ويود المؤلفون أن يشكروا نانديني نالابان وشارون يو للمساعدة في الخطوات التقنية. وقد تم تمويل الدراسة من قبل منحة البدء ل كغ من مدرسة لي كونغ شيان للطب، جامعة نانيانغ التكنولوجية، ومن قبل جائزة عالم السريرية العليا من المجلس الوطني للبحوث الطبية وزارة الصحة في سنغافورة (نمرك) ل لوت (نمرك / سسا / 045/2012 م) ومنحة مقدمة من المركز الوطني لمكافحة الجراد الصحراوي (نمرك) وتدار من قبل المركز الوطني للابتكار الصحي إلى كك و لوت (نهيك-12D-1409007).

تم جمع جميع العينات العين المستخدمة في هذه الدراسة من عيادة العين الجافة في مركز سنغافورة الوطني للعيون التي وافق عليها مجلس مراجعة المؤسسية المؤسسية سينغهيلث ومجلس المراجعة المؤسسية نانيانغ التكنولوجية، سنغافورة. ملاحظة: خضعت مواضيع الاختبارات السريرية لتقييم مدى الالتهاب وشدة الاختلالات المسيل للدموع قبل تنفيذ إيك. وشملت الاختبارات السريرية الوقت غير الغازية للكسر المسيل للدموع (ني-تبوت) 14 واحمرار الملتحمة (احتقان) 15 ، 16 تقييمها مع أداة تشخيصية، واختبار شيرمر 17 ، وتقييم المريض القياسية من جفاف العين الاستبيان (سبيد) 18 ، والقرنية تلطيخ 19 . 1. مجموعة من عينات العين بواسطة إيك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تحديد الحالة السريرية، تخديرعيون المشارك عن طريق تطبيق 1 - 2 قطرات من التخدير الموضعي، بروباراكايين هيدروكلوريد، إلى الملتحمة العلوية العلوية والسفلية السفلي. انتظر لمدة 4 - 5 دقائق للإحساس لاذع من مخدر على ارتداء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع عينات من كل من الأنف والزمني الملتحمة الشظوية مع اثنين من أجهزة علم الانطباع. ملاحظة: يتم استخدام جهاز واحد لجمع اثنين من عينات الانطباع. هنا، تم استخدام جهازين لجمع أربعة أغشية الانطباع. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جهاز علم الانطباع علميا على الملتحمة. اضغط على زر الضغط برفق واستمر لمدة 2 - 3 ثوان. ملاحظة: الجهاز يأتي مع الغشاء. يتم تحرير الضغط تلقائيا بعد الضغط على الزر. يستغرق سوى بضع ثوان للافراج عن الضغط وإزالة الجهاز. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن الغشاء في أنبوب ميكروسنتريفوج تحتوي على 1 مل من وسائل الإعلام والثقافة (روزويل بارك المعهد التذكاري المتوسطة (رمي) + 10٪ مصل البقري الجنين(فبس) + 1٪ البنسلين الستربتومايسين (القلم بكتيريا)) من قبل مشرط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الخلايا من غشاء الجهاز عن طريق كشط المستمر لمدة 1 دقيقة مع 10 ميكرولتر ماصة طرف. ملاحظة: اكتمال اكتمال عندما يصبح سطح الغشاء متفاوتة. أرقام الخلايا من كل غشاء متغير (100 - 500 خلية / غشاء). معالجة العينات في غضون 2 - 3 ساعة من جمع. </li></ol> 2. الخلايا المناعية من قبل التدفق الخلوي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 400 x ج لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لإزالة وسائل الإعلام. ريسوسبيند الخلية بيليه مع 50 ميكرولتر من التدفق الخلوي تلطيخ العازلة (الفوسفات مخزنة المالحة (بس) + 0.05٪ ألبومين المصل البقري (بسا)). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا اللطخة مع لوحة من الأجسام المضادة (على سبيل المثال ، CD3 البنفسجي الرائعة (بف) 510 (UCHT1)، CD4 ألوفيكوسيانين-H7 (أبك-H7) (SK3)، CCR7 فيكويريثرين (بي) -A، CD45RO بي سيانين 7 (PE- Cy7) -A، ويعيش / ميت علامة الخلية 7-أد) في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة فيداكن. استخدام الأجسام المضادة مباشرة من الأسهم وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. ملاحظة: لتركيز الأجسام المضادة، واستخدام 2.5 ميكرولتر من CD3-BV510، 1.25 ميكرولتر من CD4-أبك-H7، CD45RO-بي-Cy7، 7-آد و 10 ميكرولتر من CCR7-بي. استخدام خلايا الدم وحيدات النوى المحيطية (بمكس) لمعايرة تركيزات مختلفة من الأجسام المضادة. للمعايرة، واتخاذ تركيز الأجسام المضادة المذكورة في بروتوكول الشركة المصنعة واستخدام نصف وربع التركيز الموصى بها. استخدام الحد الأدنى من تركيز الأجسام المضادة لتجنب تسرب إلى قنوات فلوريكروم أخرى. وقد لوحظت إشارات واضحة مع تركيزات المذكورة من الأجسام المضادة. تم إجراء التعويض عن طريق اختبار بمكس في البداية وفقا للبروتوكول المذكور في ويليامز وآخرون . 20 للاختبار، وحضنت بمكس مع نفس مجموعة من الأجسام المضادة المستخدمة هنا وتعويضها بمقارنة البقع الأجسام المضادة مفردة ومتعددة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحاضنة بيريأود، إضافة 1 مل من تلطيخ العازلة إلى الأنبوب، وتخلط جيدا، وأجهزة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ريسوسبيند الخلايا في 200 ميكرولتر من تلطيخ العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل العينات على جهاز التدفق الخلوي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الحصول على البيانات، ومعايرة تدفق قناة الجهد الكهروضوئي مع إعداد عداد الكريات وتتبع (كس &amp; T) الخرز لتطبيع اكتساب البيانات في أيام مختلفة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح التدفق الخلوي جمع البيانات البرمجيات، انقر فوق &quot;إعداد و مراقبة الجودة&quot; زر، واختيار الصحيح كس &amp; T حبة الكثير عدد، تحميل الخرز، ثم انقر فوق زر &quot;ابدأ&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ريسوسبيند الخلايا عن طريق التنصت بلطف أنبوب قبل تحميل العينات إلى الجهاز. افتح برنامج جمع البيانات وانقر على &quot;معاينة&quot;. عندما يكون معدل العتبة مستقرا، انقر على &quot;اكتساب&quot;. مراقبة مستوى العينة وانقر على &quot;إيقاف&quot; عند نفاد العينات. ملاحظة: الحصول على 10،000 الأحداث لكل عينة. </lط&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحصول على 10،000 الأحداث، إنشاء سك-A و فسك-A مؤامرة نقطة في ورقة العمل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق زر &quot;بوابة المضلع&quot; ورسم بوابة (وهذا هو P1) على جميع الأحداث مع قيمة فسك-A&gt; 5 × 10 4 لاستبعاد الحطام. انقر فوق &quot;إنشاء نقطة مؤامرة&quot; زر لتوليد مؤامرة نقطة جديدة، انقر بزر الماوس الأيمن فوق نقطة لطخة، واختيار &quot;خصائص&quot; لفتح نافذة &quot;محرر المؤامرة&quot;، ثم اختر &quot;P1&quot;. انقر فوق فسك-A على المحور س من P1 نقطة مؤامرة، تغييره إلى CD3-BV510. ارسم &#39;&#39; بوابة مضلع &#39;&#39; لاختيار سكان CD3 + واسمها &#39;&#39; P2 &#39;&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;إنشاء نقطة مؤامرة&quot; زر لتوليد مؤامرة نقطة جديدة، انقر بزر الماوس الأيمن فوق نقطة لطخة، اختيار &quot;خصائص&quot; لفتح نافذة &quot;محرر المؤامرة&quot;. انقر فوق فسك-A على المحور س من مؤامرة نقطة P2 وتغييره إلى 7-آد. رسم &quot;بوابة مضلع &#39;&#39; لمدة 7-آد - السكان واختيار &#39;&#39; P3 &#39;&#39;. P3 هنا هو CD3 +الخلايا الحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;إنشاء نقطة مؤامرة&quot; زر لتوليد مؤامرة نقطة جديدة، انقر بزر الماوس الأيمن فوق نقطة لطخة، اختيار &quot;خصائص&quot; لفتح نافذة &quot;محرر المؤامرة&quot;. انقر فوق CD3-BV510 على المحور س و CD4-APCH7 على المحور ص من مؤامرة النقطة P3. رسم مستطيل البوابات على الجانبين العلوي والسفلي من الربع واختيار &#39;&#39; P4 &#39;&#39; و &#39;&#39; P5 &#39;&#39;، على التوالي. P4 يعيش CD3 + CD4 + و P5 يعيش CD3 + CD4 - خلايا T. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;إنشاء نقطة مؤامرة&quot; زر لتوليد مؤامرة نقطة جديدة، انقر بزر الماوس الأيمن فوق نقطة لطخة، اختيار &quot;خصائص&quot; لفتح نافذة &quot;محرر المؤامرة&quot;. انقر فوق CD45RO بي-Cy7 على المحور السيني و CCR7-بي على المحور الصادي لكل من P4 و P5 المؤامرات. رسم &#39;&#39; بوابة رباعية &#39;&#39; على هذه المؤامرة نقطة. ملاحظة: الجانب الأيسر العلوي، الجانب الأيمن العلوي، الجانب الأيسر السفلي والأرباع الجانب الأيسر السفلي هنا هي السذاجة، والذاكرة المركزية (T سم )، ه(T إم )، ذاكرة متباينة مؤقتا المستجيب (T إمرا ) الخلايا التائية، على التوالي. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Thatcher, R. W., Darougar, S., Jones, B. R. <a target="_blank" href="http://jamanetwork.com/journals/jamaophthalmology/article-abstract/632182">Conjunctival impression cytology.</a> Arch Ophthalmol. 95 (4), 678-681 (1977).</li>
<li>Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+conjunctival+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A simple conjunctival biopsy.</a> Am J Ophthalmol. 84 (6), 798-801 (1977).</li>
