The research was supported by the National Research Council (CNR) of Italy. The authors thank GIRE members for collecting seed samples and are grateful to Alison Garside for revising the English.

<ol>
	<li>Massa, D., Kaiser, Y. I., And&#250;jar-S&#225;nchez, D., Carmona-Alf&#233;rez, R., Mehrtens, J., Gerhards, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+geo-referenced+database+for+weed+mapping+and+analysis+of+agronomic+factors+affecting+herbicide+resistance+in+Apera+spica-venti+L.+Beauv.+(Silky+Windgrass).">Development of a geo-referenced database for weed mapping and analysis of agronomic factors affecting herbicide resistance in Apera spica-venti L. Beauv. (Silky Windgrass).</a> Agronomy. 3 (1), 13-27 (2013).</li><li>Powles, S. B., Shaner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Herbicides Resistance and World Grains. , 308 (2001).</li><li>Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbicide+resistance+in+Europe:+an+overview.">Herbicide resistance in Europe: an overview.</a> Proc. BCPC International Congress. , 131-138 (2005).</li><li>Jasieniuk, M., Le Corre, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+evolution+of+herbicide+resistance+in+weeds.">Deciphering the evolution of herbicide resistance in weeds.</a> Trends Genet. 29 (11), 649-658 (2013).</li><li>Heap, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+documentation+of+herbicide+resistance.">Identification and documentation of herbicide resistance.</a> Phytoprotection. 75 (4), 85-90 (1994).</li><li>Beckie, H. J., Heap, I. M., Smeda, R. J., Hall, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+herbicide+resistance+in+weeds.">Screening for herbicide resistance in weeds.</a> Weed Technol. 14 (2), 428-445 (2000).</li><li>Tal, A., Kotoula-Syka, E., Rubin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-bioassay+to+detect+grass+weeds+resistant+to+acetyl+coenzyme+A+carboxylase+inhibiting+herbicides.">Seed-bioassay to detect grass weeds resistant to acetyl coenzyme A carboxylase inhibiting herbicides.</a> Crop Prot. 19, 467-472 (2000).</li><li>Boutsalis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syngenta+Quick-Test:+a+rapid+whole-plant+test+for+herbicide+resistance.">Syngenta Quick-Test: a rapid whole-plant test for herbicide resistance.</a> Weed Technol. 15 (2), 257-263 (2001).</li><li>Menchari, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weed+response+to+herbicides:+regional-scale+distribution+of+herbicide+resistance+alleles+in+the+grass+weed+Alopecurus+myosuroides.">Weed response to herbicides: regional-scale distribution of herbicide resistance alleles in the grass weed Alopecurus myosuroides.</a> New Phytol. 171 (4), 861-874 (2006).</li><li>Burgos, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+confirmation+of+resistance+to+herbicides+and+evaluation+of+resistance+levels.">Review: confirmation of resistance to herbicides and evaluation of resistance levels.</a> Weed Sci. 61 (1), 4-20 (2013).</li><li>Owen, M. J., Martinez, N. J., Powles, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+herbicide-resistant+Lolium+rigidum.+(annual+ryegrass)+now+dominates+across+the+Western+Australian+grain+belt.">Multiple herbicide-resistant Lolium rigidum. (annual ryegrass) now dominates across the Western Australian grain belt.</a> Weed Res. 54 (3), 314-324 (2014).</li><li>Beckie, H. J., Tardif, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbicide+cross+resistance+in+weeds).">Herbicide cross resistance in weeds).</a> Crop Prot. 35, 15-28 (2012).</li><li>Moss, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+occurrence+of+herbicide-resistant+grass-weeds+in+the+United+Kingdom+and+a+new+system+for+designating+resistance+in+screening+assays.">The occurrence of herbicide-resistant grass-weeds in the United Kingdom and a new system for designating resistance in screening assays.</a> Proc. BCPC Weeds. , 179-184 (1999).</li><li>Baskin, C. C., Baskin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Seeds, Ecology, Biogeography and Evolution of dormancy and Germination. , 27-42 (1998).</li><li>Sattin, M., Gasparetto, M. A., Campagna, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Situation+and+management+of+Avena+sterilis.+ssp.+ludoviciana.+and+Phalaris+paradoxa.+resistant+to+ACCase+inhibitors+in+Italy.">Situation and management of Avena sterilis. ssp. ludoviciana. and Phalaris paradoxa. resistant to ACCase inhibitors in Italy.</a> Proc. BCPC - Weeds. , 755-762 (2001).</li><li>Scarabel, L., Varotto, S., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+European+biotype+of+Amaranthus+retroflexus.+cross-resistant+to+ALS+inhibitors+and+response+to+alternative+herbicides.">A European biotype of Amaranthus retroflexus. cross-resistant to ALS inhibitors and response to alternative herbicides.</a> Weed Res. 47 (6), 527-533 (2007).</li><li>Collavo, A., Panozzo, S., Lucchesi, G., Scarabel, L., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+and+management+of+Phalaris+paradoxa.+resistant+to+ACCase-inhibitors.">Characterisation and management of Phalaris paradoxa. resistant to ACCase-inhibitors.</a> Crop Prot. 30 (3), 293-299 (2011).</li><li>Scarabel, L., Carraro, N., Sattin, M., Varotto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+and+genetic+characterisation+of+evolved+resistance+to+ALS-inhibitors+in+Papaver+rhoeas.">Molecular basis and genetic characterisation of evolved resistance to ALS-inhibitors in Papaver rhoeas.</a> Plant Sci. 166 (3), 703-709 (2004).</li><li>Panozzo, S., Scarabel, L., Tranel, P. J., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target-site+resistance+to+ALS+inhibitors+in+the+polyploid+species+Echinochloa+crus-galli.">Target-site resistance to ALS inhibitors in the polyploid species Echinochloa crus-galli.</a> Pestic. Biochem. Phys. 105 (2), 93-101 (2013).</li><li>Sattin, M., Berto, D., Zanin, G., Tabacchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+ALS+inhibitors+in+rice+in+north-western+Italy.">Resistance to ALS inhibitors in rice in north-western Italy.</a> Proc. BCPC. Weeds. , 783-790 (1999).</li><li>Scarabel, L., Berto, D., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dormancy+breaking+and+germination+of+Alisma+plantago-aquatica.+and+Scirpus+mucronatus.">Dormancy breaking and germination of Alisma plantago-aquatica. and Scirpus mucronatus.</a> Aspects of Applied Biology. 69, 285-292 (2003).</li><li>Collavo, A., Strek, H., Beffa, R., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+an+ACCase-inhibitor-resistant+Lolium+rigidum.+population+based+on+the+use+of+ALS+inhibitors:+weed+population+evolution+observed+over+a+7+years+field-scale+investigation.">Management of an ACCase-inhibitor-resistant Lolium rigidum. population based on the use of ALS inhibitors: weed population evolution observed over a 7 years field-scale investigation.</a> Pest Manag. Sci. 69 (2), 200-208 (2013).</li><li>Scarabel, L., Panozzo, S., Savoia, W., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target-site+ACCase-resistant+Johnsongrass+(Sorghum+halepense).+selected+in+summer+dicot+crops.">Target-site ACCase-resistant Johnsongrass (Sorghum halepense). selected in summer dicot crops.</a> Weed Technol. 28 (2), 307-315 (2014).</li><li>Hess, M., Barralis, H., Bleiholder, H., Buhur, L., Eggers, T., Hack, H., Strauss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+extended+BBCH+scale+-+general+for+the+description+of+the+growth+stages+of+mono-+and+dicotyledonous+weed+species.">Use of the extended BBCH scale - general for the description of the growth stages of mono- and dicotyledonous weed species.</a> Weed Res. 37 (6), 433-441 (1997).</li><li>Collavo, A., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+glyphosate-resistant+Lolium.+spp.+biotypes+found+in+a+European+annual+arable+cropping+system+also+affected+by+ACCase+and+ALS+resistance.">First glyphosate-resistant Lolium. spp. biotypes found in a European annual arable cropping system also affected by ACCase and ALS resistance.</a> Weed Res. 54 (4), 325-334 (2014).</li><li>Scarabel, L., Cenghialta, C., Manuello, D., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+and+management+of+imidazolinone-resistant+red+rice+(Oryza+sativa.+L.,+var.+sylvatica.)+in+Clearfield&#174;+Italian+paddy+rice.">Monitoring and management of imidazolinone-resistant red rice (Oryza sativa. L., var. sylvatica.) in Clearfield&#174; Italian paddy rice.</a> Agronomy. 2 (4), 371-383 (2012).</li><li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants:+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops.">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

