Esta investigación fue apoyada por subvenciones del Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales (GM099883 y GM074675) para EAK Los financiadores no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión de publicar, o la preparación del manuscrito. Damos las gracias a la gente de nuestro taller de mecánica en la Escuela de Medicina de Harvard para el diseño del aparato conductual (contacto: <a href="http://mikesmachine.com">http://mikesmachine.com).</a> Contribuciones de los autores: ST, BC diseñaron el aparato de comportamiento. ST diseñado y optimizado el protocolo experimental. ST y BC realizado y analizado los experimentos. ST, EAK y BC escribió el documento.

Nota: La siguiente es una descripción paso a paso del protocolo experimental que usamos para permitir confiable desencadenante de la agresión entre parejas de moscas de la fruta macho (D. melanogaster). Este procedimiento induce la formación de un efecto de &quot;perdedor&quot;. El uso de este protocolo, un corto plazo el efecto &quot;ganador&quot; también ha sido recientemente reportó 5,6. La figura 1 muestra la línea de tiempo de los experimentos de comportamiento. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig1.jpg" /> Figura 1. Cronología de experimento agresión. El día 1, pupas macho en etapa tardía (cuando las alas se vuelven negro) están aislados en viales de aislamiento recién preparados. En el día 5 después de emerger como adultos, 4 días de edad moscas macho se anestesian con CO2 y pintadas con colores diferentes para propósitos de identificación. El día 7, tazas alimentos y cámaras de lucha sonpreparado para configurar los experimentos de comportamiento. Dos 06.07 varones adultos de un día se cargan en las cámaras y son capaces de interactuar. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53395/53395fig1large.jpg" target="_blank">Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 1. Día 1: Aislamiento Social de pupas <ol><li> Elevar y mantener las poblaciones de mosca en un 12 horas de luz / 12 h oscuridad ciclo incubadora de ambiente controlado a 25 ° C y una humedad relativa del 50%. </li><li> Preparar los viales de aislamiento: Calentar alimentos mosca fresca hasta que se derrita. Utilizando una pipeta Pasteur, transferir aproximadamente 1,5 ml de la comida mosca fundida en tubos de ensayo de vidrio vacíos individuales (1,6 x 10 cm). Permita que la comida se solidifique. </li><li> Aislar pupas: Con un pincel fino, retire suavemente una pupa masculino en etapa tardía (cuando las alas se convierten en negro) de las existencias vial y colocarlo en el lado de un tubo de ensayo recién preparado alimenticio que contiene. Cerrar los tubos de aislamiento con algodón (Figura 2). </li><li&gt; viales Lugar de aislamiento que contienen pupas en el 12 horas de luz / 12 h incubadora oscuridad a 25 ° C y una humedad relativa del 50%. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig2.jpg" /> Figura 2. Aislamiento Social. Una pupa masculino en etapa tardía se coloca en el lado en un vial aislamiento recién preparado. Viales de aislamiento que contienen pupa se colocan en el 12 horas de luz / 12 h incubadora oscuridad a 25 ° C y una humedad relativa del 50%. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53395/53395fig2large.jpg" target="_blank">Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 2. Día 5: Pintura las Moscas para la identificación individual Propósitos <ol><li> Realice este paso en el día 5 con 4 moscas macho de un día y dos días antes de los experimentos de comportamiento para minimizar el efecto negativo de CO 2 anestesia. </li><li> Anestesiar mosca con CO 2. </li&gt; <li> Con un palillo de dientes finos, coloque un pequeño punto de la pintura de acrílico en el tórax. Evite colocar la pintura en la cabeza, las alas, el abdomen o las piernas (Figura 3). </li><li> Deja que la pintura seca durante aproximadamente 10 segundos, y la transferencia suavemente moscas a sus viales de aislamiento originales. </li><li> Volver viales de aislamiento a la 12 horas de luz / 12 h incubadora oscuridad a 25 ° C y una humedad relativa del 50%. </li></ol><img alt="figura 3" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig3.jpg" /> Figura 3. La identificación individual. Después de anestesiar a una mosca con CO 2, una pequeña gota de pintura acrílica se aplica en el tórax. Para propósito individual de identificación, diferentes colores se utilizan (blanco y azul aquí). Véase la discusión a continuación sobre el uso de CO 2 en este paso. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53395/53395fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figu</a>re. 3. Día 7: Preparación del Aparato <ol><li> Preparar Copas alimentos: <ol><li> Calentar alimentos mosca fresca hasta que se derrita. </li><li> Con una pipeta Pasteur, transferir aproximadamente 0,8 ml de alimentos a la tapa de un vial de tapón de rosca (1,5 cm de diámetro, 1 cm de altura) y dejar enfriar. Evite las burbujas de aire. </li><li> Hacer pasta de levadura fresca mezclando la levadura seca con unas gotas de agua. Cuando gruesa, aplicar una pequeña gota de pasta de levadura al centro de la superficie de la taza del alimento con un palillo de dientes (Figura 4). </li></ol></li></ol><img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig4.jpg" /> Figura 4. Preparación de la taza de la comida. Una taza comida es preparada con alimentos mosca fresco. Después de que los alimentos se solidifica, un punto de pasta de levadura se coloca en el centro de la superficie de la taza del alimento. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53395/53395fig4large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para v</a>IEW una versión más grande de esta figura. <ol start="2"><li> Preparar individuales Cámaras de extinción: <ol><li> Lave bien las cámaras de aparatos y lucha individuo con agua antes de su uso cada vez. Seque con una toalla de papel antes de su uso. </li><li> Coloque una taza de comida en el centro de cada cámara luchando y fijar en su lugar con una gota de masilla. </li><li> Cubra cámaras de lucha con la tapa aparato (Figura 5). </li><li> Coloque el aparato en un ambiente de alta humedad (60%) a 25 ° C. </li><li> Coloque una fuente de luz por encima del aparato para iluminar las cámaras de lucha y establecer una cámara de vídeo para grabar desde arriba. </li></ol></li></ol><img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig5.jpg" /> Figura 5. Preparación de la cámara de lucha individual. La copa comida recién preparada con un punto de la pasta de levadura en la superficie se fija en lavó fi individuoghting cámaras. Cámaras se cierran con la tapa de dos piezas permite la inserción de un divisor de plástico opaco en cámaras de combate individual. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53395/53395fig5large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 4. Día 7: Experimento del Comportamiento <ol><li> Lleve a cabo los experimentos de comportamiento con 6-7 días de edad moscas macho. </li><li> Inserte separadores de plástico en cada cámara luchando. </li><li> Quitar el tapón de algodón desde el tubo de aislamiento y posicionar el tubo por debajo de un agujero abierto en el lado del aparato. </li><li> Deje que la mosca entre en la cámara de la lucha por geotaxis negativos, por lo general dentro de unos pocos segundos. </li><li> Cierre la pared deslizante después de la marcha ha salido del tubo y entrado en la cámara. </li><li> Repita el procedimiento para introducir la segunda marcha en la cámara de lucha en el otro lado del aparato. </li><li> Coloque el aparato de nuevo en el videotapi iluminadaposición ng. </li><li> Comienza la grabación de vídeo y retire el separador de plástico para permitir que las moscas para interactuar. <ol><li> Para experimentos Agresión: <ol><li> En estos experimentos, ficha lucha por al menos 20 min para asegurar la formación de relaciones de dominancia fuertes. </li><li> Después del tiempo deseado, detener la grabación de vídeo. </li><li> Retire las moscas de las cámaras de extinción de invirtiendo el procedimiento descrito anteriormente. </li><li> Lave bien el aparato de comportamiento con un detergente suave y agua después de cada uso y enjuague. </li></ol></li><li> Para &quot;Loser&quot; Experimentos Efecto: Nota: En estos experimentos, primeras peleas son considerados como la fase de acondicionamiento y segundo peleas como la fase de prueba. El período de descanso entre peleas puede diferir, pero 10 minutos permite la formación de un fuerte efecto &quot;perdedor&quot;. <ol><li> Siga el procedimiento descrito anteriormente para realizar una primera pelea. </li><li> PASO CRÍTICO: Para inducir la formación de un &quot;perdedor&quot; mentalidad, esegurar que las primeras peleas son por lo menos 20 minutos de largo con el fin de establecer relaciones de dominancia fuertes. Después de 20 minutos, vuelva a insertar el divisor de plástico en cámaras de lucha para separar las moscas. </li><li> Después de un período de 10 minutos de descanso, retire suavemente el divisor de plástico para permitir que las moscas que interactúan para segundas peleas. </li><li> Al final de la segunda 20 min pelea, detener la grabación de vídeo. </li><li> Retire las moscas de las cámaras de comportamiento que el anterior. </li><li> Una vez más, limpiar a fondo el aparato de comportamiento. </li></ol></li></ol></li></ol> 5. Análisis del Comportamiento <ol><li> Transferencia Películas <ol><li> Conecte las cámaras a la computadora. </li><li> Convertir moscas .MTS a .mov moscas y unir clips películas juntos, el uso de vídeo software de conversión y la opción &quot;unirse a los clips seleccionados&quot;. </li><li> Observar y analizar cada película con el software lector de vídeo. </li></ol></li><li> Comportamiento de puntuación Nota: esto se puede hacer de forma manual o nosing de software programa de análisis de comportamiento si está disponible. La siguiente ilustración describe una posible análisis manual para un efecto de &quot;perdedor&quot;. <ol><li> Puntuación del momento del primer encuentro entre las moscas en la copa de los alimentos (encuentros son interacciones entre pares de moscas que duran al menos 2 seg) y el momento de aparición de la primera estocada (un patrón de comportamiento en el que una mosca se eleva en lo alto de su patas traseras y broches de presión hacia abajo y los intentos de agarrar al oponente). Entonces, la puntuación de la latencia para lanzarse (el intervalo entre el primer encuentro y la primera estocada). </li><li> Cuente el número total de encuentros y las estocadas durante una pelea. Nota: Si se desea, también se puede marcar otras pautas de comportamiento, como la amenaza de ala, el boxeo, la esgrima, la retirada o el número de encuentros antes de la primera estocada, por ejemplo. </li><li> Puntuación del tiempo de establecimiento de la dominación (tiempo entre el primer encuentro y el tiempo vuela cuando uno se retira por tres veces consecutivas de la popa de taza de alimentoser estocadas recibiendo). Nota que vuela es el ganador y que el perdedor de la pelea. </li></ol></li><li> Cálculo de un efecto de &quot;Loser&quot; <ol><li> Divida el número de peleas en el que los perdedores anteriores pierden 2 peleas nd (perdedores que pierden: LL) por el número total de peleas, y se multiplica por 100. El porcentaje obtenido representa el efecto &quot;perdedor&quot;: [(# Vuela LL) / (# lucha total)] x 100 </li><li> Utilice una prueba de Chi-cuadrado para comparar si el efecto &quot;perdedor&quot; es estadísticamente diferente del valor esperado de 50%. </li></ol></li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