<li>Baudouin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathology+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The pathology of dry eye.</a> Surv Ophthalmol. 45, Suppl 2. S211-S220 (2001).</li>
<li>Nelson, J. D., Wright, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctival+goblet+cell+densities+in+ocular+surface+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Conjunctival goblet cell densities in ocular surface disease.</a> Arch Ophthalmol. 102 (7), 1049-1051 (1984).</li>
<li>Brignole, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Fas-Fas+ligand+antigens+and+apoptotic+marker+APO2.7+by+the+human+conjunctival+epithelium.+Positive+correlation+with+class+II+HLA+DR+expression+in+inflammatory+ocular+surface+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Expression of Fas-Fas ligand antigens and apoptotic marker APO2.7 by the human conjunctival epithelium. Positive correlation with class II HLA DR expression in inflammatory ocular surface disorders.</a> Exp Eye Res. 67 (6), 687-697 (1998).</li>
<li>Knop, E., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+eye-associated+lymphoid+tissue+in+corneal+immune+protection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The role of eye-associated lymphoid tissue in corneal immune protection.</a> J Anat. 206 (3), 271-285 (2005).</li>
<li>Lopez-Miguel, A., Gutierrez-Gutierrez, S., Garcia-Vazquez, C., Enriquez-de-Salamanca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+Collection+From+Human+Conjunctival+Epithelial+Cells+Obtained+With+a+New+Device+for+Impression+Cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">RNA Collection From Human Conjunctival Epithelial Cells Obtained With a New Device for Impression Cytology.</a> Cornea. 36 (1), 59-63 (2017).</li>
<li>Tomlins, P., Roy, P., Cunow, J., Rauz, S. <a target="_blank" href="http://iovs.arvojournals.org/article.aspx?articleid=2150378">Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival impression for Flow Cytometry.</a> Invest Opthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).</li>
<li>Barros Jde, N., Almeida, S. R., Lowen, M. S., Cunha, M. C., Gomes, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impression+cytology+in+the+evaluation+of+ocular+surface+tumors%3A+review+article%5BTitle%5D)+AND+%22Arq+Bras+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Impression cytology in the evaluation of ocular surface tumors: review article.</a> Arq Bras Oftalmol. 78 (2), 126-132 (2015).</li>
<li>Calonge, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impression+cytology+of+the+ocular+surface%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Impression cytology of the ocular surface: a review.</a> Exp Eye Res. 78 (3), 457-472 (2004).</li>
<li>Haller-Schober, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+an+impression+cytology+grading+system+%28IC+score%29+in+patients+with+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Evaluating an impression cytology grading system (IC score) in patients with dry eye syndrome.</a> Eye (Lond). 20 (8), 927-933 (2006).</li>
<li>Singh, R., Joseph, A., Umapathy, T., Tint, N. L., Dua, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impression+cytology+of+the+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Impression cytology of the ocular surface.</a> Br J Ophthalmol. 89 (12), 1655-1659 (2005).</li>
<li>Williams, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctival+Neutrophils+Predict+Progressive+Scarring+in+Ocular+Mucous+Membrane+Pemphigoid%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Conjunctival Neutrophils Predict Progressive Scarring in Ocular Mucous Membrane Pemphigoid.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (13), 5457-5469 (2016).</li>
<li>Best, N., Drury, L., Wolffsohn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+Oculus+Keratograph%5BTitle%5D)+AND+%22Cont+Lens+Anterior+Eye%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the Oculus Keratograph.</a> Cont Lens Anterior Eye. 35 (4), 171-174 (2012).</li>
<li>Downie, L. E., Keller, P. R., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+ocular+bulbar+redness%3A+a+comparison+of+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Physiol+Opt%22%5BJournal%5D)">Assessing ocular bulbar redness: a comparison of methods.</a> Ophthalmic Physiol Opt. 36 (2), 132-139 (2016).</li>
<li>Amparo, F., Wang, H., Emami-Naeini, P., Karimian, P., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ocular+Redness+Index%3A+a+novel+automated+method+for+measuring+ocular+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The Ocular Redness Index: a novel automated method for measuring ocular injection.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54 (7), 4821-4826 (2013).</li>
<li>Shapiro, A., Merin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schirmer+test+and+break-up+time+of+tear+film+in+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Schirmer test and break-up time of tear film in normal subjects.</a> American journal of ophthalmology. 88 (4), 752-757 (1979).</li>
<li>Finis, D., Pischel, N., Konig, C., Hayajneh, J., Borrelli, M., Schrader, S., Geerling, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+OSDI+and+SPEED+questionnaires+for+the+evaluation+of+dry+eye+disease+in+clinical+routine%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Comparison of the OSDI and SPEED questionnaires for the evaluation of dry eye disease in clinical routine.</a> Ophthalmologe. 111 (11), 1050-1056 (2014).</li>
<li>Behrens, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunctional+tear+syndrome%3A+a+Delphi+approach+to+treatment+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Dysfunctional tear syndrome: a Delphi approach to treatment recommendations.</a> Cornea. 25 (8), 900-907 (2006).</li>
<li>Williams, G. P., Pachino, A., Long, H. M., Rauz, S., Curnow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+production+and+antigen+recognition+by+human+mucosal+homing+conjunctival+effector+memory+CD8%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Opthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytokine production and antigen recognition by human mucosal homing conjunctival effector memory CD8+ T cells.</a> Invest Opthalmol Vis Sci. 55 (12), 8523-8530 (2014).</li>
<li>Bose, T., Lee, R., Hou, A., Louis, T., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+resident+memory+T+cells+in+the+human+conjunctiva+and+immune+signatures+in+human+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Tissue resident memory T cells in the human conjunctiva and immune signatures in human dry eye disease.</a> Sci Rep. 7, 45312(2017).</li>
<li>Williams, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dominant+human+conjunctival+epithelial+CD8alphabeta%2B+T+cell+population+is+maintained+with+age+but+the+number+of+CD4%2B+T+cells+increases%5BTitle%5D)+AND+%22Age+%28Dordr%29%22%5BJournal%5D)">The dominant human conjunctival epithelial CD8alphabeta+ T cell population is maintained with age but the number of CD4+ T cells increases.</a> Age (Dordr). 34 (6), 1517-1528 (2012).</li>
<li>Mrugacz, M., Zak, J., Bakunowicz-Lazarczyk, A., Wysocka, J., Minarowska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+analysis+of+HLA-DR+antigen+in+conjunctival+epithelial+cells+of+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric analysis of HLA-DR antigen in conjunctival epithelial cells of patients with cystic fibrosis.</a> Eye (Lond). 21 (8), 1062-1066 (2007).</li>
</ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

