الكتاب أود أن أشكر آن دارون وبيير لويس Loyher للحصول على المساعدة التحرير، وPlateforme IMAGERIE بيتييه-Salpêtrière (PICPS) للحصول على المساعدة مع المجهر ثنائي الفوتون ومرفق الحيوان &quot;NAC&quot; وكميل Baudesson بالنسبة للفئران تربية المساعدة. تلقت الأبحاث الرائدة لهذه النتائج بتمويل من البرنامج الإطاري السابع للجماعة الأوروبية (FP7 / 2007-2013) بموجب اتفاقية منحة رقم 304810 - الغارات، و n ° 241440-Endostem، من INSERM، من جامعة بيير وماري كوري &quot;ظهور &quot;من لا&quot; الدوري الفرنسي مناهضة جنيه السرطان &quot;، من&quot; جمعية صب لا بحوث سور جنيه السرطان &quot;ومن&quot; الوكالة الوطنية للبحوث &quot;ظهور برنامج عام 2012 (ANR-EMMA-050). وأيد PH التي كتبها la &quot;الدوري الفرنسي مناهضة جنيه السرطان&quot;.

<ol>
	<li>Ovchinnikov, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Gal4-dependent+transgenes+in+cells+of+the+mononuclear+phagocyte+system+labeled+with+enhanced+cyan+fluorescent+protein+using+Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP+double-transgenic+mice.">Expression of Gal4-dependent transgenes in cells of the mononuclear phagocyte system labeled with enhanced cyan fluorescent protein using Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP double-transgenic mice.</a> J Leukoc Biol. 83, 430-433 (2008).</li><li>Parihar, A., Eubank, T. D., Doseff, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+and+macrophages+regulate+immunity+through+dynamic+networks+of+survival+and+cell+death.">Monocytes and macrophages regulate immunity through dynamic networks of survival and cell death.</a> J Innate Immun. 2, 204-215 (2010).</li><li>Geissmann, F., Jung, S., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+monocytes+consist+of+two+principal+subsets+with+distinct+migratory+properties.">Blood monocytes consist of two principal subsets with distinct migratory properties.</a> Immunity. 19, 71-82 (2003).</li><li>Robbins, C. S., Swirski, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+roles+of+monocyte+subsets+in+steady+state+and+inflammation.">The multiple roles of monocyte subsets in steady state and inflammation.</a> Cell Mol Life Sci. 67, 2685-2693 (2010).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+mesenchymal+stem+and+progenitor+cells+induce+monocyte+emigration+in+response+to+circulating+toll-like+receptor+ligands.">Bone marrow mesenchymal stem and progenitor cells induce monocyte emigration in response to circulating toll-like receptor ligands.</a> Immunity. 34, 590-601 (2011).</li><li>Jacquelin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1+reduces+Ly6Chigh-monocyte+motility+within+and+release+from+the+bone+marrow+after+chemotherapy+in+mice.">CX3CR1 reduces Ly6Chigh-monocyte motility within and release from the bone marrow after chemotherapy in mice.</a> Blood. 122, 674-683 (2013).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325, 612-616 (2009).</li><li>Germain, R. N., Miller, M. J., Dustin, M. L., Nussenzweig, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+the+immune+system:+progress,+pitfalls+and+promise.">Dynamic imaging of the immune system: progress, pitfalls and promise.</a> Nat Rev Immunol. 6, 497-507 (2006).</li><li>Charo, I. F., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+roles+of+chemokines+and+chemokine+receptors+in+inflammation.">The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation.</a> N Engl J Med. 354, 610-621 (2006).</li><li>Milo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+reveals+promiscuous+crosspresentation+of+blood-borne+antigens+to+naive+CD8++T+cells+in+the+bone+marrow.">Dynamic imaging reveals promiscuous crosspresentation of blood-borne antigens to naive CD8+ T cells in the bone marrow.</a> 122, 193-208 (2013).</li><li>Cavanagh, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+bone+marrow-resident+memory+T+cells+by+circulating,+antigen-bearing+dendritic+cells.">Activation of bone marrow-resident memory T cells by circulating, antigen-bearing dendritic cells.</a> Nat Immunol. 6, 1029-1037 (2005).</li><li>Mazo, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+is+a+major+reservoir+and+site+of+recruitment+for+central+memory+CD8++T+cells.">Bone marrow is a major reservoir and site of recruitment for central memory CD8+ T cells.</a> Immunity. 22, 259-270 (2005).</li><li>Travlos, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+bone+marrow.">Normal structure, function, and histology of the bone marrow.</a> Toxicol Pathol. 34, 548-565 (2006).</li><li>Mazo, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+progenitor+cell+rolling+in+bone+marrow+microvessels:+parallel+contributions+by+endothelial+selectins+and+vascular+cell+adhesion+molecule+1.">Hematopoietic progenitor cell rolling in bone marrow microvessels: parallel contributions by endothelial selectins and vascular cell adhesion molecule 1.</a> J Exp Med. 188, 465-474 (1998).</li><li>Rashidi, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+time-lapse+imaging+of+mouse+bone+marrow+reveals+differential+niche+engagement+by+quiescent+and+naturally+activated+hematopoietic+stem+cells.">In vivo time-lapse imaging of mouse bone marrow reveals differential niche engagement by quiescent and naturally activated hematopoietic stem cells.</a> Blood. , (2014).</li><li>Sipkins, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+specialized+bone+marrow+endothelial+microdomains+for+tumour+engraftment.">In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment.</a> Nature. 435, 969-973 (2005).</li><li>Cariappa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perisinusoidal+B+cells+in+the+bone+marrow+participate+in+T-independent+responses+to+blood-borne+microbes.">Perisinusoidal B cells in the bone marrow participate in T-independent responses to blood-borne microbes.</a> Immunity. 23, 397-407 (2005).</li><li>Junt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+visualization+of+thrombopoiesis+within+bone+marrow.">Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow.</a> Science. 317, 1767-1770 (2007).</li><li>Zoumi, A., Yeh, A., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+cells+and+extracellular+matrix+in+vivo+by+using+second-harmonic+generation+and+two-photon+excited+fluorescence.">Imaging cells and extracellular matrix in vivo by using second-harmonic generation and two-photon excited fluorescence.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 11014-11019 (2002).</li><li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node.">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu Rev Immunol. 26, 585-626 (2008).</li><li>Yost, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+neutrophil+extracellular+trap+(NET)+formation:+a+novel+innate+immune+deficiency+of+human+neonates.">Impaired neutrophil extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune deficiency of human neonates.</a> Blood. 113, 6419-6427 (2009).</li><li>Devi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+reveals+a+new+leukocyte+recruitment+paradigm+in+the+glomerulus.">Multiphoton imaging reveals a new leukocyte recruitment paradigm in the glomerulus.</a> Nat Med. 19, 107-112 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

