Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפיתוח ספרואידים מלנומה תלת מימדיים של הלחמית והענבייה ושימוש באלקטרודות מותאמות אישית כף יד לאלקטרוכימותרפיה במבחנה של ספרואידים תלת מימדיים בבאר תרבית. זה מציע נקודות מבט חדשות בשימוש באלקטרוכימותרפיה בטיפול במלנומה עינית.

Abstract

אלקטרוכימותרפיה (ECT) היא שילוב של היווצרות נקבוביות חולפת לאחר יישום פולס חשמלי עם מתן תרופות ציטוטוקסיות, מה שמשפר את ההשפעה הציטוטוקסית של החומר המיושם עקב שינויים בממברנה. מערכות תרבית תלת מימד במבחנה מדמות את צמיחת הגידול in vivo ושומרות על המאפיינים הביולוגיים של הגידולים בצורה מדויקת יותר מאשר תרביות תאים חד-שכבתיות קונבנציונליות. אנו מתארים פרוטוקול לפיתוח אורגנואידים תלת מימדיים של גידול באמצעות קווי תאי מלנומה של הלחמית (CM) ומלנומה ענבית (UM) וכן שימוש באלקטרודות מותאמות אישית ידניות, המתאימות ל-ECT במבחנה בתרבית היטב ללא הרס של סביבת הגידול. פרוטוקול זה מנתח את התרבית והצמיחה של ספרואידים תלת-ממדיים CM ו-UM ואת תגובתם לבלאומיצין (2.5 מיקרוגרם/מ"ל) בלבד, אלקטרופורציה (EP) (750 וולט/ס"מ, 8 פולסים, 100 מיקרון, 5 הרץ) לבד, ו-ECT כשילוב של EP ובלאומיצין. ריכוז התרופה והגדרות ה-EP המשמשות בפרוטוקול זה נקבעו כתנאי ECT מועדפים על פי ניסויים קודמים. הבדיקה ששימשה לקביעת כדאיות הכדור נערכה 3-7 ימים לאחר הטיפול. ההשפעה על הכדאיות והצמיחה של ספרואידים של גידול תלת מימד הייתה משמעותית רק לאחר ECT. האלקטרודות המותאמות אישית מתוארות בפירוט על מנת להקל על יישום פולסים בתרבית היטב. טיפול חדשני זה בספרואידים תלת מימדיים UM ו-CM מציב קרש קפיצה ליישום קליני עתידי.

Introduction

מלנומה עגלגלית (UM) היא הגידול התוך עיני הראשוני השכיח ביותר בקרב מבוגרים, ואילו מלנומה של הלחמית (CM) מייצגת 2% מכלל המלנומות בעיניים 1,2,3,4,5,6. ברכיתרפיה, רדיותרפיה בקרן פרוטונים ופוטותרפיה הם טיפולי הקו הראשון ב-UM, בעוד שהסרת כדור הארץ עשויה להיות נחוצה 1,2,3. הטיפול ב-CM משתנה בין מרכזים אונקולוגיים של העין; ביופסיה כריתה ואחריה כימותרפיה מקומית ו/או טיפול בקרינה היא גישת הטיפול השכיחה ביותר4. למרות הטיפול, CM קשור לתמותה של 25%-30%5.

יש מחסור בספרות על היווצרות ספרואידים CM ו-UM ויישום ECT במלנומה עינית 6,7,8. לספרואידים של גידול יש תכונות ביולוגיות טובות יותר מאשר תרביות תאים דו-ממדיות קונבנציונליות והוצעו ככלי שימושי לחיקוי סביבת הגידול in vivo9. אלקטרוכימותרפיה (ECT) משלבת שימוש בתרופות ציטוטוקסיות שאינן חדירות עם אלקטרופורציה (EP)10. EP הוא יישום מקומי של פולסים חשמליים קצרים ואינטנסיביים המחלחלים באופן זמני לתאים לעלייה מקומית של ספיגת תרופות אנטי-סרטניות בתאים סרטניים וגורמת למוות מוגבר של תאים11. מחקר זה קובע פרוטוקול המתאר את התפתחותם של ספרואידים CM ו-UM וחוקר את התוצאות לאחר ECT עם בלאומיצין. פרוטוקול זה יכול לסייע לחוקרים בתחום אונקולוגיה של העיניים באמצעות שיטות טיפוליות אחרות על ספרואידים או לחקור השפעות נוספות של ECT. בשל השימוש המוגבל ב-ECT ברפואת עיניים, יש מעט ידע לגבי ההשפעה והתהליך של שיטה זו; לפיכך, ניסוי זה עשוי להרחיב את קשת אפשרויות הטיפול בעתיד. אנו מציעים הגדרת אלקטרודה ידנית מותאמת אישית חדשה, המאפשרת ECT של הספרואיד בבארות התרבות ללא כל הרס של סביבת הגידול.

