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지표 유기체를 통한 수질 분석

Overview

출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 - 애리조나 대학교
데모 저자: 루이사 이크너

수질 분석은 오염 물질, 영양소, 병원균 및 자원으로서의 물의 무결성에 영향을 미칠 수 있는 기타 성분과 같은 인위적인 영향을 모니터링합니다. 배설물 오염은 질병이나 질병으로 식물, 동물 및 인간의 건강을 위협하는 미생물 병원균에 기여합니다. 물 요구가 증가하고 엄격한 품질 기준을 위해서는 인간 또는 환경 자원에 공급되는 물을 낮은 병원균 수준으로 모니터링해야 합니다. 그러나, 대변 오염과 관련되었던 각 병원체를 감시하는 것은 가능하지 않습니다, 실험실 기술은 광범위한 노동, 시간 및 비용을 포함하기 때문에. 따라서 지표 유기체에 대한 검출은 비위생적 조건과 관련된 병원균을 모니터링하는 간단하고 빠르며 비용 효율적인 기술을 제공합니다.

Principles

지표는 쉽게 감지 할 수있는 유기체누구의 존재는 환경을 오염 하나 이상의 병원체에 직접 상관 관계. 적절한 지표로 간주되려면 유기체가 다음 5가지 기준을 충족해야 합니다.

  1. 지표 유기체는 병원체가 존재할 때 존재해야 하며, 병원균이 없을 때 지표 유기체는 없어야 합니다.
  2. 지표 유기체의 농도는 병원균의 농도와 상관관계가 있어야 합니다. 그러나, 지표 유기체는 항상 더 높은 숫자에서 찾아야 합니다.
  3. 지표 유기체는 병원균보다 환경에서 더 쉽고 오래 살아남을 수 있어야 합니다.
  4. 표시기 유기체에 대한 검출은 쉽고 안전하며 저렴해야 합니다.
  5. 지표 유기체는 모든 물 유형에 효과적이어야 합니다.

대부분의 지표는 장 내 생물 또는 바이러스이며, 이는 일반적으로 따뜻한 혈액 포유류 및 조류 위장 시스템에서 발견되며 배설물 오염에 직접적인 연결을 제공합니다. 그러나, 많은 지표는 특정 병원체와의 상관 관계 때문에 효과 부족할 수 있습니다. 가장 널리 받아들여지는 세균성 지표 유기체 의 2개는 그들의 배설물 연결때문에 대장균과 대장균이고, 실험실 분석에 있는 용이성입니다.

Colilert는 물 샘플에서 대장균 및 총 대장균에 대한 동시 검출, 특정 식별 및 확인을 위한 정의된 기판 기술(DST) 접근법입니다. 이 실험실 기술은 각 지표 유기체의 대사 경로에 특정 기판 영양소를 활용, 박테리아가 화합물을 변경할 때 신호를 방출 하는 원하는 미생물만 열거. 대장균이 있는 경우, 정형니다-니트로페닐-β-D-갈라크토피라노사이드(ONPG) 영양소는 대장균의 β-갈라토시다제 효소에 의해 가수분해된다. 제품 화합물, 직교-니트로페닐은 색 신호를 방출하는 염색체로, 물노란색(도 1)을선회한다.

Figure 1
그림 1. 정형소 니트로페닐이 컬러 신호를 방출하여 물을 노란색으로 돌리는 회로도를 보여 주는 회로도.

대장균의존재하에, 메틸럼벨리필리-β-D-글루쿠로니드(MUG) 영양소는 박테리아의 글루쿠로니다제 효소에 의해 갈라지며, 자외선 아래 청록색을 형광하는 메틸럼벨리페론 제품을 생산한다(그림2).

Figure 2
그림 2. 박테리아의 글루쿠로니다제 효소에 의해 갈라진 메틸럼벨리페렐레-β-D-글루쿠로니드(MUG) 영양소를 보여주는 회로도는 자외선 아래에서 청록색을 형광하는 메틸럼베리펠리페론 제품을 생산합니다.

Colilert는 유기체가 견본에 존재하는지 여부를 나타내기 위하여 존재 부재 (P-A) 시험으로 수행될 수 있습니다. 이 시험은 기판을 100mL 물 샘플로 용해시키고, 35± 0.5°C에서 24시간 동안 배양하고, 색 신호를 관찰함으로써 완료된다. 지표의 존재는 또한 각 유기체에 대해 가장 가능성이 높은 숫자(MPN)를 결정하는 시스템을 활용하여 정량화될 수 있다. 이 절차는 49 개의 큰 우물과 48 개의 작은 우물을 포함하는 트레이로 밀봉 된 100 mL 물 샘플로 기판을 용해하는 것을 포함합니다. 트레이는 35± 0.5°C에서 24시간 동안 배양되고, 양색 변화를 포함하는 우물이 계산된다. 양성 신호를 포함하는 큰 웰과 작은 우물의 비율은 존재하는 각 지표 유기체의 존재에 대한 정량화를 제공하는 MPN 차트에 정렬된다. 미국에서 식수에 대한 규정은 식수 의 100 mL에 제로 대장균이 존재하도록 요구한다.

