ونشكر جميع أعضاء المختبر Nobile لإجراء مناقشات مفيدة في فحوصات بيوفيلم. وأيد هذا الدراسة المعاهد الوطنية للصحة (المعاهد الوطنية للصحة) منحة R21 AI125801 (C.J.N.). وأيد D.L.R. على زمالة دكتوراه من جامعة "معهد كاليفورنيا" للمكسيك والولايات المتحدة (UC-مكسيوس) y Consejo ناسيونال دي العلوم تكنولوجيا (المجلس الوطني).

<ol>
	<li>Nobile, C. J., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+Biofilms+and+Human+Disease.">Candida albicans Biofilms and Human Disease.</a> Annu Rev Microbiol. 69, 71-92 (2015).</li><li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infections+of+medical+devices.">Candida infections of medical devices.</a> Clin Microbiol Rev. 17 (2), 255-267 (2004).</li><li>Fox, E. P., Nobile, C. J., Dietrich, L. A., Friedmann, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Candida albicans: Symptoms, Causes and Treatment Options. , 1-24 (2013).</li><li>Gulati, M., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+biofilms:+development,+regulation,+and+molecular+mechanisms.">Candida albicans biofilms: development, regulation, and molecular mechanisms.</a> Microbes Infect. 18 (5), 310-321 (2016).</li><li>Uppuluri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersion+as+an+important+step+in+the+Candida+albicans+biofilm+developmental+cycle.">Dispersion as an important step in the Candida albicans biofilm developmental cycle.</a> PLoS Pathog. 6 (3), e1000828 (2010).</li><li>Andes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+an+in+vivo+central+venous+catheter+Candida+albicans+biofilm+model.">Development and characterization of an in vivo central venous catheter Candida albicans biofilm model.</a> Infect Immun. 72 (10), 6023-6031 (2004).</li><li>Nett, J. E., Marchillo, K., Spiegel, C. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+an+in+vivo+Candida+albicans+biofilm+denture+model.">Development and validation of an in vivo Candida albicans biofilm denture model.</a> Infect Immun. 78 (9), 3650-3659 (2010).</li><li>Nett, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+indwelling+urinary+catheter+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection.">Rat indwelling urinary catheter model of Candida albicans biofilm infection.</a> Infect Immun. 82 (12), 4931-4940 (2014).</li><li>Krom, B. P., Willems, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Models+for+Candida+Biofilm+Development.">In Vitro Models for Candida Biofilm Development.</a> Methods Mol Biol. 1356, 95-105 (2016).</li><li>Hawser, S. P., Douglas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+by+Candida+species+on+the+surface+of+catheter+materials+in+vitro.">Biofilm formation by Candida species on the surface of catheter materials in vitro.</a> Infect Immun. 62 (3), 915-921 (1994).</li><li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms.">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob Agents Chemother. 45 (9), 2475-2479 (2001).</li><li>Nett, J. E., Cain, M. T., Crawford, K., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+a+Candida+biofilm+microtiter+plate+model+for+measurement+of+antifungal+susceptibility+by+tetrazolium+salt+assay.">Optimizing a Candida biofilm microtiter plate model for measurement of antifungal susceptibility by tetrazolium salt assay.</a> J Clin Microbiol. 49 (4), 1426-1433 (2011).</li><li>Krom, B. P., Cohen, J. B., McElhaney Feser, G. E., Cihlar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+candidal+biofilm+microtiter+assay.">Optimized candidal biofilm microtiter assay.</a> J Microbiol Methods. 68 (2), 421-423 (2007).</li><li>Lohse, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+and+Optimizations+of+Candida+albicans+In+Vitro+Biofilm+Assays.">Assessment and Optimizations of Candida albicans In Vitro Biofilm Assays.</a> Antimicrob Agents Chemother. 61 (5), (2017).</li><li>Winter, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Identification+of+Biofilm-Specific+Proteolysis+in+Candida+albicans.">Global Identification of Biofilm-Specific Proteolysis in Candida albicans.</a> mBio. 7 (5), (2016).</li><li>Nobile, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+recently+evolved+transcriptional+network+controls+biofilm+development+in+Candida+albicans.">A recently evolved transcriptional network controls biofilm development in Candida albicans.</a> Cell. 148 (1-2), 126-138 (2012).</li><li>Fox, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+regulatory+network+temporally+controls+Candida+albicans+biofilm+formation.">An expanded regulatory network temporally controls Candida albicans biofilm formation.</a> Mol Microbiol. 96 (6), 1226-1239 (2015).</li><li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p.">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Curr Biol. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li><li>Baker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the bench: A laboratory navigator. 27, (2005).</li></ol>

كلاريسا J. Nobile مؤسس بيوسينيسيس، شركة، وهي شركة تطوير مثبطات والتشخيص للأغشية الحيوية المبيضة .

