هذا نموذج الماوس انسداد وعاءين من نقص التروية الدماغية-reperfusion يمكن التحقيق في الفيزيولوجيا المرضية للسكتة الدماغية. هذا النموذج سوف تحفز حجم مستقر من الجزء الأكبر من الدماغ اختراق الخلايا المناعية في الدماغ الإقفاري والعجز السلوكي بعد نقص التروية الدماغية-reperfusion. في هذا النموذج، يحدث فيركت في المناطق القشرية ومعدل الوفيات منخفض.
لأن نموذج إعادة ضخ MCAO الربط يتطلب استئصال القحف لفضح حجم MCA عن بعد, يمكن تأكيد حجم بسهولة, والفحص ما إذا كان يتم تعطيل تدفق الدم في MCAO القحف أثناء الإجراء مباشرة. تزويد الفئران بحرية الوصول إلى الماء والطعام حتى الجراحة. اتوماتيف الأدوات الجراحية، واستخدام 70٪ الإيثانول لتطهير الجدول والمعدات الجراحية.
بعد تخدير فأر عمره ثمانية إلى 12 أسبوعًا ، تأكد من أنه ليس لديه رد فعل دواسة عند اختباره باستخدام قرصة إصبع القدم. استخدم مرهمًا بيطريًا لمنع جفاف العين أثناء وضع الماوس تحت التخدير. لمراقبة ضغط الدم، قم أولاً بإزالة الشعر، ثم استخدم نظام ضغط الدم غير الغازية ونظام مراقبة فسيولوجي لمراقبة درجة حرارة المستقيم وغازات الدم الشريانية.
حقن الماوس تحت الجلد مع مضاد حيوي وقائي. بعد ذلك، ضع الماوس في موضع الوبين على لوحة التدفئة. لفضح الجلد، استخدم المقصات الكهربائية لحلاقة الفراء على منطقة الرقبة البطنية وفي المنطقة الواقعة بين العين اليمنى والأذن اليمنى.
مسح الفراء من جسم الحيوان مع كريم الغطا، وتطهير الموقع الجراحي مع الإيثانول 70٪. ثم قطع شق خط وسط طوله سنتيمتر واحد في الرقبة باستخدام مقص القزحية. مع ملقط القزحية، تشريح بعناية الشريان السباتي المشترك خالية من الأعصاب المبهمة دون التسبب في إصابة جسدية، واستخدام خياطة الحرير 5-0 لعزل الشريان.
بعد ذلك، استخدم مقص القزحية لإجراء شق 0.3 سنتيمتر في فروة الرأس عند نقطة الوسط بين العين اليمنى والأذن اليمنى. باستخدام مقص صغير، وقطع العضلات الزمني لفضح عظم الزيج وsquamosal. ضع الفأر تحت مجهر ستيريو تشريح، واستخدام حفر صغيرة لخلق ثقب مليلتر اثنين مباشرة على الجانب الأيمن من الشريان الدماغي الأوسط.
استخدام خياطة 10-0 لligate الجذع من MCA القاصي الجانب الأيمن، واستخدام مقطع تمدد الأوعية الدموية nontraumatic لocclude CCA الجانب الأيمن. بعد المدة المطلوبة من الإقفاري، وإزالة خياطة وتمدد الأوعية الدموية مقطع لاستعادة تدفق الدم إلى MCA وCCA. استخدمي مشبك خياطة لختم شق الجلد على الرأس وختم شقوق الجلد العنقي بالغراء الجراحي.
حقن البوبرينورفين تحت الجلد لتخفيف الألم. الحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان عند 36.5 زائد أو ناقص 0.5 درجة مئوية على وسادة التدفئة، ولا تترك دون مراقبة أو إعادته إلى شركة الحيوانات الأخرى حتى يتم استردادها بالكامل من التخدير. وأخيرا، ضع الماوس في قفص الأوتوكلاف بحيث يمكن الوصول بحرية إلى الماء والغذاء بعد أن تعافى تماما.
استخدام مقص القزحية لجعل شق في الجلد من رأس الماوس تخدير وقطع الرأس لفضح الجمجمة. ثم استخدام مقص التشغيل لقطع الأمامي من العظام الأمامية، ومع مقص القزحية، وقطع الجمجمة على طول خياطة القوس. مع الرخّاء العظمي، اُترك العظم الجبهي والجريبي جانباً، وفضح الدماغ.
أزل الدماغ، وضعه في مصفوفة دماغ الماوس. استخدام شفرات الحلاقة للحصول على شرائح إكليلية مليلتر، ووضعها في أنابيب 50 ملليلتر مليئة ب5 ملليلتر من 2٪ TTC. عند استخدام مصفوفة الدماغ الماوس للحصول على شرائح الإكليل، يجب أن يكون حجم القطع نفسه في أدمغة مختلفة.
حجم القطع يؤثر على حجم شرائح الدماغ، والتي تؤثر أيضا على حساب حجم المزارع. وصمة عار شرائح الدماغ مع 2٪ TTC و 1X PBS لمدة 10 دقائق في 37 درجة مئوية، ثم شطف مرتين مع 10٪formalin. إصلاح شرائح الدماغ في 10٪ formalin في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة.
بعد تجفيف شرائح الدماغ على ورق الأنسجة لامتصاص الزائدة formalin، وترتيبها على شريحة بلاستيكية نظيفة، وتوجيهها من روسترالي إلىcaudal، وتغطيتها مع شريحة بلاستيكية نظيفة أخرى. مسح الشريحة ضوئيًا باستخدام ماسح ضوئي. قم بقلب الشريحة، ثم قم بمسح الجانب العكسي.
استخدم برنامج ImageJ لحساب منطقة احتشاء كل قسم، وذلك بفتح ملف الصورة أولاً وإعداد مقياس الصورة. ثم استخدم التحديد اليدوي لتحديد منطقة infarct ، واستخدام المناطق التي تهم مدير العائد على الاستثمار لقياس المنطقة ذات الاهتمام. وأخيراً، قم بتلخيص المساحات المخصصة لكل قسم، ثم ضرب النتيجة بسمك القسم لتقدير حجم الاحشاء الكلي، ثم أكمل التحليل الإحصائي كما هو موضح في المخطوطة.
زيادة في مدة نقص التروية خلال هذا الإجراء MCAO reperfusion أنتجت درجات مختلفة من حجم الإقفارية الناجمة عن فقدان الخلايا العصبية في قشرة الدماغ من منطقة MCA الحق. وعلاوة على ذلك، انخفض الإقفار النشاط الحركي للحيوان في 48 ساعة بعد إعادة ضخ MCAO. بعد الإقفار الدماغي- reperfusion, تسللت الجزء الأكبر من الخلايا المناعية الطرفية نصف الكرة الأرضية من الدماغ الإقفاري.
وبالإضافة إلى ذلك، عندما تمت مقارنة هذا النموذج الانسداد لسفينة اثنين مع نموذج MCAO، كانت أحجامها غير مختلفة بشكل ملحوظ. يجب استخدام الحفر الدقيق بعناية عند إنشاء ثقب في الجمجمة. مع عمل غير لائق، والتسبب في نزيف سهل من MCA.
لا ينبغي أن يكون معطوبا MCA، ويجب تجنب النزيف قبل وبعد عملية الربط. يمكن فحص انسداد MCA وحالة إعادة التسريب بواسطة دوبلر الليزر. يمكن لهذه الطريقة تأكيد حالة تدفق الدم من MCA.