כמה צעדים בפרוטוקולים הם קריטיים להערכה מוצלחת של התנגדות קוטל עשבים באוכלוסייה: 1) יש לאסוף זרעים כאשר בוגר מצמחים ששרדו את טיפול קוטל עשבים (ים). הבשלה של הזרעים על הצמח האם הוא חיוני כדי למנוע קשיים בנביטת זרעים מאוחר יותר; 2) האחסון הנכון של זרעים מומלץ להימנע התפשטות של תבניות שימנעו נביטה; 3) יש להתייחס שתילים בשלב הצמיחה תקין, כפי שדווחו על התווית של חבילת קוטל העשבים. יש להקפיד כל כך שלהיות מטופלים צמחים הגיעו בערך באותו שלב הצמיחה; 4) את פתרונות קוטל העשבים צריכים להיות מוכנים ולטפל בם ברמת דיוק כך שצמחים הם ריססו עם הריכוז הנכון של חומר פעיל ולכן להימנע מטעויות בלתי ניתנות לאימות; 5) לאחר כל טיפול קוטל עשבים מומלץ לנקות את ארון הריסוס ביסודיות ומוצרי זכוכית המשמש להכנת הפתרונות כדי למנועזיהום בטיפול קוטל העשבים הבא, במיוחד כאשר קוטלי עשבים מאוד פעילים מבחינה ביולוגית מעורבים. הפרוטוקולים שהוצגו במסמך זה ניתן להתאים בקלות למגוון רחב של מיני עשבים בשינויים הנדרשים על פי מין וקוטלי עשבים של עניין. (סעיפים לראות 2 ו -3) בפרט, שיטות לשבור תרדמת זרעים ונביטה הם צעדים שיש לשקול מחדש עבור כל מיני עשבים חדשים. ציוד ריסוס לפעמים צריך התאמות כאשר קוטלי עשבים שונים משמשים, למשל, גלייפוסט דורש הגדרות שונות של ממשלת הריסוס (ראה סעיף 5.3) ומטופלים צמחים בשלב צמיחה מאוחר יותר מאשר עם רוב קוטלי עשבים. הזמן והמרחב דרוש לביצוע פרוטוקולים אלה יכולים להיות גורם מגביל ואינו מתאים לבדיקה שגרתית. עם זאת, כדי להגביל את העלויות, ניתן להשתמש רק במינון קוטל עשבים אחד. בדרך זו עדיין ניתן להשיג מידע על אם לאהוא האוכלוסייה היא עמידה. הגבלת פוטנציאל של הגישה קשורה לעובדה שאין בדיקות עמידות כלולות בניסויים. למעשה, בשל המספר הגדול של biotypes העריך (כלומר, מין וקוטלי עשבים המעורבים שונים), יש לכלול בדיקות רבות בכל ניסוי, כך להגדיל את העלויות. עם זאת, היתרונות על פני שיטות / פרוטוקולים חלופיים המבוססים על צמח כל bioassays רק באמצעות אחד קוטל עשבים במינון 15 קשורים לאמינות גבוהה יותר והאפשרות להסיק את רמת ההתנגדות. בדיקות סקר לאבחון מהירות יותר ופחות יקרות גם כבר המציאו, in vivo או במבחנה (למשל, bioassays צלחת פטרי 8, בדיקות spectrophotometric על אנזים יעד קוטל עשבים 29). עם זאת, הם מספקים רק מידע איכותי ודורשים קצת עבודה ראשונית, לפעמים מייגע, כדי לזהות את מינון העשבים לאפליה בין מילצמחי istant ורגישים. במבחנה מבחני גם צריכים להיות מותאמים על פי המרכיב הפעיל בשימוש.

