この研究はドイツの Krebshilfeによって支えられた (Max、エーダー グループ: 110972)、(SMB) に DGVS 博士論文奨学金と大学医療センター ゲッティンゲンで (RGG) にElse Kröner フレゼニウス基礎奨学金。専門的な技術支援、ユッタ ・ ブランバーグとウルリケ ・ ウェグナーに感謝します。また、マウスを維持の大学医療センター ゲッティンゲンの動物施設ですべて動物技術者を感謝いたします。すべての実験は、ドイツの動物福祉規則に従って行われました。

このプロトコルは大学医療センター ゲッティンゲン、ドイツ (33.9-42502-04-15/2056) で動物のケアのガイドラインに従ってです。個々 の動物の特定の要件に応じて板を確認し、プロトコルの手順のいくつかは適宜変更する可能性があります。
1. 腹部触診 KPC マウスの
<ol><li>不要な超音波スキャンを避けるためには、腹腔内の病変を負担する可能性があるかもしれないし、腹部超音波検査を受ける必要がありますその後マウスを識別するためにマウスの腹部を触診します。<ol>
<li>KPC マウス モデルの年齢の 8 週間から腹部の触診を毎週実行します。高解像度超音波は、移植腫瘍モデル (例えばorthotopics) または他の遺伝子組み換えマウスのモデルにも適用できます。 注: 腫瘍動態研究目標 (予防研究、治療的介入の研究)、によって非常に小さな腫瘍 (1-2 mm) の検出可能ですモニター腫瘍発症する腫瘍を触知することができます前に。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ケージ グリッド上にマウスを置くとそっとしっぽをマウスを持ち上げ、優しくインデックスと非固定手 (図 1) の親指を上下に行くことによって腹部を触診します。</li>
	<li>マウスは、柔らかい触診を容認する場合、は、ゆっくり圧力を高めることによって進みます。大きい抵抗は、上・下腹部で簡単に検出できます。腫瘍とハードの糞便を誤って解釈ことができる時に、質量です。</li>
</ol>2. 作業スペースの準備
<ol><li>少なくとも 3 つの異なる作業台スペースを提供: スキャン前エリア、ステージと回復のケージをスキャンします。必要な材料は、図 2で描かれています。</li>
	<li>メイン作業プレートをきれい (たとえば、70% エタノール) し (図 3) をスキャンする前に暖房プラットフォームに切り替えます。最初のマウスを転送する前に 38-40 ° C の温度が設定温度に達することを確認してください。</li>
	<li>超音波マシンに切り替え、集録したデータ (図 4) の新しいフォルダーを作成します。腹部画像診断の B モードの設定が適用されます。さらに、腹部のトランスデューサーがマシンのアクティブなポートに接続されていることを確認します。作業ステージの上部にシステムをマウント トランスデューサーを使用して、探触子の頭を修正します。</li>
	<li>手続き後の体温調節やスキャンしたマウスの迅速なリカバリを確保するため加熱プレートまたは温熱マット (または暖房ランプ) の回復ケージを準備します。クッションとして窒息 (図 5) のリスクと寝具の吸引を避けるためにこのケージの下部組織の薄い層を置きます。</li>
</ol>3. 吸入麻酔
<ol><li>誘導チャンバーにマウスを置くことによって進みます。ガスのキャリアの流れ (1 L/分の酸素、空気) のバルブを開き、イソフルラン麻酔濃度を徐々 に増加させる飽和誘導室を許可する 4% に設定します。適切なイソフルラン清掃 (パッシブまたはアクティブ フィルタ リング) されていることを確認します。約 2 〜 4 分後マウスは通常深い鎮静下になります。<ol>
<li>作業段階に鼻の円錐形によって 2% イソフルランの投与による鎮静を維持します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>慎重に作業段階に誘導室から動物を転送します。一定のガス流れ鼻の円錐形を確認します。麻酔ライン コンセントの鼻の円錐形のマウスの鼻を置きます。初期スキャンの定位置は仰臥位です。マウスは、膵頭部または尾部腫瘍 (図 6) の可視性を改善するために、左右どちらにも配置できます。</li>
	<li>腹部超音波検査は痛みを伴う自体、痛み無料条件と深い麻酔状態の指標として足ピンチ テストを実行します。マウスがまだアクティブ、または積極的に動き回る、転写動物は繰り返されると長時間誘導誘導室に戻る。</li>
	<li>体液の損失による角膜の損傷を防ぐために眼保護軟膏を使用します。</li>
	<li>麻酔中モニタリング システムを使用します。しかし、心電図、直腸温が常用される腹部超音波スキャンのため。重要なは、マウスは、麻酔下で thermoregulate する能力を失います。したがって、低体温症や呼吸困難にあえぎや無呼吸などの臨床徴候を観察します。症状はすぐに明白な停止イソフルランと回復ケージ内マウスの場所です。 場合、</li>
</ol>4. 超音波の設定
<ol><li>製造元の指示に従って超音波システムに切り替えます。アクティブに腹部のパッケージと一般的なイメージングをつける主な設定を確認します。通常 B モード画像は、標準のデータ集録に使用されます。</li>