النقاط الحرجة للفي الجسم الحي منهجية التصوير في ضمان الاستقرار في التركيز من أجل تحقيق أقصى مدة التصوير والتقليل من خطر التلوث الجرثومي والتهاب، والتي قد تؤثر على ديناميات الخلايا الالتهابية. التصوير من نخاع عظم الجمجمة يتبع هذه الأهداف كما أجريت عملية جراحية للوصول إلى نخاع العظم هو الحد الأدنى. استخدام المواد المعقمة والمطهرات أمر ضروري للحد من خطر العدوى التي يمكن أن تحفز اضطراب في توازن الخلية. تطوير حامل المجسم قد يكون تحديا ويتطلب التخصيص المحدد لكل نظام (المسافة بين مرحلة موضوعية والآلية المجهر، واستخدام نشوق الغاز للتخدير). من المهم أن يحصل رئيس الماوس كما الأفقي ممكن عن وصول سطح التصوير أوسع. مرة واحدة يتم وضع الحيوان، فمن المرجح أن عدة دقائق يمكن أن يكون اشتراطاتإد للحصول على الاستقرار جيدة للالبؤري. لذلك، فمن المستحسن للتحقق من الانجراف الأنسجة قبل شن تسجيل الاستحواذ. لأن هذه العملية جنبا إلى جنب مع اختيار المناطق ذات الاهتمام يمكن أن تستمر بعض الوقت، فمن المستحسن أيضا إلى التحقق دائما من أن هذا الحيوان هو فاقد الوعي إذا استخدمت Ketamin / Xylazin، وللتحقق من الغمر السليم للهدف كما التسرب والتبخر يمكن تحدث. المواقع الجيد للحلقة مطاطية على الجمجمة يمثل خطوة حاسمة أخرى في العملية. يوفر الغراء cyanoacrylate نتائج جيدة من حيث الاستقرار والختم، ولكن يحتاج المرء لمنع التحميل الزائد من الغراء، والتي يمكن أن تغطي الجمجمة ومنع الوصول إلى المنطقة من مصلحة الأنسجة. ميزة الغمر المباشر من الجمجمة دون ساترة الزجاج هو الحصول على الوصول إلى المناطق العميقة من العظام. وبالإضافة إلى ذلك، منذ الجمجمة ليست سطح عادي، وهذا لن يحد من مجال التصوير ليخدعسطح براعة بين الجمجمة وساترة، مما يسمح حقل التصوير واسعة، كما هو معروض في الشكل 1. لجميع تقنيات التصوير، واختيار بين سرعة اكتساب وجودة قرار تمثل حلا وسطا. وهكذا، فإن عدد ونوعية الصور في كل وحدة زمنية محدودة، ويتوقف الاختيار على السؤال العلمي معالجتها. عادة، وحيدات الأوعية الدموية تدور بسرعة الخلايا، في حين حيدات متني هي متحركة بطيئة أو لاطئة. وتتبع دقيق لخلايا المتداول يتطلب قرار الوقت أعلى من الاستحواذ، كما هو مبين في الشكل (2). ارتفاع معدل التصوير للخلايا لاطئة هو عديمة الفائدة وارتفاع X، Y، Z قرار يمكن أن يكون من المفضل لتحليل النشاط تبارزي من التشعبات على سبيل المثال. أن خلايا سريعة تتطلب حجم سمكا للحصول على تتبع أطول من نزوحهم في ض. لم يتم توفير تشريد مربع متوسط ​​بوصفها وظيفة من الزمن من قبل Imaris البرمجيات. وبرينسيبلو هذا التمثيل استنادا إلى حقيقة أن لكائن السفر المقذوفات دون أي لقاء أو انقباض الهيكلي، والمسافة التي سافر سيكون متناسبا مع الفاصل الزمني (الشكل 2D). وهكذا الخطي المنحدر تشير إلى المشي العشوائي في بيئة غير مقيدة. في المقابل، فإن شكل مقارب للمنحنى يعكس النزوح مقيدة على مر الزمن من السكان الخلية. الميزة الثانية لهذا الحساب هي أن سرعة والمبالغة في بعض الأحيان من النزوح مصطنع من مركز الكتلة. هذا مهم بشكل خاص لبطء خلية متحركة مع النشاط تبارزي. وهكذا، وحساب معامل القدرة على الحركة من قبل المنحدر من منحنى تحسب على الانحدار الخطي يشير إلى النزوح الحقيقي من الوقت cellover 21. Ly6G تلطيخ في الجسم الحي يوضح إمكانية إضافة معلمة جديدة في التحليل أثناء عملية التصوير (الشكل 3 </strong&gt;). وقد استخدمنا هذه التقنية وصمة عار الأوعية الدموية تسلل العدلات إلى جرح الجلد، ويلاحظ أي خلل في قدرتها على الحركة مما يشير إلى عدم تغيير وظيفي (Rodero آخرون تحت الطبع). على الرغم من أن أكثر من 98٪ من العدلات الأوعية الدموية وصفت بشكل صحيح، وتلطيخ من العدلات نخاع العظام هو أقل كفاءة، ويتم تقليل كثافة مضان متوسط ​​بقوة، مما يشير إلى انخفاض صول الأجسام المضادة نحو لحمة نخاع العظام (لا تظهر البيانات). Rhodamin ديكستران، النقاط الكمومية، أو الأصباغ محددة أخرى من الخلايا الميتة أو الميتة مثل دابي، يوديد propidium، sytox 22، أو مراسل الفلورسنت لوظائف الخلية مثل إنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية 23، ويمكن أن يضاف عن طريق الوريد عن طريق الوريد الذيل أثناء التصوير عملية وتوفر فرصة جيدة لقياس الخصائص الوظيفية مثل موت الخلية، البلعمة وفخ خارج الخلية العدلة. مازو وآخرون 12 تستخدم لطيف اثنين من الأصباغ الأوعية الدموية المختلفةمع انخفاض وارتفاع الوزن الجزيئي لتحسين حمة التباين والأوعية الدموية. اختيار صبغة الفلورسنت أمر حاسم للسماح اكتساب ما يصاحب ذلك من صحفيين الفلورسنت مختلفة. في الواقع، وسيتم اختيار الطول الموجي الإثارة وفقا لذلك للحصول على أفضل حل وسط بين جميع الأصباغ الفلورية المستخدمة. بروتوكول المستخدمة هنا يجعل من الممكن لتحليل في الجسم الحي النشاط البيولوجي للحجرة الخلية، ودراسة التي كان من الصعب حتى الآن. التحليل النسيجي للنسيج نخاع العظم وعادة ما يتطلب إعداد طويل من زوال الكلس العظام للسماح قسم رقيقة، وانها لا تقدم سوى وجهة نظر ثابتة من الأنسجة. وجهة نظر ديناميكية يسلط الضوء على معدل الصرف بين خلية لحمة والجيوب نخاع العظام. هذه العملية السريعة هي خطوة حاسمة على فك من أجل الحصول على فهم أفضل لآلية تعبئة خلية على إشارة التهابات 5 أو شروط مسبقة العلاج الكيميائي myeloaplasiveنظام 6. لقد ذكرت الحدث من الخلايا دخول الوعاء 6 ولكن هذه العملية هو بالكاد يمكن كشفها بسبب التردد المنخفض في حالة مستقرة. ومع ذلك، فمن المرجح أن يتعزز على إشارات التهابات. مستقبلات Chemokine مثل CCR2، CX3CR1 أو CXCR4 متورطين للغاية في عملية دخول الوعاء، وبالتالي استخدام إبطال الجيني هذه المستقبلات يجب تقديم رؤى الأساسية الرواية في مسارات الهجرة الخلية