<html> קוטלי עשבים הם מידת שליטת העשב ביותר בשימוש נרחב, והיוו עד 50% משוק הגנת הצומח העולמי 1. הם כלים זולים יחסית, להימנע משיטות טיפוח אדמה עתירת עבודה וזמן רב, וסופו של דבר להביא לייצור חסכוני, בטוח ורווחי מזון 2. עם זאת, המתנה הגדולה phenological והגנטי השונות במינים עשבים רבים, יחד עם הסתמכות יתר על שימוש קוטל עשבים, לעתים קרובות גורמת לבחירה של אוכלוסיות עשבים עמידים בפני קוטלי עשבים. המבוא של קוטלי עשבים סלקטיביים עם יעד חילוף חומרים מאוד ספציפי 3-5 כבר עלה באופן משמעותי את מספר המקרים התנגדות לאורך השנים. עד כה, 240 מיני עשבים (140 dicots וmonocots 100) ברחבי העולם התפתחו התנגדות לאתרים שונים של קוטל עשבים פעולה (SOA) 4. זוהי דאגה גדולה לניהול עשב ויותר באופן כללי לייצור יבול בר-קיימא. e_content &quot;&gt; גילוי מוקדם של התנגדות, המבוסס על בדיקות אמינות, מבוצעות לעתים קרובות בחממה, הוא צעד מפתח לנהל עשבים עמידים קוטל עשבים. גישות שונות פותחו בהתאם למטרות, הרמה הנדרשת של דיוק, זמן ומשאבים זמינים, כ גם מיני עשבים נחשבים 6-12. עם זאת, כאשר אישור של מעמד ההתנגדות של biotype עשב חדש נדרש (כלומר, קבוצה של אנשים שחולקות כמה מאפיינים פיסיולוגיים, כולל היכולת לשרוד אחד או יותר קוטלי עשבים השייכים ל קבוצה מסוימת בשימוש במינון שהיה בדרך כלל לשלוט בם), המבדק צמח שלם חזק צריכה להיות מבוצעת בסביבה מבוקרת 4, 11. Biotype הוא לעתים רחוקות עמיד לקוטל עשבים רק אחד. כל biotype מתאפיין לכן בדפוס מסוים התנגדות, מספר כלומר, והסוג של SOA של קוטלי העשבים הוא עמיד ל, ועל ידי התנגדות ניתנהרמה לכל קוטלי עשבים 13. הקביעה המוקדמת ואמינה של הדפוס של צלב או התנגדות מרובה 5, 14 היא חשובה לניהול התנגדות שדה. ראוי להזכיר כי התנגדות קוטל עשבים אין שום קשר עם הסובלנות הטבעית שכמה מיני תערוכת עשב כלפי כמה קוטלי עשבים, למשל, מיני dicot לעומת קוטלי עשבים ACCase-עיכוב, מיני monocot לעומת 2,4-D, Equisetum arvense לעומת גלייפוסט. מאמר זה מציג גישה חזקה לבדיקת biotypes עמיד קוטל עשבים משוערים שנדגמו בתחומים שבם שליטה עניה על ידי קוטל עשבים (ים) שדווחו. גרסאות רלוונטיות לפרוטוקולים סטנדרטיים ביחס למיני העשבים המעורבים מוצגות. היתרונות על פני שיטות / פרוטוקולים חלופיים המבוססים על שני bioassays הצמח כולו רק באמצעות מנה אחת קוטל עשבים 15, או זרעי טיפול בצלחות פטרי 8 קשורים לreliab גבוה יותרility והאפשרות להסיק רמת ההתנגדות בגלל ההכללה של שני מינוני קוטל עשבים בניסויים. עם זאת, לבדיקת התנגדות שגרתית, יכולות להיות מיושמות באותן שיטות וברק מנה אחת קוטל עשבים, ולכן הפחתת העלויות. כמו גם לאפשר אישור של מעמד ההתנגדות, המידע שהושג יכול לשמש לייעול פעולות המחקר הבא ו / או להמציא אסטרטגיות ניהול קול התנגדות.

<table><tbody><tr><td>Paper bags</td><td>Celcar SAS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic dishes</td><td>ISI plast S.p.A.</td><td>SO600</td><td>Transparent plastic</td></tr><tr><td>Sulfuric acid 95-98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320501</td><td></td></tr><tr><td>Non-woven fabric</td><td>Carretta Tessitura</td><td>Art.TNT17</td><td>Weight 17 g m&lt;sup&gt;-2&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>Chloroform &gt;99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>Potassium nitrate &gt;99.0%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8394</td><td></td></tr><tr><td>Plastic containers</td><td>Giganplast</td><td>1875/M</td><td>600 x 400 x 110 mm</td></tr><tr><td>Plastic trays</td><td>Piber plast</td><td>G1210A</td><td>325 x 265 x 95 mm</td></tr><tr><td>Polystyrene trays</td><td>Plastisavio</td><td>S24</td><td>537 x 328 x 72 mm, 24 round cells (6x4)</td></tr><tr><td>Copper sulfate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451657</td><td></td></tr><tr><td>Agriperlite</td><td>Blu Agroingross sas</td><td>AGRI100</td><td></td></tr><tr><td>Peat</td><td>Blu Agroingross sas</td><td>TORBA250</td><td></td></tr><tr><td>Germination cabinet</td><td>KW</td><td>W87R</td><td></td></tr><tr><td>Nozzles</td><td>Teejet</td><td>XR11002-VK, TP11001-VH</td><td>The second type of nozzles are used only for glyphosate</td></tr><tr><td>Barcode generator</td><td>Toshiba TEC</td><td>SX4</td><td></td></tr><tr><td>Labels with barcode</td><td>Felga</td><td>TT20200</td><td>Stick-in labels with rounded corners</td></tr><tr><td>Barcode reader</td><td>Cipherlab</td><td>8300-L</td><td>Portable data terminal</td></tr><tr><td>Bench sprayer</td><td></td><td></td><td>Built in house</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Herbicides included in the results:&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Commercial product&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Active ingredient&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Altorex</td><td>imazamox</td><td>BASF</td><td></td></tr><tr><td>Azimut</td><td>florasulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Biopower</td><td></td><td>Bayer Crop Science</td><td>Surfact to be used with Hussar WG</td></tr><tr><td>Dash</td><td></td><td>BASF</td><td>Surfact to be used with Altorex</td></tr><tr><td>Granstar</td><td>tribenuron-methyl</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>Gulliver</td><td>azimsulfuron</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>Hussar WG</td><td>iodosulfuron</td><td>Bayer Crop Science</td><td></td></tr><tr><td>Nominee</td><td>bispyribac-Na</td><td>Bayer Crop Science</td><td></td></tr><tr><td>Roundup</td><td>glyphosate</td><td>Monsanto</td><td></td></tr><tr><td>Trend</td><td></td><td>Dupont</td><td>Surfact to be used with Granstar and Gulliver</td></tr><tr><td>Viper</td><td>penoxsulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Weedone LV4</td><td>2,4-D</td><td>Isagro</td><td></td></tr></tbody></table>

