The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.

פרוטוקול (מספר- 00,682) המפורטים להלן תאושר על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש (IACUC) באוניברסיטת נבדה רינו והוא פועל בהתאם להנחיות של אוניברסיטת נבאדה, ועדת האתיקה במחקר בבעלי חיים של רינו. בקצרה, עכברים היו מורדמים עם isoflurane ו חרטומו שמש שמירה על רמות isoflurane רציפות במשך 20 דקות. משחת וטרינר שמשה כדי למנוע התייבשות של עיניים בהרדמה. טו קמצוץ שמש כדי לברר את רמת הרדמת קצב נשימה נמדד לאורך כל ההליך. עכברים הוחזקו בכלובים בודדים במעקב עד הכרתו הייתה חזרה. עכברים שימשו רק פעם אחת עבור האכלה התקתוק היו מורדמים התאוששות לתקתק פוסט. המתת החסד בוצע על ידי המעבדה של אנשי צוות רפואת Animal. CO 2 ו נקע בצוואר הרחם שימשו והרדמת חסד בבעלי חיים. הערה: עבודה על קרציות דורש שימוש EQ מגן אישי שלםuipment. לספירת קרציות בשלה, לובשים חלוקי מעבדה לבן, כפפות ניטריל ארוכה כדי לכסות את הפתח בשרוול מעילו מעבדה כתרים עם גומיות, ונעליים-בוהן סגורה. עבור בזיהום עכברים עם קרציות, השתמשו ברשת שיער, סרבלים חד פעמיים, כפפות ארוך-שרוולים על השרוולים, וכיסויים רגל. השתמש לבן או בהיר סרבל בצבע לזהות קרציות סוררת. בדוק מעת לעת את כפפות ושרוולים קרציות. חדר 1. הכנות לקראת שיכון Animal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציין בחדר נפרד כדי עכברי-עיר שורץ קרציות. שים סרט שטיח מחצלת או דו צדדית דביק מחוץ ובתוך הדלת כדי למנוע בריחה לתקתק בשוגג. </li></ol> ספירת 2. קרציות עבור עכבר שריצה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים דבק דו-צדדי בכל רחבי הקצוות העליונים של 7&quot; X 5&quot; x 14&quot; מיכל פלסטיק וממלאים במים עד כ 2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עוד קופסה קטנה או צלחת פטרי במרכז המיכל וממלאים במים עד 1 ס&quot;מ יצירת &amp;# 34; תעלת &quot;מסביב למכולה זו </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות בקבוקון המכיל זחלים או נימפות בתוך צלחת פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במברשת צבע בסדר להסיר זחלים או נימפות מן הבקבוקון לספור תחת המיקרוסקופ. ספירת 50 זחלים או 25 נימפות לתוך בקבוקי נצנוץ נפרדים. מכסים את צלוחיות מיד עם רשת ניילון או מסך בד האורגנדי קרוב עם להקות גומי. </li></ol> 3. התנגשות עכברים עם טיקים בוגרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ספסל עבודה לבן או בהיר צבע מקל סרט דו צדדי סביב היקף של אזור העבודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם isoflurane. בדוק את רמת ההרדמה על ידי קמצוץ הבוהן. לאחר הרדים, להעביר את העכבר על כרית חימום מכוסה במגבות נייר לצרף חרוט האף עבור המשך אספקת isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים מבוססי ג&#39;לי על מנת למנוע יובש. הערה דפוס נשימה של העכבר כדי להתאים את רמות isoflurane (80 - 230 נשימות לדקה הוא נורמלי., להקטין את רמת isoflurane אם breathing שיעור הוא פחות מ 80 נשימות לדקה, כדי למנוע הרג החיה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח בקבוקון אחד של 50 זחלים או 25 נימפות ומקום קרציות מתחת לפרווה על הראש בין האוזניים עם מברשת צבע (איור 1). שמור עכבר בהרדמה עבור 20 דקות לאחר השמה לתת מספיק זמן עבור קרציות לצרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את העכבר כדי בכלוב עכבר פנוי-סוג קופסא נעליים רגיל, פלסטיק עם מכסים סטטי ומצעים לבנים. ספק צעצועים, מים, ו כרצונך מזון לפי טיפול עכבר רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את כלוב העכבר בתוך כלוב חולדה או הגרביל גדול מרופד נייר דבק דו-צדדים סביב קצוות עליונים. מלאו את הכלוב החיצוני עם 3 ס&quot;מ של מים (איור 2). </li></ol> איסוף 4. קרציות מעכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרציות לא בוגר לנתק בין ימים 3 ו 6 של האכלה. בדוק את הכלובים ואת חפיר מים עבור קרציות תפוחות כל יום אחרי יום 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף קרציות מנותקת הכלוב בין הימים 4 ו 6. השתמש כאבלא מברשת או מלקחיים רכים להרים קרציות בלויים ולאחסן בקבוקי נצנוץ נקי כתרים עם רשת ניילון בד מאובטחת עם להקות גומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים ולבדוק העכבר ביום 7 עבור כל שאר המצורפת המצורפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את מצעים, שוקת מזון, בקבוק מים עבור קרציות בלויים ביום 7. להרדים עכברים בעקבות הליך כמתואר לעיל. החיטוי כלובים חד פעמי, מצעים, בקבוק מים, שוקת מזון, כדי למנוע כל בריחות בלתי מנוסחת. </li></ol> 5. אחסון תיקי הפד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על קרציות בלוחות בלחות של 90%, 20 ° C, ו 12:12 אור: מחזור כהה לחות טמפרטורה חממה מבוקרת עד ההמולה מתרחשת. התהליך עשוי להימשך בין 12 ל -18 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד לחות גבוהה מקדמת הישרדות קשקשים, זה גם עושה את קרציות נוטה פטרייתיות יתר. בדוק את טדסים מוזן מתחת למיקרוסקופ לפחות פעם בשבוע עבור עובש. אם זוהה, לשטוף ניצולים באתנול 70% עבור 5דקות, לשטוף במים, להעביר נייר מסנן להתייבש, ולהעביר בקבוקונים חדשים, נקיים. </li></ol>