	<li>次のパラメーターを最適化されたイメージの品質を達成するため: 周波数 40 MHz、2 D ゲイン 25-30 dB、イメージ深さ 10 ミリメートル、画像幅 10 mm、3-6 mm の間の中心の 3 つの焦点ゾーン。</li>
</ol>5. マウス作製
<ol><li>粘着テープを使用して上部および下肢を修正します。(図 7) 固定のため動物への損傷を避けるために可能な限り、注意してください。</li>
	<li>電子ペット バリカンを使用してすべての腹部の毛皮を削除します。毛皮テクスチャによる胸部まで下腹部から開始します。この分野での皮膚の損傷を避けるために大の剣状突起で世話をします。 注: マウスの毛皮超音波を反映し、可視性を減少させます。</li>
	<li>脱毛クリームを使用すると、最適化された皮膚の準備と毛皮の完全な除去を実行できます。綿棒 (図 8) を使用して坊主の腹部にクリームの薄い層を管理します。多量の水を完全に削除すべての残骸 (図 9図 10図 11) 続いて乾燥組織 (30 s または使用クリームによってはそれ以降) の後、クリームを削除します。クリームの残党は超音波後皮膚や粘膜の炎症の原因し、こうして健康に影響を与える可能性があります。</li>
	<li>適切なスキャンに条件が適用されます (図 12) 腹部に超音波ゲルたっぷり。通常、暖かい超音波ゲルはマウスの低体温症を最小限にするために使用されます。</li>
	<li>手動でトランスデューサ ヘッドに超音波ゲルの薄い層を適用します。ノッチの探触子側に触れることにより、テストを実行します。画面では、探触子が正しく配置されている場合、左上の信号を見ることができます。</li>
</ol>6. 腹部超音波検査
<ol><li>会社の圧力を使用して腹部に探触子を調整します。マウスの腹部の重い圧縮は、呼吸器や循環器系の障害につながる可能性があり、避けるべきであります。</li>
	<li>上下にスキャンします。作業台や x 軸と y 軸の車輪の枠を調整します。</li>
	<li>最初のステップとして、両方の腎臓を識別します。通常彼らは下腹部に同種の構造を hyperechogenic として表示されます。接続されている下大静脈 renalisは、さらに下大静脈(図 13) につながる簡単に見つけることができます。</li>
	<li>膵臓の画期的な容器として下大静脈 lienalis機能を使用します。Renalis 下大静脈と下大静脈 lienalisを区別しようとします。Lienalis 下大静脈の検出時に膵臓は正確にローカライズされました。通常の膵臓は、固体構造(図 14 と図 15) より腹腔内感染が広がる膜ではなくです。</li>
</ol>7. 膵腫瘍検出とボリュームの評価
<ol><li>すべての周囲の構造から膵病変を識別します。彼らは一般に低エコー円形または長円形の不均質組織固まり (図 16) として表示されます。腫瘍は通常しっかりとスキャン ヘッドでは、ほとんど圧縮することができます。注は、時から腫瘍と小腸ループとの間を明確に区別するが難しいことがあります。膵腫瘍で、観察する必要があります腸の蠕動運動に注意を払います。</li>
	<li>時に腫瘍検出画面を上下に合計サイズの印象を受けるし、超音波のキャリパーを使用して最大の直径を測定します。適切なイメージが見つかったら、画面がフリーズし、正確に腫瘍の大きさを判断するものさしツールを使用します。尻尾や体膵頭部に腫瘍がローカライズされているかどうかを区別するために重要なことが後で使用できる注意してください。</li>
	<li>ライブ モードに変更する前に、作業を記録する画像を保存することを確認します。それは調整のホイールがリリースされる、マウスの腹部に超音波プローブが押されたさらにもっと起こるかもしれない画像を凍結しながら注意してください。したがって、凍結するモードを変更する前に圧縮の調整を修正します。</li>
	<li>最初の面の測定を終えた後スキャン ヘッドを縦位置 (図 17) に 90 ° 回転するか、その側では、腫瘍の縦方向の拡張を検出するには、マウスを有効にします。いくつかの腫瘍は、十分な視認性のマウスの位置を変更する必要があります。膵尾部腫瘍は、その左側にある (図 11 と図 20) 膵頭部腫瘍のため(図 10 と図 19)、右側を下にマウスを配置できます。</li>
</ol>8. 腫瘍体積の定量化
注: すべての努力の主要な目的のひとつ腫瘍体積の正しい決定であります。利用可能ないくつかのテクニックがありますが、楕円の式を含む計算法大学医療センター ゲッティンゲンでことが勧めします。
<ol><li>すべての 3 つの以前に取得した直径を装備し、対応する腫瘍 (図 21) のおおよその量を計算します。</li>
	<li>また、後続のボリューム計算・ 3 D 再構成による腫瘍領域の自動スキャンを実行するのにスキャン ヘッドのモーター システムを使用します。</li>
</ol>9. 回復
<ol><li>スキャンした後すべての粘着テープを慎重に取り外し、すべての超音波ゲルを丁寧に乾いたティッシュで。</li>
	<li>慎重に回復ケージ (図 21) にマウスを転送します。呼吸機能障害を引き起こす可能性があります mouse´s 顔であらゆるカバー ティッシュを避けてください。回復のための側の立場は、優先されるべき。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