protocols for robust herbicide resistance testing in different weed species

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented protocols, based on whole-plant bioassays performed in a greenhouse, can be readily adapted to a wide range of weed species and herbicides through appropriate variants. Seed samples from plants that survived a field herbicide treatment are collected and stored dry at low temperature until used. Germination methods differ according to weed species and seed dormancy type. Seedlings at similar growth stage are transplanted and maintained in the greenhouse under appropriate conditions until plants have reached the right growth stage for herbicide treatment. Accuracy is required to prepare the herbicide solution to avoid unverifiable mistakes. Other critical steps such as the application volume and spray speed are also evaluated. The advantages of this protocol, compared to others based on whole plant bioassays using one herbicide dose, are related to the higher reliability and the possibility of inferring the resistance level. Quicker and less expensive in vivo or in vitro diagnostic screening tests have been proposed (Petri dish bioassays, spectrophotometric tests), but they provide only qualitative information and their widespread use is hindered by the laborious set-up that some species may require. For routine resistance testing, the proposed whole plant bioassay can be applied at only one herbicide dose, so reducing the costs.

כדי להעריך את המצב של התנגדות אוכלוסייה עמידה משוערת, זה הוא יסוד לכולל בדיקה רגישה בassay על מנת לוודא את יעילות קוטלי העשבים. התוצאות של בדיקת סקר שנערכו על פ אוכלוסיות rhoeas, עשב שפשט על שדות חיטה, מדווחות באיור 2, שבו היעילות של ארבעה קוטלי עשבים הודעה הופעה-על בדיקה רגישה (09-36) ועל אחד החשודים העמידים (10-91) מוצגות. אוכלוסייה 09-36 נשלטה לחלוטין על ידי ALS מעכב iodosulfuron בעוד שרק אחד שרד צמח המינון 1x של שני קוטלי העשבים ALS האחרים שנבדקו, florasulam וtribenuron-מתיל (איור 2). במקום זאת, כ -60% מהמפעלים של אוכלוסייה 10-91 שרדו שני מינונים של קוטל העשבים iodosulfuron וtribenuron-מתיל וסביב 50% שרדו את מינון 1x של florasulam. תוצאות אלו מאשרות כי האוכלוסייה 10-91 היא עמידה מאוד (RR) ל- מתיל tribenuron ועמיד iodosulfuron ו(R) לflorasulam. תגובה שונה נצפתה עם 2,4-D, קוטל עשבים שיש SOA שונה (כלומר, היא מחקה אוקסין אנדוגני), בשימוש נרחב לשלוט עשבי dicot בחיטה. רק 33% ממפעלים של סימון S נהרגו עם קוטל עשבים זה במינון 1x וערך VEB היה&gt; 20% (איור 2). חוסר היעילות באוכלוסיית הבדיקה לא לאשר אם האוכלוסייה 10-91 היא עמידה לקוטל עשבים זה או לא. במקרה זה מומלץ לבצע את הניסוי שוב ואם התוצאות יאושרו, לשנות את אוכלוסיית S. דוגמא לשליטה טובה של הבדיקה רגישה מדווחת באיור 3. Spp Echinochloa. אוכלוסיית 07-16L נשלט לחלוטין על ידי כל קוטלי העשבים במינון המומלץ השדה (1x). במקרה זה, ניתן לומר שהאוכלוסייה 08-42 היא מאוד צלב עמידה לכל מעכבי ALS נבדקו, כלומר, azimsulfuron, bispyribac-Na, imazamox וpenoxsulam. פרק לא טופלאק בשתי האוכלוסיות דיווח על השמאל. צמחים אלו משמשים לחישוב VEB; הסכום של ביומסה מוערך חזותי מגש על ידי מגש נותן ציון של 10 לבדיקה לא טופלה ולאחר מכן הקצאת ציון בין 0, ללשכפל ללא כל רקמות צמח ירוקות, עד 10, כאשר ביומסה דומה לטופל לא לבדוק (איור 3). דוגמא נוספת לתפוקה דווחה באיור 4, שבו הישרדות מפעל של spp Lolium. לגלייפוסט מוצג. האוכלוסיות שנבדקו נאספו במערכות חיתוך מבוסס חיטה בי גלייפוסט מפעיל לחץ מבחר שונה (כלומר, מדי פעם או 1-2 טיפולים בשנה או 3-פעמים בשנה). צמחים רוססו בשלב מוקדם tillering (BBCH 14-21) באמצעות שני מינונים של גלייפוסט: 480 ו1,440 ז ע&quot;א חה -1, המייצגים את המינימום ומינון מרבי מומלצת לשדה עשבים שנתי (כלומר, therophytes) בצמיחה שרחגיל. הנתונים נאספו ארבעה שבועות לאחר טיפול. בהתבסס על שני הניסויים, שבע של האוכלוסיות שנבדקו היו שיעור הישרדות של 80% או יותר (אוכלוסיות 343, 383, 384, 403, 509, 512 ו537) במינון הנמוך ביותר מיושם אך רק 50% ממפעלים של אוכלוסיות 403 ו 509 שרדו את המינון הגבוה ביותר גלייפוסט. הייתה אוכלוסייה אחת שיעור הישרדות של כ -40% ב1x מנה, ואילו רק כמה צמחים של אוכלוסייה 509 שרדו את המינון הנמוך ביותר ואוכלוסיית 508 הייתה בשליטה מלאה בכל מנה. לסיכום, ניסויים אלה הראו רמות שונות של התנגדות לגלייפוסט, כי לעתים קרובות לידי ביטוי את ההיסטוריה של שימוש בקוטל עשבים השדה. רמת התנגדות גלייפוסט הייתה גבוהה יותר עבור האוכלוסיות שטופלו בעוצמה רבה יותר: כלומר, מספר היישומים בתחום בשנה ומספר השנים של לחץ בחירה היה גבוהים יותר. הפרוטוקול