هذه هي تقنية سهلة وسريعة وأقل الغازية التي يمكن استخدامها في العيادات الخارجية لتنميط المناعة نسبيا نسبيا على النقيض من التقنيات التقليدية مثل كشط، مسحة، بيبتينغ أو ورقة تصفية ماصة 1 ، 2 . وهناك نوع آخر من هذه التقنية يستخدم بالفعل في إعدادات البحث 22 . التطبيق المستقبلي للمنهجية المقترحة هو لطبقية المرضى في التجارب السريرية مع أمراض العين، وخاصة تلك التي تتطلب المناعي. التحدي الرئيسي مع هذه التقنية هو عدد قليل نسبيا من الخلايا المناعية استرجاعها بعد جمع الانطباع وكشط. وتراوح العدد الكلي للخلايا CD3 + T المستعادة من أربعة انطباعات لكل فرد من 500 ~ 1000 خلية. تم غسل عينات العين قبل تحليل التدفق الخلوي لعدد ضئيل من المرات لتجنب المزيد من فقدان الخليةالصورة. الخطوات والتحديات الحاسمة التي لا تزال داخل البروتوكول هي جمع كفاءة عينات العين والكشط الصحيح من الغشاء لتحقيق أرقام الخلايا أعلى. ومع ذلك، فإن هذا القيد من غير المرجح أن التحيز تجاه أي النمط الظاهري المناعي محددة. كان استكشاف الأخطاء وإصلاحها أجريت هنا لتحقيق أقصى قدر من العائد من الخلايا للحد من عدد من الخطوات الغسيل بعد وقبل حضانة الأجسام المضادة. هناك قيود أخرى لاستخدام إيك. في المرضى الذين يعانون من سطح العين شديدة الكيراتين أو فيبروزد مثل في متلازمة ستيفن جونسون، قد يكون العائد الخلوي أقل من ذلك في هذه الدراسة. قد تتغير نسبة الخلايا المناعية إذا تم تخزين العينات بدلا من تحليلها في نفس اليوم. ومن الصعب التنبؤ بما إذا كانت أنواع معينة من الخلايا أكثر مقاومة للتخزين من غيرها. وقد ذكرت الدراسات السابقة مستويات مرتفعة من التعبير هلا-در في الخلايا الظهارية الملتحمة 23 ، لذلك سيكون من بينتقييم لتقييم العلاقة بين هلا-در ومستويات الخلايا المناعية المحددة. ويمكن أيضا أن ترتبط الخلايا المناعية مع مستوى التعبير من تشيموكينس. وينبغي معالجة هذه المسائل في الدراسات المقبلة.

