מחקר זה מומן על ידי R01DE023348 (RHK) מ NIDCR / NIH ואת מענק מחקר הפקולטה (RHK) מהמועצה למחקר של הסנאט האקדמי של חטיבת לוס אנג&#39;לס של אוניברסיטת קליפורניה.

עכברים נרכשו מ ג&#39;קסון מעבדה ולעטוף ביבר חינם לפתוגן בחטיבת UCLA לרפואת בעלי חי מעבדה (DLAM). הניסויים בוצעו על פי ההנחיות מוסדיות המאושרות מן ועדת המחקר החי של הקנצלר (ARC # 2016-037). 1. עכבר הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בן שמונה שבועות הנקבה C57 / BL6 עכברים (n = 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים באמצעות קטמין (80-120 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל העכבר) / xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל העכבר) פתרונות ולנהל intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ&quot;ל / ק&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קטמין (80 - 120 מ&quot;ג / ק&quot;ג) / xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) פתרונות ולנהלם intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ&quot;ל / ק&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא עכברים בהרדמה מלאה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן. </li></ol> נוהל 2. מכסה-זולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בעל הפה בפה של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את בעל פה על השולחן כך שהואהמודעה פונה כלפי מעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את המיקרוסקופ (10X) על גבי הפה כך טוחן לסתי הראשונה הוא גלוי לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות ¼ הסיבוב ספחת בתוך ידית במהירות גבוהה ב 200,000 סל&quot;ד, הוצא את חלק האמייל של השן באמצע עד עיסת גלוי דרך הדנטין השקוף. אין לחשוף את העיסה עם הספחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשאתה משתמש בקובץ-K endodontic 15 # (בקוטר של 150 מיקרומטר), לנקב דרך הדנטין ולחשוף את העיסה. הערה: טיפול מיוחד צריכה להילקח כך פסול הדנטין לא לקבל דחף לתוך העיסה. זה יכול להימנע על ידי החלפה של קובץ K רבעונים ואז מושך את K-להגיש החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים עם MTA סטרילי H 2 O על פי הוראות היצרן. לספק ומקום MTA על העיסה החשופה עם קצה Explorer. השתמש הצד האחורי של נקודת נייר (קנס) לארוז את MTA לתוך העיסה נחשפה על ידי הקשה עדינה. מן הצד הקהה של נקודת נייר שטוח ולכן מאפשרעבור העיבוי התקין של MTA לתוך העיסה החשופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Etch השן במשך 15 שניות על ידי הנחת etchant חומצה זרחתית 35% שבו זה פשוט מכסה את השן. קח טיפול מיוחד כדי להגביל את המיקום של etchant, מכיוון שהוא עלול לגרום לגירוי רקמות חניכיים. הערה: etchant מגיע מזרק משמש לחספס את משטחי השן כך דבקים שיניים יכול לזרום לתווך מליטה micromechanical על השן. כי הם צמיגים, זה יכול להיות עצמאי על ידי החלת כמויות קטנות ישירות על גבי השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש יניקה שלילית בלחץ להסיר את etchant. השתמש גלול כותנה, כי הוא שרוי קל באות O H 2 להסיר את שאריות etchant. חזור על שלב זה עד etchant נמחק לחלוטין מן השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מטלית אוויר דחוס, לייבש את השן בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דבקי השיניים באמצעות הישבן של נקודת נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את שכבת דבק דקה באמצעות אוויר דחוס עבור 3 s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cיור דבקי השיניים במשך 20 שניות באמצעות יחידת אור-ריפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מרוכבים flowable בכמויות קטנות על השן והוא היה אטום עם MTA. השתמש בקצה של החוקר לזרום המשולב לתוך חריצי השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרפא את מרוכבים עבור 30 s באמצעות יחידת-ריפוי אור לפלמר אותו. ודא מרוכבים הוא נרפא לחלוטין וקשה באמצעות הסייר. </li></ol> 3. Post-op Care <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל carprofen (5 מ&quot;ג / קילו) תת עורי (SC) מייד לאחר הליך מכסה-העיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את העכברים על כרית חימום בהספק נמוך כדי לשמור על החיות חמות לפני שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את עכברי הביבר לדיור. </li></ol> רכש רקמות 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 5 - 6 שבועות, להרדים את העכברים על ידי נקע בצוואר הרחם תחת תנאי הרדמה מלאה עם isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את maxilla והוצא אותו מבסיס הגולגולת והכניס אותו לתוך צינור 50 מ&quot;ל. תקן את entirmaxilla דואר המכיל את שני שן העיסה-כתרי שן הסגורה והפתוחה הנגדית paraformaldehyde 4% ב- ​​PBS, pH 7.4, ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה, ולאחר מכן לאחסן אותו בתמיסת אתנול 70%. הערה: Paraformaldehyde הוא רעיל ומסרטן. Paraformaldehyde השימוש הנכון צריך להיות במעקב כפי שמתואר נהלי עבודה סטנדרטיים (SOP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את maxillae העכבר באמצעות סריקת μCT. להבטחת maxillae במהלך הסריקה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו למקם אותם בצינור תרבית תאים של 15 מ&quot;ל. </li></ol> 5. סריקה μCT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הדגימות לסריקת μCT. בקצרה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו לאבטח אותם בתוך שפופרת חרוטי תרבית תאים הגנרית של 15 מ&quot;ל. הר הצינור לבמת סריקת μCT, כפי שמתואר בהוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את מקור רנטגן כדי זרם של 145 מיקרו-אמפר, מתח של 55 KVP ופעם חשיפת 200 ms. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע רכישת התמונה עם סורק μCT ברזולוציה 20 מיקרומטר עם מסנן 0.5 מ&quot;מ אל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחזר את התמונה ולדמיין אותו 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסריקה μCT ההתקנה, הפעל decalcification עם 5% EDTA ו -4 סוכרוז% ב PBS (pH 7.4) במשך 2 שבועות. </li></ol> עיבוד רקמות 6. מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע רקמות decalcified פרפין. לפני ההטבעה, חתוך את maxilla על ידי ביצוע חתך sagittal מייד קדמית הטוחן הראשונה. בעוד הטבעה, מקם המשטח הזה כלפי מטה, כך החתך לאורך של הטוחנת הראשונה הוא משטח החיתוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microtome, להכין 5 שקופיות מיקרומטר בעובי. האזורים המגבילים עיסת בדרך כלל בקנה אחד עם distopalatal (DP) השורש, אשר ניתן להשתמש בהם כנקודת ציון. לקבוע את האזור המדויק של עניין על ידי בחינת היסטולוגיה במיקרוסקופ אור השוואת תמונות μCT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור H &amp; E מכתימה, deparaffinize ו רעננותם שקופיות עם קסילן (2x) ואתנול בדילול סדרתי (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, ו -70% EtOH 1x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את השקופיות במים זורמים מהברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכתם עם פתרון Hematoxylin עבור 2.5 דקות ולשטוף עם מי ברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים את השקופיות אתנול 95% דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם עם פתרון Eosin דקות 1 ולשטוף במים ברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים עם אתנול בדילול סדרתי (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x, ו -100% EtOH 3x) קסילן (3x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר שקופיות עם פתרון הרכבה. </li></ol>