والرزن بيوفيلم موائع جزيئية للتخصيص الموضحة هنا يسمح لتصور تشكيل بيوفيلم في الوقت الحقيقي على مستوى خلية واحدة عندما تتعرض إلى معدل ثابت الاندفاق الصفحي ودرجة حرارة ثابتة. ويوفر وسيلة قوية لدراسة تطوير الأغشية الحيوية في السلالات البرية من نوع ومتحولة، ولوحظت آثار المعالجات عامل مضادات الميكروبات في الأغشية الحيوية في ظل الظروف التي تحاكي الظروف الفسيولوجية في إعدادات السريرية. وخلافا لمعظم في المختبر بيوفيلم فحوصات، يسمح هذا الأسلوب لفحص بيوفيلم النامي في الوقت الحقيقي كما أنها تشكل.
يمكن استخدام هذا الأسلوب في طريقة الفائق، حيث تصل إلى 24 عينة يمكن تشغيلها في وقت واحد لتقييم تكوين بيوفيلم. الأسلوب يمكن استخدامها أيضا لإجراء الشاشات الوراثية المكتبات متحولة إلى تحديد الجينات المطلوبة للتنمية بيوفيلم العادية، ويمكن استخدامها لتقييم الفعالية ضد الأغشية الحيوية لمركبات مضادات الميكروبات من الفائدة في شاشات مكتبة مجمع. ونحن نتوقع أن التطبيقات المستقبلية لهذا الجهاز موائع جزيئية وسوف تشمل هذه الشاشات. ومع ذلك، نلاحظ أن بعض اختبار المخدرات العلاج سيكون محدودا بسمك بيوفيلم تشكيل باستخدام هذا الجهاز موائع جزيئية كالأغشية الحيوية نمت ل &#62; ح 16 تميل إلى أن تسد قناة العرض. وهكذا، سوف تحتاج اختبار تجارب المخدرات الذي سيتم تنفيذه ل &#60; ح 16.
وعموما، هذا الجهاز قابلة للتخصيص للغاية وتنوعاً، ويمكن تعديلها لتقييم مختلف أنواع الجراثيم عبر الممالك ومعدلات التدفق، ودرجات الحرارة، ومرات حضانة ووسائل الإعلام. الأسلوب الموصوفة يوفر معلومات حول عدد من الجوانب المختلفة لتشكيل بيوفيلم، بما في ذلك التقيد الخلية الأولى ونضوج بيوفيلم وتشتت الخلية. على الرغم من أننا فقط تقرير النتائج لتشكيل بيوفيلم نوع واحد هنا، هذا البروتوكول يمكن تكييفها وفقا لدراسة تشكيل بيوفيلم المزدوج--مختلطة--الأنواع وأيضا.
خطوتين أمرا حاسما لنجاح تنفيذ هذا البروتوكول. أولاً، يجب تجنب فقاعات الهواء في النظام بالتدفئة وسائل الإعلام في درجة حرارة التجريبية. زلة مشترك واحد هو تمييع الخلايا في وسائل الإعلام التي كانت لا يسخن. وينبغي أن تضعف الخلايا في نفس الوسائط الذي يتم استخدامه للآبار مدخل. الثانية، وتدفق الخلايا من منفذ إلى مدخل الآبار يجب أن تراقب بعناية؛ إذا كان تدفق الخلايا بعيداً جداً، سوف تصبح ملوثة وسائط الإعلام مدخل والتجربة لن تسفر عن نتائج التفسير. من ناحية أخرى، إذا كانت الخلايا غير مسموح بنقل وصولاً إلى قناة العرض، ثم لا الخلايا ستكون مرئية في القناة خلال التجربة، مما يؤدي إلى صور فارغة. هي النقاط الرئيسية الإضافية أن نأخذ في الاعتبار أن حجم وحركة بين الآبار في لوحة موائع جزيئية مرتبطة معا لكل عمود، ومن الأهمية بمكان للحفاظ على التناسق وسائل الإعلام قدر الإمكان (مع اللزوجة مماثلة، خلية الكثافة، و تكوين) وكذلك الحجم الخلايا (إذا أمكن)، كما سيكون وسائل الإعلام المختلفة وخلية مختلفة الأحجام معدلات تدفق مختلفة في العمود. أثناء التجربة، يرصد الدفق الخلايا باستخدام مجهر؛ ومع ذلك، يمكن عرض قناتين فقط في وقت واحد (باستخدام هدفا X 10). وهكذا، فإنه ينصح بشدة إجراء تجربة وهمية لقياس الوقت اللازم لتدفق من منفذ إلى مدخل الآبار باستخدام الخلايا ووسائل الإعلام يعتزم استخدامها في التجربة الفعلية.
وعموما، نحن نوصي بشدة استخدام هذا الإنزيم بيوفيلم موائع جزيئية كفحص في المختبر تستغل من قبل في فيفو التجارب الحيوانية. المقايسة، ومع ذلك، لا يزال فحص في المختبر ، وأن النتائج تحتاج إلى التحقق من صحتها في نماذج حيوانية ذات الصلة. في تجاربنا، كانت نتائج هذا الفحص بيوفيلم موائع جزيئية أفضل القيمة التنبؤية لفحوصات بيوفيلم في فيفو مقارنة مع غيرها في المختبر فحوصات قمنا بتقييم14.

