Method Article
Microfluidic double emulsions generation typically involves devices with patterned wettability or custom-fabricated glass components. Here we describe the fabrication and testing of an all polydimethylsiloxane (PDMS) double emulsion generator that does not require surface treatment or complicated fabrication processes, and is capable of producing double emulsions down to 14 µm.
Double emulsions are useful in a number of biological and industrial applications in which it is important to have an aqueous carrier fluid. This paper presents a polydimethylsiloxane (PDMS) microfluidic device capable of generating water/oil/water double emulsions using a coaxial flow focusing geometry that can be fabricated entirely using soft lithography. Similar to emulsion devices using glass capillaries, double emulsions can be formed in channels with uniform wettability and with dimensions much smaller than the channel sizes. Three dimensional flow focusing geometry is achieved by casting a pair of PDMS slabs using two layer soft lithography, then mating the slabs together in a clamshell configuration. Complementary locking features molded into the PDMS slabs enable the accurate registration of features on each of the slab surfaces. Device testing demonstrates formation of double emulsions from 14 µm to 50 µm in diameter while using large channels that are robust against fouling and clogging.
تتكون المستحلبات مزدوجة من قطرات فصل من مرحلة الناقل عن طريق وسيطة، طبقة السوائل إمتزاج، وذات أهمية خاصة نظرا للاستخدامات المحتملة في الصناعية والأدوية، والتطبيقات البيولوجية 1. في بعض الحالات، والقدرة على تغليف مركبات ذات القيمة العالية في جوهر مستحلب مزدوج لتتيح المواد المراد حمايتها وأفرج عنه في الطريقة التي تسيطر عليها. على سبيل المثال، قد تكون مغلفة المخدرات في ظل ظروف الذوبان يست مناسبة للالسائل الناقل الخارجي 2. بالإضافة إلى ذلك، فإن الطبقة المتوسطة النفط يمكن أن تستخدم كنموذج كبسولة للتغليف وتسليم الأدوية ومستحضرات التجميل، والمواد الغذائية 3. في علم الأحياء، والمستحلبات مزدوجة هي مفيدة أيضا في ارتفاع الفرز الإنتاجية لأنها تسمح لعدد هائل من التجارب نانولتر الفرعي التي يتعين الاضطلاع بها، ثم الكشف عن وفرزها باستخدام الخلايا مضان تنشيط الفرز (FACS) أداة 4،5.
والأنف والحنجرة "> تصميم المستحلبات مزدوجة مع خصائص الأداء المطلوب يتطلب مراقبة دقيقة من ضعف حجم مستحلب، وتكوينها، والتوحيد. وعلى الرغم من عمليات استحلاب السائبة، مثل استحلاب الغشاء، وتستخدم في الصناعة، والمستحلبات الناتجة polydisperse للغاية، التي تتسم مجموعة واسعة من الخصائص الفنية 1. إن مجال قطيرة على microfluidics يناسب بشكل طبيعي توليد المستحلبات monodisperse مع تكوين تسيطر عليها بعناية 6. وقد حقق الجيل مستحلب مزدوجة ميكروفلويديك مع اثنين من الاستراتيجيات الرئيسية، وصنع انخفاض متسلسل والزجاج تدفق شعري التركيز. مستحلبات مزدوجة يمكن أن تتولد في الأجهزة PDMS مستو باستخدام قطرة من خطوتين عملية صنع أولا، يتم إنشاء المستحلبات مائي في الزيت باستخدام الماء في الزيت المنطقة من جهاز بجدران قناة مسعور صنع الهبوط. وبعد ذلك، يمكن للمستحلب يكون تدفقت أو