Niş ve Kök Hücre Sessizliğini Özetlemek için Fare İskelet Kasının Fraksiyone Edilmemiş Toplu Kültürü

Araştırmamız, uydu hücrelerine özel önem vererek sağlıklı ve hastalıklı iskelet kası çalışmasını içermektedir. Araştırdığımız temel yönlerden biri, hücreye özgü gen ekspresyonunu koordine eden transkripsiyonel arttırıcıların tanımlanmasıdır. Bu protokol, özgüllüğü belirlemek için hızlı testler yapmamıza izin verir.

İskelet kası araştırmaları alanında, homeostaz, rejenerasyon ve hastalıkta farklı hücre popülasyonlarını incelemek için tek hücreli ve tek çekirdekli RNA dizileme yaklaşımları sıklıkla kullanılmaktadır. Ayrıca, uydu hücreleri, floresanla aktive edilmiş hücre sıralaması veya FACS ile izole edilebilir ve hipotez testi ve sıralama sonucu doğrulaması için kültürlenebilir. Uydu hücrelerini in vitro olarak incelemek önemli bir zorluk teşkil etmektedir.

Son çalışmalar, uydu hücrelerinin fizyolojisindeki rolünü vurguladı. FACS ile izole edilmiş uydu hücrelerini kültürlemek yaygın olsa da, uydu hücreleri nişinin in vitro olarak çoğaltılması henüz başarılamamıştır. Protokolümüz, endotel hücreleri ve fibro edoprogenetik progenitörler gibi miyojenik olmayan hücreler de dahil olmak üzere tüm kas dokusunu kültürlemenin verimli ve pratik bir yolunu sunar.

Hareketsiz hücrelerin kültürden sonraki bir hafta içinde ortaya çıktığını gösterdik. Bu protokol, diğer hücrelerin bu hareketsiz havuzu yeniden kurma üzerindeki etkisini incelemek için de kullanılabilir.