Bu çalışma NIDCR / NIH R01DE023348 (RHK) ve University of California, Los Angeles Bölümü Akademik Senatosu Araştırma Konseyi Fakültesi Araştırma Bursu (RHK) tarafından desteklenmiştir.

Fareleri Jackson Laboratory&#39;den satın alındı ​​ve Deney Hayvanları UCLA Tıp Bölümü (DLAM) bir patojen içermeyen vivaryum tutuldu. Deneyler Başbakan&#39;ın Hayvancılık Araştırma Komitesi (ARC # 2016-037) onaylanmış kurumsal kurallarına göre yapılmıştır. 1. Fare Anesthetization <ol><li> Sekiz haftalık dişi C57 / BL6 fareler kullanın (n = 3). </li><li> ketamin (fare ağırlığı 80-120 mg / kg) / ksilazin (5 mg / fare ağırlığındaki her bir kg) çözeltileri kullanılarak fareler anestezi ve 10 ml / kg&#39;lık bir dozda intraperitonal (ip) verilmesi. </li><li> ketamin hazırlanması (80-120 mg / kg) / ksilazin (5 mg / kg) çözeltiler ve 10 mL / kg bir dozda intraperitonal (ip) olarak onları yönetmek. </li><li> fareler tamamen ayak tutam yaparak anestezi onaylayın. </li></ol> 2. Selüloz-kapatma İşlemi <ol><li> Farenin ağzına ağız tutucu yerleştirin. </li><li> O böyle masada ağız yuvasını Güvenlireklam yukarı bakacak. </li><li> İlk maksiller molar tamamen görünür böylece ağız üstüne mikroskobu (10X) yerleştirin. </li><li> hamuru şeffaf dentin aracılığıyla görünür oluncaya kadar 200.000 rpm&#39;de yüksek hızda piyasemene ¼ yuvarlak bur kullanarak, ortada diş minesi parçası kaldırın. bur hamuru maruz bırakmayın. </li><li> Bir 15. endodontik K-dosya (150 mikron çapında) kullanılarak, dentin ile delmek ve hamuru maruz kalmaktadır. NOT: dentin enkaz hamuru içine itilmiş almaz böylece Özel bakım alınmalıdır. Bu üç aylık K-dosyayı dönen ve sonra dışarı K-dosya çekerek önlenebilir. </li><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, steril H2O ile MTA karıştırın. Sunun ve kaşif ucuyla maruz hamuru üzerine MTA yerleştirin. nazik dokunarak maruz hamuru içine MTA paketi kağıt noktasının (ince) arka tarafını kullanın. Kağıt noktasının kalın tarafı düz ve bu nedenle izin verirmaruz hamuru içine MTA düzgün yoğunlaşması için. </li><li> Sadece diş kapsayan% 35&#39;lik fosforik asit pürüzlendirici koyarak 15 saniye boyunca diş etch. o dişeti dokuları tahriş edebilir gibi etchant yerleştirme sınırlamak için özel özen gösterin. NOT: dağlayıcı bir şırınga gelir ve diş yapıştırıcılar diş üzerine Mikromekanik bağ aracılık etmek akabilmesi için diş yüzeylerinin pürüzlendirin için kullanılır. viskoz olduğundan, kendi kendine yeten bir diş üzerine doğrudan küçük miktarlarda uygulanması ile yapılabilir. </li><li> pürüzlendirici kaldırmak için negatif basınçlı emiş kullanın. Hafifçe etchant ve artıklar kaldırmak için H 2 O ile ıslatılır pamuk bir pelet kullanın. dağlayıcı tamamen diş kaldırılana kadar bu adımı tekrarlayın. </li><li> bir sıkıştırılmış hava silgi kullanarak, yavaşça diş kurutun. </li><li> Kağıt noktasının ters kullanarak diş yapıştırıcıları uygulayın. </li><li> 3 saniye basınçlı hava kullanılarak yapışkan tabaka ince olun. </li><li> Cure kür ışık birimini kullanarak 20 saniye boyunca diş yapıştırıcılar. </li><li> MTA ile kapaklandı diş üzerine küçük miktarlarda akışkan kompozit yerleştirin. diş oluklarına içine kompozit akmaya explorer ucu