إعادة حقنه في منطقة صنع انخفاض مع الجدران ماء مناسبة عن النفط في المياه4 اتخاذ الهبوط. ومع ذلك، والمعالجة السطحية للماء من إيضاحية يتطلب خطوة إضافية تلفيق وغالبا ما تكون مؤقتة 7. الأسلوب الأكثر السيطرة عليها وتكرار لتشكيل المستحلبات المزدوجة هو من خلال التركيز تدفق محوري المشترك، رائدة تقنية تستخدم على microfluidics الزجاج الشعرية، حيث يتم المنفصمة طائرة متحدة المركز التي تحتوي على المراحل الثلاث من خلال فتحة صغيرة لإنتاج قطرات monodisperse 8. هذا الأسلوب يسمح لإنتاج قطرات أصغر بكثير من أبعاد القناة، مع حجم الدقيق وتكوين مستحلب مزدوجة كونه وظيفة من معدلات تدفق كل مرحلة. الفرق كبير بين قطرة وحجم القناة واقية تدفق غمد الخارجي يمنع قطرات من الاتصال جدران القناة، مما يجعل المعالجة السطحية غير ضروري. ومع ذلك، فإن هذه الأجهزة الزجاج تتطلب تصنيع العرف من النصائح الشعرية مدبب، جنبا إلى جنب مع الجمعية الدقيق والختم. وقد استخدم المحققون السابق 3D يثو لينةgraphy لتوليد المستحلبات مزدوجة باستخدام تدفق التركيز الفيزياء، ولكن هذه الأجهزة تنتج المستحلبات بأقطار> 150 ميكرون 9،10، ما يقرب من أمر من حجم أكبر من الكائنات فرزها عادة مع FACS. سيكون بديلا جذابا تشمل وظائف قوية وتوليد قطرات صغيرة من الزجاج الشعرية تدفق محوري التركيز مع سهولة تصنيع PDMS الطباعة الحجرية الناعمة.في هذه الورقة، ونحن تصف مولد مستحلب مزدوج يستخدم المشارك محوري تدفق التركيز على إنتاج ≤ 50 ميكرون المستحلبات والتي شيدت تماما باستخدام 3D لينة الطباعة الحجرية 11. يستخدم الجهاز لدينا نهج صدفي لصنع الأجهزة التي تضم قناة القص الصغيرة (الشكل 1) لتقريب عمليات تشكيل مستحلب في فوهة الزجاج الشعرية سحبت. الأهم من ذلك، وهذه الأجهزة لا تحتاج إلى المعالجة السطحية محددة، ويوفر بناء كل البوليمر سهلة وقابلة للتكرار تلفيق الشوريalable لعدد كبير من الأجهزة مكررة. هنا، ونحن الخطوط العريضة لتصميم وتصنيع واختبار مولد مستحلب مزدوجة. يظهر جيل مستحلب مزدوجة أن تكون قوية وقابلة للتكرار وصولا الى أقطار قطرة من 14 ميكرون. اقتران الوظائف مع سهولة تلفيق يجعل هذا الجهاز خيارا جذابا لتطوير تطبيقات مستحلب مزدوجة جديدة.
1. SU8 تصنيع ماستر
2. PDMS تصنيع جهاز
3. إعداد الكواشف
4. نظام إعداد
5. مستحلب الجيل
يتكون المولد مستحلب مزدوجة من تدفق يركز الجهاز المشارك المحورية التي تم إنشاؤها باستخدام 3D PDMS تلفيق (الشكل 1A). تمكن الهندسة التي تشكيل ثلاث مراحل المشارك المحوري طائرة لتكون المنفصمة في مربع، 50 ميكرون × 50 ميكرون فوهة، والسماح للتشكيل من الثلج / النفط / المياه المستحلبات مزدوجة (1B الشكل، الشكل 1C). يتم إحضارها المرحلة المائية الداخلية والمرحلة المتوسطة النفط معا في مفترق طرق مع أبعاد قناة من 10 ميكرون × 50 ميكرون (1D الشكل، أشر "1"). نظرا لللا مائية من PDMS، والعناق النفط المفلورة جدران القناة وإقامة المرحلة الداخلية في وسط القناة كما السوائل السفر في طائرة مستمرة، حتى يتم التوصل إلى التوسع المفاجئ قناة التوسع (1D الشكل، أشر "2" ). في هذا الموقع، يتم حقن الداخلية مرحلتين في وسط 320 ميكرون junc طويل القامةنشوئها التي تسمح بإدخال متحدة نسبيا من المرحلة الناقل المائية. ويضطر المراحل الثلاث إلى 50 ميكرون × 50 ميكرون فوهة (1D الشكل، أشر "3")، حيث أن معدل تدفق عالية من المقصات مرحلة الناقل الداخلية مرحلتين في فترة طويلة، حالق رقيقة أن تتحلل لمن قطرات موحدة ( الشكل 1E).