المبيضات البيض عضو commensal الحجمية البشرية، إلا وهو أيضا الممرضات انتهازية، القادرة على التسبب بالأمراض الفطرية السطحية وحادة1،2. سمة فوعة رئيسية من المبيضة هو قدرته على نموذج مرن والأغشية الحيوية مقاومة للعقاقير، مجتمعات خلايا انضمت إلى سطح والمغلقة في مواد1،مصفوفة خارج الخلية3. الأغشية الحيوية المبيضة عالية منظم، الذي يحتوي على عدة طبقات من أنواع متعددة من الخلايا (جولة الناشئين الخميرة على شكل الخلايا والخلايا بسيودوهيفال البيضاوي وخلايا أصله أنبوبي)4. المبيضة بيوفيلم التنمية يبدأ مع التمسك بخلايا الخميرة جولة-نموذج سطح (البذر في بيوفيلم)، تليها انتشار هذه الخلايا على السطح، وثم هيكل نضوج بيوفيلم غير ناضجة في بيوفيلم تشكيل تماما محاط ب المواد المصفوفة خارج الخلية4. بيوفيلم ناضجة الغالب تتألف من خلايا أصله ممدود التي تشكل شبكات كثيفة ومترابطة، وتوفير الاستقرار المعمارية إلى بيوفيلم4. طوال دورة الحياة بيوفيلم، جولة الناشئين الخميرة الخلايا تفريق من بيوفيلم ناضجة، ويجوز السفر إلى مناطق أخرى من الجسم لتسبب التهابات نشرها أو البذور الأغشية الحيوية الجديدة في،من4مواقع أخرى5. يمكن أن تشكل المبيضة الأغشية الحيوية على السطوح الحيوية، مثل الأسطح المخاطية وفي جميع أنحاء أنسجة المضيف، وعلى الأسطح غير الأحيائية، مثل القسطرة ومنظم نبضات القلب، وأطقم الأسنان والمفاصل الاصطناعية. بسبب خصائص المعاندة للأغشية الحيوية، أنها صعبة للغاية للقضاء على، وفي كثير من الحالات أن استراتيجية العلاج الفعال الوحيد إزالة الأجهزة المصابة4. وبالتالي من الأهمية بمكان للتحقيق في تشكيل بيوفيلم تحت ظروف مماثلة لتلك التي لوحظت في إعدادات السريرية.
وهناك عدة حاسمة في فيفو النماذج الحيوانية المستخدمة لدراسة المبيضة بيوفيلم تشكيل6،،من78؛ بيد أن هذه الدراسات يمكن أن تكون مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً، وتقتصر على عدد من سلالات ومضادات الجراثيم التي يمكن اختبارها في وقت معين. في المختبر بيوفيلم فحوصات، من ناحية أخرى، تسمح للتقييم السريع والفائق للمركبات المضادة للفطور وسلالات متحولة، وهي أكثر فعالية من حيث التكلفة والأخلاقية من فحوصات بيوفيلم التي تقوم بها في الحيوان نماذج9، 10،،من1112،،من1314. هنا يصف لنا في المختبر مقايسة التي وضعت والأمثل لمراقبة تشكيل بيوفيلم وقتيا تحت الاندفاق الصفحي استخدام موائع جزيئية لتخصيص جهاز14،15. يسمح الفحص للتصور من كل مرحلة من مراحل تكوين بيوفيلم، بما في ذلك الخطوة الأولى التقيد وتكاثر الخلايا، ونضوج بيوفيلم، وتشتت الخلية. المقايسة مفيد أيضا لتصور التغييرات مورفولوجيا الخلية في جميع أنحاء تطوير بيوفيلم.
لوحات ميكروتيتير، والتي تستخدم عادة في المختبر فحوصات بيوفيلم، بينما إنتاجية عالية، لا تسمح لظروف التدفق التي تسيطر عليها. تسمح أنظمة الخلية الاندفاق الصفحي التقليدية للتقييم المستمر لتشكيل بيوفيلم في ظروف التدفق التي تسيطر عليها، ولكن هذه غالباً ما تستغرق وقتاً طويلاً لإعداد وتميل إلى التحكم الديناميكي وإنتاجية محدودة. الجهاز موائع جزيئية المستخدمة هنا يتغلب على هذه القيود من خلال الجمع بين لوحات الإنتاجية العالية (التي تحتوي على آبار 48) مع دائرة الاندفاق الصفحي مدمج واستنساخه عاليا وتنوعاً، وقابلة للتخصيص.
وهنا، يمكننا وصف بروتوكول لاستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي المتاحة تجارياً لتقييم تكوين بيوفيلم البرية من نوع المبيضة سلالة، آثار عامل مضاد فطري معروف على تطوير بيوفيلم، وبيوفيلم تشكيل في سلالات متحولة اثنين (bcr1Δ/Δ و efg1 Δ/Δ) التي تم الإبلاغ عنها سابقا أن يكون بيوفيلم العيوب في المختبر و في فيفو16،،من1718. يمكن استخدامها في وصف بروتوكول اختبار فعالية مضادات الجراثيم في تثبيط تكوين بيوفيلم في جميع أنحاء تطوير بيوفيلم، وتحديد الجينات المطلوبة للتنمية بيوفيلم العادي بفحص مكتبات متحولة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BioFlux 1000z</td>
			<td>Fluxion</td>
			<td></td>
			<td>Automated microfluidic device for live cell analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well plate 0-20 dyne</td>
			<td>Fluxion</td>
			<td>910-0047</td>
			<td>Microfluidic plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Montage Software</td>
			<td>Fluxion</td>
			<td>Version 7.8.4.0</td>
			<td>Visualization analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ Software</td>
			<td>NIH</td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Criterion</td>
			<td>C7341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (D-Glucose)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R6504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutrient Broth</td>
			<td>Criterion</td>
			<td>C6471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco D-Mannitol</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>217020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Criterion</td>
			<td>C5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-003-CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Inoculating Loops</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30002-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes with Clear Lid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Cuvettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens Paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>52846-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate and Cuvette Spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>EPOCH2TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking Incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>M12820004</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of biofilm formation in candida albicans using an automated microfluidic device