<ol>
	<li>Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+caries+and+tooth+loss+in+adults+in+the+United+States,+2011-2012.">Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012.</a> NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).</li><li>Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+increase+in+dental+caries.+A+pending+public+health+crisis.">The global increase in dental caries. A pending public health crisis.</a> Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).</li><li>Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+responses+following+direct+pulp+capping+of+healthy+dog+teeth+with+dentine+adhesive+systems.">Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems.</a> J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).</li><li>Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+response+to+a+resin-modified+glass-ionomer+material+on+nonexposed+and+exposed+monkey+pulps.">Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps.</a> Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).</li><li>Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentinogenic+responses+after+direct+pulp+capping+of+miniature+swine+teeth+with+Biodentine.">Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine.</a> J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).</li><li>Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+histologic+investigation+of+direct+pulp+capping+in+rodents+with+dentin+adhesives+and+calcium+hydroxide.">A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide.</a> Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).</li><li>Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+amelogenin+gene+splice+products+A+4+and+A-4+implanted+in+the+exposed+rat+molar+pulp.">Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp.</a> Head Face Med. 3, 40 (2007).</li><li>Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+the+rat+molar+pulp+of+two+proprietary+calcium+hydroxide+preparations.">The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations.</a> Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).</li><li>Sela, J., Ulmansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+of+normal+and+inflamed+dental+pulp+to+Calxyl+and+zinc+oxide+and+eugenol+in+rats.">Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).</li><li>Maurice, C. G., Schour, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+cavity+preparations+in+the+molar+of+the+rat.">Experimental cavity preparations in the molar of the rat.</a> J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).</li><li>Sohn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+ORAI1+in+the+Odontogenic+Differentiation+of+Human+Dental+Pulp+Stem+Cells.">The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells.</a> J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).</li><li>Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Experiments+with+Dental+Pulp+Stem+Cells+for+Pulp-Dentin+Complex+Regeneration.">In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration.</a> Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odontogenic+capability:+bone+marrow+stromal+stem+cells+versus+dental+pulp+stem+cells.">Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells.</a> Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).</li><li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+dental+pulp+stem+cells+and+platelet-rich+plasma+for+pulp+regeneration.">Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration.</a> J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).</li><li>Iohara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentin+regeneration+by+dental+pulp+stem+cell+therapy+with+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein+2.">Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2.</a> J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).</li><li>Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteopontin+Is+Essential+for+Type+I+Collagen+Secretion+in+Reparative+Dentin.">Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin.</a> J Dent Res. , (2016).</li><li>Hunter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+Acts+as+a+Pro-Survival+Signal+to+Enhance+Dentin+Regeneration.">Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li><li>Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentin:+structure,+composition+and+mineralization.">Dentin: structure, composition and mineralization.</a> Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).</li><li>Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatibility+of+a+resin-modified+glass-ionomer+cement+applied+as+pulp+capping+in+human+teeth).">Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth).</a> Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).</li><li>Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+pulp+capping+with+mineral+trioxide+aggregate:+an+observational+study.">Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study.</a> J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).</li><li>Miller, R. A., Nadon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+animal+use+for+gerontological+research.">Principles of animal use for gerontological research.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).</li><li>Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclasts+are+absent+in+pulpal+and+periapical+inflammatory+lesions.">Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions.</a> J Dent Res. 95, 1503 (2016).</li><li>Williams, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+bone+resorption+and+woven+bone+formation+are+associated+with+development+of+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+by+bisphosphonate+and+anti-receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+antibody+in+mice).">Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice).</a> Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).</li><li>McPherson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physical+map+of+the+human+genome.">A physical map of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).</li><li>Gregory, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physical+map+of+the+mouse+genome.">A physical map of the mouse genome.</a> Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).</li><li>Hilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keys+to+clinical+success+with+pulp+capping:+a+review+of+the+literature.">Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature.</a> Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).</li><li>Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+pathogenesis+of+collagen-induced+arthritis+in+mice--a+model+for+rheumatoid+arthritis.">The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis.</a> Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).</li><li>Kalu, D. N., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomized+murine+model+of+postmenopausal+calcium+malabsorption.">Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption.</a> J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).</li><li>Yokochi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+experimental+murine+model+for+lipopolysaccharide-mediated+lethal+shock+with+lung+injury.">A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury.</a> Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).</li><li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice.">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