The bone marrow plays a central role in hematopoiesis and represents the main reservoir of monocytes that constitutively recirculate between the blood and the medullar parenchyma, renew the pool of circulating monocytes with a short life span 2,3 and participate in the reconstitution of the steady state tissue-macrophages and dendritic cells 4. During inflammation or after transient aplasia, monocytes are actively mobilized from either the bone marrow or the spleen 5, 6, 7 and colonize inflamed organs. Several chemoattractant axis have been involved in the process of myeloid cell mobilization from the bone marrow 8, 5, 6,9. Beyond the myeloid compartment the bone marrow is also an important site of T lymphocyte priming 10 and a niche of immunological memory 11,12. Thus, this tissue is central for numerous investigations in the field of hematology and immunology. Our knowledge on the structural organization of medullar myeloid cells mainly arises from the analysis of histological section of fixed tissues 13. This static view does not allow for a study of the cellular exchange dynamic between the different compartments of the bone marrow, which is the basis of its functional activity.
Intravital imaging constitutes an important biological input in the study of cell mobility, cell adherence and cell-to-cell interactions, which were previously described only from in vitro systems. Technical challenges for proper intravital imaging include the ability to reach the tissue of interest in an optical point of view, and to maximize its isolation from physiological (breath, muscle or peristaltic contractions) or mechanical drifts (tissue disruption and extension following surgery, and exposure to microscope objective as well as temperature and vascular/oxygenation perturbations). Microscopic drifts may limit the ability to keep the focus a long time and could introduce artifacts in the quantification of cell motility. One alternative, validated for several tissues to reduce these technical difficulties, is to work on explanted tissue incubated in a thermostated and oxygenated medium; however, complete disruption of the lymphatic and vascular circulation may be problematic. Intravital imaging of skull bone marrow has several advantages concerning these issues. Firstly, it requires minimal surgical action. Secondly, thickness of the bone in this region allows direct visualization of bone marrow niches without abrasion, thus reducing physiological perturbations. The medullar network can be imaged in the parasagittal region of the bone; however the sinusoids are more visible in the fronto-parietal area where the bone matrix is thinner12,14. 
Intravital imaging relies on the availability of the most accurate fluorescent reporter tagging the population of interest. In vitro labelling of purified cell population before adoptive transfer led to important characterization of hematopoietic stem cell niches 15 or bone marrow endothelial microdomains favouring tumor engraftment 16, and provided several fundamental inputs on key concepts in immunology 17 . However, this approach usually requires hundreds of thousands of cells to get a chance to detect them afterwards in vivo. This could be explained by the high mortality rate following staining, the dilution in the whole body and the change in the activation state, which might lead to biased homing. Endogenous tagging from transgenic mouse system greatly overcomes these limitations and has allowed to image the behaviour of endogenous osteoblast 8, megakaryocytes 18 or myeloid-lineage subsets 6 . Nevertheless, one has to be cautious when considering the specificity of the fluorescent reporter among the studied subset. 
The Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP, called MacBlue mouse 1, is a valuable transgenic system to study medullar monocytes with real time imaging 6. Intravenous injection of high molecular weight rhodamin-dextran distinguishes the medullar parenchyma from the vascular sinusoid network of the bone marrow. Using this approach, it is possible to track the monocyte behaviour in the different medullar compartments in a specific physiopathological context of interest. Furthermore, we propose an additional strategy to compare monocyte dynamics with that of neutrophils through in vivo labelling using a specific antibody.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="824">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:171px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:237px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ketamin</td>
			<td style="width:171px;">Merial</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100mg/mL, anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Xylazin</td>
			<td style="width:171px;">Bayer HealthCare</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>10mg/mL, anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Isofluran</td>
			<td style="width:171px;">Baxter</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2.5%, anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">O2/NO2</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>70/30 mixture, anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:297px;">Rhodamin-Dextran</td>
			<td style="width:171px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2MDa, 10mg/mL, Vascular staining</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:297px;">Ly6G-PE</td>
			<td style="width:171px;">Becton-Dickinson</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>clone 1A8, neutrophils staining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Stereotactic holder</td>
			<td style="width:171px;">Home made</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ethanol 70%</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Sterile scissors and nippers</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Rubber ring</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>18mm diameter, surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Glubran 2</td>
			<td style="width:171px;">Queryo Medical</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Surgical Glue, rubber ring fixation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Small gauge needles</td>
			<td style="width:171px;">Terumo</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss LSM 710 NLO multiphoton microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ti:Sapphire crystal laser&#160;</td>
			<td>Coherent Chameleon Ultra</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>140fs pulses of NIR light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zen 2010</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Acquistion Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Imaris Bitplane&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Bitplane</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Analysis Software, 3D automatic tracking</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">PBS 1X</td>
			<td style="width:171px;">D. Dutscher</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surgery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Thermostated chamber</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>intravital imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tracking mouse bone marrow monocytes in vivo

