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L’échographie transabdominale est décrite comme un moyen efficace et non invasif d’évaluer le statut reproducteur chez reeves' cerf muntjac. Ces méthodes peuvent être employées pour réaliser le diagnostic tôt de grossesse et pour évaluer la viabilité foetale. Les applications futures de cette technique incluent l’estimation de l’âge gestational et des effets de la maladie maternelle sur le développement foetal.
Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est, et sont actuellement à l’étude comme un modèle potentiel de transmission de maladies à prions et de pathogenèse. La transmission verticale est un domaine d’intérêt pour les chercheurs qui étudient les maladies infectieuses, y compris les maladies à prions, et ces recherches nécessitent des méthodes efficaces pour évaluer les effets de l’infection maternelle sur la performance reproductive. L’examen ultrasonographique est un outil bien établi pour diagnostiquer la grossesse et évaluer la santé fœtale chez de nombreuses espèces animales1-7,y compris plusieurs espèces de cervidés d’élevage8-19,mais cette technique n’a pas été décrite chez le cerf muntjac de Reeves. Ici nous décrivons l’application de l’ultrason de transabdominal pour détecter la grossesse dans le muntjac fait et pour évaluer la croissance et le développement foetaux tout au long de la période gestational. À l’aide de cette procédure, les femelles gravides ont été identifiées dès 35 jours après l’appariement bêler bêler-bouc, ce qui était un moyen efficace de surveiller la grossesse en toute sécurité à intervalles réguliers. Les objectifs futurs de ce travail comprendront l’établissement de références normales de mesure fœtale pour l’estimation de l’âge gestationnel, la détermination de la sensibilité et de la spécificité de la technique de diagnostic de la grossesse à divers stades de la gestation, et l’identification des variations dans la croissance et le développement du fœtus dans différentes conditions expérimentales.
L’examen ultrasonographique est une méthode bien décrite de diagnostic de grossesse chez les bovins1,les moutons2,3,les chèvres4,les chevaux5,les animaux de compagnie6,7et d’autres espèces animales domestiques. Cette modalité d’imagerie a également été identifiée comme un outil précieux pour la détection de la grossesse et l’estimation de l’âge fœtal chez plusieurs espèces de cervidés captifs, y compris lesdaims 8-11,les cerfs rouges12-16,les cerfs sika d’Hokkaido17et les rennes18,19. Dans de nombreux cas, l’échographie a produit des taux de précision plus élevés que d’autres mécanismes de détection de grossesse, tels que la progestérone sérique ou l’analyse des glycoprotéines associées à la grossesse9,18. En outre, la visualisation ultrasonographic de l’appareil reproducteur peut fournir des informations additionnelles concernant la viabilité foetale, l’âge gestational, et l’identification des anomalies développementales qui seraient autrement difficiles à évaluer. L’utilité de l’échographie pour évaluer l’état reproducteur suggère que cette méthodologie devrait être adaptée à d’autres espèces chez lesquelles des programmes de reproduction actifs sont utilisés.
Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est20. Bien que le cycle de reproduction de ces animaux ne soit pas bien caractérisé dans leurs territoires d’origine, les études des populations sauvages dans certaines parties du sud de l’Angleterre ont amélioré la compréhension de leurs schémas de reproduction20. Contrairement à la plupart des cervidés, le muntjac de Reeves semble se reproduire toute l’année, sans pics de fauve saisonniers apparents20-22. Le muntjac femelle donne généralement naissance à un seul faon après une période de gestation de 210 jours, et entre de manière fiable dans un oestrus post-partum dans les 24 heures20-22. Est-ce que ne pas concevoir au cours de cette période post-partum reviendra à l’oestrus environ 24-25 jours plus tard20. Dans les situations captives, la reproduction est généralement obtenue par le logement avec un ou plusieurs mâles intacts. Ce système produit des taux de conception satisfaisants et nécessite peu de compétences techniques pour le personnel, mais les dates de reproduction exactes sont difficiles, voire impossibles, à déterminer.
