يود الكاتب أن أشكر ماثيو كيلي، تيزيانا Cogliati، جيسيكا Gumerson، أوفي ولفروم، ريفكا Levron، فيولا كريتشمير وزوي مان ولتقييم ينتقدون فيها المخطوطة. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جائزة Sofja كوفاليفسكايا (مؤسسة Humbodlt) وجامعة يوهانس غوتنبرغ،، ماينز، ألمانيا.

<ol>
	<li>Waters, A. M., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliopathies:+an+expanding+disease+spectrum.">Ciliopathies: an expanding disease spectrum.</a> Pediatr Nephrol. 26, 1039-1056 (2011).</li><li>May-Simera, H. L., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia,+Wnt+signaling,+and+the+cytoskeleton.">Cilia, Wnt signaling, and the cytoskeleton.</a> Cilia. 1, 7 (2012).</li><li>Ross, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Bardet-Biedl+syndrome+ciliary+proteins+perturbs+planar+cell+polarity+in+vertebrates.">Disruption of Bardet-Biedl syndrome ciliary proteins perturbs planar cell polarity in vertebrates.</a> Nat Genet. 37, 1135-1140 (2005).</li><li>Ezan, J., Montcouquiol, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+planar+cell+polarity+in+the+inner+ear.">Revisiting planar cell polarity in the inner ear.</a> Seminars in cell &amp; developmental biology. 24, 499-506 (2013).</li><li>Semenov, M. V., Habas, R., Macdonald, B. T., He, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Noncanonical+Wnt+Signaling+Pathways.">SnapShot: Noncanonical Wnt Signaling Pathways.</a> Cell. 131, 1378 (2007).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+polarized+extension+and+planar+cell+polarity+in+the+cochlea+by+the+vertebrate+PCP+pathway.">Regulation of polarized extension and planar cell polarity in the cochlea by the vertebrate PCP pathway.</a> Nat Genet. 37, 980-985 (2005).</li><li>Montcouquiol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Vangl2+and+Scrb1+as+planar+polarity+genes+in+mammals.">Identification of Vangl2 and Scrb1 as planar polarity genes in mammals.</a> Nature. 423, 173-177 (2003).</li><li>May-Simera, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+proteins+Bbs8+and+Ift20+promote+planar+cell+polarity+in+the+cochlea.">Ciliary proteins Bbs8 and Ift20 promote planar cell polarity in the cochlea.</a> Development. 142, 555-566 (2015).</li><li>Jones, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+proteins+link+basal+body+polarization+to+planar+cell+polarity+regulation.">Ciliary proteins link basal body polarization to planar cell polarity regulation.</a> Nat Genet. 40, 69-77 (2008).</li><li>Lim, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+structure+of+the+organ+of+Corti:+a+review.">Functional structure of the organ of Corti: a review.</a> Hearing research. 22, 117-146 (1986).</li><li>Nayak, G. D., Ratnayaka, H. S., Goodyear, R. J., Richardson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+hair+bundle+and+mechanotransduction.">Development of the hair bundle and mechanotransduction.</a> The International journal of developmental biology. 51, 597-608 (2007).</li><li>Denman-Johnson, K., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+hair+bundle+polarity+and+orientation+in+the+deveoping+vestibular+system+of+the+mouse.">Establishment of hair bundle polarity and orientation in the deveoping vestibular system of the mouse.</a> J. Neurocytol. , 821-835 (1999).</li><li>Sobkowicz, H. M., Slapnick, S. M., August, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kinocilium+of+auditory+hair+cells+and+evidence+for+its+morphogenetic+role+during+the+regeneration+of+stereocilia+and+cuticular+plates.">The kinocilium of auditory hair cells and evidence for its morphogenetic role during the regeneration of stereocilia and cuticular plates.</a> Journal of neurocytology. 24, 633-653 (1995).</li><li>Denman-Johnson, K., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+hair+bundle+polarity+and+orientation+in+the+developing+vestibular+system+of+the+mouse.">Establishment of hair bundle polarity and orientation in the developing vestibular system of the mouse.</a> Journal of neurocytology. 28, 821-835 (1999).</li><li>van Dam, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SYSCILIA+gold+standard+(SCGSv1)+of+known+ciliary+components+and+its+applications+within+a+systems+biology+consortium.">The SYSCILIA gold standard (SCGSv1) of known ciliary components and its applications within a systems biology consortium.</a> Cilia. 2, 7 (2013).</li><li>Blacque, O. E., Sanders, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartments+within+a+compartment:+what+C.+elegans+can+tell+us+about+ciliary+subdomain+composition,+biogenesis,+function,+and+disease.">Compartments within a compartment: what C. elegans can tell us about ciliary subdomain composition, biogenesis, function, and disease.</a> Organogenesis. 10, 126-137 (2014).</li><li>Wallingford, J. B., Mitchell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strange+as+it+may+seem:+the+many+links+between+Wnt+signaling,+planar+cell+polarity,+and+cilia.">Strange as it may seem: the many links between Wnt signaling, planar cell polarity, and cilia.</a> Genes &amp; development. 25, 201-213 (2011).</li><li>Borovina, A., Ciruna, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFT88+plays+a+cilia-+and+PCP-independent+role+in+controlling+oriented+cell+divisions+during+vertebrate+embryonic+development.">IFT88 plays a cilia- and PCP-independent role in controlling oriented cell divisions during vertebrate embryonic development.</a> Cell reports. 5, 37-43 (2013).</li><li>Huang, P., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dampened+Hedgehog+signaling+but+normal+Wnt+signaling+in+zebrafish+without+cilia.">Dampened Hedgehog signaling but normal Wnt signaling in zebrafish without cilia.</a> Development. 136, 3089-3098 (2009).</li><li>Ocbina, P. J., Tuson, M., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+are+not+required+for+normal+canonical+Wnt+signaling+in+the+mouse+embryo.">Primary cilia are not required for normal canonical Wnt signaling in the mouse embryo.</a> PloS one. 4, e6839 (2009).