נכון לעכשיו, ישנם מספר דגמים ניסיוניים שונים זמינים כדי לאמת את השפעות in vivo של חומרים דנטליים, פיגומים, או גורמי גדילה על בידול odontogenic של תאי גזע עיסת שיניים (DPSCs) 13. מודלים אלה כוללים בהשתלה עצמית אקטופי של DPSCs לתוך איבר, כגון הקפסולה כליות, או השתלה תת עורית של DPSCs לעכברים בעלי דיכוי חיסוני עם פיגומים 14,15. עם זאת, שיטות אלו מוגבלים כי אפקט odontogenic שלהם על DPSCs לא מבוצע בסביבה עיסת orthotopic. מצד השני, השתלת orthotopic לתוך נהלי עיסה או עיסה-מכסה על שן משמשת בעלי חיים גדולים יותר 16,17. למרות המודלים אלה הם בעלי ערך בהערכת פוטנציאל odontogenic בסביבת orthotopic, השימוש במודלים אלה הוא תצפית בעיקר בטבע, מתן תובנה מכניסטית מוגבלת על ריפוי פצע עיסה והיווצרות הדנטין מתקן. </p&gt; במאמר זה, אנו מציגים שיטה מפורטת לביצוע עיסה-מכסה בעכברים. הליך צעד-אחר-שלב זה כולל הרדמת העכברים, הכנת Class-I-כמו החלל, צבת חומרי מכסה-העיסה, קצירת maxillae, ניתוח עם μCT לסרוק, והערכת דגימות רקמה ליצירת דנטין מתקן. העיסה-מכסת עכבר המודל שלנו יהיה משמעותי חוקר את המנגנונים מולקולריים היסוד של ריפוי פצע pulpal in vivo בהקשר של הדנטין מתקן, בכך שהיא מאפשרת את השימוש של עכברים מהונדסים או נוק אאוט, אשר זמינים באופן נרחב בקהילת החקר. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו מודלים העכבר כמה שבו היווצרות הדנטין נצפתה 18,19. סאיטו et al. נוצר הכנת Class-I-כמו ללא חשיפת עיסה, אשר ממגרת מתקן ריאקציוני, לא, היווצרות הדנטין. שניהם הדנטין ריאקציונרים הדנטין המתקן מסווגים דנטין שלישוני, המהווה בעקבות גירוי חיצוני על השן. עם זאת, בניגוד הדנטין ריאקציוני, אשר נוצר על ידי odontoblasts הקיים, הדנטין מתקן הוא נוצר על ידי תאי odontoblast הדמוי, כגון DPSCs, כאשר העיסה הופכת חשופה שכבות odontoblastic נפרצות 20. לכן, הוא אינו מייצג הליך עיסת המגבילים בפועל במרפאה. במחקר אחר, ionomer הזכוכית שמש מכסה את חשיפת עיסת 19. עם זאת, מחקר קליני הראה כי ionomer הזכוכית מושרה דלקת כרונית, אך לא מתקנת הדנטין 21. בהקשר זה, במודל של עכברי עיסת מגבילים שלנו טוב יותר מייצג את הליך עיסת מגבילים בפועל בחולים. ראוי לציין כי כאשר אנו קוצרים עכברים לאחר יותר מ -6 שבועות, היווצרות הדנטין מתקן התרחשה ברחבי החדר עיסת ואת טיפולי שורש (איור 4). תצפית כזו היא די צפויה, כפי שציפינו היווצרות הדנטין מתקן על יוניction בין חומר העיסה-מכסה ואת העיסה. עם זאת, מינרליזציה חזק של העיסה הוא ציין גם במסגרות קליניות, במיוחד בחולים צעירים יחסית 22. מכיוון שבועות בן 8 העכברים השתמשו במחקר זה נחשבים &quot;מבוגרים צעירים&quot; 23, קיים סיכוי לפיו עכברים אלה עדיין שומרים על פוטנציאל odontogenic משמעותי. לכן, זה יהיה כדאי לבחון את השפעות ההזדקנות של היווצרות הדנטין המתקן בעכברים. הבדיקות היסטולוגית שלנו גילו כי, למרות הדנטין מתקן הוקם בבירור שן העיסה הכתירה, היו מאפיינים של שתי היווצרות הדנטין ועצמות, כפי שמעיד בנוכחות tubules dentinal (חץ אדום) osteocytes (ראשי חץ שחור) המתקן הדנטין (איור 5). תצפיות כאלה מראים כי היווצרות הדנטין המתקן עשוי להיגרם באופן מקומי על ידי המתגוררים תאי גזע עיסת שיניים odontoblast דמוי, כמו גם infiltratinבתאי גזע mesenchymal גרם מן העצם שמסביב. בהשוואה לתאים מייצר דנטין, לא מצאנו תאים-resorbing הדנטין בתוך העיסה, כפי שנקבע על ידי phosphatase חומצת tartrate עמיד (TRAP) מכתים (מידע לא מוצג). ואכן, דלקת pulpal או periapical גורמת להיווצרות osteoclast על משטחי העצם סביב השן, אבל לא על המשטחים הדנטין בשל מנגנונים כמו-עדיין-ידוע 24. מן הראוי לציין כי היה תיחום ברור בין דנטין הקיימים דנטין המתקן החדש שנוצר (איור 4). מחקר קודם דגי תופעה דומה; כאשר שן מופק בנוכחות בביספוספונטים או נוגדן אנטי RANKL, הן של אשר מעכבים את הפונקציות של osteoclasts, היו demarcations הברורה בין עצם שבשבת קיים עצם ארוג שהוקם זה עתה 25. רעיון זה אף מאשש בהעדר תאים-resorbing הדנטין העיסה. באופן קולקטיבי, במודל של העכברים הוקם שלנו היה provide הזדמנויות ייחודיות לבחון את מנגנוני ריפוי עיסת פצע והיווצרות הדנטין מתקן in vivo. ישן מגבלה למודל עכבר מכסה-העיסה. באיפור גנטי בין בני אדם ועכברים הם שונים באופן ברור. את הגנום המלא כבר רצף בבני אדם ועכברים, ויש על הדמיון 85% באזורי המקודדים חלבונים בין עכברים ובני אדם 26,27. בקנה אחד עם הרעיון הזה, הוצע כי ממצאים הקשורים עיסת מכסה בחיות לא בהכרח משקפים את אלו בבני האדם 28. עם זאת, במודלים של בעלי חיים נמצאים בשימוש נרחב בקהילת חקר לשחזר מחלות אדם in vivo, כגון דלקת הנגרמת קולגן עבור דלקת מפרקים שגרונית 29, איבוד העצם הנגרמת ovariactomy לאוסטאופורוזיס 30, lipopolysaccharide (LPS) הממשל הלם מערכתי 31, ו ליגטורה מיקום עבור חניכיים 32. ככזה, mou מגביל העיסהse המודל יהיה חיוני כדי לבחון את המנגנונים המולקולריים של ריפוי עיסת פצע והיווצרות הדנטין מתקן in vivo. עם זאת, בדיוק כמו במודלים של בעלי חיים אחרים, פרשנות ואימות הממצאים ממודל עכבר מכסה-העיסה יש להעריך בזהירות. לסיכום, המחקר הנוכחי מדגים עיסה מוצלחת מכסה בעכברים. בניגוד למודלים אחרים ידועים, במודל של עכברי עיסה-מכסת זו יספק כלי מחקר רב ערך בתחום התחדשות עיסת היווצרות הדנטין מתקן משום שהיא מספקת: 1) הזדמנות לנצל זני עכבר מהונדסים גנטי הנפוצה על מנת להבהיר את המנגנונים בבית ברמה המולקולרית ו -2) דרך יעילה מבחינה כלכלית כדי להשיג תוצאות מובהקות סטטיסטית על ידי הגדלת גודל מדגם. מחקרים נוספים ממתינים, כוללים כימות אובייקטיבי של היווצרות הדנטין מתקן in vivo, תופעות תלויות גיל היווצרות הדנטין מתקן, evaluation של חומרים-מכסת עיסת זמין קליני, ואימות של גורמים מולקולריים נדרשים עבור לריפוי תקין pulpal פצע התחדשות הדנטין מתקן.