تم تنفيذ علم الخلايا الانطباع (إيك) لأول مرة في عام 1977 من قبل تاتشر وآخرون 1 . استخدموا قرص انطباع بلاستيكي لجمع خلايا الملتحمة من المرضى بدلا من التقنيات الأخرى المتاحة في ذلك الوقت مثل كشط، مسحة أو بيبتينغ 1 . الأسلوب الحالي من إيك يستخدم ورقة تصفية ماصة 2 لطباعة بصمة والملتحمة الجفن وجمع الطبقة الأكثر سطحية من خلايا الملتحمة. هذه الخلايا، بعد أن وصلت إلى المرحلة النهائية من التمايز، وتسليط باستمرار في البكاء 3 . تم العثور على ثلاث مجموعات رئيسية من الخلايا في عينات إيك: الخلايا الظهارية 4 ، خلايا الكأس 3 ، 5 ، والأنسجة اللمفاوية المرتبطة المخاطية بمعنى ظهارة المرتبطة الخلايا T المستجيب أو الخلايا الجذعية 6 . خلايا سطح العين في إيك سامبليس يمكن تحليلها بواسطة المجهري، المناعية و النشاف و عكس ترانسكريبتاس البوليميراز سلسلة من ردود الفعل (رت-ير) 7 . وقد استخدمت التدفق الخلوي في الآونة الأخيرة لتحليل الخلايا المناعية التي جمعتها كشط غشاء إيك 8 . ومن المثير للاهتمام، وقد استخدمت إيك 6 ، 9 لتقييم العديد من أمراض السطح العين بما في ذلك التهاب القرنية، التهاب الكبد القرني، ونقص فيتامين (أ)، الفقاع الفقري، مرض التأتبي، متفوقة التهاب القرنية القرنية، التهاب القرنية، التهاب الحلق القرنية الظهاري، والحؤول الحرشفية الظهارية. وقد استخدمت إيك أيضا لتقييم تأثير ارتداء العدسات اللاصقة، والكشف عن الميكروبات سطح العين، واختبار الكفاءة العلاجية والتسامح من التدخلات العلاجية في الدراسات الطولية 10 ، 11 ، 12 . ويدعم الجهاز الطبي (إيبريم) من نوع من بوليإيثرسولفون (بيس) 0.2 ميكرون غشاء، والتي تم التحقق من صحة سابقا لتقنية الخلايا الانطباع العين مع التدفق الخلوي (تدفق أوزيك) ويفتح فرصا لاستخدام العينات الطولية لرصد تطور المرض والاستجابة للعلاج (على سبيل المثال ، مفصلة تحليل الكريات البيض داخل الظهاري المعرفة بأنها علامات المرض المفترضة للتليف الملتحمة التدريجي في الغشاء المخاطي الفقاعي الفقاعي) 13 . استخدم الباحثون في وقت مبكر المرشحات بيس تعقيمها التي تتطلب الانطباع اليدوي. ونتيجة لذلك، كان العائد متغير ويعتمد على المستخدم. ميزة هذا الجهاز الطبي هو سهولة الاستخدام، ضغط موحد (باسكال أو N / م 2 )، وتمكين التكرار، استنساخه، واستعادة الخلوية متسقة. هذه التقنية مفيدة في عيادة للمرضى الخارجيين لأنها غير الجراحية، وسهلة لأداء وسريعة. هذا هو الجهاز الطبي من الفئة الأولى (العقيمة) وفقا للتوجيه 93/42 / سي، سي 0499 (سنش). انها تتطلب فقطتخدير موضعي أثناء العملية، مما يضمن الحفاظ على سلامة سطح العين. بعد إيك، يمكن معالجة الخلايا على الفور لتدفق الخلوي. وعلاوة على ذلك، فمن الممكن لفنيين غير العيون والممرضات لتدريبهم على عينة من سطح العين. على الرغم من تحسن إيك على تقنيات أخرى، لا تزال هناك العديد من التحديات. على سبيل المثال، قد يكون هناك اختلاف بسبب مجال أخذ العينات والاختلافات الإقليمية في الملتحمة العلوية اعتمادا على موقف إيك. مصدر آخر من الاختلاف يرجع إلى تطبيق كميات مختلفة من الضغط خلال إيك. وتشمل القضايا المنهجية الأخرى توحيد معالجة الخلايا: وهذه تنطوي على مدة وطريقة التثبيت، وظروف التخزين الممكنة، والتي قد تؤثر على استقرار المواد العينة. الهدف العام من هذه التقنية هو تطوير طريقة عزل عينات الانطباع العين ثار هو سهل الاستخدام، غير الغازية ويمكن تطبيقها على توصيف المناعي للعينات السريرية.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>anti-human CD3 BV510</td><td>BD Biosciences</td><td>563109</td><td></td></tr><tr><td>anti-human CD4 APCH7</td><td>BD Biosciences</td><td>641398</td><td></td></tr><tr><td>anti-human CD45RO PECy7</td><td>BD Biosciences</td><td>337168</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD solution</td><td>BD Biosciences</td><td>555816</td><td></td></tr><tr><td>anti-human CCR7 PE</td><td>BD Biosciences</td><td>552176</td><td></td></tr><tr><td>Pippetes</td><td>Eppendorf</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Local Anaesthesia</td><td>Alcaine</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein sodium solution</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb U.K Limited</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipments&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Keratograph 5M</td><td>Oculus</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Slit lamp BioMicroscope</td><td>Haag Streit</td><td>BM900</td><td></td></tr><tr><td>EyePrim</td><td>Opia Technologies</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>FACS Verse</td><td>BD BioSciences</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Softwares&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad 6.0</td><td>Prism</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>FACSVerse analysis software</td><td>BD</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