Real time multiphoton imaging provides a great opportunity to study cell trafficking and cell-to-cell interactions in their physiological 3-dimensionnal environment. Biological activities of immune cells mainly rely on their motility capacities. Blood monocytes have short half-life in the bloodstream; they originate in the bone marrow and are constitutively released from it. In inflammatory condition, this process is enhanced, leading to blood monocytosis and subsequent infiltration of the peripheral inflammatory tissues. Identifying the biomechanical events controlling monocyte trafficking from the bone marrow towards the vascular network is an important step to understand monocyte physiopathological relevance. We performed in vivo time-lapse imaging by two-photon microscopy of the skull bone marrow of the Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP (MacBlue) mouse. The MacBlue mouse expresses the fluorescent reporters enhanced cyan fluorescent protein (ECFP) under the control of a myeloid specific promoter 1, in combination with vascular network labelling. We describe how this approach enables the tracking of individual medullar monocytes in real time to further quantify the migratory behaviour within the bone marrow parenchyma and the vasculature, as well as cell-to-cell interactions. This approach provides novel insights into the biology of the bone marrow monocyte subsets and allows to further address how these cells can be influenced in specific pathological conditions.

يوفر الماوس هيكل الجمجمة فرصة جيدة لدراسة علم وظائف الأعضاء نخاع العظام بواسطة التصوير حيوي داخلي. العظام كونها رقيقة في جميع أنحاء المنطقة الأمامية الجدارية، فمن الممكن للوصول إلى منافذ medullar دون تآكل العظام. الشكل 1 يمثل حقل 2D واسعة من الجمجمة من الماوس المعدلة وراثيا MacBlue. وتتكون المصفوفة العظام أساسا من الكولاجين I بسهولة كشفها بواسطة SHG 19. حقن rhodamin-ديكستران بقع شبكة الأوعية الدموية من نخاع العظام ويسمح لتحديد منافذ نخاع العظام متني بين مصفوفة العظام والأوعية 14. ويتم توزيع خلايا ECFP في اثنين من مقصورات للنخاع العظام، ولكنها غائبة عن مصفوفة العظام. تصنف حيدات يدويا وفقا لموقعها داخل الأنسجة. ويعرف الوحيدات الأوعية الدموية عند الخلية كلها داخل الأوعية الدموية، بغض النظر عن حجم السفينة. يتم استبعاد الأوردة جمع كبيرة فقط من وجهة نظرنا لnalysis. ويعرف متني الوحيدات عندما يقع الخلية بين الأوعية الدموية ومصفوفة العظام. الوقت الفاصل بين التصوير من منطقة محددة من الفائدة (فيديو التكميلي 1 و 2) يسمح لحساب مسار الخلايا الفردية على مر الزمن إما الأوعية الدموية (الشكل 2A) أو متني (الشكل 2B) وحيدات. ويبين طول المسار الذي عرض حيدات متني تخفيض النزوح مقارنة حيدات الأوعية الدموية. تحليل للنزوح مع مرور الوقت يقارن سرعة يعني من وحيدات في كل من المقصورات (الشكل 2C). تشريد مربع متوسط ​​بوصفها وظيفة من الزمن هو مقياس لمدى المكاني للحركة عشوائية. يتم تحديد معامل القدرة على الحركة من قبل المنحدر من الخطية جزء من منحنى، ويقدم فكرة أفضل عن تشريد الخلية (انظر القسم مناقشة). معامل القدرة على الحركة من وحيدات الأوعية الدموية (MC = 71μm² / ق) هو أعلى من coefficie الحركةالإقليم الشمالي من وحيدات متني (MC = 4.4μm² / ث). يجب أن تتكيف القرار وقت الاستحواذ على متوسط ​​سرعة الخلية. يمكن حيدات الأوعية الدموية المتداول جعل النزوح مهم داخل فترة زمنية قصيرة. لتتبع الخلايا أكثر دقة، والحد الفاصل الزمني من الاستحواذ هو الأفضل. ويبين الشكل 3 مثال على تتبع الوحيدات مع اثنين مختلفة، القرارات الوقت. A 30 ثانية الوقت الفاصل يقلل من دقة فضلا عن طول الممرات (في خط متقطع الأخضر) مقارنة ب 10 ثانية الوقت الفاصل. وأخيرا، يوضح الشكل (4) إمكانية تحليل فرعية خلية أخرى متزامنة إلى حيدات. Ly6G هو علامة محددة من العدلات الماوس ناضجة. الحقن المضادة للLy6G جنبا إلى