الفئران اليسار الأمامي تنازلي (LAD) التاجي ربط الشريان: نموذج تحسين والمبسطة لاحتشاء عضلة القلب

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

مرض نقص تروية القلب (IHD)، أو متلازمة الشريان التاجي الحادة (ACS)، هي واحدة من الأسباب الرئيسية للوفاة في الولايات المتحدة. يتميز IHD التي كتبها انخفاض تدفق الدم إلى القلب، مما أدى إلى فقدان الأوكسجين إلى ونخر التي تلت ذلك من عضلة القلب. وقد اكتسب هذا النموذج MI شعبية لاستخدامه كمصطلح القصير نموذج نقص التروية ضخه ونموذج ربط دائم على المدى الطويل. أدناه، نحن تصف طريقة يمكن الاعتماد عليها لربط دائم في LAD. مع الماوس تكنولوجيا الهندسة الوراثية أصبحت أكثر تطورا، ومع تزايد توافر الأدوات الجراحية الفئران الجودة، وأصبح الماوس نموذج شعبية للعيادات MI. يتضمن نموذجنا الجراحي استخدام مخدر عكسها بسهولة لانتعاش سريع من الفأرة. والتنبيب الرغامي مينيملي دون تنطوي على القصبة الهوائية. وبزل الصدر من خلال الموقع بضع الصدر الأصلي دون خلق شق إضافي في صدره، كما هويتم في بعض الأساليب الأخرى، نحو فعال لإزالة الدم الزائد والهواء من تجويف الصدر. هذا الأسلوب هو نسبيا أقل الغازية من الأساليب الأخرى، مما يقلل بشكل كبير المضاعفات الجراحية وبعد الجراحة والوفيات ويحسن التكاثر.

مرض الشريان التاجي، أو ACS، هو الحدث القلب والأوعية الدموية الأكثر انتشارا وسيتم النظر في السبب الرئيسي للمراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم في عام 2020 ^1. سبب ACS هو وجود تخثر عضلة القلب نتيجة لتمزق لوحة تصلب الشرايين التاجية الذي يمنع أو يقلل من تدفق الدم إلى أنسجة القلب ^2. ولذلك، هناك علامات سريرية متسقة مع وجود نقص تروية عضلة القلب الحاد، مثل احتشاء عضلة القلب (MI) ^{3، 4.} MI يؤدي إلى فقدان في كتلة العضلية والتقدم إلى إعادة البطين المرضية، والتي يمكن أن تؤدي إلى اختلال البطين وفشل القلب ^{5، 6.}

كان واحدا من أكثر الطرق فعالية لدراسة جمعية حقوق الإنسان لتقليد احتشاء عضلة القلب البشري في نموذج حيواني. ويتحقق ذلك عن طريق يسد LAD فيالفئران. باستخدام هذا النموذج، علينا أن ندرس كيف يمكن للقلب أن تكون محمية من الأضرار الناجمة عن جمعية حقوق الإنسان.

على مدى العقد الماضي، تحولت الباحثين من استخدام النماذج الحيوانية الكبيرة للحيوانات الصغيرة، بما في ذلك التحول من الفئران على الفئران. نموذج الفأر أصغر هو بداية ليكون من المفضل للعديد من الأسباب، بما في ذلك صغر حجمها، كبيرة حجم القمامة، ومنخفضة التكلفة للحفاظ على، وفترة الحمل قصيرة، فضلا عن توافر توسعية من المعدلة وراثيا وخروج المغلوب الجينات نماذج ^7. على الرغم من أن الفئران صغيرة الحجم، وبمساعدة الأدوات الجراحية الجديدة المصممة خصيصا لهم في هذا التطور. لدينا وسيلة تستخدم هذه الأدوات الجراحية الجديدة.

بينما عدة طرق تنفيذ القصبة الهوائية الغازية، ونحن نستخدم طريقة أقل الغازية من التنبيب الرغامي. استخدام الإضاءة العلوية من البلعوم، ونحن تدخله دون خلق أي شقوق، وتوفير تجربة أكثر أمانا وأقل من صدمة لرانه حيوان. ثم يتم وضع الماوس على جهاز التنفس الصناعي ويحرص على الأيزوفلورين خلال الإجراء بأكمله. نظرا لقصر مدة التخدير التي تنتجها المخدرات، فإنه يستغرق سوى بضع دقائق للحيوان للتعافي من مخدر مرة واحدة يتم التوقف عن ذلك. ويشمل نموذجنا الجراحي أيضا بزل الصدر الغازية الحد الأدنى. وقد تناول إزالة حذرا من الدم والهواء الزائد من تجويف الصدر باستخدام بزل الصدر من خلال شق بضع الصدر الأصلي من المضاعفات الشائعة اللاحقة للعمليات الجراحية للربط LAD: واسترواح التوتر. هذا الأسلوب، مما يلغي الحاجة لاثنين من شقوق إضافية المستخدمة في أساليب واحدة أخرى لالقصبة الهوائية وآخر للمضاعفات أقل، وقد بزل الصدر أسفرت عن مرحلة ما بعد الجراحة وخفضت بشكل كبير وفيات.