المبيضات البيض هي الأكثر شيوعاً الممرض الفطرية للبشر، مما تسبب في حوالي 15% حالات الانتان المكتسبة في المستشفى. هو سمة فوعة رئيسية من المبيضة لها القدرة على شكل الأغشية الحيوية، والمجتمعات تنظيماً للخلايا التي تعلق على السطوح الحيوية وغير الحيوية. يمكن أن تشكل الأغشية الحيوية المبيضة على أنسجة المضيف، مثل الطبقات المخاطية، والأجهزة الطبية، مثل القسطرة ومنظم نبضات القلب، وأطقم الأسنان والأطراف الصناعية المشتركة. الأغشية الحيوية تطرح تحديات سريرية هامة لأنها شديدة المقاومة للاضطرابات الفيزيائية والكيميائية، ويمكن أن تعمل كخزانات للبذور نشر العدوى. وقد استخدمت مختلف في المختبر فحوصات لدراسة تكوين بيوفيلم المبيضة ، مثل microtiter لوحة فحوصات وقياسات الوزن الجاف وفحوصات سلامة الخلية ومجهرية ليزر المسح [كنفوكل]. كل من هذه الاختبارات فحوصات نقطة نهاية واحدة، حيث يتم تقييم تشكيل بيوفيلم في نقطة زمنية محددة. وهنا يصف لنا بروتوكولا لدراسة تشكيل بيوفيلم في الوقت الحقيقي باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي تحت ظروف التدفق الصفحي. يسمح هذا الأسلوب للمراقبة لتشكيل بيوفيلم بيوفيلم يتطور مع مرور الوقت، استخدام الشروط القابلة للتخصيص التي تحاكي تلك المضيفة، مثل تلك التي ووجهت في القسطرة والأوعية الدموية. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتقييم عيوب بيوفيلم طفرات وراثية وكذلك الآثار المثبطة لمضادات الجراثيم في التنمية بيوفيلم في الوقت الحقيقي.