המתואר לקוטל עשבים אחד (איור 4) יכול להיות מיושם על רבים אחרים שיש diffeלשכור SOA; בדרך זו ניתן לקבוע את דפוס ההתנגדות של אוכלוסיות אחד או יותר. דוגמא של השתנות דפוס התנגדות של spp Echinochloa. אוכלוסיות מדווחות בטבלה 1. נתונים ההסטוריים של שימוש קוטל עשבים ויבול ניהול שהתקבל מהאיכר ציינו כי קוטלי עשבים ALS-עיכוב היו סוכן הבחירה (כלומר, penoxsulam או imazamox). מבחן ההתנגדות בוצע לכן עם שלושה עיכוב ALS קוטלי עשבים (azimsulfuron, penoxsulam וimazamox) השייכים למשפחות כימיות שונות, וקוטל עשבים אחד שיש עוד SOA, profoxydim קוטל העשבים ACCase-עיכוב. הבדיקה רגישה (07-16L) נשלטה לחלוטין על ידי כל נבדקו קוטלי העשבים (טבלת 1). שלושה דפוסי התנגדות התגלו: שלושה עשר אוכלוסיות הביאו כעמיד רק למעכבי ALS, ארבע אוכלוסיות הביאו כעמיד רק לprofoxydim מעכב ACCase, ושלוש אוכלוסיות הראו מרובות<html> דפוס התנגדות לשני profoxydim מעכב ACCase ומעכבי ALS. בתוך כל דפוס התנגדותו ניתן להבחין biotypes שונה, למשל, ארבע אוכלוסיות עמידות למעכבי ALS שרדו רק טיפולים עם azimsulfuron sulfonylurea בעוד שתיים מהאוכלוסיות רבת-העמידים שרדו טיפול רק עם azimsulfuron מעכב ALS אך די בשליטת penoxsulam ו imazamox. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52923/52923fig1.jpg"/> איור 1. דוגמא של ג difformis, מיני עשבים שפשטו על אורז אורז, ניסוי הגדרה. מגשי קלקר הם הכניסו לתוך מיכלי פלסטיק ונחסמו על ידי מוטות נירוסטה דפוקה כדי למנוע מהם צף. מים נשמר 1-2 סנטימטר מתחת לרמה של פני השטח האדמה כדי לחקות את תנאי אורז אורז. תמונה צולמה ארבעה שבועות לאחר הטיפול.p_upload / 52,923 52923fig1large.jpg &quot;target =&quot; / _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52923/52923fig2.jpg"/> תגובת איור 2. שני פ אוכלוסיות rhoeas לפרסם הופעת קוטלי עשבים. אפקט של iodosulfuron, tribenuron, florasulam ו2,4-D נבדק במינון המומלץ השדה (1x) ובשלוש פעמים ש( 3x) על הישרדות צמח (סורגים כחולים) וביומסה הערכה חזותית ( VEB; ברים אדומים) של הבדיקה רגישה (09-36) ושל אוכלוסייה עמידה (10-91). ההערכה נעשתה ארבעה שבועות לאחר טיפול קוטל העשבים. הישרדות הצמח וVEB באים לידי ביטוי כאחוז ממספר הצמחים שטופלו וVEB של הבדיקות לא טופלו (%). הקו האופקי ב 20% מהישרדות הצמח מייצג את הסף המפלה בין אוכלוסיות עמידות ורגישות כאשר מטופלים צמחים ב1x המינון. ברים אנכייםמייצג סטיות התקן מחושב על הערך הממוצע של שתי חזרות. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52923/52923fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52923/52923fig3.jpg"/> איור 3. תוצאות חזותי של הקרנה על שני spp Echinochloa. אוכלוסיות. הבדיקה רגישה, 07-16L (S), והאוכלוסייה עמידה, 08-42, נבדקו עם ארבעה מעכבי ALS (דיווחו על ימין) בשתי מנות, 1x ו3x, (דווחו בתחתית). לבדיקת S רק תוצאות של 1x המינון מדווחות, כי כל הצמחים כבר שלטו במינון ש. שלוש דוגמאות של ציון VEB מדווחות באדום: 0 = כל הצמחים מתים, 10 = כל הצמחים שרדו וביומסה היא דומה לבדיקה לא טופלה (NT) (דיווחה על השמאל), 5 = ביומסה היא כמחצית מזה ב מגש של מטופלים-לאלבדוק. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52923/52923fig3highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52923/52923fig4.jpg"/> איור 4. שיעור הישרדות מפעל לעשרה spp Lolium. אוכלוסיות שנבדקו עם גלייפוסט. הישרדות צמח שנרשמה בשני ניסויים (סורגים כחולים וכתומים לברי Exp. I ו- II, בהתאמה). הנתונים מבוטאים באחוזים (%) של מספר הצמחים שטופלו. שתי בדיקות רגישות היו בשליטה מלאה במינון 1x ולכן לא דיווחו בגרף. שתי מנות נבדקו, המינימום (1x = 480 גרם AE חה -1) ומקסימום (3x = 1,440 ז ע&quot;א חה -1) מינונים דיווח על תווית המוצר. הקו האופקי ב 20% מהישרדות הצמח מייצג את הסף המפלה בין אוכלוסיות עמידות ורגישות כאשר הצמחים היו תענוגאד ב1x המינון. קווים אנכיים מייצגים סטיות התקן מחושב על הערך הממוצע של שתי חזרות. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52923/52923fig4highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52923/52923table1.jpg"/> טבלת 1. מעמד התנגדות של עשרים ואחד של אוכלוסיות spp Echinochloa. בדיקה רגיש (07-16L) מדווחת בנועז. רמות ההתנגדות מדווחות לכל אחד מארבעת קוטלי העשבים נבדקו (מעכב ACCase אחד, profoxydim, ושלושה מעכבי ALS, azimsulfuron, penoxsulam וimazamox) לפי ארבע קטגוריות: פחות מ -5% S = צמחים שרדו 1x מינון קוטל עשבים, SR = הישרדות צמח נעה בין 5% ל -20% ב1x מינון קוטל עשבים, R = יותר מ -20% מצמחים שרדו 1x מינון קוטל עשבים, RR = הישרדות מפעל היה יותר מ -20% במינון קוטל עשבים1x ויותר מ -10% במינון 3x. דפוסי התנגדות שונים מודגשים: אדום = התנגדות רק למעכב ACCase, = התנגדות צהובה רק למעכבי ALS (ים), כתומה = התנגדות למעכב ACCase ומעכב ALS אחד לפחות.

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species at JoVE.com

Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

פרוטוקולים לקוטל עשבים חזקים התנגדות בדיקה במיני עשבים שונים

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

protocols-for-robust-herbicide-resistance-testing-different-weed

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

14.5K Views.  National Research Council (CNR), Italy. A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

Video: Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

Gene deletion plays an important role in the analysis of gene function. One of the most efficient methods to disrupt genes in a targeted manner is the replacement of the entire gene with a selectable marker via homologous recombination. During homologous recombination, exchange of DNA takes place between sequences with high similarity. Therefore, linear genomic sequences flanking a target gene can be used to specifically direct a selectable marker to the desired integration site. Blunt ends of the deletion construct activate the cell&#39;s DNA repair systems and thereby promote integration of the construct either via homologous recombination or by non-homologous-end-joining. In organisms with efficient homologous recombination, the rate of successful gene deletion can reach more than 50% making this strategy a valuable gene disruption system. The smut fungus Ustilago maydis is a eukaryotic model microorganism showing such efficient homologous recombination. Out of its about 6,900 genes, many have been functionally characterized with the help of deletion mutants, and repeated failure of gene replacement attempts points at essential function of the gene. Subsequent characterization of the gene function by tagging with fluorescent markers or mutations of predicted domains also relies on DNA exchange via homologous recombination. Here, we present the U. maydis strain generation strategy in detail using the simplest example, the gene deletion.

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

We describe a robust gene replacement strategy to genetically manipulate the smut fungus Ustilago maydis. This protocol explains how to generate deletion mutants to investigate infection phenotypes. It can be extended to modify genes in any desired way, e.g., by adding a sequence encoding a fluorescent protein tag.

מניפולציה גנטית של פתוגן הצמח<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; ללמוד ביולוגיה פטרייתי אינטראקציות חיידק צמח

Gene deletion plays an important role in the analysis of gene function. One of the most efficient methods to disrupt genes in a targeted manner is the ...

Genetics

Measuring Rates of Herbicide Metabolism in Dicot Weeds with an Excised Leaf Assay

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we developed an excised leaf assay combined with a vegetative cloning strategy to normalize herbicide uptake and remove translocation as contributing factors in herbicide-resistant (R) and &#8211;sensitive (S) waterhemp populations. Biokinetic analyses of organic pesticides in plants typically include the determination of uptake, translocation (delivery to the target site), metabolic fate, and interactions with the target site. Herbicide metabolism is an important parameter to measure in herbicide-resistant weeds and herbicide-tolerant crops, and is typically accomplished with whole-plant tests using radiolabeled herbicides. However, one difficulty with interpreting biokinetic parameters derived from whole-plant methods is that translocation is often affected by rates of herbicide metabolism, since polar metabolites are usually not mobile within the plant following herbicide detoxification reactions. Advantages of the protocol described in this manuscript include reproducible, accurate, and rapid determination of herbicide degradation rates in R and S populations, a substantial decrease in the amount of radiolabeled herbicide consumed, a large reduction in radiolabeled plant materials requiring further handling and disposal, and the ability to perform radiolabeled herbicide experiments in the lab or growth chamber instead of a greenhouse. As herbicide resistance continues to develop and spread in dicot weed populations worldwide, the excised leaf assay method developed and described herein will provide an invaluable technique for investigating non-target site-based resistance due to enhanced rates of herbicide metabolism and detoxification.

This manuscript describes how herbicide metabolism rates can be effectively quantified with excised leaves from a dicot weed, thereby reducing variability and removing any possible confounding effects of herbicide uptake or translocation typically observed in whole-plant assays.

מדידת מחירים של קוטל העשבים מטבוליזם בעשבי Dicot עם Assay נכרת עלה

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we ...

Protocols for Quantifying Transferable Pesticide Residues in Turfgrass Systems

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes onto humans. For this reason, transferable pesticide residue experiments are required for registration and re-registration by the United States Environmental Protection Agency (USEPA). Although such experiments are required, limited specificity is required pertaining to experimental approach. Experimental approaches used to assess pesticide transfer to humans including hand wiping with cotton gloves, modified California roller (moving a roller of known mass over cotton cloth) and soccer ball roll (ball wrapped with sorbent strip) over three treated turfgrass species (creeping bentgrass, hybrid bermudagrass and tall fescue maintained at 0.4, 5 and 9 cm, respectively) are presented. The modified California roller is the most extensively utilized approach to date, and is best suited for use at low mowing heights due to its reproducibility and large sampling area. The soccer ball roll is a less aggressive transfer approach; however, it mimics a very common occurrence in the most popular international sport, and has many implications for nondietary pesticide exposure from hand-to-mouth contact. Additionally, this approach may be adjusted for other athletic activities with limited modification. Hand wiping is the best approach to transfer pesticides at higher mowing heights, as roller-based approaches can lay blades over; however, it is more subjective due to more variable sampling pressure. Utility of these methods across turfgrass species is presented, and additional considerations to conduct transferable pesticide residue research in turfgrass systems are discussed.

Transferable pesticide residue experiments in turfgrass systems are integral components of human risk exposure assessments. Experimental approaches to measure transferable residues should be adjusted to the human interaction of interest and turfgrass system dynamics. Three transferable pesticide residue protocols are presented and the suitability across three turfgrass systems is discussed.

פרוטוקולים לכימות שאריות חומר הדברה להעברת מערכות Turfgrass

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes ...

Screening Cotton Genotypes for Reniform Nematode Resistance

A rapid non-destructive reniform nematode (Rotylenchulus reniformis) screening protocol is needed for the development of resistant cotton (Gossypium hirsutum) varieties to improve nematode management. Most protocols involve extracting vermiform nematodes or eggs from the cotton root system or potting soil to determine population density or reproduction rate. These approaches are generally time-consuming with a small number of genotypes evaluated. An alternative approach is described here in which the root system is visually examined for nematode infection. The protocol involves inoculating cotton seedling 7 days after planting with vermiform nematodes and determining the number of females attached to the root system 28 days after inoculation. Data are expressed as the number of females per gram of fresh root weight to adjust for variation in root growth. The protocol provides an excellent method for evaluating host-plant resistance associated with the ability of the nematode to establish an infection site; however, resistance that hinders nematode reproduction is not assessed. As with other screening protocols, variation is commonly observed in nematode infection among individual genotypes within and between experiments. Data are presented to illustrate the range of variation observed using the protocol. To adjust for this variation, control genotypes are included in experiments. Nonetheless, the protocol provides a simple and rapid method to evaluate host-plant resistance. The protocol has been successfully used to identify resistant accessions from the G. arboreum germplasm collection and evaluate segregating populations of more than 300 individuals to determine the genetics of resistance. A vegetative propagation method for recovering plants for resistance breeding was also developed. After removal of the root system for nematode evaluation, the vegetative shoot is replanted to allow the development of a new root system. More than 95% of the shoots typically develop a new root system with plants reaching maturity.

Here, a protocol is presented for the rapid non-destructive screening of cotton genotypes for reniform nematode resistance. The protocol involves visually examining the roots of nematode-infected cotton seedlings to determine infection response. The vegetative shoot from each plant is then propagated to recover plants for seed production.

הקרנת כותנה גנוטיפים לעמידות בפני ההתנגדות של רנפורם

A rapid non-destructive reniform nematode (Rotylenchulus reniformis) screening protocol is needed for the development of resistant cotton (Gossypium ...

Quantification of the Potential Impact of Glyphosate-Based Products on Microbiomes

Glyphosate-based products (GBP) are the most common broad-spectrum herbicides worldwide. The target of glyphosate is the enzyme 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) in the shikimate pathway, which is virtually universal in plants. The inhibition of the enzyme stops the production of three essential amino acids: phenylalanine, tyrosine, and tryptophan. EPSPS is also present in fungi and prokaryotes, such as archaea and bacteria; thus, the use of GBP may have an impact on the microbiome composition of soils, plants, herbivores, and secondary consumers. This article aims to present general guidelines to assess the effect of GBP on microbiomes from field experiments to bioinformatics analyses and provide a few testable hypotheses. Two field experiments are presented to test the GBP on non-target organisms. First, plant-associated microbes from 10 replicated control and GBP treatment plots simulating no-till cropping are sampled and analyzed. In the second experiment, samples from experimental plots fertilized by either poultry manure containing glyphosate residues or non-treated control manure were obtained. Bioinformatics analysis of EPSPS protein sequences is utilized to determine the potential sensitivity of microbes to glyphosate. The first step in estimating the effect of GBP on microbiomes is to determine their potential sensitivity to the target enzyme (EPSPS). Microbial sequences can be obtained either from public repositories or by means of PCR amplification. However, in the majority of field studies, microbiome composition has been determined based on universal DNA markers such as the 16S rRNA and the internal transcribed spacer (ITS). In these cases, sensitivity to glyphosate can only be estimated through a probabilistic analysis of EPSPS sequences using closely related species. The quantification of the potential sensitivity of organisms to glyphosate, based on the EPSPS enzyme, provides a robust approach for further experiments to study target and non-target resistant mechanisms.

Glyphosate-based products (GBP) are the most common broad-spectrum herbicides worldwide. In this article, we introduce general guidelines to quantify the effect of GBP on microbiomes, from field experiments to bioinformatics analyses.

כימות ההשפעה הפוטנציאלית של מוצרים מבוססי גלייפוסט על מיקרוביום

Glyphosate-based products (GBP) are the most common broad-spectrum herbicides worldwide. The target of glyphosate is the enzyme ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Biology

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical specimens, have been applied to uncover these resistance mechanisms to facilitate follow-up care. Although these approaches have led to clinically relevant discoveries, difficulties in attaining the relevant patient material or in deconvoluting the genomic data collected from these specimens have severely hampered the path towards a cure. To this end, we here describe a tool for expeditious discovery that may guide improvement in first-line therapies and alternative clinical management strategies. By coupling preclinical in vitro or in vivo drug selection with next-generation sequencing, it is possible to identify genomic structural variations and/or gene expression alterations that may serve as functional drivers of resistance. This approach facilitates the spontaneous emergence of alterations, enhancing the probability that these mechanisms may be observed in the patients. In this protocol we provide guidelines to maximize the potential for uncovering single nucleotide variants that drive resistance using adherent lines.

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Drug resistance to targeted therapeutics is widespread and the need to identify mechanisms of resistance--prior to or following clinical onset--is critical for guiding alternative clinical management strategies. Here, we present a protocol to couple derivation of drug-resistant lines in vitro with sequencing to expedite discovery of these mechanisms.

הטמעה של<em&gt; במבחנה</em&gt; תרופות מבחני התנגדות: למקסם את הפוטנציאל לחשיפת מנגנוני התנגדות קלינית רלוונטיים

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical ...

Medicine

Characterizing Herbivore Resistance Mechanisms: Spittlebugs on Brachiaria spp. as an Example

Plants can resist herbivore damage through three broad mechanisms: antixenosis, antibiosis and tolerance1. Antixenosis is the degree to which the plant is avoided when the herbivore is able to select other plants2. Antibiosis is the degree to which the plant affects the fitness of the herbivore feeding on it1.Tolerance is the degree to which the plant can withstand or repair damage caused by the herbivore, without compromising the herbivore's growth and reproduction1. The durability of herbivore resistance in an agricultural setting depends to a great extent on the resistance mechanism favored during crop breeding efforts3.
We demonstrate a no-choice experiment designed to estimate the relative contributions of antibiosis and tolerance to spittlebug resistance in Brachiaria spp. Several species of African grasses of the genus Brachiaria are valuable forage and pasture plants in the Neotropics, but they can be severely challenged by several native species of spittlebugs (Hemiptera: Cercopidae)4.To assess their resistance to spittlebugs, plants are vegetatively-propagated by stem cuttings and allowed to grow for approximately one month, allowing the growth of superficial roots on which spittlebugs can feed. At that point, each test plant is individually challenged with six spittlebug eggs near hatching. Infestations are allowed to progress for one month before evaluating plant damage and insect survival. Scoring plant damage provides an estimate of tolerance while scoring insect survival provides an estimate of antibiosis. This protocol has facilitated our plant breeding objective to enhance spittlebug resistance in commercial brachiariagrases5.