تم استعراض هذا البروتوكول الحيوانية والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في مستشفى رود ايلاند.

1. التخدير والتنبيب

1. وزن الماوس لحساب الجرعة من الدواء الألم بعد العملية.
2. ضع الماوس في غرفة الاستقراء وتسليم 4٪ الأيزوفلورين ل9-10 دقائق، ومراقبة الحيوانات طوال الوقت. بدوره على معقم حبة ساخنة حتى أن الجهاز يمكن أن تسخن إلى ما يقرب من 250 ° C. سوف التسخين اتخاذ 15-20 دقيقة.
3. بمجرد وصول الماوس طائرة عميقة التخدير، مع معدل التنفس ما يقرب من 32 نفسا / دقيقة، ضع الماوس مستلق على لوحة الستايروفوم واستخدام شريط مطاطي المضمون تحت أعلى القواطع لعقد الفم مفتوحا. تأكيد التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه. ضع منار عالية الكثافة فوق الماوس بحيث يمكن تصور والبلعوم.
4. استخدام ملقط منحنية لفتح الفك وزوج آخر من ملقط لرفع اللسان للخروج من الطريق. ومن المؤكد أن تدخله في حين المتمركزة أو أقل قليلا على مستوى العين مع جسم الفأر. من المستحسن استخدام loupes لالجراحية.
5. تصور افتتاح واختتام الحبال الصوتية. عندما فتح، اضافة الى وجود 20 عيار (1) في الوريد (IV) القسطرة مع حادة طرف إبرة التعريف. استخدام إبرة لتوجيه القسطرة لفتح القصبة الهوائية، ولكن تجنب إدخال الإبرة إلى القصبة الهوائية. التحقق من موضع الصحيح يمكن أن يتم ذلك باستخدام ماصة نقل البلاستيكية.
6. نقل الماوس مدخل أنبوب إلى السطح التشغيل مجهزة مع جهاز التدفئة. توصيل الماوس على جهاز التنفس الصناعي القوارض الصغيرة لتعيين حجم المخ من 150 ميكرولتر / السكتة الدماغية والسكتة الدماغية بمعدل 130 السكتات الدماغية / دقيقة.
7. تسليم 2.5٪ الأيزوفلورين. التحقق من التنبيب عن طريق التحقق من ارتفاع الصدر الثنائي. تحقق من التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه. قد تحتاج الماوس 5-10 دقيقة على جهاز التنفس الصناعي لتصبح تخدير كامل.

"jove_title"> 2. إعداد ماوس

1. الشريط أسفل أنبوب التنبيب في موقع يربط بين التنفس الصناعي والقسطرة IV. الشريط أسفل الأطراف. وضع قطرات التشحيم العقيمة على العينين.
2. تقليم الجانب الأيسر البطني من القفص الصدري مع الحلاقة الكهربائية. نفض الغبار عن الفراء حلق مع مناديل الجافة وتطبيق طبقة صغيرة من كريم إزالة الشعر باستخدام قطعة قطن معقمة. وينبغي أن تظل كريم في اتصال مع بصيلات الشعر لحوالي 30 - 45 ثانية.
3. في حين أن عمليات كريم، وضع ثلاث مسحات القطن المعقم في ثلاثة أنابيب 1.5 مل مليئة Betadine لامتصاص. باستخدام مناديل مبللة بالماء المقطر، ويمسح برفق بعيدا كريم والفراء.
4. تنظيف الجراحي الميداني ثلاث مرات، بالتناوب Betadine ومعقمة 70٪ منصات الأيزوبروبانول الإعدادية، والتنظيف في حركة دائرية الانتقال من المركز إلى المحيط. وضع الستارة العقيمة مع وجود ثقب ربع الحجم على مدى الجراحي الميداني من الفأرة.
5. تنظيف المنطقة المحيطة مذكرات التفاهمه مع 70٪ من الإيثانول. تحقق التخدير مرة أخرى مع قليل أخمص قدميه.