Protocol

1. היווצרות ספרואידים

  1. השתמש בקווי תאים סרטניים הגדלים בדבקות ליצירת ספרואידים.
  2. ספק את כל השלבים הקשורים לתרבית תאים בתנאי ספסל סטריליים.
  3. הכן את מדיום התרבות השלם הסטנדרטי כמומלץ לקווי התאים המעניינים ומחמם ל-37 מעלות צלזיוס באמצעות אמבט מים.
    הערה: כאן, קווי תאי הלחמית האנושיים CM2005.1, CRMM1, CRMM2 וכן קווי תאי המלנומה הענביים 92.1, OMM1 ו-OMM2 שימשו ותרבו במדיום Ham F-12 המכיל 10% סרום בקר עוברי ו-RPMI המכיל 10% סרום בקר עוברי, בהתאמה.
  4. נתק את התאים המעניינים בשיטות עיכול אנזימטיות סטנדרטיות (למשל, תמיסת טריפסין-EDTA).
  5. כדי לקבוע את מספר התאים החיוניים, השעו מחדש 10 מיקרוליטר של תרחיף התאים ב-10 מיקרוליטר של תמיסה כחולה טריפן (1:1) וספרו את התאים באמצעות תא (המוציטומטר או מונה תאים אוטומטי) תוך 5 דקות. התאים צריכים להיות <90% מהמפגש ובמצב טוב.
  6. ליצירת ספרואידים, זרע 5 x 103 תאים לבאר בנפח כולל של 200 מיקרוליטר של מדיום תרבית שלם בלוחות חיבור נמוכים במיוחד של 96 בארות. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באווירה לחה המכילה 5% CO2.
    הערה: לעיכוב יעיל של התקשרות סלולרית, השתמש בלוחות הצמדה נמוכים במיוחד עם הידרוג'ל הידרופילי, לא יוני, טעון ניטרלי על פני השטח. הידרוג'ל זה מעכב אימורטליזציה של תאים ומאלץ אותם למצב מושהה כדי לבנות ספרואידים תלת מימדיים.
  7. בדוק את היווצרות הכדור באמצעות מיקרוסקופ.
    הערה: חלק מקווי התאים אינם יוצרים ספרואידים עגולים של גידול תלת מימד במעבר הראשון. לעבור את תרבית כדור הגידול לפני שהם מתחילים לפתח מרכז כהה. נתק את מסות הגידול בהתאם לקו התאים לאחר 4-10 ימים על ידי טריפסיניזציה. לאחר מכן, זרעו את התאים הבודדים בצלחת חיבור טרייה של 96 נמוכה במיוחד. על ידי חזרה על הליך זה במשך מספר מעברים, התאים יסתגלו לתרבית תלת מימדית.