Les muntjac sont couramment utilisés dans les études cytogénétiques en raison de la large gamme de nombres de chromosomes diploïdes et du taux élevé de diversification caryotypique parmi les différentes espèces23. Ces animaux font également l’objet d’une étude en tant que modèle de pathogenèse et de transmission des maladies à prions, avec un intérêt particulier accordé à l’étude de la transmission verticale de la maladie déchéante chronique (MDC) chez les cervidés. L’importance du muntjac dans un certain nombre d’applications de recherche différentes suggère que des technologies de reproduction améliorées devraient être établies pour compléter les procédures d’enquête actuelles. Plus précisément, les mécanismes non invasifs pour évaluer la période gestationnelle pourraient potentiellement élucider des variations critiques dans la performance reproductive et la croissance et le développement foetaux dans différentes conditions expérimentales. De plus, l’élaboration de références de mesure fœtale en temps réel pourrait être utile pour estimer l’âge gestationnel dans les situations où les dates de reproduction ne peuvent pas être déterminées. Des études antérieures ont décrit des mécanismes d’utilisation des mesures fœtales, telles que la longueur de la croupe couronne (LCR), la profondeur thoracique (CD) et la longueur de la tête (LH) pour estimer le stade approximatif de gestation chez les espèces de cervidés11-14, 16,17. De plus, certaines de ces études ont également établi des lignes directrices décrivant quand des jalons spécifiques du développement, tels que la minéralisation squelettique ou le rythme cardiaque fœtal, peuvent être identifiés8-19. Bien que ces données puissent être utiles pour aider à guider l’analyse échographique reproductive dans le muntjac, la plupart des autres espèces de cervidés étudiées ont une taille corporelle beaucoup plus grande et des périodes gestationnelles plus longues, réduisant ainsi la valeur translationnelle de ces études pour les applications de muntjac.
Le protocole décrit ici décrit l’échographie de transabdominal du muntjac femelle aux fins de diagnostiquer et de surveiller la grossesse. L’exécution réussie de ce protocole peut faciliter la détection et l’évaluation tôt de grossesse de la croissance et du développement foetaux. Cette technique a des applications précieuses dans la conduite d’études sur la reproduction, le développement in utero, ou la transmission verticale des maladies infectieuses dans un modèle de petit cervidés et peut également être utile à des fins cliniques dans des opérations d’élevage en captivité.
1. Préparation procédurale
Toutes les procédures animales décrites ont été examinées et approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université d’État du Colorado, une association pour l’évaluation et l’accréditation des soins aux animaux de laboratoire (AAALAC), institution accréditée intl.
2. Examen échographique de reproduction transabdominal
3. Obtention de mesures fœtales
Note: L’âge gestationnel chez de nombreuses espèces animales domestiques peut être estimé à l’aide de plages de référence établies pour les mesures fœtales obtenues à partir d’un examen échographique. Les mesures les plus couramment utilisées comprennent la longueur droite de la couronne et de la croupe (SCRL), la profondeur de la poitrine (CD) et la longueur de la tête (HL)17. Bien que suffisamment de données n’aient pas encore été recueillies pour élaborer des lignes directrices fiables sur l’âge gestationnel chez le cerf muntjac de Reeves, des mesures peuvent être recueillies afin de commencer à établir ces références. Il a été démontré chez d’autres espèces de cervidés et de ruminants que la fréquence cardiaque fœtale (FHR) augmente linéairement à mesure que la gestation progresse jusqu’à un certain point (généralement vers le 60e jour de la gestation), moment auquel la fréquence cardiaque commence à diminuerde 17. FHR peut être utilisé pour estimer l’âge gestationnel en conjonction avec d’autres observations échographiques, mais il est plus couramment utilisé comme mesure de la viabilité fœtale17,24. Le FHR a été calculé dans le muntjac de Reeves dès 35 jours après l’accouplement observé.
4. Conclusions procédurales et rétablissement
Utilisant le protocole décrit ici, la grossesse peut être diagnostiquée et surveillée chez reeve' cerf muntjac de s avec des techniques d’une façon minimum invahissantes. Le point de temps le plus tôt que la grossesse a pu être détectée par les auteurs était approximativement 35 jours suivant le comportement d’accouplement observé.
Aux parties de la gestation, la grossesse a été diagnostiquée en visualisant un utérus liquide-rempli identifié comme espace anechoic dans l’abdomen caudal. Dans l’utérus, l’embryon en développement est apparu comme une structure hyperéchoïque et ovoïde avec peu de caractéristiques identifiables (Figure 1). Au fur et à mesure que la grossesse progressait, les structures fœtales devenaient apparentes et un diagnostic concluant a pu être posé à la suite de l’observation de la minéralisation squelettique et du rythme cardiaque fœtal(figures 2 et 3).
Des mesures fœtales peuvent être obtenues et utilisées pour établir des lignes directrices de référence pour estimer l’âge gestationnel dans les cas où une date de reproduction exacte n’est pas connue, bien que nous n’ayons pas encore complètement développé ce système dans le muntjac. La longueur droite de couronne-croupion (SCRL), LH, et CD sont les mesures foetales standard qui sont généralement employées pour estimer l’âge foetal dans beaucoup d’espèces17,et ces mesures ont été obtenues à partir des images d’ultrason des grossesses de muntjac utilisant le protocole décrit ici. Ces trois mesures peuvent être obtenues à partir de la même image sagittale correctement positionnée(figures 2 et 3),mais des images distinctes peuvent être utilisées si le fœtus entier ne peut pas être capturé dans une seule vue sagittale. À l’avenir, ces techniques pourront également être utilisées pour identifier les variations de croissance et de développement observées dans différentes conditions expérimentales et pour déterminer la viabilité fœtale.
Figure 1. Image d’ultrason démontrant la grossesse tôt dans un Reeves' cerf muntjac. La bérose de cette étude avait été logée avec un muntjac mâle intact pendant 46 jours, mais une date de reproduction exacte n’est pas connue. Les caractéristiques fœtales ne sont pas distinguables à ce stade de la gestation.
Figure 2. Image échographique de la même grossesse représentée à la figure 1, 91 jours après l’introduction de la bède dans le mâle. (CD - profondeur de poitrine, HL - longueur de la tête, P - placentome, SCRL - longueur de couronne droite-croupe).
Figure 3. Image d’ultrason d’une deuxième grossesse démontrant le positionnement approprié pour obtenir des mesures foetales. Image prise 91 jours après l’introduction de la bède à l’argent. (CD - profondeur de poitrine, HL - longueur de la tête, P - placentome, SCRL - longueur de couronne droite-croupe).
Ce protocole décrit l’application de l’échographie de transabdominal pour le diagnostic de grossesse dans Reeves' cerf de muntjac. Compatible avec d’autres études d’ultrason, l’équipement approprié et la compétence technique sont impératifs à un examen reproducteur réussi de la bche de muntjac. L’examen soigneux de l’anatomie de mammifère de base, des principes physiques de l’ultrason diagnostique, et de l’aspect ultrasonographic typique des viscères abdominaux aidera à la réduction des diagnostics erronés. En outre, la sélection des transducteurs appropriés et la familiarité avec l’instrumentation et les commandes du scanner sont essentielles pour obtenir des images de haute qualité et une interprétation précise.
Pour beaucoup d’ultrasonographers inexpérimentés, les objets façonné de formation image sont une cause commune de résolution pauvre d’image et d’évaluation inexacte des structures. La réverbération à l’interface de peau-transducteur est l’un des objets façonné les plus fréquemment produits dans l’ultrason abdominal vétérinaire, et peut être sensiblement réduite en éliminant la présence du gaz entre les deux surfaces. Une épilation adéquate et l’application généreuse de gel acoustique sur la peau devraient être suffisantes pour minimiser l’impact de cet artefact. Des discussions d’autres objets façonné de formation image peuvent être trouvées dans de divers textes de l’échographie humaine et vétérinaire, et ne seront donc pas discutées plus en détail ici ; cependant, une connaissance générale de ces phénomènes permettra à l’ultrasonographe de les contrôler plus efficacement24.
Si vous effectuez un examen de reproduction, il faut comprendre que l’utérus peut être difficile à visualiser chez un animal normal et nongnant. En début de grossesse, la lumière de l’utérus peut devenir identifiable comme espace hypoéchoïque à anéchoïque pendant que le sac gestationnel se forme. À ce stade dans le muntjac, l’utérus peut généralement être trouvé par balayage au niveau des glandes mammaires ou légèrement caudales. Avant la minéralisation squelettique ou l’apparition d’un rythme cardiaque fœtal, la grossesse peut être mal diagnostiquée en présence d’autres conditions de reproduction causant l’accumulation de liquide dans l’utérus, ce qui peut inclure une pathologie telle que pyometra, hydrometra ou mucometra. Les diagnostics échographiques doivent être effectués en conjonction avec une évaluation clinique complète de l’animal avant la sédation pour la procédure. Au début de la gestation, le conceptus apparaîtra comme une structure sphérique à ovoïde et hyperéchoïque dans le sac amniotique. Les périodes de développement spécifiques ne sont pas bien caractérisées chez cette espèce; cependant la minéralisation squelettique et le mouvement cardiaque foetal semblent être uniformément discernables à approximativement 8 semaines de poteau-accouplement.