</li><li>Jones, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+electron+microscopy:+preparation+and+imaging+for+SEM.">Scanning electron microscopy: preparation and imaging for SEM.</a> Methods Mol Biol. 915, 1-20 (2012).</li><li>Curtin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+of+Celsr1+disrupts+planar+polarity+of+inner+ear+hair+cells+and+causes+severe+neural+tube+defects+in+the+mouse.">Mutation of Celsr1 disrupts planar polarity of inner ear hair cells and causes severe neural tube defects in the mouse.</a> Current biology : CB. 13, 1129-1133 (2003).</li><li>Wang, Y., Guo, N., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Frizzled3+and+Frizzled6+in+neural+tube+closure+and+in+the+planar+polarity+of+inner-ear+sensory+hair+cells.">The role of Frizzled3 and Frizzled6 in neural tube closure and in the planar polarity of inner-ear sensory hair cells.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26, 2147-2156 (2006).</li><li>Montcouquiol, M., Jones, J. M., Sans, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+planar+polarity+proteins+in+mammalian+cochlea.">Detection of planar polarity proteins in mammalian cochlea.</a> Methods Mol Biol. 468, 207-219 (2008).</li><li>May-Simera, H., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+planar+cell+polarity+in+the+mammalian+cochlea.">Examining planar cell polarity in the mammalian cochlea.</a> Methods Mol Biol. 839, 157-171 (2012).</li><li>Yin, H., Copley, C. O., Goodrich, L. V., Deans, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+phenotypes+between+different+vangl2+mutants+demonstrates+dominant+effects+of+the+Looptail+mutation+during+hair+cell+development.">Comparison of phenotypes between different vangl2 mutants demonstrates dominant effects of the Looptail mutation during hair cell development.</a> PloS one. 7, e31988 (2012).</li><li>Rachel, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+Cep290+and+Mkks+ciliopathy+alleles+in+mice+rescues+sensory+defects+and+restores+ciliogenesis.">Combining Cep290 and Mkks ciliopathy alleles in mice rescues sensory defects and restores ciliogenesis.</a> J Clin Invest. 122, 1233-1245 (2012).</li><li>Jagger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alstrom+Syndrome+protein+ALMS1+localizes+to+basal+bodies+of+cochlear+hair+cells+and+regulates+cilium-dependent+planar+cell+polarity.">Alstrom Syndrome protein ALMS1 localizes to basal bodies of cochlear hair cells and regulates cilium-dependent planar cell polarity.</a> Human molecular genetics. 20, 466-481 (2011).</li><li>Collin, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Alstrom+Syndrome+Protein,+ALMS1,+Interacts+with+alpha-Actinin+and+Components+of+the+Endosome+Recycling+Pathway.">The Alstrom Syndrome Protein, ALMS1, Interacts with alpha-Actinin and Components of the Endosome Recycling Pathway.</a> PloS one. 7, e37925 (2012).</li><li>Copley, C. O., Duncan, J. S., Liu, C., Cheng, H., Deans, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+refinement+of+auditory+hair+cell+planar+polarity+deficits+occurs+in+the+absence+of+Vangl2.">Postnatal refinement of auditory hair cell planar polarity deficits occurs in the absence of Vangl2.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 14001-14016 (2013).</li><li>Sorusch, N., Wunderlich, K., Bauss, K., Nagel-Wolfrum, K., Wolfrum, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usher+syndrome+protein+network+functions+in+the+retina+and+their+relation+to+other+retinal+ciliopathies.">Usher syndrome protein network functions in the retina and their relation to other retinal ciliopathies.</a> Advances in experimental medicine and biology. 801, 527-533 (2014).</li><li>Hebert, J. M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+cre+to+the+Foxg1+(BF-1)+locus+mediates+loxP+recombination+in+the+telencephalon+and+other+developing+head+structures.">Targeting of cre to the Foxg1 (BF-1) locus mediates loxP recombination in the telencephalon and other developing head structures.</a> Dev Biol. 222, 296-306 (2000).</li><li>Willott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8,+Measurement+of+the+auditory+brainstem+response+(ABR)+to+study+auditory+sensitivity+in+mice.">Chapter 8, Measurement of the auditory brainstem response (ABR) to study auditory sensitivity in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , Unit8 21B (2006).</li><li>Martin, G. K., Stagner, B. B., Lonsbury-Martin, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8,+Assessment+of+cochlear+function+in+mice:+distortion-product+otoacoustic+emissions.">Chapter 8, Assessment of cochlear function in mice: distortion-product otoacoustic emissions.</a> Current protocols in neuroscience. , Unit8 21C (2006).</li><li>Finetti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraflagellar+transport+is+required+for+polarized+recycling+of+the+TCR/CD3+complex+to+the+immune+synapse.">Intraflagellar transport is required for polarized recycling of the TCR/CD3 complex to the immune synapse.</a> Nature cell biology. 11, 1332-1339 (2009).</li><li>Sedmak, T., Wolfrum, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraflagellar+transport+molecules+in+ciliary+and+nonciliary+cells+of+the+retina.">Intraflagellar transport molecules in ciliary and nonciliary cells of the retina.</a> J Cell Biol. 189, 171-186 (2010).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+horizons:+ciliary+proteins+reach+beyond+cilia.">Expanding horizons: ciliary proteins reach beyond cilia.</a> Annual review of genetics. 47, 353-376 (2013).</li><li>Tarchini, B., Jolicoeur, C., Cayouette, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+blueprint+at+the+apical+surface+establishes+planar+asymmetry+in+cochlear+hair+cells.">A molecular blueprint at the apical surface establishes planar asymmetry in cochlear hair cells.</a> Developmental cell. 27, 88-102 (2013).</li><li>Ezan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilium+migration+depends+on+G-protein+signalling+control+of+subapical+cytoskeleton.">Primary cilium migration depends on G-protein signalling control of subapical cytoskeleton.</a> Nature cell biology. 15, 1107-1115 (2013).</li></ol>