このプロトコルでは、遺伝子組み換えマウス モデルにおける高分解能の腹部超音波画像を用いた膵腫瘍を定量化するための詳細な説明が提供されます。最近、論らどのようにマウス モデルでもない準備をし、以降のすべてのステップのための前提条件は、11を示されていた処理の可視化について膵腫瘍を定量化する詳細な説明を出版しました。この原稿の全体的な目標は、マウスの高分解能超音波の包括的な視覚的なガイドを提供することです。
我々 は、遺伝子改変マウスの内因性膵腫瘍に対する私たちの記述を集中が、この方法は同所性同種移植モデルの使用もできます。同所性同種のモデルも非常に小さな腫瘍まで取る率および腫瘍の発症を調査する 1-2 mm を abdominally 検出できます。腹部の触診は、主観的で再現することは困難にすることができます、超音波検査は、非常に小さな膵腫瘍の発症を検出する KPC モデル以前触診なしも適用できます。さらに、空気で満たされた小腸ループなど腹部の構造がスーパーイン ポーズあります。この点で、作業段階に動物の位置を変更するのに役立つことがあります。ほとんどの腫瘍は、仰臥位; で視覚化することただし、いくつかの腫瘍は可能性がありますその左側 (膵頭部腫瘍) または右側 (膵尾部腫瘍) にマウスを配置する場合にのみ検出されます。したがって、マウスの適切な位置決めは、効率的な可視性を高めるために重要です。
腹部臓器の解剖学的変動の不十分な視認性があります。可視性と超音波画像の解像度を増やすには、フォーカスと同様に、明るさとコントラストの設定がに応じて変更される必要があります。画像工芸品不良/誤プローブ、マウスの毛皮の削除が不完全、超音波ゲルの不十分な量またはマウスの腹部にプローブの接触面圧が不足している可能性があります。さらに、プローブの少し傾斜はまたかなり視認性を向上できます。
さらに、小動物の超音波による縦、腫瘍増殖動態を監視できます。低コスト (超音波装置の可用性を与えられる)、ない放射線被ばく、スキャン時間が短いマウスのため小さなひずみなどの手法の主な利点。縦断的がん研究の観点から特に繰り返しスキャンが容易に行える、鎮静や小さな動物の CT や MRI のスキャンに必要な麻酔の非常に長い期間を必要とせず動物に少し緊張を置きます。
様々 な臨床でより強力な超音波システムと技術の進歩は、改良された解像度とますます自動化された画像の最適化ツール、小動物は、現在開発されているので高解像度超音波をより頻繁に使用されます。今後の分野。プロトコルの中で重要なステップは腹部臓器や血管の同定を修正し同様、マウスの正しい準備と位置づけが含まれます。
高解像度超音波は検出と膵腫瘍の定量化のための貴重なツールが遺伝子組み換えと同所性同種マウス モデル。この超音波法は他の確立された想像の技術と比較して高速セッションの時間とコストの効率性を組み合わせたものです。正しい獲得と超音波画像の解釈が適切な実践的な訓練と経験を必要とするのでこのビデオ プロトコルは膵癌モデルにおけるすべての側面のための詳細なガイドラインとして提供しています。