أجرينا المقايسة بيوفيلم موائع جزيئية الموصوفة هنا باستخدام نوع البرية سلالة المبيضة ظروف اثنين من وسائل الإعلام (media ربمي-1640 والعنكبوت)، وسلالة البرية من نوع حضور العقاقير المضادة للفطور المعروفة الامفوتريسين ب (16 ميكروغرام/مل) في ربمي، وسبق أن أبلغت سلالات متحولة اثنين لها عيوب في تكوين بيوفيلم (bcr1Δ/Δ و efg1 Δ/Δ) في وسائل الإعلام العنكبوت.
فيديو 1 يبين تطور بيوفيلم البرية من نوع في المتوسط RPMI 1640 وآثار العقاقير المضادة للفطور، الامفوتريسين ب، على تشكيل بيوفيلم. تحت الظروف البرية من نوع، عدة خلايا التمسك بشدة بالقناة والخلايا تشكل خيوط فطرية مع مرور الوقت وبيوفيلم سميكة يمكن ملاحظتها مع إينتيركالاتينج خيوط فطرية وخلايا الخميرة. نهاية التجربة موائع جزيئية، يملأ بيوفيلم البرية من نوع تماما قناة العرض. ومع ذلك، قد وجود الامفوتريسين ب، له تأثير واضح على الحد بيوفيلم. على وجه التحديد، على انضمام الخلايا يتناقص، وخلافا للشروط غير المعالجة، حضور الامفوتريسين B، يمكن رؤية العديد من الخلايا المتدفقة بعيداً مع تدفق القص لوسائط الإعلام. لم يتم تشكيل كتقدم الوقت وتفشل الخلايا على شكل خيوط فطرية وبيوفيلم. كما تظهر هذه الاختلافات في الشكل 3، الذي يصور الوقت 4-نقاط الفحص في ح 0، ح 2، ح 6، وح 12.
فيديو 2 يبين تطور بيوفيلم البرية من نوع واثنين سبق الإبلاغ عنها طفرات معيبة بيوفيلم (bcr1 Δ/Δ و efg1 Δ/Δ) في وسائل الإعلام العنكبوت. إظهار كلا سلالات Δ/Δ Δ/Δ و efg1 bcr1 تشكيل بيوفيلم انخفاض حاد بالمقارنة مع سلالة البرية من نوع اسوي. لسلالة Δ/Δ efg1 ، لاحظنا أن الخلايا التقيد بها لا تشكل خيوط فطرية وبيوفيلم الناتجة عن شدة معيبة. لسلالة Δ/Δ bcr1 ، لاحظنا أن ليس فقط هو سلالة Δ/Δ bcr1 المعيبة في تشكيل بيوفيلم، ولكن أيضا يعرض عيب التزام واضح، حيث يمكن رؤية خلايا الانجراف في اتجاه تدفق القص كما أنها لا تلتزم عرض القناة. كما تظهر هذه الاختلافات في الشكل 4، الذي يصور 4 نقاط زمنية من التحليل في ح 0، ح 2، ح 6، وح 12.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56743/56743fig1.jpg"> 
رقم 1: موائع جزيئية الأداة المستخدمة في هذه التجربة- تظهر لوحة أ موائع جزيئية الوسيلة المستخدمة، لوحة ب يظهر لوحة واجهة، تظهر لوحة ج ملخص تخطيطي قناة عرض واحد (المرحلة) والمراحل الفرعية الثلاث الملتقطة بواسطة الكاميرا أثناء التجربة، و تظهر لوحة د ملخص تخطيطي من لوحة موائع جزيئية 48-كذلك تستخدم مع تخطيطي لآبار مخرج ومدخل ونافذة عرض. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/56743fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56743/56743fig2.jpg"> 
رقم 2: حدد لقطات من التصوير مودوليسوفتواري وموائع جزيئية لوحة التحكم في النظام- تظهر لوحة "وحدة التحكم"، التي تحتوي على عناصر تحكم للوحة موائع جزيئية، وتظهر لوحة ب إطار الوحدة النمطية التصوير، '"نقل المرحلة"إلى"الموضع المطلق"' وحدة نمطية (خريطة)، الوحدة النمطية '"اكتساب الأبعاد"' (نجمة داود الحمراء)، ووحدة '"تحديث نموذج التكيف"' (SRA). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/56743fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56743/56743fig3.jpg"> 
الشكل 3: يؤدي التعرض إلى الامفوتريسين بعيوب تشكيل بيوفيلم- الوقت التصور يعتمد تكوين بيوفيلم في وسائل الإعلام RPMI 1640 (العمود 1)، و RPMI 1640 تستكمل مع 16 ميكروغرام/مل الامفوتريسين ب (عمود 2) تحت التدفق الديناميكي (0.5 داين/سم2) عند 37 درجة مئوية للانضمام بعد ح 12 في نظام موائع جزيئية. ح 0 الممثل (يغسل ما بعد الانضمام والأولية)، ح 2، ح 6، وصور ح 12 (من أعلى إلى أسفل) وترد لسلالة البرية من نوع اسوي SN250 (الأعمدة 1 و 2). هي أشرطة مقياس ميكرومتر 20 في كل فريق. يتم توفير أشرطة الفيديو في مرور الوقت المقابلة لتشكيل بيوفيلم في الفيديو 1. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/56743fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56743/56743fig4.jpg"> 
الشكل 4: يؤدي حذف BCR1 أو EFG1 بيوفيلم تشكيل العيوب. الوقت التصور يعتمد تكوين بيوفيلم في العنكبوت وسائط الإعلام (أعمدة 1-3) تحت التدفق الديناميكي (0.5 داين/سم2) عند 37 درجة مئوية للانضمام بعد ح 12 في نظام موائع جزيئية. ح 0 الممثل (يغسل ما بعد الانضمام والأولية)، ح 2، ح 6، وصور ح 12 (من أعلى إلى أسفل) وترد لسلالة البرية من نوع اسوي SN250 Δ/Δ bcr1(العمود 1)، سلالة (العمود 2)، و efg1 سلالة Δ/Δ (العمود 3). هي أشرطة مقياس ميكرومتر 20 في كل فريق. أشرطة الفيديو في مرور الوقت المقابلة لتشكيل بيوفيلم ترد في الفيديو 2. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/56743fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
الفيديو 1: <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/Video-1-WT_and_WT_plus_AmpB.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>
الفيديو 2: <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56743/Video-2-WT_bcr1_efg1_Mutants.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device at JoVE.com