The author declares no competing financial interests.

عند إعداد الأنسجة قوقعة للتحليل، هناك عدد قليل من النقاط الرئيسية أن نأخذ في الاعتبار. أولا، يمكن أن الاختلافات في الخلفية الوراثية تعديل النمط الظاهري قوقعة الأذن، مما يجعل من الضروري تحليل ومقارنة الضوابط littermate فقط. ثانيا، يتعين إزالة كاملة من الغشاء السقفي للحصول على أفضل الصور مع المناعية وضروري لوزارة شؤون المرأة. الغشاء السقفي هو هيكل مبهمة ويمكن أن تحجب خلايا ظهارة حسية مباشرة تحتها، مما يجعل التصوير أكثر تحديا. أحيانا أثناء المعالجة، الغشاء السقفي قد ينكمش مرة أخرى، والكشف عن خلايا الشعر. حتى في هذه الحالات ينصح بقوة الإزالة. هذه الخطوة تتطلب الصبر والممارسة. ثالثا، المناعية باستخدام أجسام مضادة ضد بروتينات الهدبية، وخاصة تلك التي توطين للجسم القاعدية مضغوط للغاية، يمكن أن يكون تحديا وتتطلب التحسين. النظر في أداء استرجاع مستضد، تكثيف permeabilسعودة الخطوات، أو تقليل تركيز أو وقت التثبيت. وأخيرا، عندما التصوير الهدب المحرك (في هدب الأساسي وجدت في خلايا الشعر القوقعة) نضع في اعتبارنا أن يبدأ في التراجع عن P0 - P1 فصاعدا في التدرج قاعدة إلى قمة. ولذلك، عند قياس طول الهدب المحرك المهم للمقارنة بين خلايا الشعر من نفس المنطقة من القوقعة وفي سن يقابل الحيوانات. لديها خلايا دعم مقحم أيضا أهداب الابتدائي، الذي لا يتراجع. يجب الحرص على التمييز بين دعم أهداب الخلايا والأهداب المحركة خلية الشعر. مع نضوج الفئران، يصبح من الصعب على نحو متزايد لعزل نظيف وظهائر الحسية قوقعة، وذلك بسبب تكلس في عظام الزمنية والمتاهات العظمية. مطلوب زوال الكلس للأنسجة، وهي ليست دائما متوافقة مع مزيد من التقنيات immunolocalization ولكن لا تسمح لفحص النمط الظاهري الإجمالي وهو أيضا متوافقة مع إعداد ووزارة شؤون المرأة. الفطرية شارع الماوساهلية ت غالبا ما تظهر العيوب السمعية مثل فقدان الخلية الشعر أو مرتفعة استجابات الدماغ السمعية (ABRs)، وذلك بسبب طفرات في الجينات السمعية المعروفة أو الجينات التعديل. لذلك لا بد من مقارنة سن يقابل الضوابط littermate أو تولد على خلفية وراثية بديلة. واحد من أوجه القصور في هذا التحليل هو أنه، في الفئران، والهدب المحرك يبدأ في التراجع بعد الولادة ولم يعد موجودا على خلايا الشعر الكبار. لهذا السبب القياسات الأهداب المحركة يمكن أن يتم إلا في تطوير الأنسجة. كما أنه من الضروري اختيار بعناية العمر كعينة ضابطة للمقارنة بين عينات متحولة والسيطرة. الحد الآخر هو أن الهدبية متحولة الفئران تحليلها حتى الآن لم يتم عرض ضعف السمع الشديد (أي، استجابات الدماغ السمعية، ABRs أو انبعاثات أذنية سمعية، OAEs) حتى عندما تنخفض قيمة تنمية القوقعة. واتساقا مع ذلك، عيوب السمع ليست النمط الظاهري المشترك ciliopathy البشري. بشكل استثنائي، وفقدان hearinز هي واحدة من السمات الرئيسية لمتلازمة Alström، التي تسببها طفرات في بروتين الجسم القاعدية ALMS1 28،29. هذا يشير إلى أن stereociliary التشكل حزمة ليست مرتبطة بالضرورة إلى خلل وظيفي السمعي في المسوخ أهداب، من المحتمل بسبب إعادة توجيه التصحيحية حزم في وقت لاحق في التنمية كما تم الإبلاغ عن المسوخ Vangl2 CKO 30. إذا تم توسيع الطيف ciliopathy لتشمل حاجب متلازمة، والسبب الخلقية الأكثر شيوعا من الصم والعمى، ثم يصبح ضعف السمع ذات أهمية كبيرة. وقد أظهرت البيانات الأخيرة أن العديد من البروتينات ذات الصلة للدخول متلازمة توطين أيضا إلى هدب وتشارك في العمليات المتعلقة الهدبية 31، ولكن إذا كانت هذه البروتينات ترتبط الإشارات PCP لم يتم فحصها. حتى الآن معظم المسوخ الهدبية الماوس تحليلها لعيوب PCP قوقعة يكون فقط تم فحصها بشكل غامض. التقنيات الموضحة في هذه المخطوطة تسمح لتفاصيل واسعة النطاق للالنمط الظاهري قوقعة الأذن، الأمر الذي سيؤدي بلا شك إلى فهم أكثر دقة للمشاركة الهدبية في إنشاء الفقارية إشارات حزب المؤتمر الشعبي. وعلى الرغم من وجود عدد كبير من نماذج ciliopathy الماوس المتاحة، وقد تم تحليل عدد قليل من المستغرب من حيث العيوب PCP القوقعة. وشرك شائعة مرتبطة مع هذه النماذج هو الفتك الجنينية. ومع ذلك، منذ القوقعة وضع يمكن فحص embryonically دور أهداب في حزب المؤتمر الشعبي في الأذن وضع يمكن لا يزال التحقيق فيها. وعلاوة على ذلك، يمكن التحايل عليها في وقت مبكر جدا الفتك الجنينية باستخدام بالضربة القاضية المشروطة. Foxg1 لجنة المساواة العرقية 32 الفئران، المتاحة من JacksonLaboratories، وتستخدم عادة لinactivategenes الاهتمام thedeveloping الأذن الداخلية من تاريخ E8.To، تركزت الجهود في المقام الأول على دراسة الجينات ciliopathy المسببة للأمراض ولكن التنقيب عن البروتينات الأخرى ذات الصلة أهداب وكيف يمكن لهذه تؤثر PCP الإشارات أثناء التطور قد توفر مزيد من التبصر في CILالجيش العراقي البيولوجيا وظيفة. في حال الاشتباه في النمط الظاهري السمعي في نماذج الفئران التي يجري تحليلها، وتشمل التحليلات الأخرى الممكنة اختبار قياس قوة السمع من ABRs 33 أو OAEs 34. فحوصات تمديد يزدرع القوقعة (كما هو موضح في مايو Simera وآخرون، 2012 25)، ويمكن أيضا أن يؤديها، والسماح لتحديد العيوب تمديد متقاربة في نقطة زمنية التنموية السابقة. زراعة القوقعة من إإكسبلنتس يسمح أيضا للعلاج مع مجموعة مختلفة من المنشطات أو مثبطات الإشارة، والتي يمكن تعديل تمديد يزدرع، مما يسهم في فهم الآلية من العمليات التنموية المعنية. على الرغم من أنه من المعروف أن الهدب المحرك تتراجع بعد الولادة 11،13،14، لم يتم معالجة هذا التراجع تماما في سياق المسوخ الهدبية. وسيكون من مصلحة لأخذ القياسات في الوقت المحدد لظهور الأهداب المحركة وتراجع في أهداب mutants.Considering أن الدور الأساسي للالهدبية المواليةالبروتينات هي حركة نقل البضائع على طول الأنابيب الدقيقة، فمن المحتمل جدا أن هذه البروتينات يمكن أيضا تنظيم جوانب الاتجار داخل الخلايا على طول الهيكل الخلوي 35-37. وقد تبين أن مجموعة فرعية من البروتينات أهداب أن تؤثر على الاتجار وتوطين غير المتماثلة من جزيئات PCP 8. الترجمة من قبل المناعية للجزيئات PCP والبروتينات وخاصة المصاحبة للغشاء مثل Vangl2، Frz3 وDSH، ولذلك أوصت لتحديد ما إذا تم mislocalized جزيئات حزب المؤتمر الشعبي. يبدو إنشاء الأقطاب لتكون شأنا متعددة الأوجه، وهناك أدلة متزايدة لخلية مسار مستقل إضافي، وهو مطلوب أيضا لحزب المؤتمر الشعبي الصحيح في خلايا الشعر الحسية 38. وأظهرت دراسة حديثة أن مجموعة تعتمد على البروتين إشارات تسيطر على الهجرة من هدب بطريقة خلية مستقلة 39. وانسجاما مع دور للبروتينات الهدبية في توطين الجزيئات القطبية، heterotrimeric G-بروتين ألفا-ط فرعية 3 (Gαi3) لوتعطلت ocalization في Bbs8 وBbs6 خروج المغلوب القوقعة 8،39. والتمييز بين دور مكونات الهدبية الفردية والآثار واضحة على إشارات PCP تعطينا مزيد من التبصر في دور هدب في إنشاء القطبية الصحيحة. أهمية خاصة هو أن نميز بين البروتينات الهدبية تعمل في سياق الهدبية، مقابل وظائف غير الهدبية من البروتينات الهدبية التي تعتبر تقليديا، مثل دورها في تنظيم غير الهدبية المتعلقة الاتجار داخل الخلايا. درجة عالية من الانتظام في كثير من جوانب بنية القوقعة، بما في ذلك الزخرفة الخلوية والتوجه الرزمة stereociliary، يجعل من الممكن للكشف عن التغييرات الطفيفة في تطوير PCP في الاستجابة إلى أي اضطرابات وراثية أو الجزيئية في البروتينات المرتبطة أهداب. وبالنظر إلى أن هناك العديد من النماذج الهدبية الماوس المتاحة، والتي القوقعة الماوس النامي هي واحدة من أفضل الأماكن لدراسة PCPإشارة، فإن من مصلحة كبيرة للتعلم لماذا تعطيل مدى الطفرات البروتين الفردية تنمية القوقعة.