2. אלקטרוכימותרפיה של ספרואידים הגידול

  1. כבקרת בדיקה, השתמש בספרואידים וספרואידים לא מטופלים שטופלו רק ב-EP או בלאומיצין בלבד.
  2. התאם את ההגדרות עבור האלקטרופורטור (ספירת דופק, תדירות דופק, משך זמן ונפחtagה; ראה טבלת חומרים). עבור תאי מלנומה, השתמש בפולסים חשמליים של 8 גלים מרובעים בעוצמה של 750 וולט/ס"מ, משך פולס של 100 מיקרון, תדר חזרה של 5 הרץ.
  3. ביום השלישי של תרבית ספרואידית, הכינו תמיסת בלאומיצין סולפט טרייה ב-PBS סטרילי בריכוז של 5 מיקרוגרם/מ"ל בשפופרת של 15 מ"ל.
  4. החלף את מדיום תרבית התאים של הספרואידים על ידי הסרת 200 מיקרוליטר של מדיום תרבית ומילוי מחדש ב-100 מיקרוליטר של מדיום תרבית שלם טרי עבור כל באר.
  5. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת בלאומיצין סולפט לכל באר (ריכוז סופי 2.5 מיקרוגרם/מ"ל). הוסף 100 מיקרוליטר של מדיום טרי לבקרות לא מטופלות וספרואידים שטופלו רק ב-EP במקום בתמיסת בלאומיצין סולפט.
  6. בצע את האלקטרופורציה.
    הערה: האלקטרודות המוצגות באיור 1 יוצרו בסדנת המחקר של אוניברסיטת האלה-ויטנברג. הם עשויים נירוסטה ומתאימים לאחיזת האלקטרופורטור. האלקטרודות תוכננו לשימוש ב-96 לוחות חיבור נמוכים במיוחד. ניתן לייצר בקלות אלקטרודות נירוסטה דומות גם ליישומים חלופיים.
    1. עקר אלקטרודות עם 70% אתנול ואפשר לאלקטרודות להתייבש. קוטר האלקטרודות הוא 1 מ"מ, המרווח בין שתי האלקטרודות הוא 4 מ"מ, והאורך של כל אלקטרודה הוא 8 מ"מ (איור 1a).
    2. הניחו את האלקטרודות בתחתית הבאר, כשהכדורים בין האלקטרודות. זה מאפשר את המיקום האידיאלי של הספרואיד בין שתי האלקטרודות (איור 1b).
    3. נענע את הצלחת כדי לאפשר לספרואידים לנוע מתחתית הבאר ולהניח אותם בין האלקטרודות. הכדור יהיה בין האלקטרודות רק לכמה שניות.
    4. התחל את האלקטרופורציה עם הגדרות מועדפות.
    5. החלף את תמיסת הבלאומיצין סולפט בבאר על ידי החלפת 150 מיקרוליטר של מדיום ב-150 מיקרוליטר של מדיום טרי.
    6. דגרו את התאים עד 10 ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באווירה לחה המכילה 5% CO2. אם הספרואידים הלא מטופלים מתחילים לפתח מרכז כהה, סיימו את הניסוי. החלף 150 מיקרוליטר ממדיום תרבית התאים כל 2-3 ימים. לפיכך, הימנע מהפרעה כדורית על ידי מיקום קצה הפיפטה באזור קצה הבאר, הטיית הצלחת ופיפטינג איטי.

3. קביעת גודל הכדור

  1. מדוד את גודל הספרואיד ביום הטיפול (נקודת ההתחלה) ו-3-7 ימים לאחר הטיפול באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר על ידי חישוב שטח החתך של הספרואידים באמצעות ImageJ Fiji11.
  2. צלם תמונה של הספרואידים הבודדים עם סרגל קנה המידה. השתמש בהגדלה שבאמצעותה כל הכדור נראה. לדוגמה, הגדלה פי 5 שימשה עבור CM2005.1. שמרו את התמונה כקובץ JPEG.
  3. נתח את גודל הספרואיד על ידי חישוב שטח החתך באמצעות ImageJ/Fiji.
    1. התקן את התוכנה (https://imagej.net/Fiji/Downloads).
    2. הפעל את ImageJ/Fiji. ייבא את תמונת הספרואיד: הקובץ > פתוח.
    3. כדי להגדיר את קנה המידה, בחר בלחצן הקו בסרגל הכלים וסמן את הקו של סרגל קנה המידה בתמונה בלחיצת עכבר: Analyze > Set Scale. באמצעות מרחק ידוע, מלא את המרחק של סרגל קנה המידה. שנה את יחידת האורך למיקרומטר. לחצו על השדה הכללי כדי להקצות את ההגדרות לכל התמונות בעלות אותו גורם הגדלה.
    4. המרת התמונה ל-8 סיביות: Image > Type >- 8 סיביות.
    5. בחר Image > Adjust > Auto Threshold (בחר > Do not reset range). הכדור מסומן באדום או שחור בהתאם לסמן הסף שנבחר. התאימו את המחוונים כך שהפיקסלים הכדוריים יהפכו לאדומים, אך פיקסלים שאינם כדוריים לא ישנו את צבעם. סגור את חלון הדו-שיח Threshold מבלי ללחוץ על אף אחד מהלחצנים.
    6. לחישוב שטח החתך של הספרואיד, בחרו 'נתח' >'קבע מידות' ולחצו על 'אזור', 'הגבל לסף' ו'תצוגה'. סגור את חלון הדו-שיח הגדרת מידות על-ידי לחיצה על אישור.
    7. להצגת התוצאות, בחרו 'נתח > נתח חלקיקים ' ושנו את הגודל (מיקרומטר2) = 10000-אינסוף כדי להסיר רעש. לחץ על הכפתור הצג תוצאות וסגור את החלון על ידי לחיצה על אישור. בתוצאות, מוצגים הספרואידים עם התווית והאזור. על-ידי חזרה על ניתוחים של מספר ספרואידים, התוצאות מפורטות בחלון התוצאות .
    8. כדי לקבוע את תגובת הטיפול היחסית של הספרואידים שטופלו ב-ECT בהשוואה לבקרות הלא מטופלות והבודדות, חשב את אחוז השינויים באזור החתך.