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

ويصف هذا البروتوكول استخدام جهاز موائع جزيئية الآلي للتخصيص لتصور تشكيل بيوفيلم في المبيضات البيض تحت ظروف فسيولوجية المضيف.

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

visualization-biofilm-formation-candida-albicans-using-an-automated

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

10.5K Views.  University of California, Merced. ويصف هذا البروتوكول استخدام جهاز موائع جزيئية الآلي للتخصيص لتصور تشكيل بيوفيلم في المبيضات البيض تحت ظروف فسيولوجية المضيف.

Video: Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third most common infection in US hospitals. Different manifestations of candidiasis are associated with biofilm formation, both on host tissues and/or medical devices (i.e. catheters). Biofilm formation carries negative clinical implications, as cells within the biofilms are protected from host immune responses and from the action of antifungals. We have developed a simple, fast and robust in vitro model for the formation of C. albicans biofilms using 96 well microtiter-plates, which can also be used for biofilm antifungal susceptibility testing. The readout of this assay is colorimetric, based on the reduction of XTT (a tetrazolium salt) by metabolically active fungal biofilm cells. A typical experiment takes approximately 24 h for biofilm formation, with an additional 24 h for antifungal susceptibility testing. Because of its simplicity and the use of commonly available laboratory materials and equipment, this technique democratizes biofilm research and represents an important step towards the standardization of antifungal susceptibility testing of fungal biofilms.