أهداب الابتدائية طويلة الزوائد القائم على أنيبيب التي تمتد من سطح معظم خلايا الثدييات. وغالبا ما يتم الخلط بين أهداب الابتدائي مع أهداب متحركة، التي يوجد منها دائما متعددة في كل خلية، والذي يهدف إلى نقل السوائل عبر أسطح الأغشية. أهداب الابتدائي، في المقابل، تعتمد الأدوار الحسية، وبالتالي المشار إليها أهداب كما الحسي أيضا. مرة واحدة فترة طويلة طي النسيان، وهذا عضية في الآونة الأخيرة &#39;اكتشاف&#39; نتيجة لارتباطه مع العديد من الأمراض الوراثية البشرية 1. موقع مثالي كما عضية الإشارات، وقد تبين من هدب الأساسي لتنظيم العديد من مسارات إشارات، وكثير منها هي مهمة ليس فقط في توازن الأنسجة والمرض، ولكن أيضا خلال تطوير 2. كان واحدا من مسارات الإشارات الأولى تبين أن تترافق مع ضعف أهداب وغير متعارف عليه مسار إشارات Wnt، المعروف أيضا باسم قطبية خلية مستو (PCP) مسار <sup<html> &gt; 3. هذه سلسلة الإشارات التي تم تحديدها في البداية في ذبابة الفاكهة، هو أمر حاسم لمرحلة التطور الجنيني. ولا سيما بالنسبة للعمليات التقارب والإرشاد والتوجيه الصحيح من الخلايا في الطائرة من ظهائر 4. إشارات متتابعة من مجموعة أساسية من البروتينات التنظيمية تترجم الإشارات الاتجاه الذي يؤدي في نهاية المطاف إلى إعادة ترتيب هيكل الخلية ويؤدي إلى الاستقطاب منسق الخلايا الظهارية في طائرة 5. مطلوب عملية التقارب والإرشاد للغاية لقناة القوقعة إلى استطال والصحيحة الزخرفة الخلوية 6. وبما أن هذا التنظيم عبر تفعيل المسار حزب المؤتمر الشعبي، واحدة من الظواهر الأكثر لفتا للطفرات PCP القوقعة هي القناة قوقعة تقصير مع غير منظمة ظهائر الحسية 7. وبالمثل، المسوخ الماوس، والتي تفتقر أهداب، كما يحمل هذا التقارب والإرشاد النمط الظاهري 8،9، على الرغم من بالضبط كيف ينظم يبقى أن توضيح. ve_content &quot;&gt; لأن عمليات التقارب والإرشاد حاسمة للنمو من القناة القوقعة، والزخرفة الخلوية من ظهائر الحسية داخل القناة القوقعة، القوقعة النامية جهازا مثاليا لدراسة PCP الإشارات خلال تطوير الفقاريات.، وجهاز ويطلق على كورتي، مصطلح يطلق على ظهارة حسية متخصصة خطوط القناة قوقعة الأذن، ويتكون من خلايا دعم غير الحسية وخلايا الشعر ميكانيكية حسية التي يجب موحد الموجهة للالقوقعة للعمل 10. وخلايا الشعر ميكانيكية حسية ذلك بسبب حزم stereociliary التي تمتد من لوحة جليدية (السطح القمي) من كل خلية الشعر الحسية (11). وهذه بمثابة محولات الطاقة الأولية من mechanosensation وعلى الرغم من التسميات على النحو أهداب ساكنة، وتتألف في الواقع من الزغيبات الصغيرة المعتمدة على خيوط الأكتين المعدلة. وفي كل الشعر على شكل شيفرون حزمة، ويتم تنظيم ثلاثة صفوف من أهداب ساكنة في السلطة الفلسطينية أمر غاية والعاديةttern في درج بطريقة حالة شبيهة. ريال مدريد أهداب القائم على أنيبيب، الأهداب المحركة تسميته، مطلوبة من أجل تطوير وتوجيه حزم stereociliary 12. على كل خلية الشعر، ويرد الهدب المحرك واحد فعليا إلى حزمة أهداب ساكنة، ويقع بالقرب مركزيا لأطول صف من أهداب ساكنة. وظيفة دقيقة من الهدب المحرك غير واضحة، وفرضية واحدة هي أن الهدب المحرك &quot;تسحب&quot; على أهداب ساكنة في الشكل لأنها ناضجة من الزغيبات الصغيرة 12. في الفقاريات، الأهداب المحركة في القوقعة هي فقط موجودة عابر وتتراجع عن خلايا الشعر في الفئران قبل بداية سماع 11،13،14. فقدان كامل للأهداب في تطوير النتائج القوقعة في القنوات قوقعة تقصير شديد، والخطأ في تشكيل وحزم stereociliary، وكذلك الهيئات القاعدية وضعه سوء 8،9 سوء المنحى. لا يشتمل هدب وظيفية فقط من الخيط المحوري الهدبية. العديد من البروتينات المرتبطة أهدابتحدث وظيفة في المجمعات المحلية لالنطاقات الفرعية ذات الصلة أهداب مثل الجسم القاعدية، منطقة انتقالية، أو الهدبية الخيط المحوري 15. الجسم القاعدية، والمستمدة من المركزيه أم جسيم مركزي، هو أيضا مركزا لتنظيم أنيبيب لميكروتثبول مد بعيدا عن هدب في خلايا الجسم، ويمكن تنظيم الاتجار داخل الخلايا وكذلك الاتجار الهدبية. المنطقة الهدبية الانتقالية منطقة أخرى حيث يتم تنظيم وظيفة الهدبية من حيث تنظيم استيراد وتصدير مركبات الهدبية 16. وقد حددت الدراسات متعددة اتصال بين أهداب وWNT غير متعارف عليه (PCP الإشارات)، على الرغم من أن الآلية الدقيقة غير واضحة (17). التكرار من الجينات الهدبية وحزب المؤتمر الشعبي وحساسية قطبية الخلية إلى التغيرات الخلوية المعمم، تجعل من الصعب ربط مباشرة طفرة إلى العجز في حزب المؤتمر الشعبي محددة. واحدة من الرافضة قراءة في إشارة PCP هو تحديد المواقع من الجسم القاعدية وPRIMARذ هدب، وبالتالي فصل المرحلة الابتدائية من العيوب الثانوية يمثل تحديا. وقد اقترحت بعض الدراسات في الزرد والفأر المسوخ لا علاقة بين أهداب وإشارات Wnt 18-20. قد تعكس تناقضات في البيانات الأنواع، الأنسجة، أو الاختلافات الزمنية التي تعتمد في المساهمات الهدبية نحو إشارات WNT. وعلاوة على ذلك، قد يتم الاحتفاظ الاستجابة WNT العادية إذا بقيت الهيئات القاعدية وظيفية. وفهم أعمق لدور البروتينات الهدبية في مسارات الإشارات الخلوية والظواهر البيولوجية الأخرى أمر حاسم لفهمنا لعلم الأحياء الخلوي والتنموي، فضلا عن تطوير استراتيجيات العلاج المستهدفة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tools/Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone elastomere - Sylgard 184</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>761028-5EA</td>
			<td>See Note 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps (no. 5 and 55) and blunt forceps</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope.</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uncoated glass microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover slips (22 mm &#215; 40 mm &#215; 0.15 mm)</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>&#160;Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM sample holder</td>
			<td>tousimis</td>
			<td>8762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning electron microscopy studs</td>
			<td>TED PELLA</td>
			<td>16111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PELCO Tabs: Carbon adhesive</td>
			<td>TED PELLA</td>
			<td>16084-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Critical Point Dryer</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe Tissue&#160;</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Paint Brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde&#160; (PFA) (EM Grade Required for EM)</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Prepare a 4% solution in 1&#215; PBS made fresh each time. EM Grade Required for EM.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Glutaraldehyde Grade1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl (pH 7.5)</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl 2</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AffiniPure Fab Fragment Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>715-007-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215; Hanks&#8217; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>14065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide (OsO4 )</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Fluka Analytical</td>
			<td>75632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tannic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>403040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 200 proof</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti Arl13b</td>
			<td>Protein Tech</td>
			<td>17711-1-AP</td>
			<td>Suggested concentration 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti acetylated tubulin (611-B1)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6793</td>
			<td>Suggested concentration 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti gamma tubulin (GTU-88)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6557</td>
			<td>Suggested concentration 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti Zo_1&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>40-2300</td>
			<td>Suggested concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myosin VI</td>
			<td>Proteus Biosciences</td>
			<td>25-6791</td>
			<td>Suggested concentration 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myosin VIIa</td>
			<td>Proteus Biosciences</td>
			<td>25-6790</td>
			<td>Suggested concentration 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti Vangl2</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>ABN373</td>
			<td>Suggested concentration 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti G&#945;i3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4040</td>
			<td>Suggested concentration 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor&#174; 488 Phalloidin</td>
			<td>Invitrogen/Life Technologies</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Suggested concentration 1:300-1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor&#174; 568 Phalloidin</td>
			<td>Invitrogen/Life Technologies</td>
			<td>A12380</td>
			<td>Suggested concentration 1:300-1000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of planar-cell-polarity phenotypes in ciliopathy mouse mutant cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest signaling pathways shown to be associated with ciliary function was the non-canonical Wnt signaling pathway, also referred to as planar cell polarity (PCP) signaling. One of the best places in which to study the effects of planar cell polarity (PCP) signaling during vertebrate development is the mammalian cochlea. PCP signaling disruption in the mouse cochlea disrupts cochlear outgrowth, cellular patterning and hair cell orientation, all of which are affected by cilia dysfunction. The goal of this protocol is to describe the analysis of PCP signaling in the developing mammalian cochlea via phenotypic analysis, immunohistochemistry and scanning electron microscopy. Defects in convergence and extension are manifested as a shortening of the cochlear duct and/or changes in cellular patterning, which can be quantified following dissection from developing mouse mutants. Changes in stereociliary bundle orientation and kinocilia length or positioning can be observed and quantitated using either immunofluorescence or scanning electron microscopy (SEM). A deeper insight into the role of ciliary proteins in cellular signaling pathways and other biological phenomena is crucial for our understanding of cellular and developmental biology, as well as for the development of targeted treatment strategies.

