We thank Lowell Cochran for expert videography assistance. The financial assistance of the Canadian Institutes of Health Research (CIHR), the Canadian Breast Cancer Foundation (CBCF, Ontario Chapter), the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC), the Canadian Breast Cancer Research Alliance, the Ontario Centers of Excellence, the Breast Cancer Action Kingston and the Clare Nelson bequest fund through grants to LR is gratefully acknowledged. SG was the recipient of an NSERC studentship. MG was supported by a postdoctoral fellowship from the US Army Breast Cancer Program, the Ministry of Research and Innovation of the Province of Ontario and the Advisory Research Committee of Queen&#8217;s University.

1エレクトロポレーションチャンバー内の細胞をプレーティング<ol><li>層流フード中で、いつものように、滅菌技術を用いて細胞をトリプシン処理。 注：これらは、したがって、ガラス上の細胞のアドヘレンとギャップ結合の形成を妨げる可能性が広がるので、それは、遠心分離によってトリプシンの痕跡をすべて排除することは非常に重要である。 </li><li> 37°Cの CO 2インキュベータ内で、その場でエレクトロ（ 図1）、および場所を提供無菌エレクトロポレーションチャンバー中の細胞懸濁液のピペット1ミリリットル。 注：細胞接着は、フィブロネクチン、コラーゲン、ポリリジン、ま​​たは細胞および組織接着剤（材料表を参照）上にプレーティングすることによって改善することができる。 </li><li>細胞がコンフルエント層を形成しているとき、彼らはGJIC試験の準備ができている。 </li></ol> 2エレクトロポレーション手順 GJIC検査用エレクトロポレーションは、層流フードの外側に行うことができるそれはほんの数分かかりますので、。より長いインキュベーション時間は、特定の実験に必要とされる場合、それは層流フード内で完全に実施することができる。全ての場合において、細胞が増殖されるチャンバは無菌でなければならない。 <ol><li> 5 mg / mlのルシファー黄色の溶液を準備します。2ミリリットルカルシウムを含まない増殖培地中で（エレクトロ付属）10mgのLY粉末を溶かす。より長いインキュベーション時間を必要とする実験のために、4℃。で溶液とストアをフィルター滅菌</li><li>増殖培地を吸引し、単層を傷つけたり、細胞を乾燥しないように注意して、カルシウムを含まない培地で細胞を洗浄。細胞が乾燥している場合は、彼らは通常より暗い核を持っているし、エレクトロポレーションすることなく、LYを拾う。効果はより多くの空気ドラフト（ 図4F）にさらされているスライドの途中でより顕著である。 </li><li>チャンバーの端にある細胞（全体のチャンバのための400μlの）へのエッペンドルフピペット、ピペット色素溶液において、a、bとの細胞層に触れないように注意しeing。 </li><li>エレクトロ付属のホルダーに室を置き、適度な強度（考察を参照）のパルスを適用します。 </li><li>慎重にLY液の一部を吸引。これは、それほど重要での実験のために二度目に再使用することができる。 </li><li> 10％透析血清を含むカルシウムを含まないDMEMを追加します。 </li><li>ギャップ結合を介して色素転写を可能にするためにインキュベーター内で3〜5分間、細胞をインキュベートします。 注：この時点での透析血清を含むことは、気孔の閉鎖を支援します。 </li><li>生細胞観察用のカルシウムを含まないDMEMで取り込まれていない色素を洗ってください。あるいは、細胞をPBS（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、その後、ウェルに4％ホルムアルデヒドの添加によって、この段階で固定することができる。すべての場合において、洗浄はすべてのバックグラウンドを削除する必要があります。 注：電圧が低すぎる場合に最適な条件を決定するための予備実験では、それは細胞がincubatoに回復させることが可能である数分間rとスライドのコスト節約するために、同じスライドをもう一度エレクトロポ。 </li></ol> 3顕微鏡検査<ol><li>使用されている染料のための適切なフィルターを装備した倒立顕微鏡を用いて、蛍光照明下で細胞を観察します。黄色ルシファーのために、励起が423nm、放射555nmの、ニコンIX70顕微鏡用WBVフィルタです。 </li><li>位相コントラスト下の細胞形態を調べるために、液体でトップにそれを充填した後、穴プラスチックの上にガラスカバースリップを配置することによって、メニスカス効果を排除します。より良い写真のために、ウェルをスライドから取り外すことができ、カバースリップは、フレーム上に置いた。生きた細胞については、増殖培地で充填されなければならないが、固定した細胞については、ウェルは、顕微鏡観察のためにグリセロールを充填することができる。 注：細胞が色素（上記のステップ2.7）の転送以下のホルムアルデヒドで固定している場合は洗浄して撮影が容易になります。細胞がある場合はありませんtは固定、蛍光はLYの細胞タイプ、電圧、および量に応じて約60分以内に細胞から除去される固定された細胞に蛍光を数時間保持している間に導入した。しかし、蛍光が消えたり、固定した細胞では、O / Nインキュベートした後に消散する。このため、写真は、エレクトロポレーション（ 図2）の後にすぐに注意する必要があります。 </li></ol>細胞間コミュニケーションの4。定量<ol><li>蛍光および位相差（ 図3）の下で20倍を目的とした細胞を撮影。 </li><li>非電気穿孔面積（ 図2、矢印、エレクトロポレーションエッジ）との国境でのエレクトロポレーションした細胞を同定し、スターとマークします。 </li><li>染料はギャップ結合を介して転送されている非電気穿孔側、上の蛍光細胞を特定し、ドットマーク（ 図3Aおよび3B）。 </li><li>の合計数で割り縁部（ 図3Aおよび図3B）に沿ってエレクトロポレーションした細胞の数で非エレクトロポレーション領域上の細胞を蛍光を発する。 注：少なくとも200個の連続電気穿孔境界セルからの転送を各実験について計算される。得られた数は、GJIC値です。 </li></ol>

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The corresponding author is the inventor in a patent held by Queen&#8217;s University, which has been licensed to Cell Projects Inc. The company or the University had no influence upon the contents of the paper.