遺伝子組み換えマウス モデルは、がん研究能力に密接にヒトの発がん1,2,3の複雑な性質を要約するための増加する重要性を得ています。膵癌の開発を研究するモデルを頻繁に使用、ほとんどの 1 つ、進行と治療反応は腫瘍のサプレッサー p534の不活化と組み合わせて Kras 遺伝子の活性化変異によって特徴付けられます。このの LSL KrasG12D/+;LSL Trp53R172H/+;Pdx 1 Cre (KPC) マウス モデル事前侵襲的な膵上皮内腫瘍 (パニン) 病変から浸潤癌への段階的進行を模倣しています。表現型は、ほぼすべてのマウスは出生後最初の 6 ヶ月以内 PDAC を開発します。ただし、移植モデルと比較して、KPC モデルはいくつかのヶ月4から 8 週間非常に可変腫瘍発症を明らかにします。膵臓の腫瘍が特定のサイズ (直径 5-9 mm) に達すれば、腫瘍の成長が急速に加速してマウスが前臨床試験5に登録する必要があります。したがって、腫瘍発生、腫瘍サイズの正確な検出は、ロジスティクス前臨床研究と治療の監視のための必須の前提条件です。一般に、いくつかのアプローチが好き磁気共鳴画像 (MRI)67,8,9または高解像度超音波スキャン コンピューター断層撮影は腫瘍のスクリーニングを行うために使用できる、療法10。各テクニックは、その利点と欠点。MRI のコンピューター断層撮影 (CT) または -イメージングにより、正確な体積計算同様、一般的な鎮静下で長期にわたる試験時間の高解像度データ集録と非常に高価な機器が必要で、頻繁には許しません。長い期間にわたってスキャン。対照的に、小動物の超音波検査は、画面のマウス11で腹部の病理学を用いることができる確立されたメソッドです。このイメージング法の利点は、短い時間、高解像度のスキャンとドップラー超音波またはコントラストを使用する可能性を強化 (CEUS) 超音波を用いた並列で臓器の灌流を可視化します。ただし、解剖学的知識、3 D の想像力と徹底した実践的なトレーニングは、正しいイメージの解釈の必要です。
次の記事では、KPC モデルの高分解能超音波を利用するための詳しいプロトコルが提供されます。さらに、標準的な超音波画像を描かれている、調査官の向きを容易に臓器の構造を持つラベルします。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-12055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-11982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;electronic pet clippers</td>
			<td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td>
			<td>5025232484324</td>
			<td>Panasonic ER-PA10-s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labotect Hot plate</td>
			<td>Labor tech G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream (ophthalmic ointment)</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr, Germany</td>
			<td>9080249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>veterinary isoflurane</td>
			<td>Abbvie, Germany</td>
			<td>4831867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>RB healthcare UK, United Kingdom</td>
			<td>8218535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td>
			<td>TH. Geyer, Germany</td>
			<td>22941000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Asmuth, Germany</td>
			<td>13477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td>
			<td>7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton tips</td>
			<td>Meditrade, Germany</td>
			<td>75481116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bowl for ultrasound gel</td>
			<td>ARC France, France</td>
			<td>H1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bowl</td>
			<td>W &#38; P Trading Co., USA</td>
			<td>B00K2P6PLQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Fuhrmann, Germany</td>
			<td>960504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSL KrasG12D/+;LSL Trp53R172H/+;Pdx 1 Cre (KPC) マウス モデルは膵臓癌の新規治療法を評価するための確立され、頻繁に使用されるトランスジェニック モデルを表します。腫瘍の発症は、8 週間と数ヶ月間 KPC モデルの変数です。したがって、非侵襲的イメージング ツールが腫瘍発症のスクリーンと治療に対する反応のモニターに必要です。この問題を解決するには、別のアプローチは最後の年にわたって浮上しています。高解像度超音波には、非侵襲、高速セッション時間および放射線被曝なし高画像解像度などの主要な利点があります。しかし、マウスの超音波ではない些細なと十分な解剖学的知識、臨床膵癌モデルにおける高分解能超音波を正常に実行するために必要な実践的なスキル。次の記事では、内因性の膵癌モデルの特定のフォーカスを持つマウスモデルでの腹部超音波検査の詳細な実践的なガイドが表示されます。さらに、よくある間違いとその回避方法の概要を提供します。

