Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen über die Stammzell-basierte Behandlung von peripheren Neuropathien zu beantworten, insbesondere für Equine Recurrent Laryngeal Neuropathy. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass die Stammzellernte minimal invasiv ist und die Injektionsmethode auch auf andere periphere Neuropathien übertragen werden kann. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf andere Studien anderer Zelltypen, da die Stammzellen vor der Injektion in andere von Interesse geratene Zellen differenziert werden können.
Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die videoendoskopische Kontrolle der Kehlkopfbewegungen und die Manipulation der Nervenstimulatortechniken schwer zu erlernen sein können. Identifizieren Sie die Probenstelle im langen Kopf des Trizepsmuskels durch visuelle Inspektion und Palpation, etwa Mittellinie zwischen dem Punkt des Ellenbogens und dem Punkt der Schulter. Verwenden Sie elektrische Clipper, um eine fläche von etwa zwei mal zwei Zentimetern zu rasieren, und wenden Sie ein chirurgisches Peeling an, das aus Polyjodid-Flüssigseife und Alkoholkompressen für eine Minute auf die exponierte Haut besteht.
Mit einer 25-Meter-Nadel, subkutan injizieren Sie einen Milliliter 2%Lidocain-Lösung in die Mitte des desinfizierten Bereichs. Nach der Desinfektion mit sauberer antibakterieller Handseife und dem Anziehen steriler Handschuhe legen Sie eine halbautomatische 14-Meter-Biopsienadel auf einen Sterileinweg-Drap und ziehen Sie den Federmechanismus an, um die Nadel zu bewaffnen. Montieren Sie eine Kanüle und einen Obturator in der verriegelten Position, um einen Trochar zu bilden, und führen Sie den Trochar senkrecht durch die desensibilisierte Haut ein, etwa 1,5 Zentimeter in das unterlegende Muskelgewebe.
Dann entfernen Sie die Trochar, und legen Sie den Obturator auf einem sterilen Vorhang. Führen Sie die Nadel durch die Kanüle. Als nächstes führen Sie die Nadel und die Kanüle durch den Hautschnitt in den Muskel ein, bis sich die Nadelspitze in der Mitte des langen Kopfes des Trizepsmuskels befindet.
Dann lassen Sie die Biopsienadel los, ziehen Sie die Nadel und Kanüle aus dem Muskel zusammen, und entfernen Sie die Nadel aus der Kanüle. Ziehen Sie die Feder mit einer Hand, während Sie die Nadel mit der anderen Hand halten, bis die Probe an der Spitze der Biopsienadel sichtbar wird. Öffnen Sie mit Hilfe eines Assistenten ein Probenröhrchen mit dem Probenmedium und verwenden Sie eine hypodermische Nadel mit 19 Gauge, um das winzige Muskelstück von der Biopsienadel in das Probenahmemedium zu übertragen.
Schließen Sie das Rohr mit dem Schraubverschluss, und neigen Sie das Rohr zwei Mal vorsichtig, um sicherzustellen, dass die Probe im Medium schwebt. Dann die Biopsienadel wieder bewaffnen und die Kanüle durch den Hautschnitt wieder einführen, um zwei bis drei weitere Proben zu sammeln, bis etwa 20 Milligramm Muskelgewebe erworben wurden. Um die Zellen zu injizieren, nach dem Erwärmen der Zellsuspension auf Raumtemperatur, aspirieren Sie einen Milliliter Zellen in eine Zwei-Milliliter-Spritze und bestätigen Sie, dass sich das Pferd in der Head-Down-Position befindet, die auf eine vollständige Sedierung hindeutet.
Als nächstes schneiden Sie eine Fläche von 20 mal zehn Zentimetern über den linken Kehlkopfbereich und wenden Sie ein chirurgisches Peeling aus Polyjodidseife und Alkohol auf die exponierte Region an. Legen Sie ein flexibles Standard-Videoendoskop durch die linke Nare des Pferdes in Richtung Nasopharynx, passen Sie die Position des Endoskops an, bis eine vollständige Ansicht sowohl der Arytenoidknorpel als auch der Epiglottis erhalten ist. Verbinden Sie die Stimulationsinjektionsnadel mit der negativen Elektrode des Nervenstimulaators.
Schließen Sie die Spritze mit der Zellsuspension an die Injektionslinie an, und füllen Sie das Rohr vor, um Luft aus dem System zu spülen. Verbinden Sie die positive Elektrode des Nervenstimulaators mit einem Elektrodenpatch, der an den Bereich der exponierten Haut klebt. Laden Sie eine Spritze mit einem Volumen steriler Salzlösung in Höhe des vorgefüllten Volumens des Rohres, und führen Sie die Stimulationsinjektionsnadel in Richtung des dorsolateralen Aspekts des Kehlkopfes ein, wobei sie den Nervenstimulator im ein Hertz-Stimulationsmodus mit einem Strom von zwei Milliampern bei Annäherung an den dorsalen seitlichen Aspekt des Kehlkopfes startet.
Bewegen Sie die Nadel vorsichtig in Richtung des wiederkehrenden Kehlkopfnervs. Sobald die Entführungsbewegung des linken Arytenoidknorpels sichtbar ist, reduzieren Sie den Strom, bis die Bewegung verschwindet, während die Nadel an Ort und Stelle gehalten wird. Wenn ein Verlust der motorischen Reaktion bei 0,5 Milliampers beobachtet wird, halten Sie die Nadelposition aufrecht und injizieren Sie einen Milliliter der autologen Stammzellen, gefolgt von dem gesamten Volumen der vorgefertigten Saline.
Halten Sie die Nadel während dieses Prozesses in einer stabilen Position, da der Abstand zu den Nerven durch die Ströme gesteuert wird, die eine motorische Reaktion erzeugen und winzige Bewegungen der Nadel einen plötzlichen Verlust der Reaktion erzeugen können. Entfernen Sie dann die Nadel und das Endoskop, und lassen Sie das Pferd mit Überwachung erholen. In früheren Studien wurden während oder nach der Probenahme keine Nebenwirkungen beobachtet, und es wurden auch keine Entzündungen während oder nach der Stimulation oder Injektion der Stammzellen beobachtet.
Weiterhin wurden keine Unterschiede zwischen den Vorinjektionswerten der Kehlkopffunktionen und den an den Tagen eins, sieben und 28 nach der Stammzellinjektion erhaltenen Werten gemessen. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass das Stammzellen-Entnahmeverfahren nicht invasiv ist und die Kultur einer großen Anzahl von autologen mesenchymalen Stammzellen in kurzer Zeit ermöglicht. Nach diesem Verfahren können andere Methoden, wie die Injektion von vordifferenzierten Zellen, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen darüber zu beantworten, ob Schwann-Zellen eher zur Bestimmung von Nerven beitragen.
Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher in der regenerativen Medizin, um die Stammzellverwendung in der equine RezidivLaryngeal Neuropathie zu erforschen.