プロトコルの重要なステップ 電気穿孔材料 エレクトロポレーションされる材料の純度が非常に重要である。細胞は非常に平坦である場合には、追跡用色素のより高い濃度が使用されなければならない（LYための最大20 mg / ml）をそのような場合には、純度がより重要より球形1細胞よりなる。 LY以外に他の染料またはnonpermeant分子の多種多様なそのような異なるコネキシン25からなるチャネルのためのプローブとして使用するためのAlexa色素シリーズとして、使用されてきた。核は（ 図4D）色素転写の定量がより難しくなる、非常に強く蛍光を発するようにしたが、臭化エチジウムまたはヨウ化プロピジウムなどの染料は、DNAにインターカレートされている。カルシウム流入が接合通信を中断、ならびにセルを低減することができるので、トラッキング色素が調製されなければならず、洗浄は、カルシウムを含まない増殖培地中で実施lの生存率。すべての溶液は、細孔の閉鎖及び生存率1を容易にする、エレクトロポレーションの前に37°Cのに維持しなければならない。 最適電圧と容量の決定 電界強度は、細胞透過性、ならびに生存に重要なパラメータである。複数のパルスの印加は、単一パルスより浸透し、細胞生存率の点で良好な結果を提供することが示されている。マイルド（10パルス、離れて10マイクロ秒、パルス間の0.1秒）、中（20パルス、離れて80マイクロ秒、パルス間の0.2秒）とストロング（50パルス：セル·プロジェクトのその場ポレータ装置は、容量およびパルス数の3つの設定があります、離れて120マイクロ秒、パルス間の0.5秒）、電圧が細かく（2-45V）独立して制御することができるが。実際には、平らな細胞は、基層に小さな接着面積を持つ塊または細胞（ 例えば 、昆虫Sf9細胞）中で細胞を形質転換したものよりも低い電圧を必要とする、おそらく、より大きな導電性領域と接触している、拡張セルを通過する電流より多量に。このテーマの詳細については、1を参照してください。 潜在的な問題とトラブルシューティング細胞が操作中に削り取られてきた場合は、染料をピックアップし、エレクトロポレーション（ 図4A）なしで蛍光を発することがあります。細胞に送達されるエネルギーの量は、エレクトロポレーションの効率に影響を与える。パルスが弱すぎる場合（ すなわち 、低すぎる電圧とパルスの設定）が、その後の細胞は、位相差下で正常に見えるが、それらは、おそらく死んであってもよく、または操作中に掻き取られてきた特定の細胞を除いて、蛍光を発しない（ 図4A） 。パルスが強すぎると、位相コントラスト細胞下非常に暗い核（ 図4B）を有するように見えるが、いくつかのLYを保持し、さらに隣接セルのいくつかの染料転写を可能にすることができる。前夜でnは、より高いパルスは、細胞（ 図4C）を破壊されます。このような細胞が溶解されているので、彼らはLYを保持しないと全然あれば、非常に弱い蛍光を発する。このような媒体の変更時に外れることがありT51Bフォームドーム構造などの特定の上皮細胞系。染料はギャップ結合（ 図4E）を介して転送することができるように、周囲の細胞を次に蛍光を発することがあります。代表的なラインのための最適エレクトロポレーション条件の例を表1に示す。 他の技術と意義に対する優位点 DNA導入 そのようなリポソームのカルシウム-リン酸共沈法26又は異種のようなトランスフェクションプロトコルは、多数がある。しかしながら、それらは、特にシグナル伝達研究のために、非常に重要であるかもしれない微妙な方法で細胞に影響を及ぼし得る。たとえば、シグナル伝達性転写物の活性化剤のTYR-705のリン酸化その転写活性と相関するイオン3（Stat3の）は劇的であってもDNAの非存在下でカルシウム - リン酸トランスフェクションの手順によって増加される。これは、沈殿物が細胞接着およびカドヘリンの関与、既知のStat3活性剤27細胞を変化させるという事実である可能性があります。エレクトロポレーションまたはレトロウイルス感染がStat3のレベル6には影響しなかった一部のリポソームは、似ていますが、それほど顕著な効果を持っていた。 ペプチドの導入 一般的な方法は、HIV-TAT遺伝子由来のような細胞膜を横切る配列との融合ペプチドの構成である。しかし、膜を通る移動は比較的遅いプロセスであり、信号の阻害は、効率的ではない。リガンドによって以下の受容体活性化を発生するイベントのシーケンスの研究のために、ペプチドの瞬間を導入するための能力は、ペプチド模倣または他の化合物は、重要なadvantagを提供していますメール。 FITC結合ペプチド（ラプティス、未発表）で明らかにされた親油性ペプチドは、細胞膜に埋め込まれているので、その取込みを促進する細胞透過性ペプチドのエレクトロポレーションは、可能性は低い。それは、（同じペプチドのエレクトロポレーションは、信号29の完全な阻害を達成しながら、例えばたGrb2-SH2ドメインをブロックする細胞透過性ペプチドの使用を通して、EGFによるErkの活性化の阻害は、28の一部だけだったことに注意することは興味深い。 図5）。リポソームに基づく他の技術は、存在してもいる。しかし、それらは、導入されている材料（ 図5、波線ブラケットにシグナル阻害がなければならないことを可能な限り強力なデモンストレーションを提供することができ、ギャップ結合の研究と関連して、処理されたものと並んで、未処理の細胞側の検査を許可していないと、c）。 ギャップ結合の研究 マイクロインジェクション染料またはスクレープローディングの一般的に用いられるが、それらは常に細胞の損傷を導入している。別の技術は、光退色後の蛍光回復は、侵襲的ではないが、それは高価な装置を必要とし、毒性物質の形成が問題かもしれないが、いくつかの細胞は、一度に検査することができる。パラシュートアッセイは、ギャップ結合は15分〜3時間以内に形成するように、その後、細胞は細胞層に付着させること、色素カルセインAM（緑色）で事前ロードセルで構成されています。多数のセルがこのように処理することができるが、このアッセイにおいて、ギャップジャンクションを形成する細胞の能力は、細胞型30と非常に変化する。 制限事項 必要な電圧がより大きなサイズと電荷の分子の導入のために高くなる。大きなプラスミドの導入に必要な高電圧では、いくつかの細胞死があってもよい。異なる分子に必要な相対電圧以前に9,12に記載されている。私たちは、特定のエレクトロポレーション装置を使用して、エレクトロポレーションを説明しているが、それは誰かが19に詳細な説明を使用してそれを作る、あるいは細胞上の上部電極との簡単なセットアップを行い、酸1をエッチングするための電気機器の使用経験が可能です。 今後の方向性 ソフトウェアは、正確にGJIC 31を定量するために開発されてきた。さらなる改善は、それらが細胞内に一旦取り込まれなかった色素を洗浄する必要がないように、のみ蛍光を発する量子ドットの開発である。プロセスは、リアルタイムでのライブ、固定されていない細胞で観察することができるが、これは洗濯のストレスを避けることができます。シグナル伝達経路を遮断するペプチドの導入は、精製された成分を使用して識別相互作用の関連性のin vivo評価のための強力なアプローチである。鍋の検討特定の経路を阻害する別のペプチドのentialは新生物の合理的な治療のためのペプチド模倣薬の開発における最初の重要なステップです。 その他のコメント スライドを、ウェル中のITO表面に到達するための小さな絵筆を用いてエキストラン-1000溶液で洗浄し、そして水ですすぐことができる。細胞をスライド上に固定されている場合、それはまずトリプシンまたは他のタンパク質分解酵素を用いてタンパク質の痕跡を除去する必要があるかもしれない。ドデシル硫酸ナトリウムを含む洗剤は避けなければならない。洗浄したスライドは、過酸化水素ガスで滅菌することができる。任意LY溶液がホルダーに漏洩した場合には、ショートの原因となるので、それがスライド上のウェルの開封を避けるために非常に重要である。