kullanın. </li><li> Bunu polimerize bir ışıkla sertleşen birimini kullanarak 30 saniye boyunca kompozit Cure. Kompozit tam kürünü ve sert explorer kullanarak doğrulayın. </li></ol> 3. Ameliyat sonrası bakım <ol><li> Hemen kağıt hamuru kapatma işleminden sonra karprofen (5 mg / kg) deri altından (sc) uygulayınız. </li><li> Onlar uyanmadan sıcak hayvanları tutmak için düşük güçte bir ısıtma pedi üzerinde fareler yerleştirin. </li><li> konut vivari fareler dönün. </li></ol> 4. Doku Alımı <ol><li> 5 sonra - 6 hafta, izofluran ile tam bir anestezi koşulları altında servikal dislokasyon ile farelerin euthanize. </li><li> Dikkatle kafatasının tabanından maksilla çıkarın ve 50 ml tüp içine koydu. entir Fixgece boyunca 4 ° C &#39;de, kağıt hamuru başlıklı diş ve PBS içinde% 4 paraformaldehid, pH 7.4 içinde karşı sınırlanmamış diş hem de içerir, ve daha sonra% 70&#39;lik bir etanol çözeltisi içinde saklayın e maksilla. NOT: Paraformaldehyde toksik ve kanserojen olduğunu. standart operasyon prosedürleri (SOP) &#39;de belirtildiği gibi doğru kullanımı paraformaldehit izlenmelidir. </li><li> uCT tarama kullanarak fare maxillae tarayın. % 70 etanol ile ıslatılmış gazlı bez ile örnekleri sarın ve 15 ml hücre kültürü tüp koyun, tarama sırasında maxillae güvenceye almak için. </li></ol> 5. uCT Tarama <ol><li> uCT tarama için numune hazırlayın. Kısaca,% 70 etanol ile ıslatılmış gazlı bez ile örnekleri sarın ve bir jenerik 15 ml hücre kültürü konik tüp sabitleyin. üreticinin talimatlarında belirtildiği gibi, uCT tarama sahneye tüp monte edin. </li><li> 145 uA bir akıma, 55 kVp bir gerilim ve 2 bir pozlama süresi X-ışını kaynağı Set00 ms. </li><li> 20 mikron çözünürlükte ve 0.5 mm Al filtre ile uCT tarayıcı ile görüntü elde etme gerçekleştirin. </li><li> Görüntüyü yeniden ve 11 görselleştirmek. </li><li> uCT Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, 2 hafta içinde% 5 EDTA ve PBS içinde% 4 sakroz (pH 7.4) dekalsifikasyon başlar. </li></ol> 6. Doku İşleme ve Boyama <ol><li> parafin dekalsifiye dokuları gömün. gömmeden önce, hemen birinci molar için ön bir sagital kesim yaparak maksilla kırpın. gömme birlikte, birinci molar uzunlamasına kesit kesme yüzeyi olacak şekilde, aşağı doğru, bu yüzey yerleştirin. </li><li> mikrotom kullanılarak, 5 mikron kalınlığında slaytlar hazırlamak. kağıt hamuru sınırı alanlar genellikle bir dönüm noktası olarak kullanılabilir distopalatal (DP) kök ile örtüşmektedir. Işık mikroskobu altında histoloji incelenmesi ve uCT görüntüleri karşılaştırarak ilgi belirli bir bölgede tespit. </li><li> H &amp; E boyama, depara içinffinize ve ksilen (2x) ve seri olarak seyreltilmiş, etanol (% 100 EtOH 2x,% 95 EtOH 2x,% 70 EtOH 1x) ile slaytlar rehidrate. </li><li> akan musluk suyu ile slaytlar durulayın. </li><li> 2.5 dakika boyunca Hematoksilen çözümü ile Leke ve musluk suyu ile durulayın. </li><li> 1 dakika boyunca% 95 etanol içinde slaytlar batırın. </li><li> 1 dakika süreyle Eosin çözeltisi ile Leke musluk suyu ile yıkayın. </li><li> seri olarak seyreltilmiş, etanol (% 70 EtOH 1x,% 95 EtOH 2x,% 100 EtOH 3x) ve ksilen (3x) ile kurutmak. </li><li> montaj çözümü ile slaytlar monte edin. </li></ol>