3. LAD من ربط

1. وضع الأدوات الجراحية تعقيمها في حبة تعقيم الساخن مسخن إلى 250 درجة مئوية لمدة حوالي 20 ثانية. وضع الأدوات المعقمة على ثنى الجراحية المعقمة تعقيمها. قفازات دون الجراحية.
2. استخدام ملقط غرامة تلميح إلى رفع بلطف الجلد في مرحلة ما يقرب من 5 ملم إلى اليسار من الغضروف الخنجري بارز. استخدام مشرط جراحي بشفرة رقم 10 لخلق شق عمودي في الجلد من هذه النقطة صعودا، إلى مستوى المقبض.
3. استخدام ملقط منحنية لفصل بلطف الجلد والعضلات طبقات. فتح طبقة العضلات، وبعد شق الجلد. إدراج اثنين من 5-0 خيوط البولي بروبلين من خلال طبقة العضلات، واحدة على كل جانب من جانبي الشق، وتأمين الغرز مؤقتا مع المشابك لعقد طبقة العضلات مفتوحة.
4. تحديد وإجراء شق في الفضاء وربي الثالث، بعدزاوية الطبيعية من القفص الصدري. إزالة الشريط من الأطراف اليسرى من الفأرة وتأمين القدم الخلفية اليسرى لقدمه اليمنى الخلفية مع الشريط. قطع قطعة طويلة من شريط وتأمين الجبهة القدم اليسرى لسطح التشغيل في وضع مرتفع قليلا. تنظيف قفازات مع 70٪ من الإيثانول.
5. استخدام ضام لنشر بلطف بعيدا في ³ و 4 ^تشرين الأضلاع. قطع جزء صغير من الشاش المعقم، ما يقرب من 1 في العاشر ½ في، وتراجع في العقيمة 0.9٪ المالحة. استنزاف المياه المالحة الزائدة واستخدام ملقط لإدراج بلطف الشاش ضد الرئة اليسرى لمنع تلف الرئتين بطريق الخطأ أثناء العملية.
6. إزالة بلطف التأمور رقيقة بالملقط.
7. المسيل للدموع على كمية صغيرة من القطن من مسحة القطن المعقم ولفة على شكل كرة صغيرة. تراجع هذه الكرة القطن في العقيمة 0.9٪ المالحة ومسحة بلطف على سطح القلب لنقدر الشرايين. دفع برفق الأذن اليسرى صعودا وتحديد الشرايين التاجية تحتنيث.
8. تحديد LAD وتمرير الخيط 8-0 النايلون تحت LAD. كامل رميتين لتأمين ربط. إذا كان الربط ناجحا، البطين الأيسر البعيدة من رباط إرادة بلانش.
9. باستخدام ملقط، إزالة الشاش إدراجها في وقت سابق، ومن ثم إزالة بلطف ضام. إدراج 6 في، 25 عيار أنبوب مرن تعلق على إبرة عيار 25 في تجويف الصدر من خلال فتح بضع الصدر. دفع حوالي 1-2 في الأنابيب في الفضاء فوق الرئة اليسرى. عودة الماوس لموقف ضعيف وتنظيف قفازات مع 70٪ من الإيثانول.
10. استخدام 5-0 خيوط البولي بروبلين في نمط توقف بسيط لإغلاق القفص الصدري، والحفاظ على أنبوب في الصدر في المكان. إزالة الغرز اثنين من عقد طبقة العضلات مفتوحة. استخدام 5-0 خيوط البولي بروبلين في نمط مستمر بسيط لإغلاق طبقة العضلات، ومرة ​​أخرى الحفاظ على أنبوب في الصدر في المكان.
11. نعلق حقنة 1 مل على إبرة عيار 25 على أنبوب في الصدر. سحب بلطف صعودا على الهبوطص أثناء استخراج في وقت واحد تدريجيا أنبوب في الصدر من تجويف الصدر مع ملقط. استخراج أنابيب ببطء، وهذه الخطوة يزيل الهواء الزائد والدم، والتي ستصبح على خلاف ذلك المحاصرين في تجويف الصدر والنتيجة في استرواح الصدر.
12. مرة واحدة حقنة مليئة، فصل حقنة من الإبرة والتخلص من النفايات في كوب النفايات أو بالوعة. تستمر هذه العملية حتى يتم استخراج أنبوب في الصدر تماما. تأكد من أن الصدر هو مغلقة بإحكام.
13. تقليل الأيزوفلورين إلى 1.5٪. إغلاق الجلد مع خيوط البولي بروبلين 4-0 في نمط توقف بسيط. تحويل المرذاذ الأيزوفلورين قبالة.
14. إدارة 0.1 ملغ / مل البوبرينورفين في المياه المالحة 0.9٪ عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP). تطبيق موضعيا 2 ملغ / مل يدوكائين مع 2 ملغ / مل بوبيفاكايين في المياه المالحة 0.9٪ إلى شق. إدارة بين 200-500 ميكرولتر من 0.9٪ المالحة عن طريق الحقن تحت الجلد، رفع كمية المياه المالحة لوزن الماوس.
15. انتظر 5 دقائق بعد ADMINIstering والأدوية الألم لإزالة الماوس من أنبوب التنبيب. هذا يساعد في التحول من التنفس الصناعي.
    1. إذا لم يكن الماوس ارتفاع الصدر الثنائي مرة واحدة قبالة التنفس الصناعي، نفذ إبرة الضغط. للقيام بذلك، وإدخال عيار 25 إبرة معقمة وحقنة 1 مل بين ³ و 4 ^تشرين الأضلاع حتى يدخل التجويف الصدري، الرمز بواسطة انخفاض مفاجئ في المقاومة. سحب ما يصل بلطف على المكبس لإزالة الهواء الزائد.
16. عندما يوضح الماوس معدل التنفس الثنائي الكافي وعمق ويستجيب لقرصة أخمص القدمين، ضع الماوس في قفص الانتعاش نظيفة تحت مصباح الحرارة. تقديم الماوس مع الغذاء رطبة وزجاجة مياه والرصد في غطاء تدفق الصفحي ل15-20 دقيقة. مراقبة لمحاولة مبالغ فيها التنفس، النزيف، أو غيرها من المضاعفات المحتملة التي تهدد الحياة.
17. وخلال الأيام الثلاثة المقبلة، إدارة 0.1 ملغ / مل الألم البوبرينورفين الدواء عن طريق IP فيjection مرتين يوميا. مراقبة الماوس يوميا.