セルへの電流の印加は、エレクトロポレーションと呼ばれるプロセスにより、細胞膜上の細孔の形成を引き起こす。細孔は膜を通してnonpermeant多様な分子の通過を可能にする。形成された細孔が非常に小さく、細胞生理に最小限の妨害で、急速に再閉鎖するように電場が、正確に制御することができる。興味深いことに、接着細胞は懸濁液中でエレクトロポレーションすることが切り離されることなく、それらが成長する表面上にある導電性および透明なインジウム-スズ酸化物（ITO）でコーティングし、 その場で電気穿孔し、スライドガラス上に成長させることができる。細胞は、この表面上に非常によく成長することができ、そしてそれらが結合拡張されると、詳細な顕微鏡観察が可能である。この技術を用いて、小nonpermeant分子は、コンプの活性化に関する研究のためのこの技術は特に適しており、瞬時に細胞の本質的に100％に導入することができる（1件）受容体のリガンド刺激後の経路のonents。 エレクトロポレーション（electrotransfectionも呼ばれる）DNAの導入のために主に使用されてきた。しかしながら、in situでエレクトロポレーションが転写因子の結合、またはsiRNA 3,5阻害するためにアンチセンスRNA、二本鎖DNAデコイオリゴヌクレオチドなどのようなペプチド2-4、オリゴヌクレオチド分子は、多種多様の導入のために有益であることができ、 6、放射性ヌクレオチド7-10、タンパク質11 12またはプロドラッグ13。エレクトロポレーション後、細胞を生化学的分析のために溶解または固定し、抗体で染色することができる。 細胞は、導電性コーティングの縁を横切って成長するように、細胞増殖は、2つの表面の高さの差によって乱されないように導電性ITOコーティングは、800-1,000Å非常に薄い。これは、非electrop利点を提供していますorated細胞を対照として使用するために、エレクトロポレーションのものと並行して成長させることができる。ビデオと同様のアプローチは、ギャップ結合細胞間コミュニケーション（GJIC）の検査のために使用することができる。 ギャップ結合は、隣接するセル14の内部を接続するチャネルである。そのようなsrcと癌遺伝子がGJIC 15,16を抑制しながら、ギャップ結合は、細胞間の通信は、腫瘍形成および転移に重要な役割を果たしている。 GJICを調べるために、イエロールシファー（LY）のような蛍光色素は、多くの場合、マイクロインジェクションを介して培養細胞に導入したりこすっロード17と隣接するセルへの色素の拡散を顕微鏡、蛍光照明下で観察されている。これらの技術は、しかしながら、常に、細胞損傷を引き起こす。現在、細胞が部分的にITO 18で被覆されたガラススライド上で増殖させる技術が記載されている。電気パルスは、CA LY（または他の色素）の存在下で適用した隣接する、非エレクトロポレーションした細胞への染料の移動を顕微鏡、蛍光照明で観察しながら、スライドの導電部に増殖している細胞への浸透を使用して。単層から剥離する傾向が妨害感受性細胞を避けるために、電極を必要としない設計されたアセンブリは、電流19を印加するセルの上に配置される。このアプローチは、多数のセルにGJICを定量する能力を提供し、細胞代謝に検出可能な妨害なしに、血清刺激12を次のG1期の長さに対する効果の欠如によって示されるように、fosのレベルの増加癌原遺伝子タンパク質（ラプティス、未発表）、または細胞ストレス、p38の豚やJNK / SAPKキナーゼ1に関連付けられた2つのキナーゼ。このアプローチは、癌遺伝子発現、形質転換及びGJのレベルの間のリンクの検査を可能にしたIC 18と同様に、肺腫瘍標本20〜23から新たに培養した細胞を含む多様な細胞型におけるGJICの際にはSrcおよびStat3の効果。また、基板への細胞付着はその段階19,24で減少しているが、成功した脂肪細胞分化の際にギャップ結合閉鎖のデモンストレーションのために使用されている上部電極を欠いて説明した設定と、その場でのエレクトロポレーション。