<ol>
	<li>Gleim, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+tick+bites+and+pathogen+prevalence+in+ticks+parasitizing+humans+in+Georgia,+USA.">Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA.</a> Parasites &amp;amp; Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).</li><li>Krober, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Kuhnert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+of+Hard+Ticks+In+Vitro:+New+Perspectives+for+Rearing+and+for+the+Identification+of+Systemic+Acaricides.">Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides.</a> ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).</li><li>Voigt, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+of+instars+of+the+ixodid+tick+Amblyomma+variegaturn+on+skin+membranes+and+its+application+to+the+transmission+of+Theileria+mutans+and+Cowdria+ruminantium.">In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium.</a> Parasitol. 107, 257-263 (1993).</li><li>Gregson, J. D., Smith, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ticks.">Ticks.</a> Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).</li><li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. 2, (1993).</li><li>Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Care,+maintenance,+and+experimental+infestation+of+ticks+in+the+laboratory+setting.">Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting.</a> Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).</li><li>Schumaker, T. S., Barros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Ornithodoros+(Alectorobius)+talaje.+(Acari:Argasidae)+in+laboratory.">Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory.</a> J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).</li><li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi+(Acari:Ixodidae).">Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).</li><li>James, A. M., Oliver, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+and+host+preference+of+immature+Ixodes+dammini,I.scapularis,and+I.pacificus.(Acari:Ixodidae).">Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול חשוב יש כמה רמות של אמצעי בטיחות כאשר גידול קרציות כדי למנוע בריחת בשוגג. שימוש סרט דביק וחפיר מים הם קריטיים כדי להבטיח בטיחות. חשוב לשמור על העכבר הרדים על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורה קבועה בגוף. ...