تلفيق 3D PDMS يتطلب اقتران اثنين من PDMS قوالب فريدة من نوعها في تكوين صدفي بعد صب على اثنين من طبقة سادة الطباعة الحجرية. ويستخدم 50 ميكرون طبقة طويل القامة لتشكيل قنوات معالجة السوائل الداخلية والوسطى، جنبا إلى جنب مع فتحة القص على ماستر 1 (الشكل 2A)، جنبا إلى جنب مع جاحظ مجانية وراحة الإطارات على المعارضة الرئيسي. يتم استخدام إضافية 135 ميكرون طبقة طويل القامة لإنشاء السائل الناقل وقنوات الخروج (الشكل 2B). جمعية مولد مستحلب مزدوج تستخدم رانه راحة وجاحظ إطارات (الشكل 3A) لمحاذاة هندسية بعد العلاج البلازما (الشكل 3B).
تم اختبار الجهاز مستحلب مزدوج في مجموعة متنوعة من الظروف تدفق للتدليل على تشكيل حجم متنوعة، والمستحلبات مزدوجة monodisperse. لهذه التجارب، عقدت معدلات التدفق المرحلة الداخلية والوسطى مستمر وتم تعديل معدل تدفق مرحلة الناقل تؤثر على قوة القص خلال الجيل الحبرية. ومعلمات الظروف التجريبية من نسبة تدفق مرحلة الناقل (س ج) إلى مجموع الداخلية مرحلتين تدفقات (Q المبلغ). وتظهر الصور من الجيل الحبرية للتجارب أجريت في س ج / س مبلغ 3-57 في الشكل (4). ويلاحظ ان المنطقة ممدود تحتوي على الداخلية مرحلتين لتبرز إلى 50 ميكرون × 50 ميكرون فوهة وفواصل إلى قطرات التي convected المصب. أناncreasing تدفق مرحلة الناقل (زيادة س ج / س مبلغ) يؤدي إلى مراحل الداخلية يجري المنفصمة إلى مناطق أرق تدريجيا التي تنتج قطرات صغيرة. المستحلبات مزدوجة المنتجة من قبل الجهاز في معدلات تدفق مختلفة تظهر متوسط معامل قطر الاختلاف من 5.2٪. تظهر رسوم بيانية من أقطار الحبرية للقيم مختارة من س ج / س المبلغ أيضا التوحيد النسبي في حجم قطرات لدت (الشكل 5). يوضح الجهاز القدرة على تشكيل المستحلبات مزدوجة أصغر بكثير من عرض الفتحة، ويظهر اتجاه تنازلي واضح مع زيادة س ج / س مبلغ (الشكل 6). في أعلى الناقل اختبار تدفق المرحلة، وتم تشكيل 14 ميكرون المستحلبات مزدوجة باستخدام 50 ميكرون × 50 ميكرون الفوهة.