a non-invasive way to isolate and phenotype cells from the conjunctiva

تقليديا، يتم دراسة علم الخلايا السطحية العين مع تقنيات مثل تكنولوجيا ملعقة وتقنية الفرشاة. المشكلة مع هذه التقنيات هي أنها قد تحفز آفات صادمة على سطح العين، والتي يمكن أن تتقدم إلى تندب، تشوه الجفن، نقص الخلايا الجذعية الليمفاوية، وفي بعض الحالات، يسبب عدم الراحة الكبيرة للموضوع. لتجنب هذه المشاكل السريرية، تم تطوير علم الخلايا الانطباع (إيك) لتشخيص مرض جفاف العين والأورام في وقت لاحق، ومرض التأتبي، التهاب القرنية والقرنية الربيعي والتهاب القرنية المخروطية سيكا. عادة، يقوم الأطباء بقطع أوراق الترشيح يدويا إلى الأشكال المطلوبة وتطبيقها على سطح العين. هنا، نحن تصف كيفية تنفيذ إيك باستخدام جهاز طبي متاح تجاريا. يتم شرح هذه التقنية هنا تليها إمونوفينوتيبينغ عن طريق التدفق الخلوي. تتطلب هذه التقنية معالجة يدوية أقل وتسبب إصابة أقل في سطح العين.