קרציות הן לחייב ectoparasites hematophagous של בעלי חוליות, ומופצים ברחבי העולם. בארצות הברית, לפחות 11 מינים של קרציות הם וקטורים של פתוגנים חשיבות 1 בריאות הציבור. Scapularis קרצית אחראי להעברת מספר פתוגנים כגון סוכני סיבתי של מחלת ליים (burgdorferi Borrelia) ההתקפי חום (miyamotoi ב), anaplasmosis granulocytic האנושי (phagocytophilum Anaplasma), ו babesiosis (SPP babesia.). למרות החשיבות של I. scapularis כוקטור מחלה, איסוף arachnids אלה בשפע מן פרא ללימודים במעבדה הוא לא תמיד אפשרי. לכן, הפקת קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. מחזור החיים של כל קרציות קשה (משפחה Ixodidae), כולל scapularis I., מורכב Activ ביצה ושלושהבשלבי דואר: זחל, נימפה, מבוגר. כל שלב פעיל נזון שורת חוליות. את יחסי הגומלין המורכבים המתרחשים בין קרציות המארחים שלהם על פני כמה ימים של קובץ מצורף והאכלה הם כמעט בלתי אפשריים לשחזר באמצעות מתקני האכלה מלאכותיות, וכן צפויים לספק מספרים מספיקים של הפד קרציות עבור המוני גידול 2, 3, 4. לכן, עכברים וארנבים חיים משמשים לרוב כמארחים לגידול בשלה (זחלים ונימפות), וכן בשלבים בוגרים (מבוגרים) של קרציות, בהתאמה. הדרישה של מארחים מרובים עבור האכלת דם במהלך כל שלב התפתחותי מסבך גידול קרציה, ואת הזמן ועלות 5 אינטנסיבית, 6, 7. רוב פרוטוקולי גידול לתקתק דורשים שמירת עכברים בכלוב רצפת רשת תיל מושעה 7, 8 או CA גליליGE בקנה מידה כזה שהיה החיה לא יכולה לנוע בחופשיות וחתן עצמו 6, 9, 10. כלובי גלילי אלה מועברים לאחר מכן לכלוב קופסת נעליים עם רשת תיל. צבה, קרציות מנותקת אז נאספים המים מתחת. עם זאת, תוצאות בשיטה זו בחשיפת הפד קרציות למים מזוהמים עם שתן וצואה שיכולה להגדיל את צמיחת פטריות וקרציות תמותה 9. בנוסף, הוא מגביר את האפשרות של בריחת קרצייה מן השוקת כמו גם גורם ללחץ על עכברים. כדי לעקוף את הבעיות הללו, אנו כאן להפגין האכלה לתקתק זחל על עכברים בתוך כלובי הפנויה קופסא נעליים מסוג הפלסטיק. שיטה זו מאפשרת התנהגות נורמלית של עכברים, מגדילה צבה התאוששות קרציה, ומקטין תמותה לתקתק עקב זיהום.

<table><tbody><tr><td>Puralube vet ointment</td><td>Amazon</td><td></td><td>Available from any Pet store or online store</td></tr><tr><td>Disposable mouse cage</td><td>&amp;nbsp;Innovive, San Diego, CA&amp;nbsp;</td><td>MV 2</td><td>Set of bottom and lid</td></tr><tr><td>White Alpha dri bedding&amp;nbsp;</td><td>Lab Supply, Fort Worth, TX</td><td>&amp;nbsp;ALPHA-Dri&amp;trade;</td><td></td></tr></tbody></table>

rearing ixodes scapularis, the black-legged tick: feeding immature stages on mice

Scapularis קרצית, הווקטור של מחלת ליים, הוא אחד וקטורי המחלה החשובים ביותר במזרח ובמערב התיכון ארצות הברית. מין זה הוא קרציה שלושה מארח הדורש ארוחת דם שורה החולייתנים עבור כל שלב פיתוח, והנקבות המבוגרות דורשות ארוחת דם לצורך הרבייה. הזחל קרציות לצרף המארח שלהם במשך 3 - 5 ימים על האכלה להשיל המארח כאשר צבה מלא. תלות זו בכמה צבאות שונים וזמן המצורף הממושך עבור גודש המסבך לתקתק גידול בסביבת המעבדה. עם זאת, כדי להבין ביולוגיה לתקתק וקרציות-הפתוגן אינטראקציות, ההפקה של קרציות בריאה, שגדל-מעבדה חיונית. הנה, אנחנו מדגימים פרוטוקול פשוט, חסכוני עבור לתקתק בשלה האכלה על עכברים. שינינו את הפרוטוקולים הקיימים עבור מתח ירד על עכברים וגדילה לתקתק האכלת הצלחה והישרדות באמצעות כלובים פנויים ללא תחתית רשת כדי למנוע מגע של Wi קרציותמים מזוהמים עם שתן עכברים וצואה.

שינינו פרוטוקולים קיימים הגברת טיק 6 , 10 לשיפור יעילות האכלה ואת הלחץ מופחת על המארח העכבר. התוצאות מראות כי הסטנדרטים סטנדרטיים בסגנון נעל בסגנון העכבר מתאימים לגידול טיק. המצעים הלבנים סיפקו ניגוד טוב לאוסף קל של טד...

Watch this Scientific Journal Video about Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice at JoVE.com

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

ההפקה של קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. כאן אנו מדגימים פרוטוקול פשוט עבור האכלה לתקתק בשלה כי היא חסכונית ופחות מלחיץ לעכברים.