الشكل 1. الهندسة لعزل مزدوه مولد مستحلب. (A) نموذج 3D من جهاز ملفقة. (B) المقطع العرضي العمودي للقناة المركزية تظهر مقدمة من الداخلية (الرمادي)، وسط (الحمراء)، والناقل (الأزرق) مراحل. (C) مقطع عرضي تظهر الطائرة التي تحتوي على الداخلية مرحلتين دخول فتحة مربعة. (D) أعلى نظرا الجيل مستحلب في الجهاز. في مفترق الطرق (1) وبمساعدة الحقن المرحلة المتوسطة مسعور من قبل PDMS ماء، الذي يؤدي إلى معطف جدران القناة. في مفترق الطرق (2) توسيع القناة والمنفصمة طائرة من الداخلية مرحلتين في الفتحة (3) من خلال ارتفاع معدل تدفق السائل مستمر إلى نقطة حيث تشكيل الحبرية الفيزياء سبب. (E) صورة المجهر من الجيل مستحلب مزدوجة في الجهاز. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. حجرية إنتاج سادة. (A) قناع تستخدم لإعداد 50 ميكرون الميزات. ويستخدم ماستر 1 إلى قالب مداخل الموائعية، والداخلية / المرحلة المتوسطة ملتقى، جيل مستحلب الفوهة، وحوض راحة للمحاذاة. ماستر 2 يحتوي على سلسلة من التلال التي أثيرت تستخدم لمحاذاة. (B) قناع تستخدم لإعداد 135 ميكرون الميزات. سادة عبارة عن صور المرآة التي تحتوي على قنوات توجيه السائل الناقل والقناة الخروج. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. جمعية الجهاز PDMS. ( ترونج> A) مصنعة PDMS ألواح تحتوي على إطارات راحة وجاحظ مجانية. (B) تجميعها، وإطارات التعشيق لتوفير المواءمة المثلى من الميزات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. صور من المستحلبات مزدوجة ولدت في معدلات تدفق مختلفة. يتم تغيير معدل التدفق للمرحلة الخارجي لتغيير س ج / س المبلغ الذي يعطى لليسار كل صورة. تتزايد س ج / س مبلغ يضيق طائرة من السوائل الداخلية يجري المنفصمة من خلال فتحة، وخلق قطرات صغيرة على نحو متزايد. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
معشوقة = "jove_content" FO: المحافظة على together.within صفحة = "1">
الرقم 5. المدرج الإحصائي من قطرات مستحلب مزدوجة الأحجام في معدلات تدفق مختلفة. متوسط معامل الاختلاف قطر قطرات مستحلب المنتجة في مجموعة معينة من الظروف تدفق 5.2٪. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 6. القطرة قطر مقابل تطبيع المعلمة معدل التدفق. ضبط معدل تدفق مرحلة مستمرة يسمح إنتاج مستحلبات المزدوجة التي هي 30٪ -100٪ من قطر الفتحة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
س ط [ميكرولتر / ساعة] | س م [ميكرولتر / ساعة] | Q مبلغ [ميكرولتر / ساعة] | س ج [ميكرولتر / ساعة] | س ج / Q المبلغ |
100 | 250 | 350 | 1050 | 3 |
100 | 250 | 350 | 2100 | 6 |
100 | 250 | 350 | 3850 | 11 |
100 | 250 | 350 | 5950 | 17 |
100 | 250 | 350 | 8050 | 23 |
100 | 250 | 350 | 10150 | 29 |
100 | 250 | 350 | 11900 | 34 |
100 | 250 | 350 | 17150 | 49 |
100 | 250 | 350 | 19950 | 57 |
جدول المعلمات معدل تدفق 1. المستخدمة في التجارب. المرحلة الداخلية ومعدلات تدفق المرحلة المتوسطة (Q ط، س م) تعقد مستمر، مما ثابت معدل التدفق المشترك (Q المبلغ). وتتنوع معدل تدفق مرحلة الناقل (مراقبة الجودة) لإنتاج مستحلبات مزدوجة مع أقطار مختلفة. نسبة س ج / س المبلغ المعلمة الرائقة الرئيسية التي تصف الظروف التجريبية.