إيك من قبل هذا الجهاز السريري سمح لنا لعزل الخلايا المناعية سطح العين مع الحفاظ على سطح العين سليمة. ويصف الشكل 1 كيفية تنفيذ إيك. تم وضع علامة على المواقع المختلفة للعين من حيث تم جمع العينات. ويبين الشكل 2 نتيجة ممثل التدفق الخلوي التي تم جمعها من 10 الضوابط الصحية. للتباعد، واستخدام سك و 7-آد للتمييز بين الخلايا الحية والميتة. 7-آد - يتم تحديد الخلايا كخلايا حية. وتتميز هذه الخلايا الحية أيضا من قبل CD3 + و CD4 + علامات. وعلاوة على ذلك، تم وصف كل من CD4 + و CD4 - السكان كما مزيد من السذاجة، T إم ، T سم و T إمرا مع علامات CCR7 و CD45RO. بين الخلايا CD3 + T، الخلايا المستجيب الذاكرة T تهيمن على سطح العين البشرية. في وقت سابق هزبيريمنتس، وقد تبين أيضا أن خلايا الذاكرة CD8 + هي السكان الرئيسيين في الخلايا التائية الظهارية الملتحمة بين الأفراد الأصحاء 20 . ويبين الشكل 3 أن CD4 + و CD8 + المستجيب خلايا T الذاكرة (T إم و T إمرا ) هي المجموعة الفرعية الرئيسية في سطح العين البشرية في 10 ضوابط صحية درس. يتم إخطار كل السكان المذكورة في الشكل مع النمط الظاهري علامة وأسماء (نايف، T سم ، T إم ، T إمرا ). الأرقام باللون الأحمر تدل على النسبة المئوية للسكان. يتم تمثيل البيانات في هذا الرقم كما يعني ± سيم <img alt="شكل 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55591/55591fig1.jpg" /> الشكل 1: جمع عينات إيك من سطح العين من قبل جهاز علم الانطباع. تم جمع العينات من اللمبة الزمنيةأر كما هو مبين. <img alt="الشكل 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55591/55591fig2.jpg" /> الشكل 2: نقطة مؤامرة الرسم البياني باستخدام التدفق الخلوي. ليف 7-آد - تم اختيار الخلايا. وكانت الخلايا CD3 + أول بوابات، وبعد ذلك كانت هذه البوابة السكان إلى CD4 + و CD4 - مجموعات فرعية. تم تحديد نسب السذاجة (CCR7 + CD45RO - ) والذاكرة المركزية (CCR7 + CD45RO + ) والذاكرة المستجيبة (CCR7 - CD45RO + ؛ CCR7 - CD45RO - ) بمساعدة علامات CCR7 و CD45RO. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55591/55591fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55591/55591fig3.jpg" /> Fإيغور 3: الخلايا المناعية أنواع فرعية في CD4 + و CD8 + خلايا T من صحة الإنسان سطح العين. توزيع الملتحمة CD4 + و CD8 + السذاجة، والذاكرة المركزية (T سم )، والذاكرة المستجيب (T إم و T إمرا ) مجموعات فرعية في ضوابط الإنسان صحية؛ كل نقطة بيانات تمثل متوسط ​​فردي منفصل ± سيم يظهر. وتظهر النسبة المئوية للسكان على أنها حمراء تحت اسم كل من السكان. وتبلغ النسبة الإجمالية للسكان 98 في المائة، لأن سكان CD4 + T إمرا لم يدرجوا في مخطط الانتثار المذكور (المعدل من بوس وآخرون 21 ). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55591/55591fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva at JoVE.com

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

يتكون سطح العين الطبيعي المكشوف من القرنية والملتحمة. الخلايا الظهارية، وخلايا الكأس والخلايا المناعية موجودة في الملتحمة. هنا، يتم وصف غير الغازية، وتقنية الخلايا الانطباع باستخدام جهاز علم الانطباع والتدفق الخلوي لتحليل الخلايا المناعية في الملتحمة.

وهناك طريقة غير الغازية لعزل والنمط الظاهري الخلايا من الملتحمة

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

a-non-invasive-way-to-isolate-and-phenotype-cells-from-the-conjunctiva

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.3K Views.  Nanyang Technological University.  يتكون سطح العين الطبيعي المكشوف من القرنية والملتحمة. الخلايا الظهارية، وخلايا الكأس والخلايا المناعية موجودة في الملتحمة. هنا، يتم وصف غير الغازية، وتقنية الخلايا الانطباع باستخدام جهاز علم الانطباع والتدفق الخلوي لتحليل الخلايا المنا...

Video: A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the skin is relatively easy to access, it provides an ideal platform to study peripheral immune regulatory mechanisms. Immune resident cells in healthy skin conduct immunosurveillance, but also play an important role in the development of inflammatory skin disorders, such as psoriasis. Despite emerging insights, our understanding of the biology underlying various inflammatory skin diseases is still limited. There is a need for good quality (single) cell populations isolated from biopsied skin samples. So far, isolation procedures have been seriously hampered by a lack of obtaining a sufficient number of viable cells. Isolation and subsequent analysis have also been affected by the loss of immune cell lineage markers, due to the mechanical and chemical stress caused by the current dissociation procedures to obtain single cell suspension. Here, we describe a modified method to isolate T cells from both healthy and involved psoriatic human skin by combining mechanical skin dissociation using an automated tissue dissociator and collagenase treatment. This methodology preserves expression of most immune lineage markers such as CD4, CD8, Foxp3 and CD11c upon the preparation of single cell suspensions. Examples of successful CD4+ T cell isolation and subsequent phenotypic and functional analysis are shown.