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Cellgro http://www.cellgro.com/</td><td>50-013-PB</td><td></td></tr><tr><td>DMEM without Calcium</td><td>Hyclone (Thermo scientific: http://www.thermoscientific.com)</td><td>SH30319-01</td><td></td></tr><tr><td>Donor Calf Serum&amp;nbsp;</td><td>PAA: http://www.paa.com/</td><td>Cat.# B15-008</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>PAA: http://www.paa.com/</td><td>Cat.# A15-751</td><td></td></tr><tr><td>Electroporation apparatus</td><td>Cell Projects Ltd UK: http://www.cellprojects.com/</td><td>ACE-100</td><td></td></tr><tr><td>Chambers</td><td>Cell Projects Ltd UK</td><td>ACE-04-CC</td><td>4-wells</td></tr><tr><td>Chambers</td><td>Cell Projects Ltd UK</td><td>ACE-08-CC</td><td>8-wells</td></tr><tr><td>Lucifer Yellow</td><td>Cell Projects Ltd UK</td><td>ACE-25-LY</td><td>High purity</td></tr><tr><td>CelTak</td><td>BD Biosciences</td><td>354240</td><td>Cell and tissue adhesive</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Collagen</td><td>BD Biosciences</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>Poly-Lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr></tbody></table>

a functional assay for gap junctional examination; electroporation of adherent cells on indium-tin oxide

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. A variety of molecules, such as peptides or oligonucleotides can be introduced into essentially 100% of the cells in a non-traumatic manner.&#160; Here, we describe how it can be used to study intercellular, gap junctional communication. Lucifer yellow penetrates into the cells when an electric pulse, applied to the conductive surface on which they are growing, causes pores to form through the cell membrane. This is electroporation. Cells growing on the nonconductive&#160;glass surface immediately adjacent to the electroporated region do not take up Lucifer yellow by electroporation but do acquire the fluorescent dye as it is passed to them via gap junctions that link them to the electroporated cells. The results of the transfer of dye from cell to cell can be observed microscopically under fluorescence illumination. This technique allows for precise quantitation of gap junctional communication. In addition, it can be used for the introduction of peptides or other non-permeant molecules, and the transfer of small electroporated peptides via gap junctions to inhibit the signal in the adjacent, non-electroporated cells is a powerful demonstration of signal inhibition.

