Нефракционированная объемная культура скелетных мышц мышей для повторения нишевого покоя и покоя стволовых клеток

Наши исследования включают в себя изучение здоровых и больных скелетных мышц с особым акцентом на клетки-сателлиты. Одним из фундаментальных аспектов, которые мы изучаем, является идентификация транскрипционных энхансеров, которые координируют экспрессию клеточных генов. Этот протокол позволяет проводить экспресс-тесты для определения специфичности.

В области исследований скелетных мышц подходы секвенирования одноклеточной и одноядерной РНК часто используются для изучения различных клеточных популяций в гомеостазе, регенерации и заболеваниях. Кроме того, сателлитные клетки могут быть выделены с помощью флуоресцентно-активированной клеточной сортировки, или FACS, и культивированы для проверки гипотез и проверки результатов секвенирования. Изучение сателлитных клеток in vitro представляет собой серьезную проблему.

Недавние исследования выявили роль ниши клеток-сателлитов в ее физиологии. Несмотря на то, что культивирование изолированных сателлитных клеток FACS является обычным делом, репликация ниши сателлитных клеток in vitro еще не достигнута. Наш протокол обеспечивает эффективный и практичный способ культивирования цельной мышечной ткани, включая немиогенные клетки, такие как эндотелиальные клетки и фиброгенетические предшественники.

Мы показали, что покоящиеся клетки появляются в течение одной недели после культивирования. Этот протокол также может быть использован для изучения влияния, которое другие клетки оказывают на восстановление этого покоящегося пула.