Characterizing Herbivore Resistance Mechanisms: Spittlebugs on Brachiaria spp. as an Example

This video explains mechanisms of host plant resistance to herbivory and demonstrates a no-choice test that estimates the relative contributions of antibiosis and tolerance to spittlebug resistance in Brachiaria spp.

אפיון מנגנוני ההתנגדות אוכלי עשב: Spittlebugs על Brachiaria Spp. כדוגמה

Plants can resist herbivore damage through three broad mechanisms: antixenosis, antibiosis and tolerance1. Antixenosis is the degree to which the plant is ...

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in 73 different countries throughout Africa, Asia, Europe, New Zealand, Oceania and the Americas1-2. Cogongrass forms rapidly-spreading, monodominant stands that displace a large variety of native plant species and in turn threaten the native animals that depend on the displaced native plant species for forage and shelter. To add to the problem, an ornamental variety [I. cylindrica var. koenigii (Retzius)] is widely marketed under the names of Imperata cylindrica 'Rubra', Red Baron, and Japanese blood grass (JBG). This variety is putatively sterile and noninvasive and is considered a desirable ornamental for its red-colored leaves. However, under the correct conditions, JBG can produce viable seed (Carol Holko, 2009 personal communication) and can revert to a green invasive form that is often indistinguishable from cogongrass as it takes on the distinguishing characteristics of the wild-type invasive variety4 (Figure 1). This makes identification using morphology a difficult task even for well-trained plant taxonomists. Reversion of JBG to an aggressive green phenotype is also not a rare occurrence. Using sequence comparisons of coding and variable regions in both nuclear and chloroplast DNA, we have confirmed that JBG has reverted to the green invasive within the states of Maryland, South Carolina, and Missouri. JBG has been sold and planted in just about every state in the continental U.S. where there is not an active cogongrass infestation. The extent of the revert problem in not well understood because reverted plants are undocumented and often destroyed.
Application of this molecular protocol provides a method to identify JBG reverts and can help keep these varieties from co-occurring and possibly hybridizing. Cogongrass is an obligate outcrosser and, when crossed with a different genotype, can produce viable wind-dispersed seeds that spread cogongrass over wide distances5-7. JBG has a slightly different genotype than cogongrass and may be able to form viable hybrids with cogongrass. To add to the problem, JBG is more cold and shade tolerant than cogongrass8-10, and gene flow between these two varieties is likely to generate hybrids that are more aggressive, shade tolerant, and cold hardy than wild-type cogongrass. While wild-type cogongrass currently infests over 490 million hectares worldwide, in the Southeast U.S. it infests over 500,000 hectares and is capable of occupying most of the U.S. as it rapidly spreads northward due to its broad niche and geographic potential3,7,11. The potential of a genetic crossing is a serious concern for the USDA-APHIS Federal Noxious Week Program. Currently, the USDA-APHIS prohibits JBG in states where there are major cogongrass infestations (e.g., Florida, Alabama, Mississippi). However, preventing the two varieties from combining can prove more difficult as cogongrass and JBG expand their distributions. Furthermore, the distribution of the JBG revert is currently unknown and without the ability to identify these varieties through morphology, some cogongrass infestations may be the result of JBG reverts. Unfortunately, current molecular methods of identification typically rely on AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphisms) and DNA sequencing, both of which are time consuming and costly. Here, we present the first cost-effective and reliable PCR-based molecular genotyping method to accurately distinguish between cogongrass and JBG revert.

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

We provide a cost-effective and rapid molecular genotyping protocol that employs variety-specific PCR primers that target DNA sequence differences within the chloroplast trnL-F spacer region to differentiate between varieties of Imperata cylindrica (cogongrass) that cannot be distinguished by morphology alone. These varieties include the federally listed noxious weed, cogongrass and closely-related, wide-spread ornamental variety, I. cylindrica var. koenigii (Japanese blood grass).

PCR מבוסס genotyping שיטה להבחין בין זנים wild-type ו נוי של Imperata cylindrica</em

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in ...

Repeatable Stair-step Assay to Access the Allelopathic Potential of Weedy Rice (Oryza sativa ssp.)

Weed competition contributes significantly to yield losses in cropping systems worldwide. The evolution of resistance in many weed species to continuously applied herbicides has presented the need for additional management methods. Allelopathy is a physiological process that some plant species possess that provide the plant with an advantage over its neighbors. Allelopathic crop varieties would be equipped with the ability to suppress the growth of surrounding competitors, thus reducing potential yield loss due to weed interference. This paper focuses on the construction and operation of a stair-step assay used for the screening of the allelopathic potential of a donor species (Oryza sativa) against a receiver weed species (Echinochloa crus-galli) in a greenhouse setting. The structure described in this paper serves as a stand for the plant samples and incorporates a timed watering system for the accumulation and distribution of allelochemicals. Allelochemicals produced by the plant roots are allowed to flow downward through a series of four pots separately into a collection tank and recycled back to the top plant through electric pumps. This method of screening provides an avenue for the allelochemicals from the donor plant to reach receiver plants without any resource competition, thus allowing quantitative measurement of the allelopathic potential of the selected donor plant. The allelopathic potential is measurable through the height reduction of the receiver plants. Preliminary screening data for the effectiveness of this method demonstrated height reduction in the receiver species, barnyardgrass (E. crus-galli), and thus the presence of allelopathic residues from the donor plant, weedy rice (Oryza sativa).

Repeatable Stair-step Assay to Access the Allelopathic Potential of Weedy Rice Oryza sativa ssp.

Allelopathy has shown promise as a useful supplemental weed control strategy in cropping systems. To determine the allelopathic potential of a desired plant specimen, a stair-step screening method is provided.

מדרגות לשחזור-שיטת הצעד כדי לגשת לפוטנציאל אללופתיה של אורז Weedy (Oryza sativa ssp.)

Weed competition contributes significantly to yield losses in cropping systems worldwide. The evolution of resistance in many weed species to continuously ...

פרוטוקולים לקוטל עשבים חזקים התנגדות בדיקה במיני עשבים שונים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מניפולציה גנטית של פתוגן הצמח