図2は、固定および洗浄後、ラット肝臓上皮T51Bセル22、LYで電気穿孔し、蛍光（パネルAおよびB）下で撮影、または位相差（C）は、照明を示している。パネルAには、エレクトロポレーション領域のエッジは赤でマークされています。赤線の右側にある蛍光の勾配はギャップ結合を介して転送を示している。染料が転送された細胞は、ドットでマークしながら、エレクトロポレーション領域の端にある細胞は、星で識別し、マークした。図3Aと図3Bは、ギャップ結合コミュニケーションの定量を示している。比率は、染料がエレクトロポレーション境界セルあたりに移した細胞の平均数を示しています。この例では57ドットと10つ、 すなわち 、GJIC = 5.7があります。 CおよびD、転写-3のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター（Stat3の）にT51B細胞tの中でダウンレギュレートされているレンチウイルスベクターによる安定したsiRNA発現hrough、及びトランスファ22の不在によって示されるように、これは、GJICの減少を引き起こす。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/51710/51710fig1highres.jpg" /> 図1エレクトロポレーション電極とスライドアセンブリ。 （A）上面図：細胞を、導電性および透明なインジウム-スズ酸化物（ITO）でコーティングされたガラススライド上で増殖させる。プラスチック容器は、細胞およびLYための容器を形成するために、スライド上に接着されている。コー​​ティングは、本質的に2つの電極を形成し、中央に直線状にレーザーエッチングする。ダムは、このように電界強度の急激な遷移を作成し、現在の上方を迂回するために使用される。非導電性領域を提供するために、ITOは、2つの矩形にエッチングされる。パルス発生器からの電流（赤い矢印）が直接に広がる、矩形間の導電性の高速道路を経由して、他の各接触点から流れ領域がダムにほぼ平行にイオンが細胞をエレクトロポレーション、もう一方の側に媒体を介しダムの上に、中間障壁に平行である。明確にするために、チャンバーの前方部分を除去し、（B）側面図。 ITOコート（ライトグリーン）、エッチングされた、裸のガラス領域上に成長している細胞を用いたスライドが表示されます。 （ - ）LYを含有するエレクトロポレーション培地は、次いで、ダムの高さの電極（+）との間の電気経路上のレベルにチャンバーに添加されると、この領域中で増殖する細胞が形成される。その実際の厚さ（800 A）はセルの厚さよりはるかに小さいが、ITO層は、明確性のために誇張厚さで示されていることに注意してください。（C）エレクトロポレーションおよび非エレクトロポレーションした細胞の面積が拡大して示されている。染料は、すべての細胞がエレクトロポレーションしたダムに近い緻密で濃度は、複数のギャップジャンクショ​​ンTRANSFを通じて弱めるようにエレクトロポレーションし、エッジを越えフェードERS。大きな矢印は、ギャップ結合を介して色素転写の方向を示している。細胞の大きさや厚さを明確にするため誇張されていることに注意してください。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51710/51710fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/51710/51710fig2highres.jpg" /> T51Bの図2エレクトロポ、ラット肝上皮細胞 。 LYはT51Bラット肝臓上皮細胞（軽度、12ボルト）にエレクトロポレーションした。 5分以下に示します。インキュベーション後、細胞を、蛍光（A、B）または位相コントラスト（C）照明下で撮影した。エレクトロポレーションエリア（矢印、A中の赤線）の端部から延びる、蛍光の勾配によって示されるギャップ結合を介して大規模な転送を、注意してください。同時に、細胞への目に見える損傷がaは、存在しない<html>位相コントラスト（C）の下で見られるのは<a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51710/51710fig2highres.jpg" target="_blank">、この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/51710/51710fig3highres.jpg" /> ギャップ結合伝達の図3。定量 。エレクトロポレーション（非エレクトロポレーションした細胞へのLYのドナー）によってLYを拾ったエレクトロポレーション領域の端にある細胞は、星印が付いた。 LYはギャップ結合を介して中に移し、細胞を、ドットでマークされた。 （A）及び（B）において、57ドット、10つ、 すなわち、GJIC = 5.7である。蛍光の勾配が存在しないことによって示されるように（C）及び（D）の細胞は、ギャップ結合を有していない。矢印は、エレクトロポレーション領域のエッジを指す。バー=100μmである。ES / ftp_upload / 51710 / 51710fig3highres.jpg &quot;ターゲット=&quot; _ブランク」&gt;この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/51710/51710fig4highres.jpg" /> 操作中に掻き取ることにより被害を受けた、図4の（A）T51B細胞 。これらの細胞はさらに、エレクトロポレーションすることなく、LYを拾うことができ、ギャップ結合を介して彼らの隣人にそれを転送してもよい。（B）と強すぎるパルスによって損傷（C）細胞（B）T51Bのラット肝臓上皮細胞は、穏やかな設定でエレクトロポレーションした、20ボルト。エッチングされた線（矢印）の左側の細胞は、エレクトロポレーションによって損傷されています。この場合、細胞は位相コントラストの写真（中央のパネル、白矢印）でしかしよく見て、デタッチしませんでしたが、彼らは、非常に弱く蛍光を発するが、暗い核を持っている細胞を示すすべて（上のパネル）である場合。しかし、目を移すラフギャップ結合エレクトロポレーションされていない右側のセルに、明らかである。下部の写真は、エレクトロポレーションのエッジの観察を容易にするために、UV及び位相差照明を組み合わせることにより作製した。中程度の設定でエレクトロポレーションし（C）T51Bラット肝上皮細胞を、30ボルト。エッチングされた行の左側のセルは深刻なパルスによって損傷されています。細胞が脱落しており、蛍光を発しない方法に注意してください。エッジの周りいくつかの生存者はLYを拾い、ギャップ結合を介して、右に彼らの隣人にそれを渡しているように見えるしている。（D）T51B細胞を10μg/ mlのヨウ化プロピジウムでエレクトロ。核の強い染色に注意してください。上皮細胞の（E）のドーム。 T51B細胞は穏やかな設定で、15ボルトでエレクトロ。左のセルのさえエレクトロポレーションに注意してください。しかし、コンフルエント、T51B細胞は操作および洗浄中に外れることがありドームを形成し、周囲の細胞がtaされる場合がありますLYをKE。大規模な染料移動に注意してください。electroporation.The増殖培地なしでLYを拾うことが乾燥している（F）細胞をT51B細胞や細胞から除去し、30分間、層流フード内に放置した。 LYは、その後1分間細胞に添加し、細胞を、その後、固定し、洗浄し、蛍光（上のパネル）または位相差（下のパネル）照明下で撮影した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51710/51710fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/51710/51710fig5highres.jpg" /> 図5のGrb2-SH2ブロッキングペプチドは無傷の生細胞におけるEGF媒介性Erk活性化を阻害する。 GJICおよびシグナル伝達の研究の組み合わせ。リガンド結合に続いて、そのような上皮成長因子撮影などの増殖因子受容体の数eptor（EGFR）は、特定のチロシン残基のトランスリン酸化されている。これらには、このようにして、膜にし、 ラスを活性化している、GTP / GDP交換因子SOSにバインドされたGrb2、などの信号変換器ののSrc相同性2ドメインのドッキング部位を構成している。これは、P TE P YシーケンスでのRaf / MEK / ERKカスケードおよびErkのリン酸化の活性化をもたらす。したがって、特定のホスホErkの抗体を用いてプロービングするEGF受容体の活性化の指標とすることができる。固定後、細胞を、ブラウンカラー29を与え、ビオチン結合二次抗体、ストレプトアビジン-ホースラディッシュペルオキシダーゼ-およびジアミノベンジジン基質、続いて、抗PERK抗体（Cellシグナリング）でプローブする。この実験では、Grb2は-SH2ドメイン（PVPE ページ Y INQS）をブロックリン酸化ペプチドは、 その場でのエレクトロポレーションiの中で紹介されましたNIH 3T3細胞はNTOは、エレクトロポレーションチャンバーと増殖停止済み培地中で成長している。 5分間のパルスの印加後に、細胞を、5分間EGFで刺激固定、明視野（上）または位相差（下）照明下で撮影した同じフィールドから免疫stainingand細胞によって活性化ホスホ-ERK1 / 2についてプローブ探査した。 （A領域）に劇的EGF信号を低減し、 すなわち 、Erkリン酸化たGrb2-SH2がペプチドをブロックしていることに注意してください。シグナルの阻害は、ギャップ結合を介して1123 Daのペプチドの移動に非エレクトロポレーションエリア（波線金具）に隣接するセルの3-4〜に行、おそらくを拡張します。この知見は、この領域の細胞は、任意の電流を受けるが、その隣人からのペプチドを取得していなかったので、観察された阻害は、むしろエレクトロポレーションの人工物よりも、原因ペプチドになければならないことを説得力のある証拠を構成している。同時に、細胞形態の際に検出可能な効果としては存在しない位相コントラストで示される。エレクトロポレーションエリアの端にポイントを矢印。倍率：240X。詳細とコントロールが参照29を参照してください。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51710/51710fig5highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide

This presentation demonstrates a method whereby electroporation of adherent, cultured cells is used for the study of intercellular, junctional communication, while the cells grow on a slide coated with conductive and transparent indium-tin oxide.

ギャップ結合審査のための機能アッセイ;インジウム - スズ酸化物に対する接着した細胞のエレクトロポレーション

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

9.9K ビュー.  Queen's University. This presentation demonstrates a method whereby electroporation of adherent, cultured cells is used for the study of intercellular, junctional communication, while the cells grow on a slide coated with conductive and transparent indium-tin oxide.