القوقعة تشريح والأنسجة التحضير بعد إزالة الدماغ، ما بعد خط منتصف تشريح سهمي من رئيس P0 الماوس، والتيه العظمي، وينظر من وراء، يمكن تصور (الشكل 1A، السهم الأبيض) وإزالتها. ويبين الشكل 1B متاهات عظمي معزولة مع الشعر القوقعة تواجه صعودا، بطني، (يسار) ومن وراء، ظهري (يمين). يشير السهم البيضاء إلى النافذة البيضوية من أي واحد يمكن أن تبدأ إزالة الغضروف الخارجي. مرة واحدة تمت إزالة الغضروف الخارجي تماما، القناة قوقعة الأذن المكشوفة، سليمة من ذلك، يمكن ملاحظة (الشكل 1C). ويرد تحديد المواقع دبوس من خلال المنطقة الدهليزي لمساعدة تشريح. ويمكن أيضا أن اثنين من المسامير، وضعت في زوايا مختلفة يمكن استخدامها لترسيخ الأنسجة. ويبين الشكل 1D القناة القوقعة بعد إزالة رايسنر &quot;؛ ق غشاء والغشاء السقفي (يسار) ومعزولة دوامة الظهارية قوقعة مرة واحدة وقد تم عزلها عن المنطقة الدهليزي استعدادا لتركيب لالمناعية (يمين). لإعطاء فكرة عامة عن ما يبدو الشعر قوقعة تتعرض مثل، يظهر استعدادا SEM سليمة في الشكل 1E. مورفولوجيا والمناعي في القوقعة تحكم بعد إعداد الأنسجة قوقعة، يتعرض السطح الظهري للقناة القوقعة تحتوي على جهاز كورتي ويمكن تم الاطلاع عبر SEM أو تلطيخ مناعي. ينظر إليها على أنها إعداد كامل جبل، وأربعة صفوف من خلايا الشعر ميكانيكية حسية (صف واحد من خلايا الشعر الداخلية وثلاثة صفوف من خلايا الشعر الخارجي) يمكن تمييزها. ويبين الشكل 2A وجهة نظر التكبير المنخفض للبدوره القاعدية من القوقعة الماوس الجنينية أعدت وأو SEM. لاحظ توجه موحد والمواءمة بين حزم stereociliary القائم الأكتين. وبالإضافة إلى ذلك التشكل من حزم stereociliary هو ثابت، كل حزمة لديها شكل الكلاسيكية &quot;)&quot; (على خلايا الشعر الداخلية) أو &quot;W&quot; (على خلايا الشعر الخارجي). على التكبير فاحصة على هذا العصر زغيبات إضافية يمكن أن ينظر إليه ليس فقط على السطح القمي للخلايا الشعر، ولكن أيضا في الفترات الفاصلة بين خلايا الشعر على الخلايا الداعمة (الشكل 2B). وهذه تنحسر ترك ثلاثة فقط صفوف من حزم stereociliary على خلايا الشعر الخارجي واثنين على خلايا الشعر الداخلية في البالغين. كما يمكن أن يرى في الشكل 2C (السهم الأبيض)، ويقع الهدب المحرك القائم على أنيبيب واحد (أ هدب الأساسي صحيح) المتاخمة لأطول صف من أهداب ساكنة في قمة الرأس من كل حزمة stereociliary. وترد هذه لحزمة عبر وصلات الأهداب المحركة. وضع العلامات الفلورية مع phalloidin، الذي مختبرإلس الأكتين، يسلط الضوء على توجه موحد وشكل حزم في الأنسجة التحكم (الشكل 2D). يسمى الأكتين القشرية أيضا، وهو أمر مفيد لتحديد محيط قمية كل خلية الشعر الفردية. شارك في وضع العلامات مع phalloidin والأجسام المضادة ضد الميوسين 7A (الشكل 2E)، وهو علامة الخلية الشعر، كما يساعد على التفريق بين خلايا الشعر وخلايا الدعم. الميوسين 7A هو أيضا علامة مفيدة لقياس تمديد أنابيب القوقعة (انظر الشكل 3A). يتم استخدام الأجسام المضادة ضد الأسيتيل-α تويولين عادة لتحديد الهدب المحرك القائم على أنيبيب (الشكل 2F). كما أيضا تؤوي خلايا الدعم أهداب الابتدائي، فمن المهم أن نميز بين أهداب المنبثقة عن خلايا الشعر مقابل الإقحام خلايا الدعم. علامة غشاء إضافية مثل الأجسام المضادة ضد ZO-1 (زونا النطيقة 1)، والذي يحدد بوضوح الزخرفة الفسيفساء من الغشاء القمي من القناة القوقعة، لذلك من المفيد (&lt;قوي&gt; الشكل 2F). المزيد من الدراسة هو أن الأجسام المضادة ضد الأسيتيل-α تويولين أيضا تسمية الأنابيب الدقيقة الداخلية ولذا يجب اتخاذها عند التصوير للتركيز على السطح القمي خلية العناية بالشعر. ميكروتثبول في الخلايا عمود هي كثيفة بشكل خاص (الشكل 2G، النجمة البيضاء). وكثيرا ما يستخدم مزيج من phalloidin ووضع العلامات مكافحة الأسيتيل-α-تويولين لتحديد وقت واحد حزم stereociliary والأهداب المحركة المجاورة (الشكل 2G، السهم الأبيض). النمط الظاهري القوقعة في سيليا المسوخ استطالة من القناة القوقعة هي واحدة من أفضل الرافضة قراءة من العيوب التقارب والإرشاد، ولوحظ القنوات قوقعة الشائع اختصارها في المسوخ PCP الكلاسيكية. القوقعة في المسوخ الهدبية غالبا ما يكون تقصير قنوات القوقعة وتظهر توسعا ملحوظا من epithe الحسيةليا في ذروة، كما كان ينظر يمكن في Ift20 CKO / CKO الفئران (الشكل 3A). عيب PCP الكلاسيكية آخر هو اضطراب في التوجه موحد للخلايا الشعر القوقعة، كما يمكن أن يرى في Bbs8 - / - الفئران على حد سواء مع المناعية (الشكل 3B، السهم الأيمن) ومع SEM (الشكل 3C). بالإضافة إلى حزم الموجهة سوء، بالارض وحزم ممسوخ كما لوحظ عموما (الشكل 3B، السهم المتوسط؛ الشكل 3D). في كثير من الأحيان دائرية حزم، كما كان ينظر يمكن في الشكل 3E، موجودة، خصوصا في خلايا الشعر خالية تماما من الأهداب المحركة. سوء توطين الهدب المحرك هي أيضا شائعة. يجوز للالهدب المحرك مترجمة سوء أو قد لا تكون محجوزة لحزمة stereociliary (الشكل 3B، السهم الأيسر. الشكل 3F). أمثلة على كيفية تحديد بووتظهر التوجيه والأهداب المحركة ndle أو المواقع الرزمة في الشكل الجيل الثالث 3G و3H. توجه كل حزمة الفردية ويمكن بعد ذلك يتم تقييم عن طريق تحديد دوران من قريب الرزمة إلى خط يمتد عموديا على صف من خلايا عمود الذي يفصل بين خلايا الشعر الداخلية والخارجية. يتم محاذاة الخلايا مع التوجه الطبيعي على طول هذا المحور العمودي وهكذا يكون دوران 0 درجة (الشكل 3G). موقف الهدب المحرك، أو وسط حزمة stereociliary، يمكن رسم طريق تغطية شبكة الموضعية على سطح lumenal من خلايا الشعر ومن ثم تحديد موقع الأهداب المحركة أو حزمة ضمن الشبكة (الشكل 3I). غالبا ما تؤثر الطفرات في الجينات أهداب طول الأهداب، وهكذا طول الهدب المحرك يمكن تقييم. في Cep290 المسوخ rd16 / rd16، الأهداب المحركة هي أطول من الضوابط (الشكل 3J). وبما أن تتراجع هدب،فمن الأهمية بمكان أن يكون سن يقابل الاصحاب القمامة ولأخذ القياسات من نفس المنطقة من القوقعة. للحصول على صور جيدة للتحليل وتقدير لكل من المناعية ووزارة شؤون المرأة، فمن الأهمية بمكان أن إزالة الغشاء السقفي. الشكل 3F يظهر صورة مجهرية ووزارة شؤون المرأة التي لم يتم إزالة الغشاء السقفي تماما. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53559/53559fig1.jpg" /> الشكل 1. تشريح ماوس القوقعة النامية (P0). (A) منتصف خط تشريح سهمي من رئيس P0 الفأر مع الدماغ إزالتها. يشير السهم البيضاء إلى الموقف من المتاهة عظمي. (ب) بطني (يسار) والظهرية (يمين) آراء المتاهات عظمي تشريح. يقع القوقعة نحو الأعلى مع الجزء الدهليزي عند نقاط السهم الأبيض أسفل إلى إطار بيضاوي. (ج) متاهة الخلف العظميةإزالة إيه من الغضروف الخارجي من القوقعة. تم وضع دبوس من خلال نظام الدهليزي. (D) يسار، نفس وجهة النظر كما في C بعد إزالة غشاء رايسنر والغشاء السقفي. الصحيح، قناة قوقعة معزولة جاهزة للتركيب. (E) المسح صورة مجهرية الإلكترون ل، القوقعة الحلزونية سليمة يتعرض فضح الكلمة من القناة القوقعة، بما في ذلك ظهارة حسية. شريط المقياس هو 100 ميكرون. . (A - D) مقتبس من مايو Simera وآخرون، 2012 25 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53559/53559fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/53559/53559fig2.jpg" /> الشكل 2. مورفولوجيا والمناعي في القوقعة التحكم (A - C). الميكروسكوب الضوئي الإلكترون من الطور القاعديةن في الجنينية (E18.5) البرية نوع القوقعة. يتم فصل صف واحد من الخلايا الداخلية الشعر (القاع) وثلاثة صفوف من خلايا الشعر الخارجي (أعلى) ومقحم من قبل خلايا الدعم. حزم stereociliary شكل شيفرون ستوجه بشكل موحد نحو الحافة الجانبية من كل خلية الشعر (الحافة العلوية من الصورة). في E18.5 تغطي زغيبات إضافية السطوح قمية من خلايا الشعر، دون حزم stereociliary، وخلايا الدعم مقحم (B). (ج) والهدب المحرك القائم على أنيبيب واحد (السهم الأبيض)، ويقع في قمة الرأس من حزمة، كما هو موضح هنا من الحافة الجانبية. (D - G) مناعي تلطيخ القاعدية آخر بدوره الولادة يوم 1 (P1) النوع البري للقوقعة. Phalloidin تسميات الأكتين الخيطية في أهداب ساكنة والأكتين القشرية في محيط الخلية (D، E، G). الميوسين 7A هو علامة للحصول على خلايا الشعر الداخلية والخارجية (E). Zo_1 التسميات منعطفات ضيقة في الفترات الفاصلة بين الخلايا، مما يجعلها علامة كبيرة على التمييز بوندا خليةريس (F). يستخدم الأسيتيل α تويولين كعلامة للالهدب المحرك في قمة الرأس من حزمة (F، G السهم الأبيض). وصفت الأنابيب الدقيقة الداخلية أيضا الأسيتيل α تويولين، والتي هي على وجه الخصوص وفرة في خلايا عمود (G أستريكس الأبيض). يمنع على نطاق وج: 10 ميكرون، B: 5 ميكرون، C: 1 ميكرون، DG: 5 ميكرون <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53559/53559fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53559/53559fig3.jpg" /> الشكل 3. القوقعة النمط الظاهري في سيليا المسوخ. (A) تقصير ملحوظ من Ift20 CKO / CKO القنوات قوقعة مقارنة مع الشاهد. تشريح القنوات قوقعة في E18.5 ملطخة تويولين الأسيتيل. (ب </قوية&gt;) كامل الصور جبل بدوره قوقعة القاعدية في Bbs8 - / - متحولة (P0). وصفت Phalloidin الأكتين الخيطية، أهداب ساكنة (الحمراء)، تويولين الأسيتيل، الأهداب المحركة (الخضراء). حزم Stereociliary في Bbs8 - / - القوقعة يتم تناوب بنسب مختلفة (السهم الأيمن)، بالارض و / أو mislocalized (السهم الأوسط). وmislocalized الأهداب المحركة أو axonemes مفقودة (السهم الأيسر). (C - F) التكبير العالي ووزارة شؤون المرأة حزم stereociliary والأهداب المحركة في Bbs8 - / - OHCs. في C، استدارة حزم، في D، بالارض حزمة، في E، حزم الدائرية وفي F mislocalized الأهداب المحركة. (G - I) تمثيل تخطيطي الكمي شذوذ ربطة. (G) اليسار، حزمة التحدب (الارتفاع). أقصر مسافة بين قمة الرأس من حزمة والخط الذي يمتد من خلال طرفي &quot;الأسلحة&quot; حزمة. كما دepicted بخط أسود خالص. الحق، ومنطقة تحت حزمة. المنطقة. (H) تمثيل تخطيطي من المعايير المستخدمة لتحديد اتجاه حزم stereociliary. يتم حساب زاوية دوران حزمة النسبي إلى الخط يمتد عموديا على صف من خلايا عمود. (I) تمثيل تخطيطي للمعايير تحليل الموضعية من الأهداب المحركة وحزم stereociliary. وضعت وشبكة مجزأة على محيط الخلية الشعر، وأشار إلى الموقف. (J) صورة التكبير العالي للحزم المسمى phalloidin أهداب ساكنة (الحمراء)، والأسيتيل الأهداب المحركة المسمى تويولين (الخضراء) من خلايا الشعر الخارجي في القوقعة P0. في لوحة أحادية اللون المجاورة، خطوط حمراء تحدد الأهداب المحركة، وهي تعد في Cep29 المسوخ rd16 / rd16 مقارنة مع الشاهد (السهام البيضاء). (K) ووزارة شؤون المرأة مجهرية من القوقعة الجنينية مع إزالة كاملة من الغشاء السقفي. مقياسيحظر ج: 100 ميكرون، B: 5 ميكرون، C - F: 2.5 ميكرون، و: 5 ميكرون، J: 50 ميكرون. (A - F).. معدلة من مايو Simera وآخرون، 2015 8، J طبع بإذن من راشيل وآخرون، 2012 27 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53559/53559fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea at JoVE.com