يصرح باستخدامها الفئران بعد ثمانية وعشرين يوما الجراحة، ويتم حصاد قلوب وفحصها. يتم تخدير الفئران مع 50-75 ملغ / كغ من الكيتامين و5-10 ملغم / كغم من زيلازين. عندما يكون الحيوان تحت التخدير المناسب، يتم فتح التجويف الصدري، وباستخدام إبرة 23 عيار، يتم حقن البارد كلوريد البوتاسيوم (بوكل و 30 ملم) في المنطقة القاعدية الخلفي للقلب. ألقي القبض على القلب في انبساط. لمزيد من التحقق من صحة الربط، تتم إزالة القلب من الحيوان ويتم حقن مع 4٪ لامتصاص العرق وثم 1٪ صبغ أزرق ايفان. ويبين الشكل 1 عدم وجود الأزرق ايفان في البطين الأيسر الدماغية. يوضح الشكل 2 الإعداد التنبيب الرغامي السليم. الشكل (3) يعرض وضع أنبوب في الصدر لبزل الصدر في موقع شق الأولي، مع طبقة العضلات خياطة مغلق حول الأنبوب قبل استخراج الهواء من جhest تجويف. يظهر ثلاثي الألوان تلطيخ زيادة الكولاجين في المنطقة محتشية (الشكل 4).