جنب مع تألقي (في هذه الحالة Phyco-erythrin) 5 دقائق قبل العدلات وصمة عار تسلسل التصوير مباشرة في الجسم الحي. ويوفر هذا النهج وقاتمة إضافية<html> ension التحليل وإمكانية للمقارنة بين سلوك مجموعات فرعية مختلفة من الخلايا. ويمكن استخدام هذا النهج لتحديد مجموعات فرعية في المقصورات الوحيدات. <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52476/52476fig1highres.jpg" /> الشكل 1. حقل واسع من منظمة نخاع العظم الجمجمة. في الجسم الحي اثنين الفوتون المسح الضوئي ليزر صورة مجهرية من الجمجمة ثابتة للدولة نخاع العظم من MacBlue الماوس. اتسخت الأوعية الدموية (باللون الأحمر) من خلال الذيل حقن الباطل من 2MDa Rhodamin-ديكستران 5 دقائق قبل جلسة التصوير. هو تصور العظام بواسطة الجيل الثاني التوافقي (الأزرق). وتقع ECFP + حيدات (سماوي) داخل محاريب متني (المناطق المظلمة بين الأوعية الدموية والعظام) وداخل الأوعية. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52476/52476fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> together.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/52476/52476fig2highres.jpg" /> الشكل 2. الوقت الحقيقي تتبع الخلية. مسارات المسار التمثيلية طول الوقت من وحيدات داخل (A) في الأوعية الدموية و(B) لحمة. يتم إنشاء السكك الحديدية (الخط الأخضر) لكل خلية تلقائيا من قبل البرنامج. بقع حمراء تمثل مركز كتلة من الخلايا تتبعها. (C) متوسط ​​سرعة المقارنة بين الأوعية الدموية ومتني وحيدات. وقد تم إجراء مان ويتني التحليل الإحصائي، *** يمثل ف &lt;0،001. (D) يعني تشريد التربيعية (MSD) بوصفها وظيفة من الزمن ويمثل لالأوعية الدموية ومتني وحيدات. منحنى مقارب يشير إلى النزوح مقيدة من الخلايا مع مرور الوقت، في حين أن منحنى خطي يشير المشي العشوائي في بيئة غير مقيدة. معامل الحركة يشير إلى مدى النزوح الخلية ويتم تحديد من قبل المنحدر من ج<html> ايرفى تحسب على الانحدار الخطي. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52476/52476fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52476/52476fig3highres.jpg" /> الشكل 3. قرار الفاصل الزمني في دراسة حيدات المتداول. متواليات صورة الممثل تظهر أن زيادة دقة الوقت يحسن الدقة في مسار الخلايا المتداول. (حتى) تسلسل الصور مع فترات زمنية 10 ثانية. (أسفل) تسلسل الصور مع فترات زمنية 30 ثانية. تم تحسين نوعية مسار المسار ويتم تقليل خطر النظر خليتين مختلفة لنفسه أو العكس. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52476/52476fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <html> الصورة &quot;&gt; <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/52476/52476fig4highres.jpg" /> . ويبين هذا الشكل الشكل 4. في الجسم الحي شارك في توطين العدلات medullar وحيدات إمكانية للكشف عن مجموعة فرعية خلية أخرى في الجسم الحي بالتزامن مع حيدات، عن طريق حقن الأجسام المضادة وحيدة النسيلة محددة جنبا إلى جنب مع تألقي. 2 ميكروغرام من Ly6G-PE الأجسام المضادة قد تم حقنها عن طريق الوريد 5 دقائق قبل الجمجمة نخاع العظام التصوير من MacBlue الماوس. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52476/52476fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> فيديو التكميلي 1. السلوك المهاجرة من وحيدات متني. في الجسم الحي 3D التصوير النشاط المهاجرة ثابتة للدولة من وحيدات في نخاع العظام حمة الجمجمة على فأرة الحاسوب MacBlue. إشارة ECFP + هي في السماوي. ويبدو أن مسارات الهجرة لكل خلية (النقطة الحمراء) باللون الأخضر. = &quot;jove_content&quot;&gt; التكميلي الفيديو 2. السلوك المهاجرة من وحيدات الأوعية الدموية. في الجسم الحي 3D التصوير النشاط المهاجرة ثابتة للدولة من وحيدات في نخاع العظام الأوعية الدموية الجمجمة من MacBlue الماوس. إشارة ECFP + هي في السماوي. (2M &#160; تم حقن دا) رودامين-ديكستران قبل الدورة التصوير لتمييز الأوعية الدموية نخاع العظم (أحمر). ويبدو أن مسارات الهجرة لكل خلية (النقطة الحمراء) باللون الأخضر.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo at JoVE.com

