（紫外-可见） 的紫外-可见光谱法

紫外-可见通常被称为通用的技术，因为大多数分子将吸收在紫外-可见光波长范围内。Uv 光从 100-400 毫微米和可见光谱从 400-700 nm 延伸。100 — — 200 毫微米范围称为深紫外。光源是更难找到对此范围内，所以不经常被用于紫外-可见测量。典型的紫外可见光谱仪使用产生光从 350-2,500 纳米的紫外线，产生光从 170 — — 375 nm 和钨丝白炽灯为可见，氘灯。

当光子击中一种分子和被吸收时，分子被提升到更兴奋的饱满的精神状态。紫外-可见的光有足够的能量，促进电子到一个更高的电子状态，从最高的被占领分子轨道 (HOMO) 到最低空分子轨道 (LUMO)。HOMO 与 LUMO 之间的能量差称为带隙。通常情况下，这些轨道被称为成键和反键。光子的能量必须完全匹配带隙光子被吸收。因此，具有不同化学结构的分子有不同的能量带隙和不同吸收谱。最常见的转换，落在紫外-可见光范围内的 π-π * 和 n-π *。引起双键的 π 轨道和 n 轨道是为非成键电子。Pi 星是反键 π 轨道。因此，最好的紫外-可见吸收光谱是由含有双键的分子。彼此相邻的连接，称为共轭 π 轨道通常增加吸收。西格玛-σ * 跃迁，伴单键，是更高的能量和跌幅深紫外，所以他们都是常规使用的那么有用。广泛的乐队或肩膀上的紫外-可见结构的外观是由于许多振动和转动国家的一分子，这导致分离能源带隙的略有不同的能量。

与可见光区吸收的分子，化合物会经常出现彩色。然而，一个常见的误解是波长峰值吸收 (λ_最大) 的一种化合物是它出现的颜色。出现红色的化合物没有多吸收在红色区域的光谱。相反，λ_最大的一种化合物，看上去红是绿色的。一种化合物的颜色出现因为这些波长的光有选择性地传过样本，因此他们不是被吸收。色轮是有助于确定一种化合物会吸收什么颜色和什么 λ 范围_最大，将直接穿过车轮从观察到的颜色的颜色最被吸收的颜色。

吸收遵循定律，A = 的 εbC ε 是摩尔的衰减系数，b 是路径长度，，C 是浓度。摩尔的衰减系数是一种个人的化合物吸收特定波长的特点，此属性是由于官能团、 共轭等。如果一种化合物不具有高的衰减系数，它可以使用适当的组来增加其吸光度标记。路径长度一般与试管的大小有关，是标准的分光光度计 1 厘米。

各种仪器，从更多的现代天板读者传统分光光度计进行紫外-可见。必须选择吸收波长，使用筛选器或单色器。单色器是光的光的一种设备，空间上分离波长，然后将出射狭缝放置所需的波长在哪里。可以扫描单色仪提供整个的吸收光谱。或者，二极管阵列仪器允许所有颜色的光传输通过样品，然后光空间上分离成不同波长和检测到使用光电二极管。二极管阵列文书收集全谱速度更快，但是更复杂和更昂贵。

紫外-可见可以用于获取各种有色化合物。在图 1A，所示的蓝色染料的吸收光谱。背景显示在可见光谱的光的颜色。蓝色染料在橙红色的 λ_最大吸光度。图 1B显示频谱的一种红色染料，与 λ_最大的绿色。

可以从情节随着时间的推移在一个波长吸光度测量动力学。图 2显示了一块蓝染料的吸光度 (在 630 nm) 因为它反应与漂白剂。

图 1。紫外-可见吸收光谱。A.蓝色染料 #1 在橙红色有最大吸收。B.红色染料 #40 具有最大吸光度在绿色。请点击这里查看此图的大版本。

图 2。紫外-可见的动力学。作为它的 #1 蓝染料的吸光度与漂白反应。曲线可以符合指数衰减，指示第一阶动力学。请点击这里查看此图的大版本。

紫外-可见用于许多化学分析。它用来定量的大量蛋白质在溶液中，大多数蛋白质强烈吸收在 280 nm。图 3显示一个示例谱细胞色素 C，具有高吸光度亚铁血红素基团在 450，280。紫外-可见也用作为一种标准技术量化的 DNA 样本，因为所有的垒强烈吸收在 260 nm。RNA 和蛋白质也吸收在 260 nm，所以可以测量其他波长处的吸光度，检查是否有干扰。具体而言，蛋白质强烈吸收在 280 nm，所以 280/260 吸收比率能样品中 DNA 的蛋白质比措施。

大多数简单分析一次测量吸光度一个波长。然而，更多化学信息如果是存在很多波长同时进行测量。二极管阵列文书捕获所有光线的传输，分成不同的颜色使用棱镜或全息光栅光和不同波长处的吸光度的捕捉到，然后线性阵列的光电二极管。此方法的优点是有用同时测量许多不同的分子。

图 3。紫外-可见光谱的一种蛋白质。峰值在 280 nm 是指示性的一种蛋白质。在 450 峰为吸收的亚铁血红素基团中细胞色素 c。