超音波は、人間の病気のマウスモデルでいくつかの問題に対処するため汎用性と非侵襲的な手法です。すべてその他イメージングのアプローチの主要な利点と比較して、高スループット、コスト効率、短いアクイジション時間と実時間イメージング。ただし、このツールは、高精度、高品質の画像を生成するための専門知識を必要があります。不要な工芸品の特に超音波一般に少なくともいくつかの経験は非常に便利です。膵癌に関連してこのツールは腫瘍発症、進行および治療への反応を決定することができます。さらに、異なる直径の測定では、時間をかけて腫瘍体積の正確な定量化できます。本研究は示し、遺伝子組み換えマウスの膵臓癌のスクリーニング ツールとして高分解能超音波イメージングを使用する方法の詳細について説明します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig1.jpg"> 図 1: 腹部触診します。非修正の手が優しく上下に移動することによってプロシージャを開始しながら、尾を引き出し手をやさしく固定します。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig2.jpg"> 図 2: 事前スキャン エリアをすべて必要な項目の概要と。皮膚の 70% イソプロパノール (3) 超音波ゲル ガラス腸 (4)、眼軟膏 (5)、ティッシュ ワイパー (6)、医療用テープ (7)、水容器 (8)、ペット バリカン (9) 脱毛クリーム小さい容器 (10) 適用する綿棒、ガーゼ (2) 消毒 (1)眼軟膏や超音波ゲル (11)。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig3.jpg"> 図 3: イソフルレン気化器の領域をスキャンします。作業段階で調整可能なプローブ ホルダー (1) 誘導商工会議所 (2) イソフルラン気化器 (3) を含みます。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig4.jpg"> 図 4: 超音波デバイス。超音波システムには 3 つの超音波プローブは、対応するポートが付属します。キーボードと PC のマウスは、システムに含まれます。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig5.jpg"> 図 5: 回復ケージ。ケージの下は薄い組織で、スキャンの手順の後十分な暖房を可能に予熱します。温度は、摂氏 (° C) で表示されます。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig6.jpg"> 図 6: 作業段階に固定マウスします。マウスは作業段階に仰臥位に配置されます。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig7.jpg"> 図 7: ペット バリカンを使用した後剃ったマウスします。腹部の毛をカットするが、工芸品を定期的に発生する髪の小さな部分を保持します。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig8.jpg"> 図 8: 脱毛クリームの使用。腹部の剃毛地域に脱毛クリームの薄い層を管理します。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig8large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig9.jpg"> 図 9: マウスの腹部を完全に剃毛します。すべてのクリームの残りを洗い流すため多量の水、毛皮ののみの完全な除去により、最適なスキャン プロシージャ。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig9large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig10.jpg"> 図 10: マウスの右側します。膵尾部腫瘍をスキャンするための最適な向き。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig10large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig11.jpg"> 図 11: マウスの左側にある。膵頭部腫瘍をスキャンするための最適な向き。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig11large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig12.jpg"> 図 12: マウスの腹部超音波プローブします。防ぐために、マウスへの損傷はあまりにも多くの圧力を使用しないでください。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig12large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 13" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig13.jpg"> 図 13: 右腹部パーツの超音波画像腎臓や肝臓に近接して本船に腹部大動脈や下大静脈などの構造があります。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig13large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 14" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig14.jpg"> 図 14: 左腹部パーツの超音波画像左腎臓と脾臓と膵臓の膜状の組織がある、ランドマークとして下大静脈 lienalisオルガン (黄色の矢印) を実行しているし、基本構造として使用することができます。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig14large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 15" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig15.jpg"> 図 15: 膵臓の境界線です。(内容) と胃膵臓 (黄色の矢印) の左側の境界線をマークします。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig15large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 16" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig16.jpg"> 図 16: 膵腫瘍を識別します。膵腫瘤影を表示 hypodense と仰臥位の矢印は、周囲の正常組織の境界を示します。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig16large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 17" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig17.jpg"> 図 17: 縦位置。膵腫瘍の長さを決定します。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig17large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 18" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig18.jpg"> 図 18: 膵腫瘍の縦スキャンします。空気充填十二指腸に起因する干渉。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig18large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 19" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig19.jpg"> 図 19: マウスの右側にある:膵尾部腫瘍<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig19large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 20" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig20.jpg"> 図 20: マウスの左側にある:膵頭部腫瘍<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig20large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 21" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig21.jpg"> 図 21: 腫瘍量定量化します。先に示した 2 つのスキャン位置のすべての 3 つの直径の買収後, 体積の計算が実行されます。したがって、楕円の式を使用: 4/3 π/2、* b/2 * c/2。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig21large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 22" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig22.jpg"> 図 22: 回復。完全に回復するまで加熱プレートに転送は動物をスキャンした後は、マウスの目に白い眼軟膏を注意してください。<a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig22large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