الشكل 1: حقن الأزرق ايفان. حقن الأزرق وايفان يكشف عن عدم وجود الصبغة في الأنسجة الدماغية، مترجمة إلى المنطقة محتشية البطين الأيسر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: التنبيب الرغامي. مظاهرة من الإعداد التنبيب الرغامي السليم. المشغل، وارتداء loupes لالجراحية، يجلس في مستوى العين مع الماوس. وتركز إضاءة عالية الكثافة أسفل على منطقة القصبة الهوائية، transilluminating سropharynx. يتم التوصيل شريط مطاطي خلف القواطع العلوية، مما يسمح للمشغل لفتح الفم مع ملقط منحنية. يتم استخدام ملقط منحنية لعقد اللسان إلى الجانب لرؤية واضحة. متقدمة على طريق الوريد قنية القسطرة التنبيب مع حادة طرف إبرة التعريف في زاوية بزيادة طفيفة بينما تصور افتتاح واختتام الحبال الصوتية. التصور من الحبال الصوتية فتح وإغلاق قبل محاولة التنبيب هي واحدة من النقاط الحرجة لالتنبيب ناجحة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3): بزل الصدر. وضع أنبوب في الصدر تستخدم لبزل الصدر، وإدراجها في موقع شق الأصلي. وخياطة طبقة العضلات مغلقة حوليتم استخراج الأنبوب قبل الهواء داخل تجويف الصدر مع حقنة، ومن ثم يتم إزالة أنبوب في الصدر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: ثلاثي الألوان تلطيخ. لوحة اليسار: التحكم ligated غير LAD-القلب. اللوحة اليمنى:-ligated LAD، القلب محتشية. ثلاثي الألوان وصمة عار (ماسون) توظيف Biebrich حل القرمزي حمض بالفوكسين، الفسفوتنغستيك / الفسفومولبديك محلول حمض، والأنيلين الأزرق تكشف زيادة الكولاجين (الأزرق) كعلامة للكشف عن التليف في المنطقة محتشية البطين الأيسر عبر مقطوع. بار = 500 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

مع تزايد استخدام نموذج MI في المختبرات، يسعى الإجراء الموضح لزيادة معدل الكفاءة وبقاء الفئران مع تقليل الألم بعد العمليات الجراحية وعدم الراحة. يسعى هذا البروتوكول للحد من وفيات طريق إدخال تحسينات عديدة لمختلف جوانب الإجراء LAD ربط. هناك عدد قليل من الاختلافات. بعض الدراسات التنبيب الفئران التي تستخدم الكيتامين وزيلازين جنبا إلى جنب مع isoflurane لتحريض، ويرجع ذلك إلى الاستفادة من مدة أطول من التخدير، وقد أظهرت الوفيات ⁸ زاد. يستخدم أسلوب لدينا الأيزوفلورين الوحيد لتحريض، الحد بشكل كبير من احتمال حصول مضاعفات تتعلق بالمخدرات. ويشمل مماثل بروتوكول آخر LAD ربط والقصبة الهوائية، وإنتاج وقت الانتعاش الموسعة وزيادة الحاجة إلى تدريب دقيق ^9. الإجراء وصفنا هنا يستخدم أسلوب غير الغازية من التنبيب الرغامي، مما أدى لووفيات ور واستنساخ أعلى النتائج. أيضا، بدلا من مجرد استخدام الحلاقة الكهربائية، إجراءاتنا أيضا يستخدم كريم إزالة الشعر لإزالة الفراء، وتوفير التصور الواضح تماما من المجال المعقم في أقل من 1 دقيقة.

الفرق الرئيسي الآخر هو اعادة تموضع من الفأرة، والذي يحدث بعد، وليس قبل، والشقوق الأولية. جعل شقوق في حين أن الفأر هو ضعيف يسمح لتصور أكثر مباشرة ودقيقة من المعالم مثل الغضروف الخنجري، مما أدى إلى استنساخ أعلى النتائج. يستخدم أسلوب لدينا أيضا قطعة قطن معقمة بدلا من كوتر لوقف نزيف إدارة، وخفض إصابات الحروق علاجي المنشأ وخطر العدوى. وبصرف النظر عن هذه الاختلافات، فإن إدخال أنبوب في الصدر لبزل الصدر هو خصوصا من المذكرة، كطريقة لدينا لا تنطوي على خلق شق جديد للأنبوب. وبدلا من ذلك، فإنه ينطوي على إدخال أنبوب إلى شق السابق، ومرة ​​أخرى خفض مورtality. الإجراء صفنا أيضا ما يلي: (1) استخدام ضام، مما تصور أكثر دقة ومستقر الشرايين التاجية. (2) إدخال شاش معقم في تجويف الصدر أثناء الإجراء، مما يقلل من خطر الإصابات الرئة علاجي المنشأ. و (3) إدارة المالحة باتباع الإجراء، وهو ما ثبت على كل تقصير وقت الانتعاش ومنع انخفاض حرارة الجسم.