Dental caries are one of the most prevalent oral diseases and the leading cause of surgical interventions to dentitions in almost all individuals1,2. The prognosis of surgical interventions and restorations of a tooth largely depends upon proper pulpal response and successful wound healing. Indeed, dental caries that penetrate deeply through the enamel and dentin frequently lead to the exposure of the underlying pulp tissue that is often "capped" with dental materials, such as calcium hydroxide (Ca(OH)2) or hydraulic calcium-silicate cements (HCSCs), including mineral trioxide aggregates (MTA). The ultimate goal of such a pulp-capping procedure is to expedite pulpal wound healing by regenerating reparative dentin, a physical barrier that functions as a "biological seal" to protect the underlying pulp tissue and to increase the life expectancy of the tooth and the overall oral health. However, the underlying mechanism of pulpal wound healing and reparative dentin formation is not fully understood.
To better understand the mechanisms of pulpal wound healing and reparative dentin formation in vivo, several animals were previously used, including monkeys, dogs, and pigs3-5. Among them, rats are frequently used because they are relatively smaller in sizes compared to the other animals, but their teeth are large enough to perform direct pulp capping without any technical difficulties6-10. These animal models are ideal alternatives to human studies for examining pulpal responses and reparative dentin formation. However, their utilization is limited to observational studies at the cellular level, and they scarcely provide mechanistic insights during reparative dentin formation at the molecular level.
Recent technical advances in genetic engineering provided invaluable and indispensable research tools-mice that harbor a gene that is either overexpressed or deleted-that are instrumental to studying molecular mechanisms of human diseases in vivo. The numbers of different strains of transgenic or knockout mice that are strategically inducible in a cell-specific manner are continually growing in the scientific community. Therefore, examining pulpal wound healing and reparative dentin regeneration in these mice would greatly help to expedite our understanding of these processes at the molecular level. However, the use of mice is significantly dampened, as performing a pulp-capping procedure on a mouse tooth is technically challenging due to its miniature size. Here, we present our reproducible method of performing direct pulp capping in mice for the evaluation of pulpal wound healing and reparative dentin formation in vivo.

<table><tbody><tr><td>BM-LED stereo microscope</td><td>MEIJI Techno</td><td></td><td>Microscope&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Optima MCX-LED&amp;nbsp;</td><td>Bien Air Dental</td><td>1700588-001</td><td>Electic motor engine</td></tr><tr><td>isoflurane</td><td>Henry schein animal health</td><td>NDC 11695-0500-2</td><td></td></tr><tr><td>1/4 round bur</td><td>Brasseler</td><td>001092T0</td><td></td></tr><tr><td>Endodontic K-file</td><td>Roydent</td><td>98947</td><td></td></tr><tr><td>ProRoot MTA</td><td>Dentsply</td><td>PROROOT5W</td><td>MTA</td></tr><tr><td>Paper point</td><td>Henry schein</td><td>100-3941</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Etch</td><td>Ultradent product Inc.</td><td></td><td>Phosphoric acid etchant</td></tr><tr><td>OptiBond SoloPlus</td><td>Kerr</td><td>29669</td><td>Adhesives</td></tr><tr><td>Coltolux LED</td><td>Coltene/whaledent Inc.</td><td>C7970100115</td><td>Curing light unit</td></tr><tr><td>Characterization tint</td><td>Bisco</td><td>T-14012</td><td>Flowable composite</td></tr><tr><td>Skyscan</td><td>Breuker</td><td>1275</td><td>uCT scanner</td></tr><tr><td>Microm</td><td>Thermo</td><td>HM355S</td><td>Microtome</td></tr><tr><td>Hematoxyline-1</td><td>Thermo Scientific</td><td>7221</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td><td>Mounting solution</td></tr></tbody></table>

development of a direct pulp-capping model for the evaluation of pulpal wound healing and reparative dentin formation in mice

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is often capped with biocompatible materials in order to expedite pulpal wound healing. The ultimate goal is to regenerate reparative dentin, a physical barrier that functions as a "biological seal" and protects the underlying pulp tissue. Although this direct pulp-capping procedure has long been used in dentistry, the underlying molecular mechanism of pulpal wound healing and reparative dentin formation is still poorly understood. To induce reparative dentin, pulp capping has been performed experimentally in large animals, but less so in mice, presumably due to their small sizes and the ensuing technical difficulties. Here, we present a detailed, step-by-step method of performing a pulp-capping procedure in mice, including the preparation of a Class-I-like cavity, the placement of pulp-capping materials, and the restoration procedure using dental composite. Our pulp-capping mouse model will be instrumental in investigating the fundamental molecular mechanisms of pulpal wound healing in the context of reparative dentin in vivo by enabling the use of transgenic or knockout mice that are widely available in the research community.

הנה, הראינו את שלב-אחר-צעד נהלים לבצע עיסת מכסת על השיניים עכברים. אחד ההיבטים המרכזיים של עיסת מכסה בעכברים הוא לקבל את המנגנון המתאים. בהקשר זה, שיש מיקרוסקופ עם הגדלה כוח 10X חיוני (איור 1 א). כדי ליצור הכנת Class-I-כמו השן, השתמשנו בר ¼-סיבוב במאבק ידית במהירות גבוהה חשמלית ב 200,000 סל&quot;ד (איור 1B). לחלופין, כל מנועי החיפוש האחרים, כולל אלה שמשתמשים אוויר דחוס, שניתן להשתמש בהם כדי להכין שן. באיור 2 א-2E, צעדים נציג לביצוע מכסת עיסת מוצגים. הכנת Class-I-כמו שהוצגה (תרשים 2B). בגלל תרסיס מים עשוי להטביע העכברים במהלך ההליך, השימוש בו אינו מומלץ. מסיבה זו, חשוב להכין את השן עם עדינה intermittent מלטפת כדי למנוע התחממות יתר. שימוש אוויר דחוס מומלץ גם לספק אפקטי קירור. תוך חשיפת העיסה עם קובץ שורש, לנקוט זהירות לא לדחוף את פסולת הדנטין לתוך העיסה, מכיוון שהדבר עלול להפריע פרשנות נתונים במבנה הדנטין מתקן (איור 2 ג). זה יכול להימנע על ידי שימוש באוויר הדחוס. באופן דומה, MTA צריך להיות ממוקם על העיסה החשופה מבלי לדחוף רחוק מדי לתוך העיסה. מיקום MTA יכול להיות מושגת על ידי שימוש הישבן של נקודת נייר בתנועות קשות עדינות (איור 2 ד). בעקבות מיקום MTA, השן יש לנקות באמצעות H 2 O-ספוג כדורי צמר גפן כדי להסיר כל MTA שנותרו החריצים, שעלול להפריע את הכריכה של מרוכבים על השן. בשיטות המקובלות של שיקום מרוכבים משמשים, כולל תחריט משטחי השן, תחול מליטה עם דבקים, והצבת וריפוי מרוכבים flowable (2E איור). שישה שבועות לאחר מכסת עיסה, העכברים נבצרו, ואת המבט מלמעלה צולם לאשר כי מרוכבים היו עדיין שלמים (איור 3 א). μCT סריקה הראתה מיתון משמעותי של שטח pulpal בקבוצה הכתירה העיסה (איור 3 ב), דבר המצביע על כך הדנטין מתקן הוקם בשנת העיסה. דגימות רקמות decalcified היו נתוני צביעת H &amp; E לבחון נוסף היסטולוגית ההיווצרות של הדנטין מתקן in vivo. בקבוצת הביקורת, שכבות odontoblastic (OB) ניכרו בולט מסביב לקצוות של הדנטין (איור 4 א - 4C). לעומת זאת, בקבוצת מכסה-העיסה הייתה כמויות משמעותיות של הדנטין מתקן (RD) נוצר במרחב pulpal (האיור 4D - 4F). מעניין לציין, כי בחינה מדוקדקת יותר העלתה כי הדנטין המתקן (RD) הציג מאפיין טיפוסי של הדנטין (למשל, s<html> קווי triated המייצג tubules dentinal, חץ אדום), כמו גם זה של העצם (למשל, osteocytes המייצג אוסטאובלסטים לכוד, ראשי חץ שחור). כשאנחנו מוכתמים עבור הדנטין מטריקס חלבון 1 (DMP1), סמן לבידול odontogenic 12, מצאנו עלייה משמעותית ביטוי DMP1 התקוע במוך השן הכתירה העיסה בהשוואה לזו של השן לא האטומה (איור 5 א ו 5 ב) , המציין כי הדנטין מתקן הוקם בתוך העיסה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig1.jpg" /> איור 1: התקנת הציוד עבור הנוהל הזול המגביל. (א) מיקרוסקופ (10X) המאפשר הדמיה השן העכבר. (ב) הידית במהירות גבוהה ומנוע המנוע החשמלי להכנת תכשיר לי מח&#39; לחשוף את העיסה.= &quot;_ Blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig2.jpg" /> איור 2: שלבי נציג בנוהל התקרה. (א) שן Unprepared על הטוחנת הראשונה לסתי בעכבר. (ב) הסרת אמייל ראשונית שהתקבלה בעזרת רבע סיבוב הספחת. (ג) חשיפה זולה באמצעות קובץ השורש. (ד) MTA מיקום העיסה החשופה. (ה) מיקום שיקום Composite על השן. הבר מייצג 500 מיקרומטר. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig3.jpg" /> איור 3: הצגה קלינית μCT Scanninגרם של השן זולה-סגורה ופתוחה בעכברים. (א) סגרים לאור העכבר maxillae על השן הכתירה עיסה (משמאל) שן לא אטום (מימין). (ב) תמונות μCT חתך של maxillae. הבר מייצג 500 מיקרומטר. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig4.jpg" /> איור 4: עדויות היסטולוגית של גיבוש מתקנת הדנטין in vivo. (AC) H &amp; E מכתים של הטוחנת הראשונה לסתי לא אטומה ב לעכבר 100X, 200X, ו 400X. (DE) H &amp; E מכתים של הטוחנת הראשונה לסתי הכתירה העיסה ב לעכבר 100X, 200X, ו 400X. הבר מייצג 100 מיקרומטר (OB = odontoblast שכבות; RD = הדנטין המתקן; ראשי חץ שחור =osteocytes; חץ אדום = tubules dentinal). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig5.jpg" /> איור 5: immunohistochemical מכתים של DMP1. (א) מכתים DMP1 של הטוחנת הראשונה לסתי לא אטומה ב לעכבר 400X. (ב) מכתים DMP1 של הטוחנת הראשונה לסתי הכתירה העיסה ב לעכבר 400X. הבר מייצג 100 מיקרומטר. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice at JoVE.com

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

אנו מתארים שיטת צעד אחרת צעד ביצוע עיסה ישירה מכסה על שיני עכברים להערכת ריפוי פצע pulpal והיווצרות הדנטין מתקן in vivo.

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

development-direct-pulp-capping-model-for-evaluation-pulpal-wound

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K Views.  The UCLA School of Dentistry.  אנו מתארים שיטת צעד אחרת צעד ביצוע עיסה ישירה מכסה על שיני עכברים להערכת ריפוי פצע pulpal והיווצרות הדנטין מתקן in vivo. 

Video: Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

A Co-Culture Method to Study Neurite Outgrowth in Response to Dental Pulp Paracrine Signals

Tooth innervation allows teeth to sense pressure, temperature and inflammation, all of which are crucial to the use and maintenance of the tooth organ. Without sensory innervation, daily oral activities would cause irreparable damage. Despite its importance, the roles of innervation in tooth development and maintenance have been largely overlooked. Several studies have demonstrated that DP cells secrete extracellular matrix proteins and paracrine signals to attract and guide TG axons into and throughout the tooth. However, few studies have provided detailed insight into the crosstalk between the DP mesenchyme and neuronal afferents. To address this gap in knowledge, researchers have begun to utilize co-cultures and a variety of techniques to investigate these interactions. Here, we demonstrate the multiple steps involved in co-culturing primary DP cells with TG neurons dispersed on an overlying transwell filter with large diameter pores to allow axonal growth through the pores. Primary DP cells with the gene of interest flanked by loxP sites were utilized to facilitate gene deletion using an Adenovirus-Cre-GFP recombinase system. Using TG neurons from the Thy1-YFP mouse allowed for precise afferent imaging, with expression well above background levels by confocal microscopy. The DP responses can be investigated via protein or RNA collection and analysis, or alternatively, through immunofluorescent staining of DP cells plated on removable glass coverslips. Media can be analyzed using techniques such as proteomic analyses, although this will require albumin depletion due to the presence of fetal bovine serum in the media. This protocol provides a simple method that can be manipulated to study the morphological, genetic, and cytoskeletal responses of TG neurons and DP cells in response to the controlled environment of a co-culture assay.

We describe the isolation, dispersion and plating of dental pulp (DP) primary cells with trigeminal (TG) neurons cultured atop overlying transwell filters. Cellular responses of DP cells can be analyzed with immunofluorescence or RNA/protein analysis. Immunofluorescence of neuronal markers with confocal microscopy permits the analysis of neurite outgrowth responses.

שיטת שיתוף התרבות כדי ללמוד Neurite Outgrowth בתגובה שיניים זולה הקרנף סימנים

Tooth innervation allows teeth to sense pressure, temperature and inflammation, all of which are crucial to the use and maintenance of the tooth organ. ...

Developmental Biology

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, proliferation and remodeling. Murine wounds have a histologically well-defined and easily recognizable wound bed over which these different phases of the healing process are measurable. Within the field, it is common to use an arbitrarily defined &#8220;middle&#8221; of the wound for histological analyses. However, wounds are a three-dimensional entity and often not histologically symmetrical, supporting the need for a well-defined and robust method of quantification to detect morphometric defects with a small effect size. In this protocol, we describe the procedure for creating bilateral, full-thickness excisional wounds in mice as well as a detailed instruction on how to measure morphometric parameters using an image processing program on select serial sections. The two-dimension measurements of wound length, epidermal length, epidermal area, and wound area are used in combination with the known distance between sections to extrapolate the three-dimension epidermal area covering the wound, overall wound area, epidermal volume and wound volume. Although this detailed histological analysis is more time and resource consuming than conventional analyses, its rigor increases the likelihood of detecting novel phenotypes in an inherently complex wound healing process.

This protocol describes how to generate bilateral, full-thickness excisional wounds in mice and how to subsequently monitor, harvest, and prepare the wounds for morphometric analysis. Included is an in-depth description of how to use serial histological sections to define, precisely quantify and detect morphometric defects.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

מעקב חי אחר תאי שיניים באמצעות מיקרוסקופ דו-פוטוני

Using Ex Vivo Live Imaging to Investigate Cell Divisions and Movements During Mouse Dental Renewal

The continuously growing mouse incisor is emerging as a highly tractable model system to investigate the regulation of adult epithelial and mesenchymal stem cells and tooth regeneration. These progenitor populations actively divide, move, and differentiate to maintain tissue homeostasis and regenerate lost cells in a responsive manner. However, traditional analyses using fixed tissue sections could not capture the dynamic processes of cellular movements and interactions, limiting our ability to study their regulations. This paper describes a protocol to maintain whole mouse incisors in an explant culture system and live-track dental epithelial cells using multiphoton timelapse microscopy. This technique adds to our existing toolbox for dental research and allows investigators to acquire spatiotemporal information on cell behaviors and organizations in a living tissue. We anticipate that this methodology will help researchers further explore mechanisms that control the dynamic cellular processes taking place during both dental renewal and regeneration.

מחבר זרקור: הבנת התנהגויות תאיות דינמיות בחידוש ותיקון רקמת שיניים של עכבר בוגר 

Ex vivo live imaging is a powerful technique for studying the dynamic processes of cellular movements and interactions in living tissues. Here, we present a protocol that implements two-photon microscopy to live track dental epithelial cells in cultured whole adult mouse incisors.

שימוש בהדמיה חיה של Ex Vivo כדי לחקור חלוקות תאים ותנועות במהלך חידוש שיניים של עכבר

The continuously growing mouse incisor is emerging as a highly tractable model system to investigate the regulation of adult epithelial and mesenchymal ...

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine models provide valuable mechanistic insight into these processes; however, no single model fully addresses all aspects of the wound healing response. Instead, it is ideal to use multiple models to address the different aspects of wound healing. Here, two different methods that address diverse aspects of the wound healing response are described. In the first model, polyvinyl alcohol sponges are subcutaneously implanted along the mouse dorsum. Following sponge retrieval, cells can be isolated by mechanical disruption, and fluids can be extracted by centrifugation, thus allowing for a detailed characterization of cellular and cytokine responses in the acute wound environment. A limitation of this model is the inability to assess the rate of wound closure. For this, a tail skin excision model is utilized. In this model, a 10 mm x 3 mm rectangular piece of tail skin is excised along the dorsal surface, near the base of the tail. This model can be easily photographed for planimetric analysis to determine healing rates and can be excised for histological analysis. Both described methods can be utilized in genetically altered mouse strains, or in conjunction with models of comorbid conditions, such as diabetes, aging, or secondary infection, in order to elucidate wound healing mechanisms.

Here, two murine wound healing models are described, one designed to assess cellular and cytokine wound healing responses and the other to quantify the rate of wound closure. These methods can be used with complex disease models such as diabetes to determine mechanisms of various aspects of poor wound healing.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Immunology and Infection

Digital Planimetry for Assessing Wound Closure Kinetics in a Mouse Model

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, thereby reducing the risk of complications and alleviating the economic burden on healthcare systems. Although numerous experimental studies have investigated wound healing, most rely on qualitative observations or quantitative direct measurements. The objective of this study was to standardize an indirect wound measurement method using digital planimetry, incorporating digital scaling and segmentation. This approach addresses the lack of detailed, step-by-step methodologies for accurate wound assessment. A photodocumentation booth was designed and constructed, and computer-assisted digital planimetry tools were employed to minimize variability in measurements of the wound area, perimeter, and the distance from the wound center to its edges. A circular traumatic wound (5 mm in diameter) was created on the dorsal midline at the shoulder blade level of male CD1 mice (n = 4, 10 weeks old, 30-35 g). Wound evolution was photodocumented for 14 days using the custom-designed photo booth, which controlled lighting conditions, focal distance, and subject positioning. Scaling and wound measurements were performed using segmentation in ImageJ software, and statistical analysis was conducted using statistical analysis software. The kinetics of wound closure showed a slight increase in wound size and perimeter between day 0 and day 2, followed by a gradual decrease until complete closure by day 14. The photodocumentation booth and computer-assisted digital planimetry enabled quantitative measurements with minimal variability. In conclusion, these tools provide a reliable and reproducible method for evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

Wounds represent a global health challenge. This study developed a standardized photo booth utilizing digital planimetry to minimize wound measurement variability. Monitoring wounds in mice over 14 days revealed an initial increase in wound area and perimeter, followed by gradual closure. This methodology may aid in evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, ...

Bioengineering

יצירת מודל עכבר לדלקת במוך השן באמצעות פיו חדשני 

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms underlying pulpitis and its efficient treatment is an ongoing focus of endodontic research. Therefore, understanding the inflammatory process within the dental pulp is vital for improving pulp preservation. Compared to other in vitro experiments, a murine pulpitis model offers a more authentic and genetically diverse context to observe the pathological progression of pulpitis. However, using mice, despite their cost-effectiveness and accessibility, poses difficulties due to their small size, poor coordination, and low tolerance, complicating intraoral and dental procedures. This protocol introduces a novel design and application of a mouth-gag to expose mouse pulp, facilitating more efficient intraoral procedures. The mouth-gag, comprised of a dental arch readily available to most dentists and can significantly expedite surgical preparation, even for first-time procedures. Micro-CT, hematoxylin-eosin (HE) staining, and immunofluorescence staining were used to identify changes in morphology and cell expression. The aim of this article is to help researchers establish a more reproducible and less demanding procedure for creating a pulp inflammation model using this novel mouth-gag.

מחבר זרקור: שיפור מחקר מוך השן עם מודלים עכבריים משופרים

This article presents a streamlined protocol for establishing a pulpitis model in mice using an innovative mouth-gag, followed by subsequent histological analysis.

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מודל עכברי של ריפוי פצע

שיטת שיתוף התרבות כדי ללמוד Neurite Outgrowth בתגובה שיניים זולה הקרנף סימנים

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

שימוש בהדמיה חיה של Ex Vivo כדי לחקור חלוקות תאים ותנועות במהלך חידוש שיניים של עכבר

שימוש בהדמיה חיה של Ex Vivo כדי לחקור חלוקות תאים ותנועות במהלך חידוש שיניים של עכבר

שימוש בהדמיה חיה של Ex Vivo כדי לחקור חלוקות תאים ותנועות במהלך חידוש שיניים של עכבר

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

הקמת מודל חשיפה למועיסת מוך עם פיו חדשני לחקר דלקת הדוכן

הקמת מודל חשיפה למועיסת מוך עם פיו חדשני לחקר דלקת הדוכן