La era moderna de la utilización de Drosophila con sus métodos genéticos de gran alcance como un organismo modelo para el estudio de la agresión comenzó hace alrededor de una docena de años con la introducción de nuevos escenarios experimentales en los que la conducta de lucha confiable podría obtenerse con pares individuales de moscas 1,7, 8,17,19. Estos escenarios incluyen recursos deseados (una taza de comida, parejas potenciales) y un espacio para el perdedor vuela a retirarse a. Cuando s...

Agresión en sistemas animales está fuertemente asociado con la adquisición y tenencia de los recursos como los alimentos, el territorio y compañeros. Dado el importante papel que desempeña en el estado físico de las personas, no es de extrañar que la agresión se ha desarrollado en todo el reino animal. Como un rasgo adaptativo que beneficia directamente a los individuos, un aprendizaje y la memoria fuerte componente se asocia con la agresión. En la competencia por el rango social, experiencia en la lucha anterior influye en el resultado de los concursos posteriores. En general, antes que aumenta la experiencia perdedoras, y la experiencia de ganar disminuye, la probabilidad de perder concursos posteriores (llamados &quot;perdedor&quot; y efectos &quot;ganador&quot;). Efectos &quot;Loser&quot; se han observado en una amplia gama de especies, y algunos informes sugieren que estos pueden durar varios días mientras que los efectos &quot;ganador&quot; suelen ser de menor duración 2,10,11. El primer informe de la conducta agresivaen moscas de la fruta (D. ampelophila) fue por Sturtevant en 1915 en un documento de que se trate con el reconocimiento de sexo y la selección del sexo 12. Medio siglo más tarde, los exámenes más completos de la fruta macho agresión volar se hicieron, que describe la mayoría de los patrones de comportamiento observados durante los combates de la mosca de la fruta. Estos experimentos se llevaron a cabo en su mayoría en pequeños grupos de moscas machos y hembras observadas durante horas 13-15. Recientemente, con la incorporación de potentes herramientas genéticas, diádicas configuraciones individuales de lucha sexo y tiempos más cortos de observación, D. melanogaster se ha convertido en un importante sistema modelo para el estudio de la biología de la agresión 1,16. Análisis de peleas entre parejas sexuales de los mismos moscas macho y hembra demostró que la agresión implica patrones de conducta estereotipadas que la transición de uno a otro de una manera estadísticamente confiable 1,17. Algunos de los patrones de comportamiento observados son sexo-específicas, mientras que otros se observan en la luchas en ambos sexos. Peleas masculinas van a niveles de intensidad más altos que las peleas femeninas y dar lugar a la formación de relaciones de dominancia con &quot;ganadores&quot; y &quot;perdedores claros&quot;. En la actualidad, muchos laboratorios han comenzado a investigar la bioquímica 18, neural 7,19-21, y genéticos 22 bases de agresión. Por desgracia, un meta-análisis de estudios para comprender mejor la dinámica de la lucha y de la formación y el mantenimiento de relaciones de dominancia es problemático debido a la utilización de una multiplicidad de procedimientos experimentales en diferentes laboratorios. Esencialmente todas las técnicas descritas en la literatura implican manejo y manipulación de las moscas para introducirlos en arenas 19,23,24 y durante el experimento de comportamiento 3,4 para transferir moscas de arenas. Aspiración suave es la forma más común de manipular moscas 3,4,23-25, pero frío o CO 2 anestesia también se utilizan 9,26, a pesar de que pestudios de la mera existencia ya han informado de que estos procedimientos tienen efectos nocivos sobre el comportamiento de la mosca 27,28. Se recomienda un periodo de al menos 24 horas después de la utilización de cualquier anestésicos para minimizar sus efectos sobre el comportamiento 29,30. Moscas aprenden de la experiencia de lucha anterior y modificar su uso de patrón de comportamiento en situaciones nuevas, lo que sugiere que el aprendizaje y la memoria acompañan y son consecuencias de encuentros agonísticos. En ese sentido, vuelan peleas se asemejan a las situaciones de aprendizaje condicionamiento operante en el que vuela a aprender que la estrategia ha funcionado y luego use con más y más a menudo durante los encuentros posteriores. Las moscas cambian sus estrategias de lucha después de las relaciones de dominación se han establecido durante los combates, con los ganadores lanzarse más y más y perdedores cada vez menos. Después de un período de separación, perdedores anteriores muestran un comportamiento mucho más sumisa y son altamente propensos a perder 2º combate cuando se combina con fl ingenuoies o ganadores anteriores 3,4. Sin embargo, la ausencia de un procedimiento experimental que excluye el manejo de moscas ha hecho estudios detallados de efectos &quot;perdedor&quot; difíciles. En un reciente estudio, se compararon dos procedimientos experimentales utilizados rutinariamente en los laboratorios (aspiración y fría-anestesia) para introducir las moscas en las cámaras de comportamiento al nuevo procedimiento que elimina el manejo. Los resultados mostraron que en frío anestesia tenía mucho mayores efectos negativos sobre la agresión de aspiración, pero incluso la aspiración reduce el nivel de agresividad por las moscas. Aspiración hizo, sin embargo, causa efectos altamente significativos en el aprendizaje y la memoria que acompaña a la agresión. Siguiendo el protocolo idéntico a dos procedimientos experimentales (aspiración y no de manipulación), un efecto robusto &quot;perdedor&quot;, sólo se observó cuando el manejo de moscas fue eliminado del procedimiento 5,6 experimental. Idealmente, los estudios de Drosophila