على الرغم من أن وصفنا نموذجا ربط دائم، وهذا الإجراء يمكن أيضا أن يتم تعديل لنموذج MI الحاد. ويشير نموذج MI الحاد، كما وصفه نقص التروية وضخه إلى 30 - 60 دقيقة من نقص التروية تليها ضخه في أنسجة القلب ^7. طريقة بديلة لتقييم حجم احتشاء أو المنطقة في خطر بعد نقص التروية وضخه هو تلطيخ من 2٪ كلوريد ثلاثي فينيل نتروبلو (TTC) ^10. ويستند TTC تلطيخ على القدرة على صمة عار الأنسجة قابلة للحياة بعد إهانة الدماغيةنظرا لإنزيم نازع للهيدروجين موجودة في أنسجة القلب. هذه الإنزيمات بتحويل عنصر قابل للذوبان في عنصر أحمر غير قابلة للذوبان، وبالتالي ترسيم المنطقة محتشية ^11. نموذج MI الحاد يمكن أن تحاكي الآليات التي تحدث في أمراض القلب البشري، وبالتالي قد يكون أداة مفيدة لتوضيح الأحداث نقص تروية عضلة القلب ^(10). وربط LAD يمكن التحقق من خلال مراقبة تغيير فوري في لون الأنسجة، وتوفير ميزة لهذا الأسلوب من تحريض على MI. طريقة أخرى للتحقق من ربط الناجح هو استخدام الكهربائي، على الرغم من أن هذا ينطوي على استخدام معدات باهظة الثمن وقد لا يكون ممكنا لجميع المختبرات.

كما هو موضح أعلاه، هناك العديد من التقنيات الجزيئية سهلة وميسورة لتأكيد الربط بعد حصاد القلب. تقنيات جهازي المبينة أعلاه هي تلطيخ ايفان الأزرق وثلاثي الألوان تلطيخ. يتم حقن صبغة زرقاء ايفان مباشرة في قوس AOهيئة الطرق والمواصلات، مشيرا إلى حيث يوجد نقص في تدفق الدم. هذا هو وسيلة سريعة وفعالة يعملون مباشرة بعد حصاد قلب لاختبار ما إذا كان النموذج الناجح ولقياس مدى انسداد الشريان التاجي. لثلاثي الألوان تلطيخ، يجب مقطوع القلب وثم تعرض لالمناعية. ثلاثي الألوان تلطيخ يمكن أن تشير إلى مناطق متليفة بعد الدماغية أو القلبية المناطق المتضررة من نقص التروية المزمن. حقن اللاحقة للعمليات الجراحية الفئران 2-24 ساعة السابقة للتضحية مع 5-إيثينيل-2'-deoxyuridine (EDU)، التماثلية للالثيميدين، هو وسيلة فعالة للإشارة إلى المناطق تكرار الحمض النووي وانتشار الخلايا التالية نقص التروية، وخاصة في الدراسات التي تنطوي على تجديد الأوعية الدموية ^12.

بشكل عام، والقيود المفروضة على دراسة LAD ربط تشمل حالات وفيات ما بعد الجراحة، والناجمة أساسا عن وجود عدم انتظام ضربات القلب، والنزيف، واسترواح الصدر. وبزل الصدر فعالة وخفة الظلالحوت شقوق الصدر إضافية (موضح في الطريقة الحالية)، والرعاية المناسبة بعد العملية ضرورية لتجنب الإصابة بالأمراض والوفيات في الحيوانات. رصد دقيق للغاية من انخفاض حرارة الجسم بعد الجراحة أمر بالغ الأهمية أيضا. التخفيض في عدد من الرقبة والصدر شقوق (لالقصبة الهوائية وبزل الصدر) وصفها في الطريقة الحالية سوف تساعد على تحسين معدلات البقاء على قيد الحياة. وتجنب التخدير عن طريق الحقن قبل العملية الموصوفة هنا أيضا تحسين الانتعاش بعد العمليات الجراحية للحيوانات.

من أجل الحصول على استنساخ عالية، ونموذج LAD ربط يتطلب التدريب والخبرة صارم. يحتاج المشغل لأداء عدة أسابيع من العمليات الجراحية لاكتساب القدرة على اتخاذ بتكاثر عوائق في المواقع المطلوبة على القلب. التدريب والخبرة نوعان من العوامل الحاسمة لنجاح LAD ربط عملية جراحية البقاء على قيد الحياة.

The authors declare that they have no competing financial interests.

This model was developed with the support of the National Institute of General Medical Sciences (NIGMS)/the National Institute of Health (NIH) grant 1P20GM103652 (Project# 3) (to MRA) and the American Heart Association (AHA) Grant-in-Aid 14GRNT20460291 (to MRA); the Brazilian government grant CAPES (to KR and FR); and a Brown University LINK award (to IM). We also acknowledge the outstanding technical support from our veterinarians and animal facility staff.