تم تصميم مزدوجة هندسة توليد مستحلب الموصوفة هنا لتقليد فيزياء الأجهزة الزجاج الشعرية 8. في هذه، يتم استخدام الزجاج الشعيرات الدموية أسطواني الانحياز لإنشاء طائرة المحورية ثلاث مراحل التي المنفصمة إلى موحدة قطرات مستحلب مزدوجة. وظيفة جهاز 3D PDMS لدينا تعتمد على محاذاة المركزية من الميزات الصغيرة شكلت مع 50 ميكرون تلفيق طويل القامة مع قنوات مرحلة الناقل التي هي 320 ميكرون في إجمالي الارتفاع. هناك إمكانية كبيرة للmisaligning الميزات أطول منقوشة بواسطة قناع الطبقة الثانية 2 في الخطوة 1.7 فيما يتعلق الهندسة طويل القامة 50 ميكرون إذا لم يتم محاذاة أقنعة بدقة. المحاذاة الصحيحة يمكن بمساعدة من تصميم علامات المحاذاة، مثل دوائر متحدة المركز إلى أقنعة يشترك تقع خلال الصور الزخرفة. الترابط البلازما من اثنين PDMS شطر من الجهاز هو العملية الثانية التي يمكن أن تؤدي إلى اختلالات كبيرة من الجهاز النهائي. الترابط البلازمامن PDMS لPDMS غير لحظية بشكل عام، وذلك في خطوة 2.4 وصفنا ترطيب سطح الجهاز مع الماء DI إلى إعاقة الترابط والسماح التلاعب بحيث يمكن السماح الإطارات المحاذاة هو مبين في الشكل 3A لقفل. إذا حاول ذلك من دون ترطيب كاف، فإن السطوح PDMS الرجعة السندات قبل مجيئه إلى المحاذاة الصحيحة، ويجب التخلص من الجهاز وPDMS قوالب جديدة الشأن.
تم تصميم الجهاز مستحلب مزدوجة للاستفادة من تقنيات التصنيع التي التي تؤدي إلى خصائص سطح مسعور موحد. ومع ذلك، العملية خارج المعلمات هو موضح في البروتوكول يتطلب بعض الفهم للعمليات الموائعية المطلوبة. A تقاطع المراحل الداخلية والوسطى (1D الشكل، أشر "1")، وتدفق عالية نسبيا من المرحلة الداخلية وانخفاض تدفق للمرحلة المتوسطة خلق طائرة مرحلتين، في المرحلة المتوسطة مسعور طلاء جدران القناة. إذايتم زيادة تدفق المتناسب للمرحلة المتوسطة، وتوليد منفصلة قطرات الماء في الزيت يبدأ أن يحدث، والقضاء على القدرة على تشكيل متماسكة طائرة من ثلاث مراحل لتشكيل قطرة في فوهة (1D الشكل، أشر "3" ). بعد توسيع قناة (1D الشكل، أشر "2")، وهي كمية كبيرة من الناقل تدفق المرحلة هو مطلوب لخلق فصل الهندسي بين المرحلة المتوسطة وجدران قناة مسعور. وتخفيضات في تدفق مرحلة الناقل يؤدي في نهاية المطاف إلى المرحلة المتوسطة ترطيب جدران الجهاز مسعور. تخفيضات كبيرة في تدفق مرحلة الناقل قد خلق ظروف تدفق التي هي غير كافية ليجز المراحل الداخلية إلى فترة طويلة، خيوط رقيقة، وبالتالي تغيير جذري في الفيزياء المزدوج تشكيل مستحلب الحبرية.
بني مرة واحدة، تم تصميم هذا الجهاز لإنتاج مستحلبات مزدوجة 14-50 ميكرون، وهو حجم مناسب للفرز باستخدام FACS التجاريةالصكوك. وإذا رغبت المستحلبات مزدوجة خارج هذا النطاق الحجم، تحتاج أبعاد فتحة لزيادتها من 50 ميكرون حجم × 50 ميكرون المستخدمة هنا. لأن الجهاز مصمم لانتاج المستحلبات مزدوجة المياه / النفط / الماء مع خصائص سطح مسعور موحد، يمكن المستحلبات مزدوجة النفط / الماء / النفط لم يخلق إلا إذا كان هناك علاج سطح تطبيقها لجعل الجهاز محبة للماء بشكل موحد.