agresión en laboratorios deben incluir situaciones ambientales que las moscas normalmente encuentran en la naturaleza (competencia por los recursos, el territorio para defender y espacio para escapar). Además, las condiciones experimentales deben ser optimizados para inducir de manera fiable, observar e interpretar el comportamiento bajo examen (tratan de minimizar la manipulación de animales, limitar el uso de CO 2 como anestésico, y estandarizar los procedimientos experimentales). Al tratar de resolver la mayor parte o la totalidad de estos problemas, se diseñó un nuevo aparato de comportamiento que elimina el manejo de las moscas antes, durante y después de la introducción a escenarios de comportamiento. Con estos aparatos, las moscas utilizan sus geotaxis negativas innatas a ser trasladada y transferidos dentro y fuera de las cámaras de lucha. Mediante la eliminación de la manipulación de las moscas, el protocolo tiene como objetivos: (a) reducir la variabilidad de comportamiento entre los individuos; (b) reducir el tiempo necesario para las moscas que interactúan y generan relaciones de dominancia claras (machos); y (c) inducir fiable fuerte behavio suficientecambios rales para permitir la formación de los efectos de &quot;perdedor&quot;. Este protocolo describe un nuevo aparato experimental y un procedimiento paso a paso para analizar la agresión y para permitir la formación de un fuerte efecto &quot;perdedor&quot; en D. melanogaster. Esperamos que este aparato de comportamiento puede ser fácilmente adaptado para el estudio de otros comportamientos sociales exhibidos por moscas de la fruta.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="665">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Drosophila melanogaster pupa</td>
			<td style="width:163px;">Bloomington Stock Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Standard fly food</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Fabricated in-house.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Behavioral chambers</td>
			<td style="width:163px;">Mike machine</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Fabricated in-house. Directly&#160; contact the compagny for more informations.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Borosilicate glass vials</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">47729-576</td>
			<td style="width:167px;">16 x 10 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cotton</td>
			<td style="width:163px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">22-456-881</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">53300-567</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paintbrush&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Blick Art Material</td>
			<td style="width:119px;">06157-7030</td>
			<td style="width:167px;">Round , Size 3/0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Toothpick</td>
			<td style="width:163px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Acrylic paint (blue/white)</td>
			<td style="width:163px;">Blick Art Material</td>
			<td style="width:119px;">01637-5172/01637-1022</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dry active yeast</td>
			<td style="width:163px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">YSC2-500G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Srew cap tube</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">10011-394&#160;</td>
			<td style="width:167px;">15 mm diameter, 10 mm height</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22363212</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tape</td>
			<td style="width:163px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Plastic slices</td>
			<td style="width:163px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">70329-40</td>
			<td style="width:167px;">22 x 40 x 0.25 mm Thickness</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light source (bulb)</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">500003-418</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Timer</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62344-641</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Incubator</td>
			<td style="width:163px;">Percival</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Directly contact the constructor for more informations.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Carbon Dioxide Dry (CO2)</td>
			<td style="width:163px;">Medical-Technical Gases, Inc</td>
			<td style="width:119px;">14H31</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Binocular</td>
			<td style="width:163px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ-745</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Camera (SONY Handycam&#160; HDR-CX330)</td>
			<td style="width:163px;">B&#38;H</td>
			<td style="width:119px;">SOHDRCX330B</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Computer</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">With a minimum of 1.4 Ghz Processor, running Microsoft Windows or Machintosh HD</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">ClipWrap</td>
			<td style="width:163px;">Download online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any importing software can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QuickTime Player</td>
			<td style="width:163px;">Download online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any reading software can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GraphPad Software</td>
			<td style="width:163px;">Online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any statistical software can be used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new approach that eliminates handling for studying aggression and the "loser" effect in drosophila melanogaster