Rearing<em&gt; Scapularis קרצית,</em&gt; את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי Immature על עכברים

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

rearing-ixodes-scapularis-black-legged-tick-feeding-immature-stages

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

11.9K Views.  University of Nevada, Reno.  ההפקה של קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. כאן אנו מדגימים פרוטוקול פשוט עבור האכלה לתקתק בשלה כי היא חסכונית ופחות מלחיץ לעכברים. 

Video: Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut

Lyme disease is caused by infection with the spirochete pathogen Borrelia burgdorferi, which is maintained in nature by a tick-rodent infection cycle 1. A tick-borne murine model 2 has been developed to study Lyme disease in the laboratory. While na&iacute;ve ticks can be infected with B. burgdorferi by feeding them on infected mice, the molting process takes several weeks to months to complete. Therefore, development of more rapid and efficient tick infection techniques, such as a microinjection-based procedure, is an important tool for the study of Lyme disease 3,4. The procedure requires only hours to generate infected ticks and allows control over the delivery of equal quantities of spirochetes in a cohort of ticks. This is particularly important as the generation of B. burgdorferi infected ticks by the natural feeding process using mice fails to ensure 100% infection rate and potentially results in variation of pathogen burden amongst fed ticks. Furthermore, microinjection can be used to infect ticks with B. burgdorferi isolates in cases where an attenuated strain is unable to establish infection in mice and thus can not be naturally acquired by ticks 5. This technique can also be used to deliver a variety of other biological materials into ticks, for example, specific antibodies or double stranded RNA 6. In this article, we will demonstrate the microinjection of nymphal ticks with in vitro-grown B. burgdorferi. We will also describe a method for localization of Lyme disease pathogens in the tick gut using confocal immunofluorescence microscopy.

Lyme disease research studies often require generation of ticks infected with the pathogen Borrelia burgdorferi, a process that typically takes several weeks. Here we demonstrate a microinjection-based tick infection procedure that can be accomplished within hours. We also demonstrate an immunofluorescence method for in situ localization of B. burgdorferi within ticks.

שיטות העברה מהירים לוקליזציה של פתוגנים מחלת ליים בתוך גוט טיק

Lyme disease is caused by infection with the spirochete pathogen Borrelia burgdorferi, which is maintained in nature by a tick-rodent infection cycle 1.  ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne relapsing fever (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis and E. equi), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick-borne encephalitis virus), babesiosis (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus), and tularemia (Francisella tularensis) 1-8. To be properly transmitted into the host these infectious agents differentially regulate gene expression, interact with tick proteins, and migrate through the tick 3,9-13. For example, the Lyme disease agent, Borrelia burgdorferi, adapts through differential gene expression to the feast and famine stages of the tick's enzootic cycle 14,15. Furthermore, as an Ixodes tick consumes a bloodmeal Borrelia replicate and migrate from the midgut into the hemocoel, where they travel to the salivary glands and are transmitted into the host with the expelled saliva 9,16-19.
As a tick feeds the host typically responds with a strong hemostatic and innate immune response 11,13,20-22. Despite these host responses, I. scapularis can feed for several days because tick saliva contains proteins that are immunomodulatory, lytic agents, anticoagulants, and fibrinolysins to aid the tick feeding 3,11,20,21,23. The immunomodulatory activities possessed by tick saliva or salivary gland extract (SGE) facilitate transmission, proliferation, and dissemination of numerous tick-borne pathogens 3,20,24-27. To further understand how tick-borne infectious agents cause disease it is essential to dissect actively feeding ticks and collect tick saliva. This video protocol demonstrates dissection techniques for the collection of hemolymph and the removal of salivary glands from actively feeding I. scapularis nymphs after 48 and 72 hours post mouse placement. We also demonstrate saliva collection from an adult female I. scapularis tick.

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

The collection of infected tick hemolymph, salivary glands, and saliva is important to study how tick-borne pathogens cause disease. In this protocol we demonstrate how to collect hemolymph and salivary glands from feeding Ixodes scapularis nymphs. We also demonstrate saliva collection from female I. scapularis adults.