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A Mimic of the Tumor Microenvironment: A Simple Method for Generating Enriched Cell Populations and Investigating Intercellular Communication

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events leading to stromal activation and establishment of the tumor microenvironment (TME). Several in vitro and in vivo models of the TME have been developed; however, in general these models do not readily permit isolation of individual cell populations, under non-perturbing conditions, for further study. To circumvent this difficulty, we have employed an in vitro TME model using a cell growth substrate consisting of a permeable microporous membrane insert that permits simple generation of highly enriched cell populations grown intimately, yet separately, on either side of the insert&#39;s membrane for extended co-culture times. Through use of this model, we are capable of generating greatly enriched cancer-associated fibroblast (CAF) populations from normal diploid human fibroblasts following co-culture (120 hr) with highly metastatic human breast carcinoma cells, without the use of fluorescent tagging and/or cell sorting. Additionally, by modulating the pore-size of the insert, we can control for the mode of intercellular communication (e.g., gap-junction communication, secreted factors) between the two heterotypic cell populations, which permits investigation of the mechanisms underlying the development of the TME, including the role of gap-junction permeability. This model serves as a valuable tool in enhancing our understanding of the initial events leading to cancer-stroma initiation, the early evolution of the TME, and the modulating effect of the stroma on the responses of cancer cells to therapeutic agents.

We adapted a permeable microporous membrane insert to mimic the tumor microenvironment (TME). The model consists of a mixed cell culture, allows simplified generation of highly enriched individual cell populations without using fluorescent tagging or cell sorting, and permits studying intercellular communication within the TME under normal or stress conditions.

濃縮細胞集団を生成し、細胞間コミュニケーションを調べるための簡単​​な方法：腫瘍微小環境のミミック

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events ...

がん研究

Adhesion Frequency Assay for In Situ Kinetics Analysis of Cross-Junctional Molecular Interactions at the Cell-Cell Interface

The micropipette adhesion assay was developed in 1998 to measure two-dimensional (2D) receptor-ligand binding kinetics1. The assay uses a human red blood cell (RBC) as adhesion sensor and presenting cell for one of the interacting molecules. It employs micromanipulation to bring the RBC into contact with another cell that expresses the other interacting molecule with precisely controlled area and time to enable bond formation. The adhesion event is detected as RBC elongation upon pulling the two cells apart. By controlling the density of the ligands immobilized on the RBC surface, the probability of adhesion is kept in mid-range between 0 and 1. The adhesion probability is estimated from the frequency of adhesion events in a sequence of repeated contact cycles between the two cells for a given contact time. Varying the contact time generates a binding curve. Fitting a probabilistic model for receptor-ligand reaction kinetics1 to the binding curve returns the 2D affinity and off-rate.
The assay has been validated using interactions of Fc&gamma; receptors with IgG Fc1-6, selectins with glycoconjugate ligands6-9, integrins with ligands10-13, homotypical cadherin binding14, T cell receptor and coreceptor with peptide-major histocompatibility complexes15-19.
The method has been used to quantify regulations of 2D kinetics by biophysical factors, such as the membrane microtopology5, membrane anchor2, molecular orientation and length6, carrier stiffness9, curvature20, and impingement force20, as well as biochemical factors, such as modulators of the cytoskeleton and membrane microenvironment where the interacting molecules reside and the surface organization of these molecules15,17,19.
The method has also been used to study the concurrent binding of dual receptor-ligand species3,4, and trimolecular interactions19 using a modified model21.
The major advantage of the method is that it allows study of receptors in their native membrane environment. The results could be very different from those obtained using purified receptors17. It also allows study of the receptor-ligand interactions in a sub-second timescale with temporal resolution well beyond the typical biochemical methods.
To illustrate the micropipette adhesion frequency method, we show kinetics measurement of intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) functionalized on RBCs binding to integrin &alpha;L&beta;2 on neutrophils with dimeric E-selectin in the solution to activate &alpha;L&beta;2.

Adhesion Frequency Assay for In Situ Kinetics Analysis of Cross-Junctional Molecular Interactions at the Cell-Cell Interface

An adhesion frequency assay for measuring receptor-ligand interaction kinetics when both molecules are anchored on the surfaces of the interacting cells is described. This mechanically-based assay is exemplified using a micropipette-pressurized human red blood cell as adhesion sensor and integrin &alpha;L&beta;2 and intercellular adhesion molecule-1 as interacting receptors and ligands.

用接着周波数アッセイその場で</em細胞間のインタフェースにおけるクロス接合分子間相互作用の>速度論解析

The micropipette adhesion assay was developed in 1998 to measure two-dimensional (2D) receptor-ligand binding kinetics1. The assay uses a human red blood ...

生物工学

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is the formation of fibroblastic foci, which is associated with the disease severity. Mesenchymal cells consisting of the fibroblastic foci are proposed to be derived from several cell sources, including originally resident intrapulmonary fibroblasts and circulating fibrocytes from bone marrow. Recently, mesenchymal cells that underwent epithelial-mesenchymal transition (EMT) have been also supposed to contribute to the pathogenesis of fibrosis. In addition, EMT can be induced by transforming growth factor &#946;, and EMT can be enhanced by pro-inflammatory cytokines like tumor necrosis factor &#945;. The gel contraction assay is an ideal in vitro model for the evaluation of contractility, which is one of the characteristic functions of fibroblasts and contributes to wound repair and fibrosis. Here, the development of a gel contraction assay is demonstrated for evaluating contractile ability of mesenchymal cells that underwent EMT.

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Here, we describe the development and application of a gel contraction assay for evaluating contractile function in mesenchymal cells that underwent epithelial-mesenchymal transition.