El comportamiento agresivo en Drosophila melanogaster se compone de la expresión secuencial de patrones de conducta estereotipados (para el análisis ver 1). Este comportamiento complejo está influenciada por factores genéticos, hormonales y ambientales. Al igual que en muchos organismos, experiencia de lucha anterior influye en la estrategia de lucha de las moscas y el resultado de los concursos posteriores: perder una pelea aumenta la probabilidad de perder concursos posteriores, revelando efectos &quot;perdedor&quot; que probablemente impliquen el aprendizaje y la memoria 2-4. El aprendizaje y la memoria que acompaña a la expresión de complejos comportamientos sociales como la agresión, es sensible a la validez de la prueba de manejo de los animales 5,6. Muchos de los procedimientos experimentales se utilizan en diferentes laboratorios para estudiar la agresión 7-9, sin embargo, no rutinariamente protocolo utilizado que excluye la manipulación de las moscas está disponible actualmente. Aquí, se presenta un nuevo aparato de comportamiento que elimina el manejo de las moscas, utilizando INSTEAd sus innatas respuestas geotáctico negativos para mover los animales dentro o fuera de las cámaras de lucha. En este protocolo, pequeñas arenas de lucha circular que contiene una taza de alimentos se dividen en dos mitades iguales por una corredera de plástico extraíble antes de la introducción de las moscas. Las moscas entran en las cámaras de sus viales de aislamiento casa a través de puertas corredizas de cámara y geotaxis. Tras la eliminación de controles deslizantes de plástico, las moscas son libres de interactuar. Después de períodos de tiempo especificados, las moscas se separan de nuevo por controles deslizantes para la posterior experimentación. Todo esto se hace fácilmente sin manejo de moscas individuales. Este aparato ofrece un nuevo enfoque para estudiar la agresión y el aprendizaje y la memoria asociada, incluyendo la formación de efectos &quot;perdedor&quot; en peleas mosca. Además, este nuevo aparato de comportamiento de uso general se puede emplear para estudiar otras conductas sociales de moscas y debe, en general, ser de interés para la investigación de los cambios relacionados con la experiencia en los procesos de comportamiento fundamentales.