この記事では、膵がんの遺伝子組み換えマウスの高分解能超音波の利用について説明します。主な目的は、内因性膵腫瘍の検出と評価の詳細な指示を提供するためにです。

高解像度モニター腫瘍発症と遺伝子組み換えの膵癌モデルの成長に超音波を利用しました。

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Cancer Research

10.7K ビュー.  University Medical Center Goettingen. この記事では、膵がんの遺伝子組み換えマウスの高分解能超音波の利用について説明します。主な目的は、内因性膵腫瘍の検出と評価の詳細な指示を提供するためにです。

ビデオ: Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

がん研究

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis remains incomplete. In vivo models are paramount for metastasis research, but require refinement. Tracking spontaneous metastasis by non-invasive in vivo imaging is now possible, but remains challenging as it requires long-time observation and high sensitivity. We describe a longitudinal combined radionuclide and fluorescence whole-body in vivo imaging approach for tracking tumor progression and spontaneous metastasis. This reporter gene methodology employs the sodium iodide symporter (NIS) fused to a fluorescent protein (FP). Cancer cells are engineered to stably express NIS-FP followed by selection based on fluorescence-activated cell sorting. Corresponding tumor models are established in mice. NIS-FP expressing cancer cells are tracked non-invasively in vivo at the whole-body level by positron emission tomography (PET) using the NIS radiotracer [18F]BF4-. PET is currently the most sensitive in vivo imaging technology available at this scale and enables reliable and absolute quantification. Current methods either rely on large cohorts of animals that are euthanized for metastasis assessment at varying time points, or rely on barely quantifiable 2D imaging. The advantages of the described method are: (i) highly sensitive non-invasive in vivo 3D PET imaging and quantification, (ii) automated PET tracer production, (iii) a significant reduction in required animal numbers due to repeat imaging options, (iv) the acquisition of paired data from subsequent imaging sessions providing better statistical data, and (v) the intrinsic option for ex vivo confirmation of cancer cells in tissues by fluorescence microscopy or cytometry. In this protocol, we describe all steps required for routine NIS-FP-afforded non-invasive in vivo cancer cell tracking using PET/CT and ex vivo confirmation of in vivo results. This protocol has applications beyond cancer research whenever in vivo localization, expansion and long-time monitoring of a cell population is of interest.