開発<em&gt;インビトロ</em&gt;アッセイは、間葉細胞受けた上皮間葉移行の収縮機能を評価します

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

発生生物学

Electric Cell-substrate Impedance Sensing for the Quantification of Endothelial Proliferation, Barrier Function, and Motility

Electric Cell-substrate Impedance Sensing (ECIS) is an in vitro impedance measuring system to quantify the behavior of cells within adherent cell layers. To this end, cells are grown in special culture chambers on top of opposing, circular gold electrodes. A constant small alternating current is applied between the electrodes and the potential across is measured. The insulating properties of the cell membrane create a resistance towards the electrical current flow resulting in an increased electrical potential between the electrodes. Measuring cellular impedance in this manner allows the automated study of cell attachment, growth, morphology, function, and motility. Although the ECIS measurement itself is straightforward and easy to learn, the underlying theory is complex and selection of the right settings and correct analysis and interpretation of the data is not self-evident. Yet, a clear protocol describing the individual steps from the experimental design to preparation, realization, and analysis of the experiment is not available. In this article the basic measurement principle as well as possible applications, experimental considerations, advantages and limitations of the ECIS system are discussed. A guide is provided for the study of cell attachment, spreading and proliferation; quantification of cell behavior in a confluent layer, with regard to barrier function, cell motility, quality of cell-cell and cell-substrate adhesions; and quantification of wound healing and cellular responses to vasoactive stimuli. Representative results are discussed based on human microvascular (MVEC) and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), but are applicable to all adherent growing cells.

This protocol reviews Electric Cell-substrate Impedance Sensing, a method to record and analyze the impedance spectrum of adherent cells for the quantification of cell attachment, proliferation, motility, and cellular responses to pharmacological and toxic stimuli. Detection of endothelial permeability and assessment of cell-cell and cell-substrate contacts are emphasized.

内皮増殖、バリアー機能、運動性の定量のための電気細胞 - 基質インピーダンスセンシング

Electric Cell-substrate Impedance Sensing (ECIS) is an in vitro impedance measuring system to quantify the behavior of cells within adherent cell layers. ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

The discovery of neural stem and progenitor cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult mammalian brain has led to a body of research aimed at utilizing the multipotent and proliferative properties of these cells for the development of neuroregenerative strategies. A critical step for the success of such strategies is the mobilization of NPCs toward a lesion site following exogenous transplantation or to enhance the response of the endogenous precursors that are found in the periventricular region of the CNS. Accordingly, it is essential to understand the mechanisms that promote, guide, and enhance NPC migration. Our work focuses on the utilization of direct current electric fields (dcEFs) to promote and direct NPC migration - a phenomenon known as galvanotaxis. Endogenous physiological electric fields function as critical cues for cell migration during normal development and wound repair. Pharmacological disruption of the trans-neural tube potential in axolotl embryos causes severe developmental malformations1. In the context of wound healing, the rate of repair of wounded cornea is directly correlated with the magnitude of the epithelial wound potential that arises after injury, as shown by pharmacological enhancement or disruption of this dcEF2-3. We have demonstrated that adult subependymal NPCs undergo rapid and directed cathodal migration in vitro when exposed to an externally applied dcEF. In this protocol we describe our lab's techniques for creating a simple and effective galvanotaxis assay for high-resolution, long-term observation of directed cell body translocation (migration) on a single-cell level. This assay would be suitable for investigating the mechanisms that regulate dcEF transduction into cellular motility through the use of transgenic or knockout mice, short interfering RNA, or specific receptor agonists/antagonists.

In this protocol we demonstrate how to construct custom chambers that permit the application of a direct current electric field to enable time-lapse imaging of adult brain derived neural precursor cell translocation during galvanotaxis.

外部から印加された直流電界における神経前駆細胞の移行動態の解析のための走電性アッセイ

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

神経科学

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying potassium (referred to as GIRK) channels, which are important for regulating the excitability of neurons. There are four different mammalian GIRK channel subunits (GIRK1-GIRK4) - we focus on GIRK2 because it forms a homotetramer. Stimulation of different types of G protein-coupled receptors (GPCRs), such as the muscarinic receptor (M2R), leads to activation of GIRK channels. Alcohol also directly activates GIRK channels. We will show how to mutate one amino acid by specifically changing one or more nucleotides in the cDNA for the GIRK channel. This mutated cDNA sequence will be amplified in bacteria, purified, and the presence of the point mutation will be confirmed by DNA sequencing. The cDNAs for the mutated and wild-type GIRK channels will be transfected into human embryonic kidney HEK293T cells cultured in vitro. Lastly, whole-cell patch-clamp electrophysiology will be used to study the macroscopic potassium currents through the ectopically expressed wild-type or mutated GIRK channels. In this experiment, we will examine the effect of a L257W mutation in GIRK2 channels on M2R-dependent and alcohol-dependent activation.

We will demonstrate how to study the effect of a single point mutation on the function of an ion channel.

異種哺乳動物細胞で発現したイオンチャネルの変異導入と機能解析

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

生物学

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) is a ubiquitous research strategy. HEK-293T cells must be plated onto glass coverslips at low enough density so that they are not in contact with each other in order to allow for electrophysiological recording without confounding effects due to contact with adjacent cells. Transfected channels must also express with high efficiency at the plasma membrane for whole-cell patch clamp recording of detectable currents above noise levels. Heterologous ion channels often require long incubation periods at 28&deg;C after transfection in order to achieve adequate membrane expression, but there are increasing losses of cell-coverslip adhesion and membrane stability at this temperature. To circumvent this problem, we developed an optimized strategy to transfect and plate HEK-293T cells. This method requires that cells be transfected at a relatively high confluency, and incubated at 28&deg;C for varying incubation periods post-transfection to allow for adequate ion channel protein expression. Transfected cells are then plated onto glass coverslips and incubated at 37&deg;C for several hours, which allows for rigid cell attachment to the coverslips and membrane restabilization. Cells can be recorded shortly after plating, or can be transferred to 28&deg;C for further incubation. We find that the initial incubation at 28&deg;C, after transfection but before plating, is key for the efficient expression of heterologous ion channels that normally do not express well at the plasma membrane. Positively transfected, cultured cells are identified by co-expressed eGFP or eGFP expressed from a bicistronic vector (e.g. pIRES2-EGFP) containing the recombinant ion channel cDNA just upstream of an internal ribosome entry site and an eGFP coding sequence. Whole-cell patch clamp recording requires specialized equipment, plus the crafting of polished recording electrodes and L-shaped ground electrodes from borosilicate glass. Drug delivery to study the pharmacology of ion channels can be achieved by directly micropipetting drugs into the recording dish, or by using microperfusion or gravity flow systems that produce uninterrupted streams of drug solution over recorded cells.