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Rearing and Injection of Manduca sexta Larvae to Assess Bacterial Virulence

Manduca sexta, commonly known as the tobacco hornworm, is considered a significant agricultural pest, feeding on solanaceous plants including tobacco and tomato. The susceptibility of M. sexta larvae to a variety of entomopathogenic bacterial species1-5, as well as the wealth of information available regarding the insect's immune system6-8, and the pending genome sequence9 make it a good model organism for use in studying host-microbe interactions during pathogenesis. In addition, M. sexta larvae are relatively large and easy to manipulate and maintain in the laboratory relative to other susceptible insect species. Their large size also facilitates efficient tissue/hemolymph extraction for analysis of the host response to infection.
The method presented here describes the direct injection of bacteria into the hemocoel (blood cavity) of M. sexta larvae. This approach can be used to analyze and compare the virulence characteristics of various bacterial species, strains, or mutants by simply monitoring the time to insect death after injection. This method was developed to study the pathogenicity of Xenorhabdus and Photorhabdus species, which typically associate with nematode vectors as a means to gain entry into the insect. Entomopathogenic nematodes typically infect larvae via natural digestive or respiratory openings, and release their symbiotic bacterial contents into the insect hemolymph (blood) shortly thereafter10. The injection method described here bypasses the need for a nematode vector, thus uncoupling the effects of bacteria and nematode on the insect. This method allows for accurate enumeration of infectious material (cells or protein) within the inoculum, which is not possible using other existing methods for analyzing entomopathogenesis, including nicking11 and oral toxicity assays12. Also, oral toxicity assays address the virulence of secreted toxins introduced into the digestive system of larvae, whereas the direct injection method addresses the virulence of whole-cell inocula.
The utility of the direct injection method as described here is to analyze bacterial pathogenesis by monitoring insect mortality. However, this method can easily be expanded for use in studying the effects of infection on the M. sexta immune system. The insect responds to infection via both humoral and cellular responses. The humoral response includes recognition of bacterial-associated patterns and subsequent production of various antimicrobial peptides7; the expression of genes encoding these peptides can be monitored subsequent to direct infection via RNA extraction and quantitative PCR13. The cellular response to infection involves nodulation, encapsulation, and phagocytosis of infectious agents by hemocytes6. To analyze these responses, injected insects can be dissected and visualized by microscopy13, 14.

Rearing and Injection of Manduca sexta Larvae to Assess Bacterial Virulence

The method described here utilizes direct injection of entomopathogenic bacteria into the hemocoel of Manduca sexta insect larvae. M. sexta is a commercially available and well-studied insect. Thus, this method represents a simple approach to analyzing host-bacterial interactions from the perspective of one or both partners.

גידול והזרקה של<em&gt; Manduca סקסטה</em&gt; זחלים להערכה ארסית קטריאלי

Manduca sexta, commonly known as the tobacco hornworm, is considered a significant agricultural pest, feeding on solanaceous plants including tobacco and ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on mammalian hosts. In nature, this zoonotic bacterial pathogen may use a variety of reservoir hosts, but the white-footed mouse (Peromyscus leucopus) is the primary reservoir for larval and nymphal ticks in North America. Humans are incidental hosts most frequently infected with B. burgdorferi by the bite of ticks in the nymphal stage. B. burgdorferi adapts to its hosts throughout the enzootic cycle, so the ability to explore the functions of these spirochetes and their effects on mammalian hosts requires the use of tick feeding. In addition, the technique of xenodiagnosis (using the natural vector for detection and recovery of an infectious agent) has been useful in studies of cryptic infection. In order to obtain nymphal ticks that harbor B. burgdorferi, ticks are fed live spirochetes in culture through capillary tubes. Two animal models, mice and nonhuman primates, are most commonly used for Lyme disease studies involving tick feeding. We demonstrate the methods by which these ticks can be fed upon, and recovered from animals for either infection or xenodiagnosis.

Lyme disease is the most commonly-reported vector-borne disease in North America. The causative agent, Borrelia burgdorferi is a spirochete bacterium transmitted by Ixodid ticks. Transmission and detection of infection in animal models is optimized by the use of tick feeding, which we describe here.

האכלה של קרציות בבעלי חיים להילוכים וXenodiagnosis במחקר מחלת ליים

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. Exposure to an allergen in a sensitized individual can result in clinical symptoms that vary from minor erythema to life threatening anaphylaxis. In the laboratory, various animal models have been developed to understand the mechanisms driving allergic responses. Herein, we describe a detailed method for measuring changes in vascular permeability to quantify localized allergic responses. The local anaphylaxis assay was first reported in the 1920s, and has been adapted from the technique published by Kojima et al. in 20071. In this assay, mice sensitized to OVA are challenged in the left ear with vehicle and in the right ear with OVA. This is followed by an intravenous injection of Evans Blue dye. Ten min after injecting Evans Blue, the animal is euthanized and the dye that has extravasated into the ears is extracted overnight in formamide. The absorbance of the extracted dye is then quantified with a spectrophotometer. This method reliably results in a visual and quantifiable manifestation of a local allergic response.

