Ottimizzazione della visualizzazione del trasporto assonale del carico endogeno mediante microscopia a fluorescenza in Caenorhabditis elegans vivente

L'inizio classico è comunemente usato per le proteine di trasporto assonale per la visualizzazione del trasporto assonale, ma il comportamento del carico endogeno differisce. I livelli di proteine endogene sono bassi, il che rende difficile la visualizzazione. Offriamo idee per ottimizzare le condizioni di acquisizione per una migliore visualizzazione del GPR3 endogeno, che marcare i precursori vascolari sinaptici.

L'abbondanza di proteine citosoliche nel campo del trasporto assonale rende difficile la visualizzazione della loro dinamica, utilizzando la microscopia a fluorescenza convenzionale. Questo protocollo suggerisce di utilizzare la fase di ablazione, insieme ad approcci di etichettatura temporalmente controllati per superare queste sfide. Recentemente siamo stati in grado di visualizzare il trasporto assonale dello spettro endogeno.

Ottimizzando i parametri di acquisizione descritti in questo protocollo, abbiamo abbinato il nostro approccio di etichettatura a controllo temporale. Questo ci ha permesso di individuare i primi componenti del macchinario che mediano il trasporto.