We describe a protocol for preclinical in vivo tracking of cancer metastasis. It is based on a radionuclide-fluorescence reporter combining the sodium iodide symporter, detected by non-invasive [18F]tetrafluoroborate-PET, and a fluorescent protein for streamlined ex vivo confirmation. The method is applicable for preclinical in vivo cell tracking beyond tumor biology.

放射性核種蛍光レポーターの遺伝子齧歯動物腫瘍モデルで腫瘍の進行を追跡するイメージング

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and colorectal cancer (CRC). More than 50% of patients with muscle-invasive UCC, despite curative therapy for clinically-localized disease, will develop metastases and die within 5 years, and metastatic CRC is a leading cause of cancer-related deaths in the US. Xenograft models that consistently mimic UCC and CRC metastasis seen in patients are needed. This study aims to generate patient-derived orthotopic xenograft (PDOX) models of UCC and CRC for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of LN stromal cells mimicking the progression of human metastatic diseases for drug screening. Fresh UCC and CRC tumors were obtained from consented patients undergoing resection for HG-UCC and colorectal adenocarcinoma, respectively. Co-inoculated with LN stromal cell (LNSC) analog HK cells, luciferase-tagged UCC cells were intra-vesically (IB) instilled into female non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, and CRC cells were intra-rectally (IR) injected into male NOD/SCID mice. Tumor growth and metastasis were monitored weekly using bioluminescence imaging (BLI). Upon sacrifice, primary tumors and mouse organs were harvested, weighed, and formalin-fixed for Hematoxylin and Eosin and immunohistochemistry staining. In our unique PDOX models, xenograft tumors resemble patient pre-implantation tumors. In the presence of HK cells, both models have high tumor implantation rates measured by BLI and tumor weights, 83.3% for UCC and 96.9% for CRC, and high distant organ metastasis rates (33.3% detected liver or lung metastasis for UCC and 53.1% for CRC). In addition, both models have zero mortality from the procedure. We have established unique, reproducible PDOX models for human HG-UCC and CRC, which allow for tumor formation, growth, and metastasis studies. With these models, testing of novel therapeutic drugs can be performed efficiently and in a clinically-mimetic manner.

This protocol describes the generation of patient-derived orthotopic xenograft models by intra-vesically instilling high-grade urothelial cell carcinoma cells or intra-rectally injecting colorectal cancer cells into non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of lymph node stromal cells, which mimics the progression of human metastatic diseases.

ヒト尿路上皮細胞癌および大腸癌腫瘍増殖および自発性転移に対する患者由来の眼科医異所性Xenograft移植片モデル

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ever-increasing number of studies have identified miRNAs as potential biomarkers for cancer diagnosis and prognosis, and also as therapeutic targets, adding an extra dimension to cancer evaluation and treatment. In the context of thyroid cancer, tumorigenesis results not only from mutations in important genes, but also from the overexpression of many miRNAs. Accordingly, the role of miRNAs in the control of thyroid gene expression is evolving as an important mechanism in cancer. Herein, we present a protocol to examine the effects of miRNA-inhibitor delivery as a therapeutic modality in thyroid cancer using human tumor xenograft and orthotopic mouse models. After engineering stable thyroid tumoral cells expressing GFP and luciferase, cells are injected into nude mice to develop tumors, which can be followed by bioluminescence. The in vivo inhibition of a miRNA can reduce tumor growth and upregulate miRNA gene targets. This method can be used to assess the importance of a determined miRNA in vivo, in addition to identifying new therapeutic targets.

This protocol describes xenograft and orthotopic mouse models of human thyroid tumorigenesis as a platform to test microRNA-based inhibitor treatments. This approach is ideal to study the function of non-coding RNAs and their potential as new therapeutic targets.

