Rats under acute food deprivation condition robustly increased heroin seeking after punishment-imposed abstinence.

A procedure that demonstrates a robust acute food deprivation-induced relapse to heroin seeking after punishment-imposed abstinence is described. A punishment-imposed abstinence model was successfully implemented using the seek and take chain schedule for heroin self-administration. Heroin-seeking tests are then performed following 24 h of food-deprivation stress.

처벌 부과 금욕 후 헤로인의 스트레스로 인한 재발을 연구하는 절차

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델에서 Hippocampal 기능 장애를 평가 하기 위해 추적 Eyeblink 클래식 컨디셔닝의 사용

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue reactivity, the sensitivity to cues previously linked with the drug-taking experience, plays a prominent role in human craving during abstinence. Cue reactivity can be assessed as the attentional orientation toward drug-associated cues that is measurable as appetitive approach behavior in both preclinical and human studies. Herein describes an assessment of cue reactivity in rats trained to self-administer cocaine. Cocaine self-administration is paired with the presentation of discrete cues that act as conditioned reinforcers (i.e., house light, stimulus light, infusion pump sounds). Following a period of abstinence, lever presses in the cocaine self-administration context accompanied by the discrete cues previously paired with cocaine infusion are measured as cue reactivity. This model is useful to explore neurobiological mechanisms underlying cue reactivity processes as well as to assess pharmacotherapies to suppress cue reactivity and therefore, modify relapse vulnerability. Advantages of the model include its translational relevance, and its face and predictive validities.&#160;The primary limitation of the model is that the cue reactivity task can only be performed infrequently and must only be used in short duration (e.g., 1 hour), otherwise rats will begin to extinguish the pairing of the discrete cues with the cocaine stimulus. The model is extendable to any positively reinforcing stimulus paired with discrete cues; though particularly applicable to drugs of abuse, this model may hold future applications in fields such as obesity, where palatable food rewards can act as positively reinforcing stimuli.

Cue reactivity is conceptualized as sensitivity to cues linked with drug-taking experiences that contribute to craving and relapse in abstinent humans. Cue reactivity is modeled in rats by measuring attentional orientation toward drug-associated cues that results in appetitive approach behavior in a cue reactivity test following self-administration and forced abstinence.

코카인 사용 장애의 쥐 모델에서 큐 반응성을 측정 하기 위한 프로토콜

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Prediction Error-driven Retrieval Procedure for Destabilizing and Rewriting Maladaptive Reward Memories in Hazardous Drinkers

Maladaptive reward memories (MRMs) can become unstable following retrieval under certain conditions, allowing their modification by subsequent new learning. However, robust (well-rehearsed) and chronologically old MRMs, such as those underlying substance use disorders, do not destabilize easily when retrieved. A key determinate of memory destabilization during retrieval is prediction error (PE). We describe a retrieval procedure for alcohol MRMs in hazardous drinkers that specifically aims to maximize the generation of PE and therefore the likelihood of MRM destabilization. The procedure requires explicitly generating the expectancy of alcohol consumption and then violating this expectancy (withholding alcohol) following the presentation of a brief set of prototypical alcohol cue images (retrieval + PE). Control procedures involve presenting the same cue images, but allow alcohol to be consumed, generating minimal PE (retrieval-no PE) or generate PE without retrieval of alcohol MRMs, by presenting orange juice cues (no retrieval + PE). Subsequently, we describe a multisensory disgust-based counterconditioning procedure to probe MRM destabilization by re-writing alcohol cue-reward associations prior to reconsolidation. This procedure pairs alcohol cues with images invoking pathogen disgust and an extremely bitter-tasting solution (denatonium benzoate), generating gustatory disgust. Following retrieval + PE, but not no retrieval + PE or retrieval-no PE, counterconditioning produces evidence of MRM rewriting as indexed by lasting reductions in alcohol cue valuation, attentional capture, and alcohol craving.

This manuscript describes a memory retrieval procedure for destabilizing robust reward memories and rewriting them with counterconditioning prior to their reconsolidation.

불안정 하 고 위험한 마시는에 Maladaptive 보상 메모리를 다시 쓰기에 대 한 예측 오류 기반 검색 절차

Maladaptive reward memories (MRMs) can become unstable following retrieval under certain conditions, allowing their modification by subsequent new ...

Intermittent-Access Two-Bottle Choice Drinking with Lick Detection in Rats

Modeling Alcohol Consumption in Rodents Using Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are provided with access to two drinking bottles, one of which contains regular tap water and the other ethanol, with daily intake measured by change in bottle weight over the 24 h period. Consequently, this approach requires no specialized laboratory equipment. While such ease of implementation is likely the greatest contributor to its widespread adoption by preclinical alcohol researchers, the resolution of drinking data acquired using this approach is limited by the number of times the researcher measures bottle weight (e.g., once daily). However, the desire to examine drinking patterns in the context of overall intake, pharmacological interventions, and neuronal manipulations has prompted the development of home cage lick detection systems that can acquire data at the level of individual licks. Although a number of these systems have been developed recently, the open-source system, LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home cage Device), has garnered significant attention in the field for its affordability and user friendliness. Although exciting, this system was designed for use in mice. Here, we review appropriate procedures for standard and lickometer-equipped two-bottle choice home cage drinking. We also introduce methods for adapting the LIQ HD system to rats including hardware modifications to accommodate larger cage size and a redesigned 3D printed bottle holder compatible with standard off-the-shelf drinking bottles. Using this approach, researchers can examine daily drinking patterns in addition to levels of intake in many rats in parallel thereby increasing the resolution of acquired data with minimal investment in additional resources. These methods provide researchers with the flexibility to use either standard bottles or a lickometer-equipped apparatus to interrogate the neurobiological mechanisms underlying alcohol drinking depending on their precise experimental needs.

This protocol describes a standard intermittent-access two-bottle choice home cage drinking paradigm to model alcohol consumption in rats. In addition, it provides step-by-step instructions to augment the standard protocol with a DIY lick detection system that enables microstructural analysis of drinking behavior.

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are ...