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

We describe a simple, rapid and robust method for the formation of Candida albicans biofilms using 96 well microtiter plates and its utility in antifungal susceptibility testing of cells within biofilms.

96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings. In fact, life in a biofilm probably represents the predominate mode of growth for microbes in most environments. Mature biofilms have a few distinct characteristics. Biofilm microbes are typically surrounded by an extracellular matrix that provides structure and protection to the community. Microbes growing in a biofilm also have a characteristic architecture generally comprised of macrocolonies (containing thousands of cells) surrounded by fluid-filled channels. Biofilm-grown microbes are also notorious for their resistance to a range of antimicrobial agents including clinically relevant antibiotics.
The microtiter dish assay is an important tool for the study of the early stages in biofilm formation, and has been applied primarily for the study of bacterial biofilms, although this assay has also been used to study fungal biofilm formation. Because this assay uses static, batch-growth conditions, it does not allow for the formation of the mature biofilms typically associated with flow cell systems. However, the assay has been effective at identifying many factors required for initiation of biofilm formation (i.e, flagella, pili, adhesins, enzymes involved in cyclic-di-GMP binding and metabolism) and well as genes involved in extracellular polysaccharide production. Furthermore, published work indicates that biofilms grown in microtiter dishes do develop some properties of mature biofilms, such a antibiotic tolerance and resistance to immune system effectors.
This simple microtiter dish assay allows for the formation of a biofilm on the wall and/or bottom of a microtiter dish. The high throughput nature of the assay makes it useful for genetic screens, as well as testing biofilm formation by multiple strains under various growth conditions. Variants of this assay have been used to assess early biofilm formation for a wide variety of microbes, including but not limited to, pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, staphylocci, enterococci, mycobacteria and fungi.
In the protocol described here, we will focus on the use of this assay to study biofilm formation by the model organism Pseudomonas aeruginosa. In this assay, the extent of biofilm formation is measured using the dye crystal violet (CV). However, a number of other colorimetric and metabolic stains have been reported for the quantification of biofilm formation using the microtiter plate assay. The ease, low cost and flexibility of the microtiter plate assay has made it a critical tool for the study of biofilms.

The assay describes a rapid means to measure early biofilm formation in bacteria and fungi. This method uses a microtiter plate as the substratum for microbial biofilm formation, and the biofilm is visualized using crystal violet strain. The assay provides either a qualitative or quantitative assay for early biofilm formation.

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. Biofilms are community-associated bacteria attached to a surface and encased in a matrix. The role of the extracellular matrix is multifaceted, including facilitating nutrient acquisition, and offers significant protection against environmental stresses (e.g. host immune responses). In an effort to acquire a better understanding as to how the bacteria within a biofilm respond to environmental stresses we have used a protocol wherein we visualize bacterial biofilms which have formed in an 8-well chamber slide. The biofilms were stained with the BacLight Live/Dead stain and examined using a confocal microscope to characterize the relative biofilm size, and structure under varying incubation conditions. Z-stack images were collected via confocal microscopy and analyzed by COMSTAT. This protocol can be used to help elucidate the mechanism and kinetics by which biofilms form, as well as identify components that are important to biofilm structure and stability.

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

This article describes the procedure for the formation and visualization of a bacterial biofilm grown within an 8-well chamber slide

تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

دراسة المجتمعات الميكروبية<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج من التفاعل بوساطة بين المضيف<em&gt; المبيضات البيض</em&gt; و<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في الخطوط الجوية

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, a significant stress response is induced during gastrointestinal transit and upon bile exposure, a normal component of human digestion. To overcome the bactericidal effects of bile, many enteric pathogens form a biofilm hypothesized to permit survival when transiting through the small intestine. Here we present methodologies to define biofilm formation through solid-phase adherence assays as well as extracellular polymeric substance (EPS) matrix detection and visualization. Furthermore, biofilm dispersion assessment is presented to mimic the analysis of events triggering release of bacteria during the infection process. Crystal violet staining is used to detect adherent bacteria in a high-throughput 96-well plate adherence assay. EPS production assessment is determined by two assays, namely microscopy staining of the EPS matrix and semi-quantitative analysis with a fluorescently-conjugated polysaccharide binding lectin. Finally, biofilm dispersion is measured through colony counts and plating. Positive data from multiple assays support the characterization of biofilms and can be utilized to identify bile salt-induced biofilm formation in other bacterial strains.