4. קביעת כדאיות הכדור

  1. יש למדוד את הכדאיות הספרואידית 3-7 ימים לאחר הטיפול באמצעות בדיקת כדאיות תאים המתאימה לתרביות תאים תלת מימדיות בהתאם להוראות היצרן. הבדיקה צריכה לחדור וליזה של ספרואידים גדולים כדי לאפשר זיהוי של כדאיות על ידי כימות של ATP, המסמן את נוכחותם של תאים פעילים מטבולית.
    הערה: בניסוי זה נעשה שימוש בבדיקה מבוססת לומינסנציה כשיטת קריאה. הכדאיות של הספרואידים שטופלו ב-ECT הושוותה לביקורת שבעה ימים לאחר הטיפול.

תוצאות

הניסויים נערכו עם אלקטרודות ידניות מותאמות אישית, המורכבות מפלדת אל-חלד בדרגה גבוהה. עובי האלקטרודות הוא 1 מ"מ, הרוחב הוא 4 מ"מ, המרווח בין שתי האלקטרודות הוא 4 מ"מ והאורך של כל אלקטרודה הוא 8 מ"מ (איור 1). ל-EP ולבלאומיצין לבדם אין השפעה משמעותית על הכדאיות והצמיחה של ספרואידים של גידול UM ו-CM. ECT מראה ירידה משמעותית בכדאיות הגידול ובגודל הספרואיד. אובדן ארכיטקטורת ספרואידים עם שברי תאים מפורקים סביב הספרואידים ונמק באזור המרכזי וההיקפי של כל הספרואידים שנבדקו נצפו לאחר ECT עם בלאומיצין. איור 2 מציג את התוצאות של שורות התאים CM2005.1. קווי תאי UM גרורתיים הראו תגובה גבוהה יותר בהשוואה לקווי תאים ראשוניים לאחר ECT8.

figure-results-830
איור 1: אלקטרודות כף-יד מותאמות-במיוחד. האלקטרודות עשויות מפלדת אל חלד בדרגה גבוהה. ידית האלקטרודות מסופקת עם האלקטרופורטור. עובי האלקטרודות הוא 1 מ"מ, הרוחב הוא 4 מ"מ, הפער בין שתי האלקטרודות הוא 4 מ"מ ואורך כל אלקטרודה הוא 8 מ"מ (a); אלקטרופורציה של ספרואידים בפורמט של 96 בארות (B). אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-1422
איור 2: השפעה ציטוטוקסית של אלקטרוכימותרפיה על ספרואידים של גידול קו תאי מלנומה של הלחמית CM2005.1. אלקטרוכימותרפיה (ECT, 750 וולט/ס"מ לאחר מריחת 2.5 מיקרוגרם/מ"ל בלאומיצין) גרמה להשפעות ציטוטוקסיות חזקות יותר בספרואידים בהשוואה לאלקטרופורציה (EP) בלבד או כימותרפיה באמצעות בלאומיצין (2.5 גרם/מ"ל) בלבד. ההשפעה הציטוטוקסית נמדדה על ידי חישוב שטח החתך ובדיקת כדאיות כאחוז מהביקורת הלא מטופלת שבעה ימים לאחר הטיפול. תרשימי קופסאות מציגים את שטח החתך הממוצע של ספרואידים (a); הכדאיות הממוצעת של ספרואידים (B); תמונות מייצגות של ספרואידים, סרגל קנה מידה = 200 מיקרומטר (C). אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

Discussion

EP משמש ביישומים ביוטכנולוגיים וקליניים שונים12. פיתוחים טכנולוגיים חדשים, כגון אלקטרודות שתוכננו במיוחד עם ספציפיות גבוהה לכל תא מטרה ואתר, עשויים לסייע ל-ECT למקד רקמות בכל מקום בגוף12. העיצוב והמיקום של האלקטרודות חייבים לאפשר נגישות מלאה לגידול ולהבטיח שרקמה בריאה תושפע רק באופן מינימלי או לא תיפגע מהטיפול13.

פרסומים קודמים הראו את ההשפעה של ECT על תרחיפי תאי מלנומה אנושיים במבחנה 7,8. הספרות המתייחסת ליישום ECT במודלים תלת מימדיים של תאי עיניים או סביבות דומות אחרות in vivo, המאפשרות שימוש טיפולי בטוח יותר, מוגבלת. ברון ועמיתיו מניחים כי לתאים התלת-ממדיים בפיגום במהלך הניתוח המורפולוגי יש צורה עגולה שונה מהצורה המוארכת המוצגת בתרביות הדו-ממדיות אך דומה מאוד לתאים מביופסיות של חולים9. חידוד הגדרות הטיפול והמכשירים המשמשים בתרביות תלת מימד עשוי להוביל לאופטימיזציה של פרמטרי ECT, מה שמאפשר גישה קלינית מדויקת יותר9.

אנו מתארים פיתוח טכנולוגי לגבי אלקטרודות חדשות ליישום ECT בתרביות תאים תלת מימדיות. בלאומיצין הוא החומר הציטוטוקסי הנפוץ ביותר בשילוב עם ECT11. מחקרים קודמים של קבוצתנו הראו כי הגדרות ה-EP המיושמות (750 וולט/ס"מ, 8 פולסים, 100 אלפיות השנייה, 5 הרץ) מתאימות לטיפול בגידולי עיניים במבחנה. השלבים הקריטיים של הטכניקה כוללים את הזמן הקצר הדרוש לביצוע ה-ECT בזמן שהספרואיד שוקע לאחר הגיוס, כמו גם את הממד המדויק של האלקטרודות. הצורך באלקטרודות המותאמות אישית נבע מקשיים בביצוע ECT בבארות עם המכשירים הזמינים. נתונים שלא פורסמו מהקבוצה שלנו הראו נזק מוגבר לספרואידים בעת העברת הספרואידים לבאר גדולה יותר או לקובט כדי להכין אותם לטיפול ואז בחזרה לבאר התרבית. יתרון בטכניקה המתוארת הוא היעדר מניפולציה ספרואידית לביצוע הטיפול, מכיוון שהאורגנואידים אינם מועברים לצלחות או בארות גדולות יותר. לכן, כל הספרואידים שומרים על צורתם. יתרון נוסף הוא השימוש במבחני כדאיות תלת מימדיים חזקים יותר לקביעת ציטוטוקסיות של ECT בהשוואה למבחני כדאיות סטנדרטיים, כגון בדיקת MTT. לפיכך, כל תאי הספרואיד עוברים ליזה ונדרשת שטיפת תאים נוספת, הסרת שלבי פיפטינג בינוניים ומרובים.

מגבלות השיטות המתוארות הן תוחלת החיים הקצרה של הספרואידים, המשפיעה על גודל הגידול כמו גם על נמק התאים, כפי שניתן לראות במרכז האורגנואיד של הגידול. שיעור התמותה הגבוה הנלווה הן ב-CM והן ב-UM והאפשרויות הטיפוליות המוגבלות מחייבים העשרת האפשרויות הטיפוליות הקיימות. ECT עשוי להציע שיטה מסייעת לשיפור איכות חייו של המטופל ולהאריך את הישרדותו של המטופל. תנאי מבחנה אלה מחקים סביבת in vivo עם דיוק גבוה יותר, ומציעים תוצאות מבטיחות ליישום אנושי נוסף. מחקרים עתידיים המשתמשים בספרואידים שהוכנו מתרביות ראשוניות יכולים לספק תוצאות מייצגות יותר לאופטימיזציה של הגדרות ECT לטיפול ממוקד.