マウスの腫瘍増殖を減少させるマイクロRNAの生体内阻害

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

マウス膵管腺癌の超音波誘導矯正着移植

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables associated to specific pancreatic pathologies to help preoperative differential diagnosis and patient profiling. Pancreatic juice is a relatively unexplored body fluid, which, due to its close proximity to the tumor site, reflects changes in the surrounding tissue. Here we describe in detail the intraoperative collection procedure. Unfortunately, translating pancreatic juice collection to murine models of PDAC, to perform mechanistic studies, is technically very challenging. Tumor interstitial fluid (TIF) is the extracellular fluid, outside blood and plasma, which bathes tumor and stromal cells. Similarly to pancreatic juice, for its property to collect and concentrate molecules that are found diluted in plasma, TIF can be exploited as an indicator of microenvironmental alterations and as a valuable source of disease-associated biomarkers. Since TIF is not readily accessible, various techniques have been proposed for its isolation. We describe here two simple and technically undemanding methods for its isolation: tissue centrifugation and tissue elution.

Pancreatic juice is a precious source of biomarkers for human pancreatic cancer. We describe here a method for intraoperative collection procedure. To overcome the challenge of adopting this procedure in murine models, we suggest an alternative sample, tumor interstitial fluid, and describe here two protocols for its isolation.

膵臓腺癌の腫瘍微小環境を調べるための近位液の分離

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role of CAFs in the tumor microenvironment can be helpful for understanding the functional importance of fibroblasts, fibroblasts from different tissues, and specific genetic factors in fibroblasts. Mouse models are essential for understanding the contributors to tumor growth and progression in an in vivo context. Here, a protocol in which cancer cells are mixed with fibroblasts and introduced into mice to develop tumors is provided. Tumor sizes over time and final tumor weights are determined and compared among groups. The protocol described can provide more insight into the functional role of CAFs in tumor growth and progression.

A protocol to co-inject cancer cells and fibroblasts and monitor tumor growth over time is provided. This protocol can be used to understand the molecular basis for the role of fibroblasts as regulators of tumor growth.

腫瘍増殖における癌関連線維芽細胞の役割を調べるためのマウスモデル

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

メラノーマのBraf/Pten遺伝子操作マウスモデルにおける超高周波超音波イメージングによるリンパ節容積の解析

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor types, numerous mouse models have been developed in order to investigate the next generation of cancer therapies. However, in GIST, most in vivo studies use xenograft mouse models which have inherent limitations. Here, we describe an immunocompetent, genetically engineered mouse model of gastrointestinal stromal tumor harboring a KitV558&#916;/+ mutation. In this model, mutant KIT, the oncogene responsible for most GISTs, is driven by its endogenous promoter leading to a GIST which mimics the histological appearance and immune infiltrate seen in human GISTs. Furthermore, this model has been used successfully to investigate both targeted molecular and immune therapies. Here, we describe the breeding and maintenance of a KitV558&#916;/+ mouse colony. Additionally, this paper details the treatment and procurement of GIST, draining mesenteric lymph node, and adjacent cecum in KitV558&#916;/+ mice, as well as sample preparation for molecular and immunologic analyses.

The goal of this manuscript is to describe the KitV558&#916;/+&#160;mouse model and techniques for successful dissection and processing of mouse specimens.

消化管間質腫瘍の遺伝子操作マウスモデルにおける分子および免疫学的技術

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features of a unique and convenient model system. As highly proliferative cells are more susceptible to radiation-induced DNA damage, zebrafish embryos are a front-line in vivo model in radiation research. In addition, this model projects the effect of radiation and different drugs within a short time, along with major biological events and associated responses. Several cancer studies have used zebrafish, and this protocol is based on the use of radiation modifiers in the context of radiotherapy and cancer. This method can be readily used to validate the effects of different drugs on irradiated and control (non-irradiated) embryos, thus identifying drugs as radio sensitizing or protective drugs. Although this methodology is used in most drug screening experiments, the details of the experiment and the toxicity assessment with the background of X-ray radiation exposure are limited or only briefly addressed, making it difficult to perform. This protocol addresses this issue and discusses the procedure and toxicity evaluation with a detailed illustration. The procedure describes a simple approach for using zebrafish embryos for radiation studies and radiation-based drug screening with much reliability and reproducibility.

The zebrafish has recently been exploited as a model to validate potential radiation modifiers. The present protocol describes the detailed steps to use zebrafish embryos for radiation-based screening experiments and some observational approaches to evaluate the effect of different treatments and radiation.

ゼブラフィッシュの幼生を潜在的な放射線増感剤またはプロテクターを評価するためのモデルとして

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...