En esta sección se presenta el diseño de la cámara de comportamiento y el análisis de un conjunto típico de experimentos de comportamiento siguiendo el protocolo descrito anteriormente medición de la agresión y la formación de un efecto de &quot;perdedor&quot;. También ilustró son muestras de otras conductas que pueden ser medidos usando este aparato. La figura 6 muestra una representación esquemática del nuevo aparato. El aparato se compone de tres pozos cilínd...

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A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Durante mosca de la fruta peleas, los patrones de comportamiento observados, lucha dinámica, y el aprendizaje y la memoria asociada están influenciadas por las condiciones experimentales. El protocolo que se presenta aquí describe un procedimiento novedoso que elimina por completo la manipulación de las moscas durante los experimentos. Esto mejora la dinámica de lucha y permite la formación de efectos fuertes &quot;perdedor&quot;.

Un nuevo enfoque que elimina el manejo para el estudio de la agresión y el efecto &quot;Loser&quot; en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

9.5K vistas.  Harvard Medical School.  Durante mosca de la fruta peleas, los patrones de comportamiento observados, lucha dinámica, y el aprendizaje y la memoria asociada están influenciadas por las condiciones experimentales. El protocolo que se presenta aquí describe un procedimiento novedoso que elimina por completo la manipulación de las moscas durante los experimentos. Esto mejora la dinámica de lucha y permite la formación de efectos fuertes "perdedor". 