Allergic responses, characterized by the activation of mast cells and basophils, are driven by the cross-linking of IgE and release of proinflammatory mediators. A quantitative assessment of allergic responses can be achieved by using Evans Blue dye to monitor changes in vascular permeability after allergen challenge.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. The immune system is a constant balance in maintaining tolerance to self-molecules and reacting rapidly to pathogens. Dendritic cells (DCs) are powerful professional antigen presenting cells that link the innate immune system to the adaptive immune system and balance the adaptive response between self and non-self. Depending on the maturation signals, immature dendritic cells can be selectively stimulated to differentiate into immunogenic or tolerogenic DCs. Immunogenic dendritic cells provide proliferation signals to antigen-specific T cells for clonal expansion; while tolerogenic dendritic cells regulate tolerance by antigen-specific T-cell deletion or clonal expansion of regulatory T-cells. Due to this unique property, dendritic cells are highly sought after as therapeutic agents for cancer and autoimmune diseases. Dendritic cells can be loaded with specific antigens in vitro and injected into the human body to mount a specific immune response both immunogenic and tolerogenic. This work presents a means to generate in vitro from monocytes, immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), tolerogenic and mature moDCs that differ in surface marker expression, function and metabolic phenotypes.

Immature dendritic cells can be selectively differentiated into tolerogenic or mature dendritic cells to regulate the balance between immunity and tolerance. This work presents a means to generate from immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), in vitro tolerogenic and mature moDCs that differ in metabolic phenotypes.

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

חשיפת בני אדם לקרציות זחלים לחקר מחלות המועברות על ידי קרציות

A Model for Experimental Exposure of Humans to Larval Ixodes scapularis Ticks

Tickborne diseases are a significant public health problem in the United States and worldwide. Ticks are obligate blood-feeding arthropods; an ixodid tick must remain attached to the skin of the host and complete its multi-day feeding process to acquire its blood meal. Exposing animals to ticks is a common practice for studying host responses to tick bites and tickborne diseases. We developed the procedure, conducted the first human research study, and published the findings on exposing human volunteers to uninfected larval Ixodes scapularis ticks. This article describes the methodology used to construct the containment dressing, how to apply and secure the ticks to the host, how to maintain the dressing, and how to remove the ticks from the host. Exposing volunteers to tick bites is an experimental procedure and must be performed under a clinical research protocol approved by the appropriate regulatory authorities. This method allows for translational research to better understand the human response to tick bites and foster the development of diagnostics, prevention, and therapies for tickborne diseases.

מחבר זרקור: מודל חשיפה אנושית מבוקרת לחקר קרציות ומחקרי מחלת ליים

This article presents the methodology for exposing humans to larval Ixodes scapularis for clinical research. The technique is relatively simple, tolerable by the research volunteers, and can be modified according to experimental needs. Such research involving human subjects must be conducted under clinical study protocols approved by the appropriate regulatory authorities.

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

Tickborne diseases are a significant public health problem in the United States and worldwide. Ticks are obligate blood-feeding arthropods; an ixodid tick ...

A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of mouse models in tick research is critical for understanding their biology and tick-host-pathogen interactions. Here we demonstrate a non-laborious technique for the feeding of immature stages of hard ticks on laboratory mice. The benefit of the method is its simplicity, short duration, and the ability to monitor or collect ticks at different time points of an experiment. In addition, the technique allows attachment of two individual capsules on the same mouse, which is beneficial for a variety of experiments where two different groups of ticks are required to feed on the same animal. The non-irritating and flexible capsule is made from easily accessible materials and minimizes the discomfort of the experimental animals. Furthermore, euthanasia is not necessary, mice recover completely after the experiment and are available for re-use.

In this study, a feeding system for nymphal and larval stages of hard tick was developed using a capsule attached to laboratory mouse. The feeding capsule is made from flexible materials and remains firmly attached to the mouse for at least one week and allows comfortable monitoring of tick feeding.

מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

Rearing

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

שיטות העברה מהירים לוקליזציה של פתוגנים מחלת ליים בתוך גוט טיק

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

גידול והזרקה של

האכלה של קרציות בבעלי חיים להילוכים וXenodiagnosis במחקר מחלת ליים

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה