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Perfilado Redox Celular Utilizando Microscopía de Alto Contenido

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•

11:37 min

•

May 14th, 2017

DOI :

10.3791/55449-v

May 14th, 2017

•

Tom Sieprath¹^,², Tobias Corne¹^,², Joke Robijns¹, Werner J. H. Koopman³, Winnok H. De Vos¹^,²

¹Laboratory of Cell Biology and Histology, Department of Veterinary Sciences, University of Antwerp, ²Cell Systems and Imaging Research Group (CSI), Department of Molecular Biotechnology, Ghent University, ³Department of Biochemistry , Radboud Institute for Molecular Life Sciences, Radboud University Medical Center

Resumen

Este trabajo presenta un flujo de trabajo de microscopía de alto contenido para la cuantificación simultánea de los niveles de ROS intracelular, así como el potencial de membrana mitocondrial y la morfología -conocidas conjuntamente como morfofonción mitocondrial- en células adherentes vivas utilizando las moléculas reportero fluorescentes permeantes a las células 5- 6) - clorometil - 2 ', 7' - diclorodihidrofluoresceína, éster acetilico (CM - H _ { ₂ } DCFDA) y éster metílico de tetrametilrodamina (T

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Biolog a Celular

Especies de Ox geno Reactivo

Morfofunci n Mitocondrial

Im genes de C lulas Vivas

Microscop a de Alto Contenido

Microscop a de Fluorescencia

Microscop a Cuantitativa Multiparam trica

Capítulos en este video

0:05

Title

10:38

Conclusion

9:35

Results: Effect of Saquinavir on Primary Human Fibroblasts

0:47

Seeding Cells in a 96-well Plate

1:48

Setting Up the Microscope and Acquisition Protocol

3:10

Loading of the Cells with CM-H₂DCFDA and TMRM

4:18

First and Second Live Imaging Rounds

6:22

Image Processing and Analysis

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