Video: A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Grabaciones solo Sensillum en los insectos Drosophila melanogaster Y Anopheles gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Investigación

Neurociencias

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

El grano y Pruebas de Manejo de Capellini: Simple medidas cuantitativas de la función de las patas delanteras diestro en ratas y ratones

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We developed a novel nanoinjection/electrophysiology assay that allows the detection of bioactive modulatory effects of compounds on the function of a neuronal circuit that mediates the escape response in Drosophila melanogaster3,4. Our in vivo assay, which uses the Drosophila Giant Fiber System (GFS, Figure 1) allows screening of different types of compounds, such as small molecules or peptides, and requires only minimal quantities to elicit an effect. In addition, the Drosophila GFS offers a large variety of potential molecular targets on neurons or muscles. The Giant Fibers (GFs) synapse electrically (Gap Junctions) as well as chemically (cholinergic) onto a Peripheral Synapsing Interneuron (PSI) and the Tergo Trochanteral Muscle neuron (TTMn)5. The PSI to DLMn (Dorsal Longitudinal Muscle neuron) connection is dependent on D&alpha;7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs)6. Finally, the neuromuscular junctions (NMJ) of the TTMn and the DLMn with the jump (TTM) and flight muscles (DLM) are glutamatergic7-12. Here, we demonstrate how to inject nanoliter quantities of a compound, while obtaining electrophysiological intracellular recordings from the Giant Fiber System13 and how to monitor the effects of the compound on the function of this circuit. We show specificity of the assay with methyllycaconitine citrate (MLA), a nAChR antagonist, which disrupts the PSI to DLMn connection but not the GF to TTMn connection or the function of the NMJ at the jump or flight muscles.
Before beginning this video it is critical that you carefully watch and become familiar with the JoVE video titled "Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster " from Augustin et al7, as the video presented here is intended as an expansion to this existing technique. Here we use the electrophysiological recordings method and focus in detail only on the addition of the paired nanoinjections and monitoring technique.

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

A rapid in vivo assay to test for neuromodulatory compounds using the Giant Fiber System (GFS) of Drosophila melanogaster is described. Nanoinjections in the head of the animal along with electrophysiological recordings of the GFS can reveal bioactivity of compounds on neurons or muscles.

Nanoinjection parejas y Ensayo de electrofisiología para la detección de bioactividad de compuestos utilizando el Drosophila melanogaster Sistema de fibra gigante

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other insects proprioception is provided by specialized sensory organs termed chordotonal organs (ChOs) 2. Like many other organs in Drosophila, ChOs develop twice during the life cycle of the fly. First, the larval ChOs develop during embryogenesis. Then, the adult ChOs start to develop in the larval imaginal discs and continue to differentiate during metamorphosis.
The development of larval ChOs during embryogenesis has been studied extensively 10,11,13,15,16. The centerpiece of each ChO is a sensory unit composed of a neuron and a scolopale cell. The sensory unit is stretched between two types of accessory cells that attach to the cuticle via specialized epidermal attachment cells 1,9,14. When a fly larva moves, the relative displacement of the epidermal attachment cells leads to stretching of the sensory unit and consequent opening of specific transient receptor potential vanilloid (TRPV) channels at the outer segment of the dendrite 8,12. The elicited signal is then transferred to the locomotor central pattern generator circuit in the central nervous system.
Multiple ChOs have been described in the adult fly 7. These are located near the joints of the adult fly appendages (legs, wings and halters) and in the thorax and abdomen. In addition, several hundreds of ChOs collectively form the Johnston's organ in the adult antenna that transduce acoustic to mechanical energy 3,5,17,4.
In contrast to the extensive knowledge about the development of ChOs in embryonic stages, very little is known about the morphology of these organs during larval stages. Moreover, with the exception of femoral ChOs 18 and Johnston's organ, our knowledge about the development and structure of ChOs in the adult fly is very fragmentary.
Here we describe a method for staining and visualizing ChOs in third instar larvae and pupae. This method can be applied together with genetic tools to better characterize the morphology and understand the development of the various ChOs in the fly.

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

A method to immunostain and visualize chordotonal organs in larvae and pupae of Drosophila melanogaster is described.

Visualización de los propioceptores<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas y pupas

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Determinación de la actividad locomotora espontánea en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Ensayo sencillo para cuantificación de Prevención Social en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Condiciones que afectan Espacio Social en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

De alta resolución de cuantificación del comportamiento guiado Olor en<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uso de la<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Un ensayo de conducta para Mechanosensation de clones en MARCM-basa<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

Forrajeo Protocolo Ruta de longitud de<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Las larvas

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Un nuevo enfoque que elimina el manejo para el estudio de la agresión y el efecto "Loser" en

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