<ol>
	<li>Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+caries+and+tooth+loss+in+adults+in+the+United+States,+2011-2012.">Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012.</a> NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).</li><li>Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+increase+in+dental+caries.+A+pending+public+health+crisis.">The global increase in dental caries. A pending public health crisis.</a> Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).</li><li>Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+responses+following+direct+pulp+capping+of+healthy+dog+teeth+with+dentine+adhesive+systems.">Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems.</a> J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).</li><li>Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+response+to+a+resin-modified+glass-ionomer+material+on+nonexposed+and+exposed+monkey+pulps.">Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps.</a> Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).</li><li>Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentinogenic+responses+after+direct+pulp+capping+of+miniature+swine+teeth+with+Biodentine.">Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine.</a> J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).</li><li>Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+histologic+investigation+of+direct+pulp+capping+in+rodents+with+dentin+adhesives+and+calcium+hydroxide.">A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide.</a> Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).</li><li>Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+amelogenin+gene+splice+products+A+4+and+A-4+implanted+in+the+exposed+rat+molar+pulp.">Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp.</a> Head Face Med. 3, 40 (2007).</li><li>Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+the+rat+molar+pulp+of+two+proprietary+calcium+hydroxide+preparations.">The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations.</a> Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).</li><li>Sela, J., Ulmansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+of+normal+and+inflamed+dental+pulp+to+Calxyl+and+zinc+oxide+and+eugenol+in+rats.">Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).</li><li>Maurice, C. G., Schour, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+cavity+preparations+in+the+molar+of+the+rat.">Experimental cavity preparations in the molar of the rat.</a> J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).</li><li>Sohn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+ORAI1+in+the+Odontogenic+Differentiation+of+Human+Dental+Pulp+Stem+Cells.">The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells.</a> J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).</li><li>Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Experiments+with+Dental+Pulp+Stem+Cells+for+Pulp-Dentin+Complex+Regeneration.">In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration.</a> Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odontogenic+capability:+bone+marrow+stromal+stem+cells+versus+dental+pulp+stem+cells.">Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells.</a> Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).</li><li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+dental+pulp+stem+cells+and+platelet-rich+plasma+for+pulp+regeneration.">Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration.</a> J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).</li><li>Iohara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentin+regeneration+by+dental+pulp+stem+cell+therapy+with+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein+2.">Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2.</a> J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).</li><li>Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteopontin+Is+Essential+for+Type+I+Collagen+Secretion+in+Reparative+Dentin.">Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin.</a> J Dent Res. , (2016).</li><li>Hunter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+Acts+as+a+Pro-Survival+Signal+to+Enhance+Dentin+Regeneration.">Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li><li>Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dentin:+structure,+composition+and+mineralization.">Dentin: structure, composition and mineralization.</a> Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).</li><li>Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatibility+of+a+resin-modified+glass-ionomer+cement+applied+as+pulp+capping+in+human+teeth).">Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth).</a> Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).</li><li>Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+pulp+capping+with+mineral+trioxide+aggregate:+an+observational+study.">Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study.</a> J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).</li><li>Miller, R. A., Nadon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+animal+use+for+gerontological+research.">Principles of animal use for gerontological research.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).</li><li>Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclasts+are+absent+in+pulpal+and+periapical+inflammatory+lesions.">Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions.</a> J Dent Res. 95, 1503 (2016).</li><li>Williams, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+bone+resorption+and+woven+bone+formation+are+associated+with+development+of+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+by+bisphosphonate+and+anti-receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+antibody+in+mice).">Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice).</a> Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).</li><li>McPherson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physical+map+of+the+human+genome.">A physical map of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).</li><li>Gregory, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physical+map+of+the+mouse+genome.">A physical map of the mouse genome.</a> Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).</li><li>Hilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keys+to+clinical+success+with+pulp+capping:+a+review+of+the+literature.">Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature.</a> Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).</li><li>Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+pathogenesis+of+collagen-induced+arthritis+in+mice--a+model+for+rheumatoid+arthritis.">The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis.</a> Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).</li><li>Kalu, D. N., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomized+murine+model+of+postmenopausal+calcium+malabsorption.">Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption.</a> J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).</li><li>Yokochi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+experimental+murine+model+for+lipopolysaccharide-mediated+lethal+shock+with+lung+injury.">A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury.</a> Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).</li><li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice.">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Şu anda, dental pulpa kök hücrelerin (DPSCs) 13 odontojenik farklılaşma dental materyaller, iskeleler, ya da büyüme faktörlerinin in vivo etkilerini doğrulamak için birkaç farklı deneysel model vardır. Bu modeller gibi böbrek kapsül gibi bir organ DPSCs ektopik otolog transplantasyon, ya da iskeleler 14,15 ile immün sistemi baskılanmış farelere DPSCs deri altına nakli sayılabilir. Bununla birlikte, bu yöntemler DPSCs üzerindeki odontojenik etkisi ortotopik hamur ortamında gerçekleştirilmez olması ile sınırlıdır. Diğer yandan, bir diş üzerinde hamur veya hamur kapaklama prosedürlerine ortotopik transplantasyon büyük hayvanlar 16,17 kullanılmaktadır. bu modeller ortotopik ortamda odontojenik potansiyelinin değerlendirilmesinde değerli olmasına rağmen, bu modellerin kullanılması hamuru yara iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumu sınırlı mekanik anlayışlar sağlayarak, doğada büyük ölçüde gözlemsel olduğunu. </p&gt; Bu yazıda farelerde hamuru kuafajı gerçekleştirmek için detaylı bir yöntem mevcut. Bu adım adım prosedürü tarama uCT ile analiz, kağıt hamuru kapatma malzemeleri yerleştirerek maxillae hasat, Sınıf-I-benzeri boşluğu hazırlanması, fareler anestezi ve onarıcı dentin oluşumu için doku örnekleri değerlendirirken içerir. Bizim hamuru-kapatma fare modeli araştırma toplumda yaygın olarak bulunmaktadır transgenik ya da nakavt fareler, kullanımını sağlayarak onarım dentinin bağlamında vivo pulpa yara iyileşmesinin temel moleküler mekanizmaların araştırılması vesile olacaktır. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, dentin oluşumu 18,19 gözlendiği pek çok fare modelleri gösterdi. Saito ve diğ. gerici değil, onarıcı, dentin oluşumunu uyarır pulpa maruz kalmadan Sınıf-I-benzeri hazırlık yarattı. gerici dentin ve onarıcı dentin Hem üçüncül dentin olarak sınıflandırılırHangi dişin dış stimülasyon takip oluşturur. Ancak, mevcut odontoblast oluşturduğu gerici dentin, farklı olarak, onarım dentin hamuru açıkta kalır ve odontoblastik tabakalar 20 ihlal olan bu gibi DPSCs olarak odontoblast-benzeri hücreler, tarafından oluşturulur. Bu nedenle, klinik gerçek bir kağıt hamuru kapatma işlemini temsil etmez. Başka bir çalışmada, cam iyonomer hamuru poz 19 kap için kullanılmıştır. Ancak, klinik çalışma cam iyonomer kronik inflamasyon kaynaklı, ama onarıcı 21 dentin değil gösterdi. Bu bağlamda, daha iyi kağıt hamuru sınırı fare modeli hastalarda gerçek kağıt hamuru kapatma işlemini temsil eder. Biz daha 6 hafta sonra fareler hasat zaman, onarıcı dentin oluşumu hamuru oda ve kök kanallarının (Şekil 4) boyunca meydana dikkat çekicidir. Böyle bir gözlem biz jun de onarıcı dentin oluşumunu tahmin edildiği gibi, oldukça beklenmedik birkağıt hamuru sınırı malzeme ve kağıt hamuru ile ction. Bununla birlikte, kağıt hamuru güçlü bir mineralizasyon özellikle genç hastalar 22, klinik görülmektedir. Bu çalışmada kullanılan 8 haftalık fareler &quot;genç yetişkinler&quot; 23 olarak kabul edilir, çünkü bu fareler yine de önemli odontojenik potansiyeli barındıran bu sayede, bir olasılık var. Nedenle, farelerde onarım dentin oluşumu yaşlanma etkilerini incelemek için faydalı olacaktır. Bizim histolojik incelemeler onarıcı dentin açıkça pulpa kapaklı diş kuruldu rağmen reparatif dentin tübüllerine varlığı (kırmızı ok) ve osteositlere (siyah ok başları) ile kanıtlandığı gibi, hem dentin ve kemik oluşumu özellikleri vardı, ortaya dentin (Şekil 5). Bu gözlemler onarıcı dentin oluşumu lokal odontoblast gibi dental pulpa kök hücrelerinin yanısıra infiltratin bulunan neden olabileceğini düşündürmektedirÇevredeki kemikten g mezenkimal kök hücrelerin. tartrat-dirençli asit fosfataz (TRAP) lekelenmesi ile saptandığı haliyle dentin oluşturucu hücreler ile karşılaştırıldığında, biz hamuru içinde herhangi bir dentin yıkıcı hücreler bulunan (veriler gösterilmemiştir). Nitekim, pulpa veya periapikal iltihabı diş çevresinde kemik yüzeylerinde osteoklast oluşumunu indükler, fakat nedeniyle olduğu gibi henüz bilinmeyen mekanizmalar 24 dentin yüzeylerinde. Unutmayın ki, mevcut dentin ve yeni oluşan onarıcı dentin (Şekil 4) arasında net bir sınır vardı. Bir önceki çalışmada da benzer bir fenomen gösterdi; Diş bisfosfonat veya osteoklast fonksiyonlarını inhibe her ikisi de anti-RANKL antikoru varlığında ekstrakte edildi, varolan yaprak yapılı kemik ve yeni oluşturulan dokunmuş kemiği 25 arasında açık demarcations vardı. Bu kavram daha hamuru dentin-rezorbe hücrelerin yokluğunu desteklemektedir. Topluca, bizim kurulan fare modeli p olurhamuru yara iyileşmesi ve in vivo onarıcı dentin oluşumu mekanizmalarını incelemek için eşsiz fırsatlar rovide. kağıt hamuru sınırı fare modelinde bir sınırlama yoktur. İnsanlarda ve farelerde arasındaki genetik Makyaj net bir şekilde farklıdır. Bütün Genom insan ve farede dizilenmiştir ve fareler ve insanlarda 26,27 arasındaki protein kodlama bölgeleri ile ilgili olarak% 85 benzerlik vardır. Bu fikri doğrultusunda, bu hayvanlarda kapatma hamuru ilişkin bulgular mutlaka insanlarda 28 bu yansıtmadığını öne sürüldü. Bununla birlikte, hayvan modelleri yaygın olarak, romatoid artrit 29 sistemik şok 31 osteoporoz 30 lipopolisakarit (LPS) uygulama için ovariactomy kaynaklı kemik kaybı ve ligasyonu için kollajen kaynaklı arterit gibi, in vivo olarak insan hastalıklarının, özetlemek için araştırma eden kullanılan periodontitis 32 yerleştirme. Bu tür, kağıt hamuru kapatma mou olarakse modeli hamuru yara iyileşmesi ve in vivo onarıcı dentin oluşumu moleküler mekanizmaları incelemek için gerekli olacaktır. Bununla birlikte, sadece diğer hayvan modelleri, yorumlanması ve kağıt hamuru-kapatma fare modelinde elde edilen bulgulara doğrulama gibi dikkatle değerlendirilmelidir. Özetle, bu çalışma farelerde kapatma başarılı hamuru göstermektedir. Diğer bilinen modellerin aksine, bu hamuru-kapatma fare modeli hamuru rejenerasyonu ve onarıcı dentin oluşumu sağladığından alanında paha biçilmez bir araştırma aracı sağlayacaktır: En altta yatan mekanizmaları aydınlatmak için yaygın olarak kullanılabilir genetiği değiştirilmiş fare suşları kullanmak için 1) bir fırsat moleküler düzeyde ve 2) ekonomik verimli bir şekilde örneklem büyüklüğü artırılarak istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar elde etmek. Daha ileri çalışmalar in vivo onarım dentin oluşumu objektif ölçümü, onarıcı dentin oluşumu yaşa bağlı etkiler, değerlendiril dahil bekliyorklinik kullanıma hamuru-kapatma malzemelerin yon ve uygun pulpa yara iyileşmesi ve onarıcı dentin rejenerasyonu için gerekli olan moleküler belirleyicileri doğrulama.

Dental caries are one of the most prevalent oral diseases and the leading cause of surgical interventions to dentitions in almost all individuals1,2. The prognosis of surgical interventions and restorations of a tooth largely depends upon proper pulpal response and successful wound healing. Indeed, dental caries that penetrate deeply through the enamel and dentin frequently lead to the exposure of the underlying pulp tissue that is often "capped" with dental materials, such as calcium hydroxide (Ca(OH)2) or hydraulic calcium-silicate cements (HCSCs), including mineral trioxide aggregates (MTA). The ultimate goal of such a pulp-capping procedure is to expedite pulpal wound healing by regenerating reparative dentin, a physical barrier that functions as a "biological seal" to protect the underlying pulp tissue and to increase the life expectancy of the tooth and the overall oral health. However, the underlying mechanism of pulpal wound healing and reparative dentin formation is not fully understood.
To better understand the mechanisms of pulpal wound healing and reparative dentin formation in vivo, several animals were previously used, including monkeys, dogs, and pigs3-5. Among them, rats are frequently used because they are relatively smaller in sizes compared to the other animals, but their teeth are large enough to perform direct pulp capping without any technical difficulties6-10. These animal models are ideal alternatives to human studies for examining pulpal responses and reparative dentin formation. However, their utilization is limited to observational studies at the cellular level, and they scarcely provide mechanistic insights during reparative dentin formation at the molecular level.
Recent technical advances in genetic engineering provided invaluable and indispensable research tools-mice that harbor a gene that is either overexpressed or deleted-that are instrumental to studying molecular mechanisms of human diseases in vivo. The numbers of different strains of transgenic or knockout mice that are strategically inducible in a cell-specific manner are continually growing in the scientific community. Therefore, examining pulpal wound healing and reparative dentin regeneration in these mice would greatly help to expedite our understanding of these processes at the molecular level. However, the use of mice is significantly dampened, as performing a pulp-capping procedure on a mouse tooth is technically challenging due to its miniature size. Here, we present our reproducible method of performing direct pulp capping in mice for the evaluation of pulpal wound healing and reparative dentin formation in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="641">
	<colgroup>
		<col span="2" />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">BM-LED stereo microscope</td>
			<td style="width:164px;">MEIJI Techno</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:173px;">Microscope&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optima MCX-LED&#160;</td>
			<td>Bien Air Dental</td>
			<td>1700588-001</td>
			<td>Electic motor engine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Henry schein animal health</td>
			<td>NDC 11695-0500-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/4 round bur</td>
			<td>Brasseler</td>
			<td>001092T0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endodontic K-file</td>
			<td>Roydent</td>
			<td>98947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ProRoot MTA</td>
			<td>Dentsply</td>
			<td>PROROOT5W</td>
			<td>MTA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paper point</td>
			<td>Henry schein</td>
			<td>100-3941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra-Etch</td>
			<td>Ultradent product Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Phosphoric acid etchant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OptiBond SoloPlus</td>
			<td>Kerr</td>
			<td>29669</td>
			<td>Adhesives</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Coltolux LED</td>
			<td>Coltene/whaledent Inc.</td>
			<td>C7970100115</td>
			<td>Curing light unit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Characterization tint</td>
			<td>Bisco</td>
			<td>T-14012</td>
			<td>Flowable composite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Skyscan</td>
			<td>Breuker</td>
			<td>1275</td>
			<td>uCT scanner</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microm</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>HM355S</td>
			<td>Microtome</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxyline-1</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>7221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin-Y</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytoseal 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-16</td>
			<td>Mounting solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a direct pulp-capping model for the evaluation of pulpal wound healing and reparative dentin formation in mice

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is often capped with biocompatible materials in order to expedite pulpal wound healing. The ultimate goal is to regenerate reparative dentin, a physical barrier that functions as a "biological seal" and protects the underlying pulp tissue. Although this direct pulp-capping procedure has long been used in dentistry, the underlying molecular mechanism of pulpal wound healing and reparative dentin formation is still poorly understood. To induce reparative dentin, pulp capping has been performed experimentally in large animals, but less so in mice, presumably due to their small sizes and the ensuing technical difficulties. Here, we present a detailed, step-by-step method of performing a pulp-capping procedure in mice, including the preparation of a Class-I-like cavity, the placement of pulp-capping materials, and the restoration procedure using dental composite. Our pulp-capping mouse model will be instrumental in investigating the fundamental molecular mechanisms of pulpal wound healing in the context of reparative dentin in vivo by enabling the use of transgenic or knockout mice that are widely available in the research community.

Burada, fareler dişlerde pulpa kaplama gerçekleştirmek için adım adım uygulandığını göstermiştir. Farelerde kapatma hamuru önemli yönlerinden biri uygun cihazı sahip olmaktır. Bu bağlamda, 10X güç büyütme ile mikroskop olan esas (Şekil 1A) &#39;dir. Diş Sınıf-I-benzeri hazırlık oluşturmak için, biz 200.000 rpm (Şekil 1B) bir elektrik yüksek hızda piyasemene bir ¼ tur çapak kullanılır. Seçenek olarak ise, basınçlı hava kullanımı da dahil olmak üzere başka herhangi bir motor, bir diş hazırlamak için de kullanılabilir. Şekil 2A-2E olarak, pulpa kaplaması gerçekleştirmek için temsili adımlar gösterilmektedir. Sınıf-I-benzeri terkibin, (Şekil 2b) uygulandı. Bir su püskürtme işlemi sırasında fareler boğmak olduğundan, kullanımı tavsiye edilmez. Bu nedenle, yumuşak ve intermi ile dişin hazırlanması için esastırttent aşırı ısınmayı önlemek için okşar. basınçlı hava kullanımı, aynı zamanda, soğutma etkisini sağlamak için önerilir. Bu onarıcı dentin oluşumu (Şekil 2C) veri yorumlama engel olabilecek bir endodontik dosya ile hamuru teşhir ederken, kağıt hamuru içine dentin enkaz itmek için değil dikkat çekmek. Bu basınçlı hava kullanılarak önlenebilir. Benzer şekilde, MTA hamuru içine çok basmadan maruz hamuru konulmalıdır. MTA yerleştirme nazik dokunarak hareketleri (Şekil 2B) ile kağıt noktasının ters kullanılarak elde edilebilir. MTA yerleştirilmesini takiben, diş diş üzerine kompozit bağlanmasına müdahale edebilir oluklar içinde kalan MTA kaldırmak için H 2 O batırılmış pamuk pelet kullanılarak temizlenmelidir. Kompozit restorasyon geleneksel yöntemler (akışkan kompozitler, diş yüzeylerinin oyulması yapıştırıcı ile doldurma ve yapıştırma ve yerleştirilmesi ve sertleştirme de dahil olmak üzere, kullanılanŞekil 2E). Altı hafta kuafaj sonra, fareler hasat edildi ve üstten görünüm kompozit (Şekil 3A) hala bozulmamış olduğunu doğrulamak için fotoğraflandı. uCT tarama onarıcı dentin hamuru meydana geldiğini göstermektedir, kağıt hamuru başlıklı grup (Şekil 3B) pulpa alan önemli durgunluk göstermiştir. Dekalsifiye doku numuneleri daha histolojik in vivo onarım dentin oluşumunu incelemek için H &amp; E boyama tabi tutuldu. Kontrol grubunda, odontoblastik tabakalar (OB) dentin (- 4C Şekil 4A) kenarlarında belirgin belirgindi. Buna karşılık, kağıt hamuru başlık grubu pulpa alan (- 4F Şekil 4D) oluşan onarıcı dentin (RD) önemli miktarda vardı. İlginçtir ki, daha yakından inceleme onarıcı dentin (RD) dentinin tipik bir özelliği sergilenen ortaya (örneğin, s<html> dentin tübülleri, kırmızı ok) temsil eden tritiye hatları, yanı sıra bu kemiğin (örn osteositlerde temsil tuzağa osteoblastlar, siyah ok başları). Bu dentin matriks protein 1 (DMP1ve), odontojenik farklılaşma 12 için bir marker için boyanmış zaman (Şekil 5A ve 5B) kapatılmamış dişin karşılaştırıldığında, biz hamuru başlıklı diş hamuru DMP1ve ekspresyonunda önemli bir artış bulunan , onarıcı dentin hamuru içinde oluştuğunu göstermektedir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig1.jpg" /> Şekil 1: Küspe-kapatma Prosedür için donatım Kur. (A) fare dişi görselleştirilmesi için bir mikroskop (10X). (B) yüksek hızda el aleti ve hamuru ortaya çıkarmak için bir Sınıf I preparatın hazırlanması için elektrik motoru motoru.= &quot;_ Blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54973/54973fig2.jpg" /> Şekil 2: Kapatma İşlemi Temsilcisi Adımlar. (A) fare maksiller birinci molar hazırlıksız diş. (B) çeyrek yuvarlak bur kullanarak ilk emaye kaldırma. Endodontik dosyasını kullanarak (C) Hamuru maruz kalma. Maruz hamuru (D) MTA yerleştirme. (E) diş üzerinde Kompozit restorasyon yerleştirme. Bar 500 mikron temsil eder. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54973/54973fig3.jpg" /> Şekil 3: Klinik Sunum ve uCT TaramalıFarelerde Selüloz-kapatıldı ve Sınırlandırılmamış diş g. (A) hamuru kaplı diş (solda) ve kapağını açıp dişin (sağ) fare maxillae oklüzal görünümü. (B) maxillae enine kesit uCT ve görüntüler. Bar 500 mikron temsil eder. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54973/54973fig4.jpg" /> Şekil 4: In Vivo Onarım Dentin Formasyonu histolojik kanıtı. 100X, 200X ve 400X&#39;lik bir fare kapağını açıp maksiller birinci molar (AC) H &amp; E boyama. 100X, 200X ve 400X&#39;lik bir fare hamuru kaplı maksiller birinci molar (DE) H &amp; E boyama. RD = onarıcı dentinin;, bar, 100 mikron (OB = odontoblast katmanları temsil siyah ok uçları =osteositlerde; kırmızı ok = dentin tübülleri). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54973/54973fig5.jpg" /> Şekil 5: DMP1ve İmmünohistokimyasal Boyama. 400X&#39;lik bir fare kapağını açıp maksiller birinci molar (A) DMP1ve boyama. 400X&#39;lik bir fare hamuru kaplı maksiller birinci molar (B) DMP1ve boyama. Bar 100 mikron temsil eder. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54973/54973fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice at JoVE.com

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Bu pulpa yara iyileşmesi ve in vivo onarım dentin oluşumunun değerlendirilmesi için farenin dişler üzerinde kapatma doğrudan kağıt hamuru yapmayı bir adım adım bir yöntem açıklanmaktadır.

Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

development-direct-pulp-capping-model-for-evaluation-pulpal-wound

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K Görüntüleme.  The UCLA School of Dentistry.  Bu pulpa yara iyileşmesi ve in vivo onarım dentin oluşumunun değerlendirilmesi için farenin dişler üzerinde kapatma doğrudan kağıt hamuru yapmayı bir adım adım bir yöntem açıklanmaktadır. 

Video: Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

Yara Şifa murin Modeli

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Tıp

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients with impeded blood flow or with large wounds might be prolonged. Cell-based therapies have appeared as a new technique for the treatment of diabetic ulcers, and cell-sheet engineering has improved the efficacy of cell transplantation. A number of reports have suggested that adipose-derived stem cells (ASCs), a type of mesenchymal stromal cell (MSC), exhibit therapeutic potential due to their relative abundance in adipose tissue and their accessibility for collection when compared to MSCs from other tissues. Therefore, ASCs appear to be a good source of stem cells for therapeutic use. In this study, ASC sheets from the epididymal adipose fat of normal Lewis rats were successfully created using temperature-responsive culture dishes and normal culture medium containing ascorbic acid. The ASC sheets were transplanted into Zucker diabetic fatty (ZDF) rats, a rat model of type 2 diabetes and obesity, that exhibit diminished wound healing. A wound was created on the posterior cranial surface, ASC sheets were transplanted into the wound, and a bilayer artificial skin was used to cover the sheets. ZDF rats that received ASC sheets had better wound healing than ZDF rats without the transplantation of ASC sheets. This approach was limited because ASC sheets are sensitive to dry conditions, requiring the maintenance of a moist wound environment. Therefore, artificial skin was used to cover the ASC sheet to prevent drying. The allogenic transplantation of ASC sheets in combination with artificial skin might also be applicable to other intractable ulcers or burns, such as those observed with peripheral arterial disease and collagen disease, and might be administered to patients who are undernourished or are using steroids. Thus, this treatment might be the first step towards improving the therapeutic options for diabetic wound healing.

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Adipose-derived stem cells (ASCs) are easily isolated and harvested from the fat of normal rats. ASC sheets can be created using cell-sheet engineering and can be transplanted into Zucker diabetic fatty rats exhibiting full-thickness skin defects with exposed bone and then covered with a bilayer of artificial skin.

Oluşturma ve diyabetik yara iyileşmesi manken bir yağ elde edilen kök hücre (ASC) Sheet nakli

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The amount of the different tissues in the callus provides important information on the fracture healing progress. Available in vivo techniques to longitudinally monitor the callus tissue development in preclinical fracture-healing studies using small animals include digital radiography and &#181;CT imaging. However, both techniques are only able to distinguish between mineralized and non-mineralized tissue. Consequently, it is impossible to discriminate cartilage from fibrous tissue. In contrast, magnetic resonance imaging (MRI) visualizes anatomical structures based on their water content and might therefore be able to noninvasively identify soft tissue and cartilage in the fracture callus. Here, we report the use of an MRI-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice. The experiments demonstrated that the fixator and a custom-made mounting device allow repetitive MRI scans, thus enabling longitudinal analysis of fracture-callus tissue development.

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

The evaluation of tissue development in the fracture callus during endochondral bone healing is essential to monitor the healing process. Here, we report the use of a magnetic resonance imaging (MRI)-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice.

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated experimental procedures, while potentially lacking in precision. In vitro culture of epithelial cell lines provides a suitable platform for researching the cell migratory behavior in wound healing and the impact of treatments on these cells. The physiology of epithelial cells is often studied in non-confluent conditions; however, this approach may not resemble natural wound healing conditions. Disrupting the epithelium integrity by mechanical means generates a realistic model, but may impede the application of molecular techniques. Consequently, microscopy based techniques are optimal for studying epithelial cell migration in vitro. Here we detail two specific methods, the artificial wound scratch assay and the artificial migration front assay, that can obtain quantitative and qualitative data, respectively, on the migratory performance of epithelial cells.

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

This manuscript describes how incision-like lesions made on cultured epithelial cell monolayers conveniently model wound healing in vitro, allowing for imaging by confocal or laser scanning microscopy, and which can provide high-quality quantitative and qualitative data for studying both cell behavior and the mechanisms involved in migration.

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an increased use of mouse models in orthopedic research was noted, most probably because mouse models offer a large number of genetically-modified strains and special antibodies for the analysis of molecular mechanisms of fracture healing. To control the biomechanical conditions, well-characterized osteosynthesis techniques are mandatory, also in mice. Here, we report on the design and use of a closed bone healing model to stabilize femur fractures in mice. The intramedullary screw, made of medical-grade stainless steel, provides through fracture compression an axial and rotational stability compared to the mostly used simple intramedullary pins, which show a complete lack of axial and rotational stability. The stability achieved by the intramedullary screw allows the analysis of endochondral healing. A large amount of callus tissue, received after stabilization with the screw, offers ideal conditions to harvest tissue for biochemical and molecular analyses. A further advantage of the use of the screw is the fact that the screw can be inserted into the femur with a minimally invasive technique without inducing damage to the soft tissue. In conclusion, the screw is a unique implant that can ideally be used in closed fracture healing models offering standardized biomechanical conditions.

This protocol describes a minimally invasive osteosynthesis technique using an intramedullary screw for standardized stabilization of femur fractures, which can be used to analyze endochondral bone healing in mice.

Endochondral standart biyomekanik koşullar altında farelerde şifa kırık çözümlemek için minimal invaziv bir Model

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

Kornea epitel aşınma oküler Burr ile bir Model olarak kornea için yara iyileşme

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies that promote efficient bone healing are non-existent and in high demand. Effective and reproducible animal models of fractures healing are needed to understand the complex biological processes associated with bone regeneration. Many animal models of fracture healing have been generated over the years; however, murine fracture models have recently emerged as powerful tools to study bone healing. A variety of open and closed models have been developed, but the closed femoral fracture model stands out as a simple method for generating rapid and reproducible results in a physiologically relevant manner. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice and facilitate a post-fracture stabilization of the femur by inserting an intramedullary steel rod. Although devices such as a nail or a screw offer greater axial and rotational stability, the use of an intramedullary rod provides a sufficient stabilization for consistent healing outcomes without producing new defects in the bone tissue or damaging nearby soft tissue. Radiographic imaging is used to monitor the progression of callus formation, bony union, and subsequent remodeling of the bony callus. Bone healing outcomes are typically associated with the strength of the healed bone and measured with torsional testing. Still, understanding the early cellular and molecular events associated with fracture repair is critical in the study of bone tissue regeneration. The closed femoral fracture model in mice with intramedullary fixation serves as an attractive platform to study bone fracture healing and evaluate therapeutic strategies to accelerate healing.

The murine closed femoral fracture model is a powerful platform to study fracture healing and novel therapeutic strategies to accelerate bone regeneration. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice using an intramedullary steel rod to stabilize the femur.

Farelerde kapalı femur kırığı nesil: kemik şifa çalışması için bir Model

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two dimensional (2D) and three dimensional (3D) culture has generated a wealth of information not only about corneal biology but also about wound healing, myofibroblast biology, and scarring in general. The goal of the protocol is an assay system for quantifying myofibroblast development, which characterizes scarring. We demonstrate a corneal organ culture ex vivo model using pig eyes. In this anterior keratectomy wound, corneas still in the globe are wounded with a circular blade called a trephine. A plug of approximately 1/3 of the anterior cornea is removed including the epithelium, the basement membrane, and the anterior part of the stroma. After wounding, corneas are cut from the globe, mounted on a collagen/agar base, and cultured for two weeks in supplemented-serum free medium with stabilized vitamin C to augment cell proliferation and extracellular matrix secretion by resident fibroblasts. Activation of myofibroblasts in the anterior stroma is evident in the healed cornea. This model can be used to assay wound closure, the development of myofibroblasts and fibrotic markers, and for toxicology studies. In addition, the effects of small molecule inhibitors as well as lipid-mediated siRNA transfection for gene knockdown can be tested in this system.

A protocol for an ex vivo corneal organ culture model useful for wound healing studies is described. This model system can be used to assess the effects of agents to promote regenerative healing or drug toxicity in an organized 3D multicellular environment.

Ex vivo kornea Organ kültür modeli için yaranın çalışmaları

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the lower extremities, hyperhidrosis, etc. It is commonly practiced to position the puncture needle tip in front of the anterior fascia of the psoas major muscle and inject the inactivating agent around the sympathetic trunk, which is defined as conventional CLS. Although relatively rare, ureteropelvic damage is the most frequently reported complication of conventional CLS and can cause serious harm to patients. We found that injecting the inactivating agent behind the anterior fascia, which only targets gray rami communicantes, helped achieve therapeutic efficacy in&#160;vasodilation, sweat reduction, and pain relief comparable to conventional CLS, and serious complications were largely reduced. We define this procedure as selective CLS. Here, we present a protocol of selective CLS. The precise needle tract and accurate evaluation of the spreading of the contrast agent are critical to ensure that the drug is injected behind the anterior fascia of the psoas major muscle. The needle tip is at approximately one-third the dividing line of the vertebral body in the lateral view of a lumbar X-ray. The contrast is mainly confined around the needle tip and spreads outward and downward along the psoas muscle fibers. In this way, the anterior fascia provides a natural barrier for the ureteropelvic area, and the psoas major muscle provides a natural barrier for the lumbar nerve root. There are several highlights of this article, including 1) a detailed description of the selective CLS procedures, 2) an explanation of the anatomical basis for the implementation of selective CLS, and 3) an explanation of the differences between selective and conventional CLS.

We present a protocol for selective chemical lumbar sympathectomy (CLS), which inactivates only gray rami communicantes and not the sympathetic trunk. Selective CLS can help achieve therapeutic efficacy in vasodilation, sweat reduction, and pain relief that are comparable to conventional CLS, and serious complications, particularly ureteropelvic damages, can be reduced.

Seçmeli kimyasal Lomber sempatektomi gri Rami Communicantes hedefleme

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...