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

We describe a protocol to efficiently isolate skin resident T cells from human skin biopsies. This protocol yields sufficient numbers of viable human skin resident lymphocytes for flow cytometric analysis and ex vivo culture.

عزل الخلايا اللمفاوية من الجلد البشري لتحليل المظهري و<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; زراعة الخلايا

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells (RGCs) by Flow Cytometry

Neurodegenerative diseases often have a devastating impact on those affected. Retinal ganglion cell (RGC) loss is implicated in an array of diseases, including diabetic retinopathy and glaucoma, in addition to normal aging. Despite their importance, RGCs have been extremely difficult to study until now due in part to the fact that they comprise only a small percentage of the wide variety of cells in the retina. In addition, current isolation methods use intracellular markers to identify RGCs, which produce non-viable cells. These techniques also involve lengthy isolation protocols, so there is a lack of practical, standardized, and dependable methods to obtain and isolate RGCs. This work describes an efficient, comprehensive, and reliable method to isolate primary RGCs from mice retinae using a protocol based on both positive and negative selection criteria. The presented methods allow for the future study of RGCs, with the goal of better understanding the major decline in visual acuity that results from the loss of functional RGCs in neurodegenerative diseases.

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells RGCs by Flow Cytometry

Millions of people suffer from retinal degenerative diseases that result in irreversible blindness. A common element of many of these diseases is the loss of retinal ganglion cells (RGCs). This detailed protocol describes the isolation of primary murine RGCs by positive and negative selection with flow cytometry.

عزل الخلايا العقدة الشبكية الفئران الأولية (رغس) عن طريق التدفق الخلوي

Neurodegenerative diseases often have a devastating impact on those affected. Retinal ganglion cell (RGC) loss is implicated in an array of diseases, ...

Bioengineering

Impression Cytology of the Lid Wiper Area

Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.

We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.

الانطباع علم الخلايا من منطقة ممسحة غطاء

Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The ...

Medicine

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. Identification and monitoring of bacterial species at the ocular mucosa have been challenging due to their low abundance and limited availability of appropriate methodology for commensal growth and identification. There are two standard approaches: culture based or DNA sequencing methods. The first method is problematic due to the limited recoverable bacteria and the second approach identifies both live and dead bacteria leading to an aberrant representation of the ocular space. We developed a robust and sensitive method for bacterial isolation by building upon standard microbiological culturing techniques. This is a swab-based technique, utilizing an &#8220;in-lab&#8221; made thin swab that targets the lower conjunctiva, followed by an amplification step for aerobic and facultative anaerobic genera. This protocol has allowed us to isolate and identify conjunctival species such as Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., etc. The approach is suitable to define commensal diversity in mice under different disease conditions.

Presented here is a protocol for the isolation and amplification of aerobic and facultative anaerobic mouse conjunctival commensal bacteria using a unique eye swab and culture-based enrichment step with subsequent identification by microbiological based methods and MALDI-TOF mass spectrometry.

عزل الملتحمة والهوية في الفئران

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Induction of Ocular Surface Inflammation and Collection of Involved Tissues

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular surface gland network. Meibomian glands (MG) secrete lipids that create a covering layer that prevents the evaporation of the aqueous part of the tear film. Neutrophils and extracellular DNA traps populate MG and the ocular surface in a mouse model of allergic eye disease. Aggregated neutrophil extracellular traps (aggNETs) formulate a mesh-like matrix composed of extracellular chromatin that occludes MG outlets and conditions MG dysfunction. Here, a method for inducing ocular surface inflammation and MG dysfunction is presented. The procedures for collecting organs related to the ocular surface, such as the cornea, conjunctiva, and eyelids, are described in detail. Using established techniques for processing each organ, the major morphological and histopathological features of MG dysfunction are also shown. Ocular exudates offer the opportunity to assess the inflammatory state of the ocular surface. These procedures enable the investigation of topical and systemic anti-inflammatory interventions at the preclinical level.

Ocular surface inflammation harms the ocular surface tissues and compromises vital functions of the eye. The present protocol describes a method to induce ocular inflammation and collect compromised tissues in a mouse model of Meibomian gland dysfunction (MGD).

تحريض التهاب سطح العين وجمع الأنسجة المصابة

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular ...