This protocol enables the reader to analyze bile salt-induced biofilm formation in enteric pathogens using a multifaceted approach to capture the dynamic nature of bacterial biofilms by assessing adherence, extracellular polymeric substance matrix formation, and dispersion.

تشكيل بيوفيلم التي يسببها الملح الصفراوية في مسببات الأمراض المعوية: تقنيات لتحديد وتقدير حجم

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

العميق "الجلد حقن كنموذج" "عدوى الجلد" المبيضات البيض "التحليل النسيجي"

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic growth of C. albicans SN425, the inoculums grew on Yeast Nitrogen Base media. For biofilm formation, RPMI 1640 media, which have high concentrations of amino acids, were applied to help biofilm growth. Biofilms of 48 h were treated twice a day for a period of 1 min with a non-coherent light device (red light; wavelength = 635 nm; energy density = 87.6 J&#183;cm-2). As a positive control (PC), 0.12% chlorhexidine (CHX) was applied, and as a negative control (NC), 0.89% NaCl was applied to the biofilms. Colony forming units (CFU), dry-weight, soluble and insoluble exopolysaccharides were quantified after treatments. Briefly, the protocol presented here is simple, reproducible and provides answers regarding viability, dry-weight and extracellular polysaccharide amounts after red light treatment.

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcome of red light application on the growth of Candida albicans biofilm. A non-coherent red light device with the wavelength of 635 nm and energy density of 87.6 J&#183;cm-2 was applied throughout the growth of Candida albicans biofilms for 48 h.

المعالجة الضوئية اليومية مع الضوء الأحمر لتنظيم "النمو بيوفيلم" المبيضات البيض

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most colonized hosts, the commensal reservoir does serve as a repository for infectious disease, and the presence of high fungal titers in the gut is associated with inflammatory bowel disease. Here, we describe a method to visualize C. albicans cell morphology and localization in a mouse model of stable gastrointestinal colonization. Colonization is established using a single dose of C. albicans in animals that have been treated with oral antibiotics. Segments of gut tissue are fixed in a manner that preserves the architecture of luminal contents (microorganisms and mucus) as well as the host mucosa. Finally, fluorescent in situ hybridization is performed using probes against fungal rRNA to stain for C. albicans and hyphae. A key advantage of this protocol is that it allows for simultaneous observation of C. albicans cell morphology and its spatial association with host structures during gastrointestinal colonization.

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

The purpose of this protocol is to visualize Candida albicans cell shape and localization in the mammalian gastrointestinal tract.

التصور من المبيضات الbicans في الجهاز الهضمي Murine باستخدام التهجين في الموقع الفلورسنت

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch from yeast-form growth to hyphal growth. Cells initiating this process become adherent to surfaces as well as to each other, with the resulting development of a biofilm colony. This commonly occurs not only on mucosal tissue surfaces in yeast infections, but also on medical implants such as catheters. It is well known that biofilm cells are resistant to antifungal drugs, and that cells that shed from the biofilm can lead to dangerous systemic infections. Biofilms range from heavily translucent to opaque due to refractive heterogeneity. Therefore, fungal biofilms are difficult to study by optical microscopy. To visualize internal structural, cellular, and subcellular features, we clarify fixed intact biofilms by stepwise solvent exchange to a point of optimal refractive index matching. For C. albicans biofilms, sufficient clarification is attained with methyl salicylate (n = 1.537) to enable confocal microscopy from apex to base in 600 &#181;m biofilms with little attenuation. In this visualization protocol we outline phase contrast refractometry, the growth of laboratory biofilms, fixation, staining, solvent exchange, the setup for confocal fluorescence microscopy, and representative results.

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

To view and quantify the internal features of Candida albicans biofilms, we prepare fixed intact specimens that are clarified by refractive index matching. Then, optical sectioning microscopy can be used to obtain three-dimensional image data though the full thickness of the biofilm.

توضيح والتصوير المبيضات ألبيكانس بيوفيم

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...