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

تقييم مستو خلية-التقاطب الظواهر في Ciliopathy ماوس المسخ القوقعة

Primary cilia influence various signaling pathways. The mammalian cochlea is ideal for examining planar cell polarity (PCP) signaling. Cilia dysfunction affects cochlear outgrowth, cellular patterning and hair cell orientation, readouts of PCP. Our goal is to analyze PCP signaling in mouse cochlea via phenotypic analysis, immunohistochemistry and scanning electron microscopy.

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

evaluation-planar-cell-polarity-phenotypes-ciliopathy-mouse-mutant

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.3K Views.  Johannes Gutenberg-Universität Mainz. Primary cilia influence various signaling pathways. The mammalian cochlea is ideal for examining planar cell polarity (PCP) signaling. Cilia dysfunction affects cochlear outgrowth, cellular patterning and hair cell orientation, readouts of PCP. Our goal is to analyze PCP signaling in mouse cochlea via phenotypic analysis, immunohistochemistry and scanning electron microscopy.

Video: Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold standard" method for assessing insulin action in vivo. During an insulin clamp, hyperinsulinemia is achieved by a constant insulin infusion. Euglycemia is maintained via a concomitant glucose infusion at a variable rate. This variable glucose infusion rate (GIR) is determined by measuring blood glucose at brief intervals throughout the experiment and adjusting the GIR accordingly. The GIR is indicative of whole-body insulin action, as mice with enhanced insulin action require a greater GIR. The insulin clamp can incorporate administration of isotopic 2[14C]deoxyglucose to assess tissue-specific glucose uptake and [3-3H]glucose to assess the ability of insulin to suppress the rate of endogenous glucose appearance (endoRa), a marker of hepatic glucose production, and to stimulate the rate of whole-body glucose disappearance (Rd).
The miniaturization of the insulin clamp for use in genetic mouse models of metabolic disease has led to significant advances in diabetes research. Methods for performing insulin clamps vary between laboratories. It is important to note that the manner in which an insulin clamp is performed can significantly affect the results obtained. We have published a comprehensive assessment of different approaches to performing insulin clamps in conscious mice1 as well as an evaluation of the metabolic response of four commonly used inbred mouse strains using various clamp techniques2. Here we present a protocol for performing insulin clamps on conscious, unrestrained mice developed by the Vanderbilt Mouse Metabolic Phenotyping Center (MMPC; URL: www.mc.vanderbilt.edu/mmpc). This includes a description of the method for implanting catheters used during the insulin clamp. The protocol employed by the Vanderbilt MMPC utilizes a unique two-catheter system3. One catheter is inserted into the jugular vein for infusions. A second catheter is inserted into the carotid artery, which allows for blood sampling without the need to restrain or handle the mouse. This technique provides a significant advantage to the most common method for obtaining blood samples during insulin clamps which is to sample from the severed tip of the tail. Unlike this latter method, sampling from an arterial catheter is not stressful to the mouse1. We also describe methods for using isotopic tracer infusions to assess tissue-specific insulin action. We also provide guidelines for the appropriate presentation of results obtained from insulin clamps.

The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is the gold standard for assessing insulin action in vivo. A method for performing insulin clamps in mice is described. This includes a method for arterial catheterization that permits experiments to be performed in conscious, unrestrained mice with minimal stress.

Hyperinsulinemic - سوي سكر الدم في الفئران المشابك ، وإدراكا بلا حدود

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

Spinal cord injury (SCI) is often accompanied by osteoporosis in the sublesional regions of the pelvis and lower extremities, leading to a higher frequency of fractures 1. As these fractures often occur in regions that have lost normal sensory function, the patient is at a greater risk of fracture-dependent pathologies, including death. SCI-dependent loss in both bone mineral density (BMD, grams/cm2) and bone mineral content (BMC, grams) has been attributed to mechanical disuse 2, aberrant neuronal signaling 3 and hormonal changes 4. The use of rodent models of SCI-induced osteoporosis can provide invaluable information regarding the mechanisms underlying the development of osteoporosis following SCI as well as a test environment for the generation of new therapies 5-7 (and reviewed in 8). Mouse models of SCI are of great interest as they permit a reductionist approach to mechanism-based assessment through the use of null and transgenic mice. While such models have provided important data, there is still a need for minimally-invasive, reliable, reproducible, and quantifiable methods in determining the extent of bone loss following SCI, particularly over time and within the same cohort of experimental animals, to improve diagnosis, treatment methods, and/or prevention of SCI-induced osteoporosis.
An ideal method for measuring bone density in rodents would allow multiple, sequential (over time) exposures to low-levels of X-ray radiation. This study describes the use of a new whole-animal scanner, the IVIS Lumina XR (Caliper Instruments) that can be used to provide low-energy (1-3 milligray (mGy)) high-resolution, high-magnification X-ray images of mouse hind limb bones over time following SCI. Significant bone density loss was seen in the tibiae of mice by 10 days post-spinal transection when compared to uninjured, age-matched control (na&iuml;ve) mice (13% decrease, p&lt;0.0005). Loss of bone density in the distal femur was also detectable by day 10 post-SCI, while a loss of density in the proximal femur was not detectable until 40 days post injury (7% decrease, p&lt;0.05). SCI-dependent loss of mouse femur density was confirmed post-mortem through the use of Dual-energy X-ray Absorptiometry (DXA), the current "gold standard" for bone density measurements. We detect a 12% loss of BMC in the femurs of mice at 40 days post-SCI using the IVIS Lumina XR. This compares favorably with a previously reported BMC loss of 13.5% by Picard and colleagues who used DXA analysis on mouse femurs post-mortem 30 days post-SCI 9. Our results suggest that the IVIS Lumina XR provides a novel, high-resolution/high-magnification method for performing long-term, longitudinal measurements of hind limb bone density in the mouse following SCI.