بروتوكول لعزل وزراعة وتحديد الخلايا المتخصصة الحوافية البشرية

Isolation and Identification of Limbal Niche Cells

Here we report a standard procedure for the isolation and identification of limbal niche cells (LNCs). Limbus tissue obtained from an eye bank was used for LNCs isolation. The tissue was divided into 12 pieces under aseptic conditions and digested for 18 h at 37 &#176;C in the cell culture incubator using collagenase A to obtain cell clusters with LNCs and limbal&#160;epithelial progenitor cells. The cell clusters were further digested for 15 min at 37 &#176;C using 0.25% trypsin-EDTA to obtain single cells and then cultured in modified embryonic stem cell medium (MESCM) on a plastic surface coated with 5% Matrigel. Cells were passaged upon 70% confluence, and LNCs were identified using immunofluorescence, real-time quantitative PCR (qPCR), and flow cytometry. Primary LNCs were isolated and passaged more than 12 times. The proliferation activity of LNCs from P4 to P6 was the highest. LNCs expressed higher stem cell markers than BMMSCs (SCF, Nestin, Rex1, SSEA4, CD73, CD90, MSX1, P75NTR, and PDGFR&#946;). Furthermore, results showed that P4 LNCs uniformly expressed VIM, CD90, CD105, and PDGFR&#946;, but not Pan-CK, which could be used as a marker for the identification of LNCs. Flow cytometric analysis showed that approximately 95%, 97%, 92%, and 11% of LNCs expressed CD73, CD90, CD105, and SCF respectively, while they were&#160;68%, 99%, 20%, and 3% in&#160;BMMSCs. The standard process for LNC&#160;isolation and identification could provide&#160;a reliable laboratory basis for the widespread use of LNCs.

تسليط الضوء على المؤلف: توحيد عزل وتوصيف الخلايا المتخصصة في الأطراف (LNC) لدعم أبحاث LNC على نطاق واسع 

Here, we present a protocol to isolate and identify the human limbal niche cells.

عزل وتحديد الخلايا المتخصصة في الحوفي

Here we report a standard procedure for the isolation and identification of limbal niche cells (LNCs). Limbus tissue obtained from an eye bank was used ...

Isolation of Intact Eyeball to Obtain Integral Ocular Surface Tissue for Histological Examination and Immunohistochemistry

Ocular surface (OS) consists of an epithelial sheet with three connected parts: palpebral conjunctiva, bulbar conjunctiva and corneal epithelium. Disruption of OS would lead to keratitis, conjunctivitis or both (keratoconjunctivitis). In experimental animal models with certain genetic modifications or artificial operations, it is useful to examine all parts of the OS epithelial sheet to evaluate relative pathogenetic changes of each part in parallel. However, dissection of OS tissue as a whole without distortion or damage has been challenging, primarily due to the softness and thinness of the OS affixed to physically separate yet movable eyelids and eyeball. Additionally, the deep eye socket formed by the hard skull/orbital bones is fully occupied by the eyeball leaving limited space for operating dissections. As a result, direct dissection of the eyeball with associated OS tissues from the facial side would often lead to tissue damages, especially the palpebral and bulbar conjunctiva. In this protocol, we described a method to remove the skull and orbital bones sequentially from a bisected mouse head, leaving eyelids, ocular surface, lens and retina altogether in one piece. The integrity of the OS sheet was well preserved and could be examined by histology or immunostaining in a single section.

This protocol describes a method for the isolation of the mouse eyeball with eyelid, ocular surface, anterior and posterior segments in relatively intact position.

عزل مقلة العين السليمة للحصول علي الانسجه السطحية البصرية المتكاملة للفحص النسيجي والمناعي

Ocular surface (OS) consists of an epithelial sheet with three connected parts: palpebral conjunctiva, bulbar conjunctiva and corneal epithelium. ...

Biology

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin that is secreted by conjunctival goblet cells (CGCs) onto the ocular surface contributes to multiple ocular surface diseases. The elimination of exogenous sex hormones is essential to obtain consistent results during in vitro study of sex-based differences in CGCs. This paper describes a method to minimize the presence of exogenous hormones in the study of sex-based differences in CGCs while maintaining their physiological function. CGCs from postmortem human donors of both sexes were cultured from pieces of the conjunctiva in RPMI medium with 10% fetal bovine serum (FBS) (referred to as the complete medium) until confluency. Nearly 48 h before the start of the experiments, CGCs were transferred to RPMI medium without phenol red or FBS but with 1% BSA (referred to as phenol-red-free medium). The normal cellular function was studied by measuring the increase in intracellular [Ca2+] ([Ca2+]i) after carbachol (Cch, 1 x 10-4 M) stimulation using fura 2/acetoxymethyl (AM) microscopy. The result shows that CGCs maintained normal function in the phenol-red-free media after 48 h. No significant difference in [Ca2+]i response was observed between phenol red-free RPMI medium and complete medium upon Cch stimulation. Therefore, we recommend using the phenol-red free RPMI medium with 1% BSA to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of CGCs in the study of sex-based differences.

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Phenol red-free/fetal bovine serum-free medium is a better option than advanced RPMI to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of conjunctival goblet cells in the study of sex-based differences.

في المختبر طريقة لدراسة الاختلافات الجنسية في الخلايا الكأسية الملتحمة

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin ...

وهناك طريقة غير الغازية لعزل والنمط الظاهري الخلايا من الملتحمة

Summary

Explore More Videos

عزل الخلايا اللمفاوية من الجلد البشري لتحليل المظهري و

عزل الخلايا العقدة الشبكية الفئران الأولية (رغس) عن طريق التدفق الخلوي

الانطباع علم الخلايا من منطقة ممسحة غطاء

عزل الملتحمة والهوية في الفئران

تحريض التهاب سطح العين وجمع الأنسجة المصابة

عزل وتحديد الخلايا المتخصصة في الحوفي

عزل وتحديد الخلايا المتخصصة في الحوفي

عزل وتحديد الخلايا المتخصصة في الحوفي

عزل مقلة العين السليمة للحصول علي الانسجه السطحية البصرية المتكاملة للفحص النسيجي والمناعي

في المختبر طريقة لدراسة الاختلافات الجنسية في الخلايا الكأسية الملتحمة