Reliable method for highly efficient in vitro expression and subsequent electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T).

発現とHEK - 293T細胞における組換え電位依存性イオンチャネルの電気生理学的記録用に最適化されたトランスフェクション戦略

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Single-cell Microinjection for Cell Communication Analysis

Gap junctions are intercellular channels that allow the communication of neighboring cells. This communication depends on the contribution of a hemichannel by each neighboring cell to form the gap junction. In mammalian cells, the hemichannel is formed by six connexins, monomers with four transmembrane domains and a C and N terminal within the cytoplasm. Gap junctions permit the exchange of ions, second messengers, and small metabolites. In addition, they have important roles in many forms of cellular communication within physiological processes such as synaptic transmission, heart contraction, cell growth and differentiation. We detail how to perform a single-cell microinjection of Lucifer Yellow to visualize cellular communication via gap-junctions in living cells. It is expected that in functional gap junctions, the dye will diffuse from the loaded cell to the connected cells. It is a very useful technique to study gap junctions since you can evaluate the diffusion of the fluorescence in real time. We discuss how to prepare the cells and the micropipette, how to use a micromanipulator and inject a low molecular weight fluorescent dye in an epithelial cell line.

We describe here how to perform a single-cell microinjection of Lucifer Yellow to visualize cellular communication via gap-junctions in living cells, and provide some useful tips. We expect that this paper will help everyone to evaluate the degree of cellular coupling due to functional gap junctions. Everything described here could be, in principle, adapted to other fluorescent dyes with molecular weight below 1,000 Daltons.

セル通信解析のための単一細胞のマイクロインジェクション

Gap junctions are intercellular channels that allow the communication of neighboring cells. This communication depends on the contribution of a ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

ギャップ結合細胞間コミュニケーション：毒物および毒素の有害効果を評価するための機能バイオマーカー、および天然物の健康上の利点

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

An Iodide-Yellow Fluorescent Protein-Gap Junction-Intercellular Communication Assay

Gap junctions (GJs) are cell membrane channels that allow diffusion of molecules smaller than 1 kDa between adjacent cells. As they have physiological and pathological roles, there is need of high-throughput screening (HTS) assays to identify GJ modulators in drug discovery and toxicology assays. A novel iodide-yellow fluorescent protein-gap junction-intercellular communication (I-YFP-GJIC) assay fulfills this need. It is a cell-based assay including acceptor and donor cells that are engineered to stably express a yellow fluorescent protein (YFP) variant, whose fluorescence is sensitively quenched by iodide, or SLC26A4, an iodide transporter, respectively. When iodide is added to a mixed culture of the two cell types, they enter the donor cells via the SLC26A4 transporter and diffuse to the adjacent acceptor cells via GJs where they quench the YFP fluorescence. YFP fluorescence is measured well by well in a kinetic mode. The YFP quenching rate reflects GJ activity. The assay is reliable and rapid enough to be used for HTS. The protocol for the I-YFP-GJIC assay using the LN215 cells, human glioma cells, is described.

Here, we present a protocol for a novel gap junction intercellular communication assay designed for the high-throughput screening of gap junction-modulating chemicals for drug discovery and toxicological assessment.

ヨウ化黄色蛍光タンパク質ギャップ結合細胞間コミュニケーション アッセイ

Gap junctions (GJs) are cell membrane channels that allow diffusion of molecules smaller than 1 kDa between adjacent cells. As they have physiological and ...

ギャップ結合審査のための機能アッセイ;インジウム - スズ酸化物に対する接着した細胞のエレクトロポレーション

要約

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濃縮細胞集団を生成し、細胞間コミュニケーションを調べるための簡単な方法：腫瘍微小環境のミミック

用接着周波数アッセイその場で速度論解析

開発

内皮増殖、バリアー機能、運動性の定量のための電気細胞 - 基質インピーダンスセンシング

外部から印加された直流電界における神経前駆細胞の移行動態の解析のための走電性アッセイ

異種哺乳動物細胞で発現したイオンチャネルの変異導入と機能解析

発現とHEK - 293T細胞における組換え電位依存性イオンチャネルの電気生理学的記録用に最適化されたトランスフェクション戦略

セル通信解析のための単一細胞のマイクロインジェクション

ギャップ結合細胞間コミュニケーション：毒物および毒素の有害効果を評価するための機能バイオマーカー、および天然物の健康上の利点

ヨウ化黄色蛍光タンパク質ギャップ結合細胞間コミュニケーションアッセイ

ギャップ結合審査のための機能アッセイ;インジウム - スズ酸化物に対する接着した細胞のエレクトロポレーション

要約

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濃縮細胞集団を生成し、細胞間コミュニケーションを調べるための簡単​​な方法：腫瘍微小環境のミミック

用接着周波数アッセイその場で速度論解析

開発

内皮増殖、バリアー機能、運動性の定量のための電気細胞 - 基質インピーダンスセンシング

外部から印加された直流電界における神経前駆細胞の移行動態の解析のための走電性アッセイ

異種哺乳動物細胞で発現したイオンチャネルの変異導入と機能解析

発現とHEK - 293T細胞における組換え電位依存性イオンチャネルの電気生理学的記録用に最適化されたトランスフェクション戦略

セル通信解析のための単一細胞のマイクロインジェクション

ギャップ結合細胞間コミュニケーション：毒物および毒素の有害効果を評価するための機能バイオマーカー、および天然物の健康上の利点

ヨウ化黄色蛍光タンパク質ギャップ結合細胞間コミュニケーション アッセイ

濃縮細胞集団を生成し、細胞間コミュニケーションを調べるための簡単な方法：腫瘍微小環境のミミック

ヨウ化黄色蛍光タンパク質ギャップ結合細胞間コミュニケーションアッセイ