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

Monocytes are key regulators of innate immunity and play a critical role in the renewal of the peripheral mononuclear phagocytic system and in case of inflammation. This manuscript describes the procedure of real time imaging of the mouse calvaria bone marrow to study the monocyte mobilisation mechanism.

تتبع الماوس نخاع العظم وحيدات<em&gt; في فيفو</em

Real time multiphoton imaging provides a great opportunity to study cell trafficking and cell-to-cell interactions in their physiological 3-dimensionnal ...

tracking-mouse-bone-marrow-monocytes-in-vivo

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

9.5K Views.  Sorbonne Universités, UPMC Univ Paris 06, CR7. Monocytes are key regulators of innate immunity and play a critical role in the renewal of the peripheral mononuclear phagocytic system and in case of inflammation. This manuscript describes the procedure of real time imaging of the mouse calvaria bone marrow to study the monocyte mobilisation mechanism. 

Video: Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii disseminates as a fast replicating form called the tachyzoite. Tachyzoites convert into a slow-growing encysted form called the bradyzoite by a signaling process that is not well characterized. Within animals, bradyzoite cysts are found in the central nervous system and muscle tissue and represent the chronic stage of infection. Conversion to bradyzoites can be simulated in tissue culture by CO2 starvation, using medium with high a pH, or the addition of interferon gamma (IFN&gamma;). Bradyzoites are characterized by the presence of a cyst wall, to which the lectin Dolichos biflorus agglutinin (DBA) binds. Fluorescently labeled DBA is used to visualize the cyst wall in parasites grown in human foreskin fibroblasts (HFFs) that have been exposed to low CO2 and high pH medium. Similarly, parasites residing in murine bone marrow-derived macrophages (BMMs) display a cyst wall detectable by DBA after the BMMs are activated with IFN&gamma; and lipopolysaccharide (LPS). This protocol will demonstrate how to induce conversion of T. gondii to bradyzoites using a high pH growth medium with low CO2 and activation of BMMs. Host cells will be cultured on coverslips, infected with tachyzoites and either activated with addition of IFN&gamma; and LPS (BMMs) or exposed to a high pH growth medium (HFFs) for three days. Upon completion of infections, host cells will be fixed, permeabilized, and blocked. Cyst walls will be visualized using rhodamine DBA with fluorescence microscopy.

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii converts to a cyst form in response to environmental stresses, which can be mimicked in tissue culture models. This video demonstrates techniques to examine cyst wall formation by activating bone marrow-derived macrophages or changing growth medium pH in fibroblast cells.

التوكسوبلازما جدار الكيس الغوندية تشكيل المنشط تقوم البلاعم في نخاع العظام والمستمدة من الشروط المتباطئة

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone marrow, spleen, lymph nodes and Peyer's patches 1-3. DCs present in peripheral tissues sample the organism for the presence of antigens, which they take up, process and present in their surface in the context of major histocompatibility molecules (MHC). Then, antigen-loaded DCs migrate to immunological organs where they present the processed antigen to T lymphocytes triggering specific immune responses. One way to evaluate the migratory capabilities of DCs is to label them with fluorescent dyes 4.
Herewith we demonstrate the use of Qdot fluorescent nanocrystals to label murine bone marrow-derived DC. The advantage of this labeling is that Qdot nanocrystals possess stable and long lasting fluorescence that make them ideal for detecting labeled cells in recovered tissues. To accomplish this, first cells will be recovered from murine bone marrows and cultured for 8 days in the presence of granulocyte macrophage-colony stimulating factor in order to induce DC differentiation. These cells will be then labeled with fluorescent Qdots by short in vitro incubation. Stained cells can be visualized with a fluorescent microscopy. Cells can be injected into experimental animals at this point or can be into mature cells upon in vitro incubation with inflammatory stimuli. In our hands, DC maturation did not determine loss of fluorescent signal nor does Qdot staining affect the biological properties of DCs. Upon injection, these cells can be identified in immune organs by fluorescent microscopy following typical dissection and fixation procedures.