هذا العمل يدل على وسيلة سهلة لصنع جهاز PDMS قادرة على تشكيل قوة من المستحلبات مزدوجة المياه / النفط / الماء. على الرغم من أن المحققين السابق وأفادت تشكيل المستحلبات مزدوجة في الأجهزة التي تم إنشاؤها باستخدام 3D الطباعة الحجرية 14،15، كانت المستحلبات مزدوجة تشكلت في أجهزتهم أقطار التي تم قياسها في 100s من ميكرون. يناسب الجهاز ذكرت هنا للانتاج المستحلبات مزدوجة أمر من حجم أصغر من ذلك، وتوفير كميات مماثلة لخلايا الثدييات ومناسبة تماما ليكون الترتيب بواسطة FACS.
على الرغم من أن هذه النتائج يمكن أيضا أن تتحقق باستخدام الزجاج على microfluidics الشعرية، تصنيع الأجهزة الزجاج هو شاقة وتتطلب العديد التدريب العملي على الخطوات لكل جهاز. لدينا جهاز كل PDMS وتصنيع تتألف في معظمها من صب، والترابط، وألواح الخبز PDMS، والعمليات التي هي بسيطة، يمكن تكرارها، وسهلة النطاق لأعداد كبيرة.
فائدة جهاز ملفقة lithographically لتوليد المستحلبات مزدوجة باستخدام تدفق محوري المشترك مع التركيز وقد تجلى. نأمل أن تلفيق واضحة وظائف قوية من هذا مزدوج مستحلب تصميم مولد ينبغي أن يؤدي إلى التكيف من أجل التطبيقات العلمية والصناعية. المحققون ردع من قبل المهارات المتخصصة اللازمة للعمل في microfluidics الزجاج الشعرية، ينبغي أن تكون أكثر راحة باستخدام PDMS الطباعة الحجرية الناعمة، والآن تقنية المختبرات المشتركة. وعلاوة على ذلك، فإن أحجام قطرات صغيرة التي يمكن أن تنتج هي مناسبة تماما لادائهام الخلية والمقايسات البيولوجية في قطرات، وتقدير والفرز باستخدام FACS. للتطبيقات الصناعية، وقد تم بالفعل ثبت أن هذه الأنواع من الأجهزة يمكن أن تكون ملفقة في المصفوفات وبشكل متوازي 10، مما مزدوجة معدلات توليد مستحلب لزيادة بأوامر من المقادير بالمقارنة مع جهاز واحد. وبالإضافة إلى ذلك، فإن القدرة على تشكيل المستحلبات مزدوجة صغيرة في تدفق التركيز قنوات المحورية الكبيرة يجب أن تجعل مقاومة للقاذورات وانسداد الجهاز، وهو أمر حاسم عندما parallelizing الأجهزة يعتزم الترشح لفترات طويلة دون تدخل.
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل على جائزة بحوث من معهد كاليفورنيا للالكمي العلوم البيولوجية (QB3)، وسد جائزة الفجوة من مؤسسة أسرة روجرز، و/ برنامج مؤسسة ساندلر UCSF لاختراق بحوث الطبية الحيوية، منحة من BASF، وجبهة الخلاص الوطني من خلال كلية المبكر التطوير المهني (الوظيفي) برنامج (DBI-1253293).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Photomasks | CadArt Servcies | ||
3" silicon wafers, P type, virgin test grade | University Wafers | 447 | |
SU-8 3035 | Microchem | Y311074 | |
SU-8 2050 | Microchem | Y111072 | |
Sylgard 184 silicone elastomer kit | Krayden | 4019862 | |
1 ml syringes | BD | 309628 | |
10 ml syringes | BD | 309604 | |
27 gaugue needles | BD | 305109 | |
PE 2 polyethylene tubing | Scientific Commodities, Inc. | B31695-PE/2 | |
Novec 7500 | Fisher Scientific | 98-0212-2928-5 | Commonly knowns as HFE 7500 |
Biocompatable surfactant | Ran Biotechnologies | 008-FluoroSurfactant | |
35,000 MW PEG | Sigma Aldrich | 1546660 | |
Tween 20 | Sigma Aldrich | P1369 | |
Sodium dodecyl sulfate | Sigma Aldrich | L3771 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved