藻類培養手法を介して列挙

ソース: ドクターペッパー イアン博士チャールズ Gerba - アリゾナ大学所
示す著者: ブラッドリー ・ シュミッツ

藻類は、1 つの共通の特徴、すなわち光合成色素の保有微生物の非常に異種のグループです。環境、水で成長して、藻類によってプールの所有者に問題が発生します。藻類も海面、湖や貯水池、アオコの毒素を解放するためなどで問題が発生します。最近では、藻が藻類バイオ燃料によるエネルギーの新しい源として評価されています。青緑色藻類、シアノ バクテリアに分類される細菌実際に。シアノ バクテリアは光合成、だけでなく、また大気中の窒素ガスを修正する能力を持っています。他の藻類は真核生物、海草のような複雑な多細胞生物の単細胞生物に至るです。緑の藻、euglenoids、渦鞭毛藻、黄金の褐藻、珪藻、褐藻、紅藻が含まれます。土壌、藻類の人口が頻繁に 10 グラムあたり⁶ 。これらの数字は、光合成に必要な日光が地表面下まで突き通すことができないので、主に細菌、放線菌、糸状菌の対応する番号より低いです。

藻は光合成であるため光合成・炭酸ガス、バイオマスの炭素からエネルギーを得る彼ら育てることができる完全無機栄養素と有機炭素基板なしで構成される成長媒体。有機基板の欠如には、従属栄養細菌の増殖ができなくなります。無機成長媒体を使用して、藻類はもともと土壌に存在または水は最確数 (MPN) 法で測定することができます。藻類自体が絶滅の危機に希釈されるよう、MPN 法は連続して、サンプルを希釈することに依存します。希釈する藻類の存在は、藻類の光合成に起因する緑のスライムは、通常、媒体の成長の肯定的な記号によって決まります。各希釈でレプリケート チューブの使用と指定された希釈する成長の肯定的なチューブの数の統計的評価できます藻オリジナル サンプルで現在の数を計算します。MPN テーブルを開発し、各希釈で使用される複製の数を含む特定の MPN 設計に固有を公開します。

1. フィールドから湿った収集されてのいずれかを持っている土壌の 10 g のサンプルを比較検討または持っていたそれに追加している水は 2 ~ 3 日はしっとり残るようにします。土が湿る飽和していないする必要があることに注意してください。
2. 10 倍希釈系列を準備するには、変更されたブリストルのソリューション (図 1) の 95 mL に土の 10 g を追加します。変更されたブリストルのソリューションを作成する溶解水 1,000 mL に次: 0.25 g ナノ₃、0.025 g CaCl₂、0.075 g^-MgSO₄ ·7 H₂O、0.075 g K₂HPO₄、0.018 g KH₂PO₄、0.025 g 塩化ナトリウム 0.5 mg した FeCl_3.
3. ブリストルのソリューションおよび追加の連続希薄 9 mL に A 懸濁液 1 mL を添加して希釈系列を継続します。
4. 5 複製管 1 ml の各希釈 10^-2 10^-6 (表 1) に変更されたブリストルのソリューションの各含む 9 mL を接種します。
5. 日光にさらされる領域に最大 4 週間のキャップのチューブを孵化させなさい。
6. 藻類の成長 7 日に一度チューブを観察します。藻類の成長とチューブが緑色表示されます。

図 1。10 倍希釈系列を作る方法。

チューブ	希釈
B	10-2
C	10-3
D	10-4
E	10-5
F	10-6

表 1。管および希薄。

図 2は、典型的な結果の例です。

p₁が最も高い陽性管数が (少なくとも土壌に集中して) 最高希釈のレプリケート チューブの数に選ばれました。ここでは、チューブ B からレプリケートはカウントされないため、管 C のこれらのより高い希釈からに。対照的に、成長の肯定的な兆候を示す管 D からチューブの数が少ないよりもチューブ C からだから、 p₁ = 5。

p成長の肯定的な兆候を示す次の 2 つの高い希薄のチューブの数₂とpの₃が選ばれます。したがって、 p₂ = 3 と₃ p= 1。

P₁の値は、表 2の最初の列を見ることによって見つけることが。同じはp₂列で行われます。その後、 p₃ (上部) の値は、 p₁とp₂の値で定義されている 2 つを交差しています。この例では、値は 1 mL あたり 1.1 生物です。

この値は、 p₂を割り当てられて希釈で土壌の濃度で割る。この例では、これはチューブ + です。

したがって、この例では、1.1 倍土の g あたり 10⁴藻類細胞があった。この値は、土壌中の藻は数のかなり典型的です。

図 2。藻類列挙体実験の仮説の結果。影付きの管は、藻類の存在を示します。非灰色のチューブは、藻類のないことを表します。

		P3の指定された値の最確数
p1	p2	0	1	2	3	4	5
0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	-- 0.018 0.037 0.056 0.075 0.094	0.018 0.036 0.055 天文単位 0.074 0.094 0.11	0.036 0.055 天文単位 0.074 0.093 0.11 0.13	0.054 0.073 0.092 0.11 0.13 0.15	0.072 誤差は 0.091 0.11 0.13 0.15 0.17	0.090 0.11 0.13 0.15 0.17 0.19
1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	0.020 0.040 0.061 0.083 0.11 0.13	0.040 0.061 0.082 0.1 0.13 0.16	0.060 0.081 0.10 0.13 0.15 0.17	0.080 0.10 0.12 0.15 0.17 0.19	0.10 0.12 0.15 0.17 0.19 0.22	0.12 0.14 0.17 0.19 0.22 0.24
2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	0.045 0.068 0.093 0.12 0.15 0.17	0.068 0.092 0.12 0.14 0.17 0.20	誤差は 0.091 0.12 0.14 0.17 0.20 0.23	0.12 0.14 0.17 0.20 0.23 0.26	0.14 0.17 0.19 0.22 0.25 0.29	0.16 0.19 0.22 0.25 0.28 0.32
3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	0.078 0.11 0.14 0.17 0.21 0.25	0.11 0.14 0.17 0.21 0.24 0.29	0.13 0.17 0.20 0.24 0.28 0.32	0.16 0.20 0.24 0.28 0.32 0.37	0.20 0.23 0.27 0.31 0.36 0.41	0.23 0.27 0.31 0.35 0.40 0.45
4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	0.13 0.17 0.22 0.34 0.41	0.17 0.21 0.26 0.33 0.40 0.48	0.21 0.26 0.32 0.39 0.47 0.56	0.25 0.31 0.38 0.45 0.54 0.64	0.30 0.36 0.44 0.52 0.62 0.72	0.36 0.42 0.5 0.59 0.69 0.81
5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	0.23 0.33 0.49 0.79 1.3 2.4	0.31 0.46 0.7 1.1 1.7 3.5	0.43 0.64 0.95 1.4 2.2 5.4	0.58 0.84 1.2 1.8 2.8 9.2	0.76 1.1 1.5 2.1 3.5 16	0.95 1.3 1.8 2.5 4.3 --

表 2。この演習では、実験的なデザインで使用するための最も可能性の数字。

MPN 方法論は、プロセス関連の帰属に基づく機能人口の推定できるので便利です。例では、機能のプロセスは光合成藻類は、有機炭素の不在の成長の許可によって行わだったこれは列挙される土壌中総藻類人口の許可。

MPN はまた特定の種類などサルモネラ、マラカイト グリーンにサルモネラの抵抗を利用した水中の微生物病原体の数を推定する使用されます。

それ以上の適用は、植物宿主に土壌の希釈液を接種し、菌によって植民地化ルートを探して、菌根菌の推定です。