Dendritic cells uptake antigens and migrate towards immune organs to present processed antigens to T cells. Qdot nanocrystal labeling provides a long-lasting and stable fluorescent signal. This allows tracking of dendritic cells to different organs by fluorescent microscopy.

جيل ووسمها الفئران خلايا نخاع العظام المستمدة من البلورات النانوية مع شجيري Qdot تتبع للدراسات

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice to colitis. If the gene-of-interest is expressed in both bone marrow derived cells and non-bone marrow derived cells of the host; however, it is possible to differentiate the role of a gene of interest in bone marrow derived cells and non- bone marrow derived cells by bone marrow transplantation technique. To change the bone marrow derived cell genotype of mice, the original bone marrow of recipient mice were destroyed by irradiation and then replaced by new donor bone marrow of different genotype. When wild-type mice donor bone marrow was transplanted to knockout mice, we could generate knockout mice with wild-type gene expression in bone marrow derived cells. Alternatively, when knockout mice donor bone marrow was transplanted to wild-type recipient mice, wild-type mice without gene-of-interest expressing from bone marrow derived cells were produced. However, bone marrow transplantation may not be 100% complete. Therefore, we utilized cluster of differentiation (CD) molecules (CD45.1 and CD45.2) as markers of donor and recipient cells to track the proportion of donor bone marrow derived cells in recipient mice and success of bone marrow transplantation. Wild-type mice with CD45.1 genotype and knockout mice with CD45.2 genotype were used. After irradiation of recipient mice, the donor bone marrow cells of different genotypes were infused into the recipient mice. When the new bone marrow regenerated to take over its immunity, the mice were challenged by chemical agent (dextran sodium sulfate, DSS 5%) to induce colitis. Here we also showed the method to induce colitis in mice and evaluate the role of the gene of interest expressed from bone-marrow derived cells. If the gene-of-interest from the bone derived cells plays an important role in the development of the disease (such as colitis), the phenotype of the recipient mice with bone marrow transplantation can be significantly altered. At the end of colitis experiments, the bone marrow derived cells in blood and bone marrow were labeled with antibodies against CD45.1 and CD45.2 and their quantitative ratio of existence could be used to evaluate the success of bone marrow transplantation by flow cytometry. Successful bone marrow transplantation should show a vast majority of donor genotype (in term of CD molecule marker) over recipient genotype in both the bone marrow and blood of recipient mice.

Bone marrow transplantation provides a way to change the genotype of the bone marrow derived cells. If the gene of interest is expressed in both bone marrow derived cells and non-bone marrow derived cells, bone marrow transplantation can change the bone marrow derived cells to a different genotype without changing the non-bone marrow derived cell genotype.

التفريق الأدوار الوظيفية في التعبير الجيني من الخلايا المناعية وغير المناعية في التهاب القولون الماوس عن طريق زرع نخاع العظم

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

التحقيق في الاستقطاب البلاعم عن طريق نخاع العظم الضامة المشتقة

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or pathogenic effects depending on the inflammatory milieu. Nonetheless, despite the indispensable role of neutrophils in immunity, detailed understanding of the molecular factors that mediate neutrophils' effector and immunopathogenic effects in different infectious diseases and inflammatory conditions is still lacking, partly because of their short half life, the difficulties with handling of these cells and the lack of reliable experimental protocols for obtaining sufficient numbers of neutrophils for downstream functional studies and adoptive transfer experiments. Therefore, simple, fast, economical and reliable methods are highly desirable for harvesting sufficient numbers of mouse neutrophils for assessing functions such as phagocytosis, killing, cytokine production, degranulation and trafficking. To that end, we present a reproducible density gradient centrifugation-based protocol, which can be adapted in any laboratory to isolate large numbers of neutrophils from the bone marrow of mice with high purity and viability. Moreover, we present a simple protocol that uses CellTracker dyes to label the isolated neutrophils, which can then be adoptively transferred into recipient mice and tracked in several tissues for at least 4 hr post-transfer using flow cytometry. Using this approach, differential labeling of neutrophils from wild-type and gene-deficient mice with different CellTracker dyes can be successfully employed to perform competitive repopulation studies for evaluating the direct role of specific genes in trafficking of neutrophils from the blood into target tissues in vivo.

We describe a protocol for isolation and purification of neutrophils from mouse bone marrow by density gradient centrifugation and for neutrophil labeling using CellTracker dyes. This represents a simple, fast, reproducible and economical method for obtaining large numbers of neutrophils for downstream functional studies or adoptive transfer and tracking experiments.