Procedure

1. 콜릴러트 존재 – 부재 (P – A) 테스트

  1. 100mL 플라스틱 콜릴러트 병을 엽니다. 병은 적절한 반응에 필요한 소량의 분말 시약을 포함하고,이 분말을 버리지 마십시오.
  2. Colilert 병에 100mL 물 샘플을 추가합니다.
  3. 영양 기판이 들어있는 베개 튜브를 열고 Colilert 병 내부의 물 샘플에 내용물을 붓습니다.
  4. 콜릴러트 병을 캡하고 밀봉합니다. 기판이 완전히 용해 될 때까지 병을 반복적으로 반전, 적극적으로 병을 흔들어.
  5. 24시간 동안 35± 0.5°C에서 병 내부의 시약/물 샘플 혼합물을 배양한다.
  6. 시약/물 샘플 혼합물의 노란색 색상 변화를 관찰한다. 노란색은 대장균이 존재한다는 것을 나타냅니다. 맑은 물이나 색의 변화가 없음은 대장균이 존재하지 않는다는 것을 나타냅니다.
  7. 시약/물 샘플을 자외선에 노출시키고 청색 형광을 관찰한다. 청색 형광은 대장균이 존재한다는 것을 나타냅니다. 형광이 없음은 대장균이 결석함을 나타내지않는다(도 3).

Figure 3
그림 3. P-A 테스트 네거티브(왼쪽), 대장균 양성(가운데), 대장균 양성(오른쪽).

2. 콜릴러트 MPN: 콴티 트레이 2000

  1. 콜릴러트 병과 100mL 물 샘플을 Colilert 병에 엽니다.
  2. 영양 기판이 들어있는 베개 튜브를 열고 Colilert 병 내부의 물 샘플에 내용물을 붓습니다.
  3. 콜릴러트 병을 캡하고 밀봉합니다. 기판이 완전히 용해 될 때까지 병을 반복적으로 반전, 적극적으로 병을 흔들어.
  4. 트레이 상단의 가장자리를 압박하고 용지 탭을 다시 당겨 퀀티 트레이 2000을 조심스럽게 엽니다. 트레이가 열려 있도록 계속 압박하십시오.
  5. 시약/물 샘플 혼합물을 트레이에 붓고, 트레이 내부의 샘플을 35 ± 0.5°C에서 24시간 동안 배양한다.
  6. 시약/물 샘플 혼합물의 노란색 색상 변화를 관찰한다. 대장균에 대한 긍정적 인 존재를 신호 크고 작은 우물의 수를 계산합니다. 노란색은 대장균이 존재한다는 것을 나타냅니다. 맑은 물이나 색의 변화가 없음은 대장균이 존재하지 않는다는 것을 나타냅니다.
  7. 시약/물 샘플을 자외선에 노출시키고 푸른 형광을 관찰합니다. 대장균에 대한 긍정적 인 존재를 신호 크고 작은 우물의 수를 계산합니다. 청색 형광은 대장균이 존재한다는 것을 나타냅니다. 형광은 대장균이 없다는 것을 나타내지 않습니다.
  8. 정량형 트레이 2000 MPN시트(도 4)를사용하여 100mL의 물에 존재하는 각 지표 유기체의 농도를 정량화한다. 스프레드시트를 사용하여 큰 것을 비교합니다: 작은 양성 우물 비율은 두 지표 생물모두에 대한 존재를 확대합니다.

Figure 4
그림 4. 정량트레이 네거티브(왼쪽), 대장균 양성(가운데), 대장균 양성(오른쪽).

Application and Summary

지표 유기체는 환경 오염을 신속하고 저렴하게 결정하기 위해 사용됩니다. Colilert 분석은 음용, 레크리에이션 및 폐수 원천의 수질을 분석하는 데 사용됩니다. 수질은 인적 및/또는 환경 소비를 위한 자원으로 받아들여지기 위해 환경 보호국(EPA) 및 주 규제 부서에서 정한 법적 기준을 충족해야 합니다.

Colilert 분석은 또한 환경 연구 내의 질량 균형 마커로 전략적으로 사용되며,이 데이터는 결과 사이의 상관 관계를 측정하기 위해 다른 환경 분석과 함께 분석 될 수있다. 간단한 P-A Colilert 테스트를 수행하면 샘플이 오염되었는지 여부를 표시하여 연구 결과와 함께 분석할 수 있습니다. P-A 샘플이 물에 오염이 있음을 보여주는 경우, 연구에서 활용되는 물 샘플은 또한 잘못 해석된 결과로 이어지는 오염을 가질 수 있으며, MPN Quanti-tray는 오염에 대한 기준 정수화를 제공합니다. 예를 들어, 지표 유기체는 지표 정량화를 물 샘플에서 발견되는 병원균의 수와 상호 연관시키는 데 사용될 수 있다. 정량트레이가 낮은 지표 수를 내포하면, 이것은 물 샘플이 낮은 병원균 수준으로 유사한 추세를 경험해야 한다는 것을 시사합니다.

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Overview

1:10

Principles of Monitoring Water Quality Using Indicator Organisms

3:49

Coliform Presence-Absence (P-A) Test

5:06

Most Probable Number (MPN) Analysis

6:44

Applications

7:54

Summary

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