Disclosures

דוח זה לא קיבל מענק ספציפי מסוכנות מימון כלשהי במגזר הציבורי, המסחרי או ללא מטרות רווח.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי קרן ד"ר רולף מ. שווייטה. המחברים מודים למרטין ג'אגר (המעבדה לרפואת עיניים ב-LUMC, ליידן, הולנד) והלן קליראי (קבוצת המחקר לאונקולוגיה של העיניים בליברפול, רפואה מולקולרית וקלינית לסרטן, אוניברסיטת ליברפול, בריטניה) על אספקת קווי תאי ה-UM. ברצוננו גם להודות לסבין הכט (מחלקת עיניים, בית החולים האוניברסיטאי האלה (זאלה), גרמניה) על הסיוע הטכני.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Bleomycin sulfateEnzoBML-AP302-001010 mg
Cell culture flask 75 cmTPPTPP90076
Cell culture flask TC175 cmSarstedt83,39,12,002Standard with Filter
CliniporatorIGEAEPS01Electroporator
Corning Costar Ultra-Low Attachment Multiple Well Plate, 96 well, round bottomCorning700796Well clear round Bottom, Ultra low attachment plates
EGF 1MGSigma-AldrichE4127-.1MG
F-12 K Nut Mix (1x)Gibco21127-022
Fetal Bovine Serum, South AmericanCorning35-079-CVLOT Nr. 35079010, Reservierungsnummer: EU00478541
FKS
KGM-2LonzaCC-3103
PBS w/o. CaCl und MgClPromoCellC-40232500 ml
Penicillin-StreptomycinSigma-AldrichP4333-100ml
RPMI 1640Gibco11504566ATCC modification, HEPES, liquid, 500 ml
Tecan Infinity M PlexTecan
Trypsin-EDTA 1x SolutionSigma-Aldrich59430C-100ml

References

  1. Kaliki, S., Shields, C. L. Uveal melanoma: relatively rare but deadly cancer. Eye (Lond). 31 (2), 241-257 (2017).
  2. Chang, A. E., Karnell, L. H., Menck, H. R. The National Cancer Data Base report on cutaneous and noncutaneous melanoma: a summary of 84,836 cases from the past decade. The American College of Surgeons Commission on Cancer and the American Cancer Society. Cancer. 83 (8), 1664-1678 (1998).
  3. Dogrusoz, M., Jager, M. J., Damato, B. Uveal Melanoma Treatment and Prognostication. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology. 6 (2), 186-196 (2017).
  4. Damato, B., Coupland, S. E. Management of conjunctival melanoma. Expert Review of Anticancer Therapy. 9 (9), 1227-1239 (2009).
  5. Norregaard, J. C., Gerner, N., Jensen, O. A., Prause, J. U. Malignant melanoma of the conjunctiva: occurrence and survival following surgery and radiotherapy in a Danish population. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 234 (9), 569-572 (1996).
  6. Fiorentzis, M., et al. Electrochemotherapy with bleomycin and cisplatin enhances cytotoxicity in primary and metastatic uveal melanoma cell lines in vitro. Neoplasma. 65 (2), 210-215 (2018).
  7. Fiorentzis, M., et al. Conjunctival melanoma and electrochemotherapy: preliminary results using 2D and 3D cell culture models in vitro. Acta Ophthalmologica. 97 (4), 632-640 (2019).
  8. Fiorentzis, M., et al. The Potential Use of Electrochemotherapy in the Treatment of Uveal Melanoma: In vitro Results in 3D Tumor Cultures and In vivo Results in a Chick Embryo Model. Cancers (Basel). 11 (9), (2019).
  9. Brun, P., et al. Cell-seeded 3D scaffolds as in vitro models for electroporation. Bioelectrochemistry. 125, 15-24 (2019).
  10. Sersa, G., et al. Electrochemotherapy in treatment of tumours. European Journal of Surgical Oncology. 34 (2), 232-240 (2008).
  11. Rueden, C. T., et al. ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data. BMC Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).
  12. Miklavcic, D., et al. Electrochemotherapy: technological advancements for efficient electroporation-based treatment of internal tumors. Medical & Biological Engineering & Computing. 50 (12), 1213-1225 (2012).
  13. Miklavcic, D., Corovic, S., Pucihar, G., Pavselj, N. Importance of tumour coverage by sufficiently high local electric field for effective electrochemotherapy. EJC Supplements. 4 (11), 45-51 (2006).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

We use cookies to enhance your experience on our website.

By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.

Learn More