العزلة وتنقية وصفها من العظام بالنسبة للفئران العدلات نخاع للدراسات الفنية والتجارب نقل بالتبني

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because of their powerful microbicidal activities. Macrophages are widely distributed throughout the body and are present in the lymphoid organs, liver, lungs, gastrointestinal tract, central nervous system, bone, and skin. Because of their repartition, they participate in a wide range of physiological and pathological processes. Macrophages are highly versatile cells that are able to recognize microenvironmental alterations and to maintain tissue homeostasis. Numerous pathogens have evolved mechanisms to use macrophages as Trojan horses to survive, replicate in, and infect both humans and animals and to propagate throughout the body. The recent explosion of interest in evolutionary, genetic, and biochemical aspects of host-pathogen interactions has renewed scientific attention regarding macrophages. Here, we describe a procedure to isolate and cultivate macrophages from murine bone marrow that will provide large numbers of macrophages for studying host-pathogen interactions as well as other processes.

Macrophages have long been recognized as a critical component of the innate and adaptive immune responses. The recent explosion of knowledge pertaining to evolutionary, genetic, and biochemical aspects of the interaction between macrophages and microbes has renewed scientific attention to macrophages. This article describes a method to differentiate macrophages from mouse bone marrow.

نخاع العظام المستمدة من بلعم الإنتاج

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of various fields in biomedical science. The method described below is a simple and effective way to isolate murine monocytes from heterogeneous bone marrow.
Bone marrow from the femur and tibia of Balb/c mice is harvested by flushing with phosphate buffered saline (PBS). Cell suspension is supplemented with macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) and cultured on ultra-low attachment surfaces to avoid adhesion-triggered differentiation of monocytes. The properties and differentiation of monocytes are characterized at various intervals. Fluorescence activated cell sorting (FACS), with markers like CD11b, CD115, and F4/80, is used for phenotyping. At the end of cultivation, the suspension consists of 45%&#177; 12% monocytes. By removing adhesive macrophages, the purity can be raised up to 86%&#177; 6%. After the isolation, monocytes can be utilized in various ways, and one of the most effective and common methods for in vivo delivery is intravenous tail vein injection. 
This technique of isolation and application is important for mouse model studies, especially in the fields of inflammation or immunology. Monocytes can also be used therapeutically in mouse disease models.

Here we present a protocol that generates large amounts of murine monocytes from heterogeneous bone marrow for translational applications. In comparison to others, this new method helps reduce the number of sacrificed animals and lowers costs by avoiding expensive methods such as high gradient magnetic cell separation (MACS).

عزل وحقن في الوريد من الفئران نخاع العظام المستمدة حيدات

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Murine Hind Limb Long Bone Dissection and Bone Marrow Isolation

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, biomechanics, and stem cell biology. Despite the importance of the bone in healthy and pathologic states, however, it is a largely under-researched organ due to lack of specialized knowledge of bone dissection and bone marrow isolation. Mice are a common model organism to study effects on bone and bone marrow, necessitating a standardized and efficient method for long bone dissection and bone marrow isolation for processing of large experimental cohorts. We describe a straightforward dissection procedure for the removal of the femur and tibia that is suitable for downstream applications, including but not limited to histomorphologic analysis and strength testing. In addition, we outline a rapid procedure for isolation of bone marrow from the long bones via centrifugation with limited handling time, ideal for cell sorting, primary cell culture, or DNA, RNA, and protein extraction. The protocol is streamlined for rapid processing of samples to limit experimental error, and is standardized to minimize user-to-user variability.

Here we present a protocol for the dissection of hind limb long bones (femurs and tibiae) from the laboratory mouse. We further describe a rapid technique for bone marrow isolation from these bones that utilizes centrifugation for removal of bone marrow from the bone marrow space.

الفئران هند الاطراف طويل العظام تشريح ونخاع العظم عزل

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, including hematopoiesis, immune regulation and tumor regulation. Commonly used methods for understanding cellular actions in the bone marrow, such as histology and blood counts, provide static information rather than capturing the dynamic action of multiple cellular components in vivo. To complement the standard methods, a window chamber (WC)-based model was developed to enable serial in vivo imaging of cells and structures in the murine bone marrow. This protocol describes a surgical procedure for installing the WC in the femur, in order to facilitate long-term optical access to the femoral bone marrow. In particular, to demonstrate its experimental utility, this WC approach was used to image and track neutrophils within the vascular network of the femur, thereby providing a novel method to visualize and quantify immune cell trafficking and regulation in the bone marrow. This method can be applied to study various biological processes in the murine bone marrow, such as hematopoiesis, stem cell transplantation, and immune responses in pathological conditions, including cancer.

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

The protocol describes a novel murine femur window chamber model that can be used to track movement of cells in the femoral bone marrow in vivo. Intravital multiphoton fluorescence microscopy is used to image three components of the femoral bone marrow (vasculature, collagen matrix, and neutrophils) over time.

عظم الفخذ نافذة الغرفة نموذج ل<em&gt; في فيفو</em&gt; تتبع الخلايا في الفئران نخاع العظام

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method enables researchers to better understand the characteristics of a single cell population without the influence of other cells. Compared to other methods of cell enrichment, such as magnetic-activated cell sorting (MCS), FACS is more flexible and accurate for cell separation due to the ability of phenotype detection by flow cytometry. In addition, FACS is usually capable of separating multiple cell populations simultaneously, which improves the efficiency and diversity of experiments. Although FACS has some limitations, it has been broadly used to purify cells for functional studies in both in vitro and in vivo settings. Here we report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate a very rare population of immune cells, plasmacytoid dendritic cells (pDC), with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for in vitro functional studies of pDC.

We report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate plasmacytoid dendritic cells (pDC) with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for functional studies of pDC.

مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

تتبع الماوس نخاع العظم وحيدات

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video