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

A longitudinal examination of bone loss in the femurs and tibiae of adult mice was performed following spinal cord injury using sequential low-dose X-ray scans. Tibia bone loss was detected throughout the study, while bone loss in the femur was not detected until 40 days post injury.

التقييم الطولي للهند ماوس الاطراف فقدان العظام بعد اصابة النخاع الشوكي به الرواية ، في الجسم الحي ، منهجية

Spinal cord injury (SCI) is often accompanied by osteoporosis in the sublesional regions of the pelvis and lower extremities, leading to a higher ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Stroke is the third cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic stroke accounts for approximately 80% of all strokes. However, the thrombolytic tissue plasminogen activator (tPA) is the only treatment of acute ischemic stroke that exists. This led researchers to develop several ischemic stroke models in a variety of species. Two major types of rodent models have been developed: models of global cerebral ischemia or focal cerebral ischemia. To mimic ischemic stroke in patients, in whom approximately 80% thrombotic or embolic strokes occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), the intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is quite relevant for stroke studies. This model was first developed in rats by Koizumi et al. in 1986 1. Because of the ease of genetic manipulation in mice, these models have also been developed in this species 2-3.
	Herein, we present the transient MCA occlusion procedure in C57/Bl6 mice. Previous studies have reported that physical properties of the occluder such as tip diameter, length, shape, and flexibility are critical for the reproducibility of the infarct volume 4. Herein, a commercial silicon coated monofilaments (Doccol Corporation) have been used. Another great advantage is that this monofilament reduces the risk to induce subarachnoid hemorrhages. Using the Zeiss stereo-microscope Stemi 2000, the silicon coated monofilament was introduced into the internal carotid artery (ICA) via a cut in the external carotid artery (ECA) until the monofilament occludes the base of the MCA. Blood flow was restored 1 hour later by removal of the monofilament to mimic the restoration of blood flow after lysis of a thromboembolic clot in humans. The extent of cerebral infarct may be evaluated first by a neurologic score and by the measurement of the infarct volume. Ischemic mice were thus analyzed for their neurologic score at different post-reperfusion times. To evaluate the infarct volume, staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) was usually performed. Herein, we used cresyl violet staining since it offers the opportunity to test many critical markers by immunohistochemistry. In this video, we report the MCAO procedure; neurological scores and the evaluation of the infarct volume by cresyl violet staining.

The intraluminal middle cerebral occlusion model in mice is herein presented. The extent of cerebral infarct is evaluated by a neurologic score and cresyl violet staining, an alternative staining to TTC, offering the great advantage to test in parallel many interest markers.

نموذج الفأر من MCAO داخل اللمعة: الدماغي التقييم عائق من قبل تلوين البنفسج الكريزيل

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

طريقة بسيطة لتركيب الانبوبة الرئة ماوس

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

تقييم الرئة الانبثاث في ماوس الثديية ورم المجموعات بواسطة الكمي في الوقت الحقيقي PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, primarily in the hip and knee joints, which results in significant impacts on patient mobility and quality of life. To date, there are no existing curative therapies for OA able to slow down or inhibit cartilage degeneration. Presently, there is an extensive body of ongoing research to understand OA pathology and discover novel therapeutic approaches or agents that can efficiently slow down, stop, or even reverse OA. Thus, it is crucial to have a quantitative and reproducible approach to accurately evaluate OA-associated pathological changes in the joint cartilage, synovium, and subchondral bone. Currently, OA severity and progression are primarily assessed using the Osteoarthritis Research Society International (OARSI) or Mankin scoring systems. In spite of the importance of these scoring systems, they are semiquantitative and can be influenced by user subjectivity. More importantly, they fail to accurately evaluate subtle, yet important, changes in the cartilage during the early disease states or early treatment phases. The protocol we describe here uses a computerized and semiautomated histomorphometric software system to establish a standardized, rigorous, and reproducible quantitative methodology for the evaluation of joint changes in OA. This protocol presents a powerful addition to the existing systems and allows for more efficient detection of pathological changes in the joint.

The current protocol establishes a rigorous and reproducible method for quantification of morphological joint changes that accompany osteoarthritis. Application of this protocol can be valuable in monitoring disease progression and evaluating therapeutic interventions in osteoarthritis.

تقييم قياسي للفزة الهيستومترية لهشاشة العظام في نموذج الماوس الجراحي

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining endocochlear potential, ion transport, and fluid balance. Different forms of hearing disorders are reported to involve abnormal microcirculation in the cochlea. Investigation of how cochlear blood flow (CoBF) pathology affects hearing function is challenging due to the lack of feasible interrogation methods and the difficulty in accessing the inner ear. An open vessel-window in the lateral cochlear wall, combined with fluorescence intravital microscopy, has been used for studying CoBF changes in vivo, but mostly in guinea pig and only recently in the mouse. This paper and the associated video describe the open vessel-window method for visualizing blood flow in the mouse cochlea. Details include 1) preparation of the fluorescent-labeled blood cell suspension from mice; 2) construction of an open vessel-window for intravital microscopy in an anesthetized mouse, and 3) measurement of blood flow velocity and volume using an offline recording of the imaging. The method is presented in video format to show how to use the open window approach in mouse to investigate structural and functional changes in the cochlear microcirculation under normal and pathological conditions.

An open vessel-window approach using fluorescent tracers provides sufficient resolution for cochlear blood flow (CoBF) measurement. The method facilitates the study of structural and functional changes in CoBF in mouse under normal and pathological conditions.

قياس تدفق الدم الغريلي في قوقعة الفئران باستخدام نافذة الأوعية المفتوحة والمجهر الفلوري داخل الحيوية

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

Evaluation of Hepatic Glucose Production in a Polycystic Ovary Syndrome Mouse Model

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a common disease that results in disorders of glucose metabolism, such as insulin resistance and glucose intolerance. Dysregulated glucose metabolism is an important manifestation of the disease and is the key to its pathogenesis. Therefore, studies involving evaluation of glucose metabolism in PCOS are of utmost importance. Very few studies have quantified hepatic glucose production directly in PCOS models using non-radioactive glucose tracers. In this study, we discuss step-by-step instructions for the quantification of the rate of hepatic glucose production in a PCOS mouse model by measuring M+2 enrichment of [6,6-2H2]glucose, a stable isotopic glucose tracer, via gas chromatography - mass spectrometry (GCMS). This procedure involves creation of stable isotopic glucose tracer solution, use of tail vein catheter placement and infusion of the glucose tracer in both fasting and glucose-rich states in the same mouse in tandem. The enrichment of [6,6-2H2]glucose is measured using pentaacetate derivative in GCMS. This technique can be applied to a wide variety of studies involving direct measurement of the rate of hepatic glucose production.

This study describes the direct measurement of hepatic glucose production in a polycystic ovary syndrome mouse model by using a stable isotopic glucose tracer via tail vein in both fasting and glucose-rich states in tandem.

تقييم إنتاج الجلوكوز الكبدي في نموذج ماوس متلازمة المبيض المتعدد الكيسات

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a common disease that results in disorders of glucose metabolism, such as insulin resistance and glucose intolerance. ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.

التقييم الفسيولوجي المرضي للشبكية في نموذج الفئران

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

أخذ عينات الدم المتكررة من الوريد تحت الترقوة للفأر الواعي

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...