Dans des conditions idéales, l’échographie transabdominale peut être un outil incroyablement utile pour l’évaluation des structures de reproduction chez de nombreuses espèces, y compris le muntjac de Reeves. La valeur de cette technique, cependant, dépend fortement des capacités spécifiques des installations d’hébergement des animaux. Contrairement aux mécanismes plus passifs de détection de la grossesse, tels que l’observation visuelle du comportement d’accouplement et la distension abdominale subséquente de la bè bè quinzaine, l’échographie nécessite une contention physique et / ou chimique de l’animal pendant une période de temps de 5 à 10 minutes ou plus. Dans de nombreux établissements, cela n’est ni possible ni pratique, et la nécessité de l’examen devrait être prise en considération en fonction des objectifs spécifiques de l’étude. En outre, certains états physiologiques ou pathologiques peuvent suggérer que l’échographie est contre-indiquée chez certains animaux en raison des effets potentiellement néfastes de la détresse liée à la capture et à la sédation. Il est important d’évaluer l’aptitude de chaque animal à l’examen échographique avant de commencer l’étude, et un vétérinaire devrait être consulté aux étapes de planification de ces projets.
Les pratiques actuelles de détection de la grossesse chez le muntjac de Reeves et d’autres espèces sauvages sont généralement de nature passive (observation du comportement d’accouplement et de la distension abdominale dans les does). Des niveaux sériques de progestérone ou de glycoprotéine associée à la grossesse peuvent être mesurés pour confirmer le diagnostic18,25, cependant les résultats de ces essais ne fournissent aucune information concernant le stade de gestation ou la viabilité fœtale. L’échographie offre l’avantage de permettre une évaluation en temps réel de l’état reproducteur avec une précision similaire ou supérieure à celle des dosages hormonauxsériques 18, tout en maintenant un caractère invasif et une détresse minimes pour les animaux. Dans les opérations où la date de reproduction est difficile ou impossible à déterminer, l’échographie peut fournir un mécanisme plus précis pour estimer le stade de gestation que les tests hormonaux, même en l’absence de tableaux gestationnels publiés. En outre, la contention physique et chimique pour l’examen échographique semble causer une détresse minimale au muntjac sain et offre une occasion idéale d’effectuer un examen physique approfondi et de recueillir des échantillons supplémentaires (sang, urine, etc.)pour les évaluations générales de la santé.
L’estimation de l’âge gestationnel par des mesures ultrasonographiques a été établie chez de nombreuses espèces, y compris les bovins1,les moutons2,3,les chèvres4et les chevaux5,et a été décrite dans un nombre limité d’espèces de cervidés ainsi que8-19. En l’absence de dates de reproduction exactes ou de tables de gestation établies, l’âge fœtal du muntjac de Reeves ne peut être estimé qu’approximativement en fonction des paramètres de développement fœtal décrits pour d’autres espèces. Un objectif précis des travaux décrits ici est d’établir des lignes directrices plus formelles pour le vieillissement fœtal chez cette espèce. Avec des données normatives suffisantes en place, les applications futures de l’échographie dans cette colonie comprendront l’identification des anomalies dans le développement foetal en présence de différentes variables expérimentales et l’évaluation de la viabilité foetale. En outre, la sensibilité et la spécificité de l’échographie transabdominale peuvent être déterminées et comparées à d’autres mécanismes couramment utilisés pour détecter la grossesse chez les espèces de cervidés.
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Les auteurs souhaitent remercier Jeanette Hayes-Klug et Kelly Anderson pour la gestion de la colonie de muntjac, le Dr Alan Young pour nous avoir présenté le muntjac et M. Cleve Tedford de Cervid Solutions Inc. pour avoir fourni la graine de muntjac pour ce projet. Ce travail a été soutenu par la subvention R01AI093634 des NIH.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
Azaperone tartrate (0.035 mg/kg) | ZooPharm | ||
Medetomidine HCl (0.04 mg/kg) | ZooPharm | ||
Ultrasound contact gel | Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | |
Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finland | NADA 141-033 | |
V-trough (optional) | N/A | N/A | Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough |
Electrical clippers or razor blades for hair removal | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Ibex Pro | |
5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
3 ml syringes | Covidien | 1.18E+09 | |
22 G needles | Covidien | 8.88E+09 |
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