Normotermik ex-situ perfüzyon ile ilişkili komplikasyonları azaltmak ve donör kalpler için güvenli koruma süresini artırmak için bir model geliştirdik. Alternatif hayvan modelleriyle karşılaştırıldığında, bu model basit ve uygun maliyetlidir ve tek bir deneyci tarafından yürütülebilir. Bu model, transplantasyonlardan sonra donör kalpleri üzerindeki farmakolojik ve genetik müdahalelerin uzun vadeli etkinliğini test etmede faydalı olabilir.
Cerrahi prosedür mikrocerrahi beceri gerektirir. Bu modelde başarıya ulaşmanın kilit faktörü, makalede belirtilen kritik adımları uygulamak ve bunlara odaklanmaktır. Başlamak için, oksijenatör, pompa ve perfüzyon hatları dahil olmak üzere Langendorff cihazını monte edin.
Perfüzyon devresini 20 mililitre salin solüsyonu ile doldurun ve otolog kanla astarlanana kadar dolaştırın. Anestezi uygulanmış donör sıçanda, 7 santimetrelik orta hat abdominal insizyon ve ardından ksifoid işleminden orta klavikulaya kadar 3 santimetre ölçülerinde iki taraflı insizyonlar yapın. Postu torasik bölgeden çıkarın.
1 mililitrelik bir şırınga kullanarak inferior vena kava yoluyla 0.3 mililitre izotonik salin içinde çözülmüş 1.000 uluslararası birim heparin enjekte edin İğne deliğinden herhangi bir kanamayı pamuklu çubukla hafifçe sıkıştırarak durdurun. Abdominal aort içine 5 Fransız femoral kateter yerleştirin. Kateter ucunun aort arkına ulaştığından emin olun ve kateterin takılan kısmının yaklaşık uzunluğunu değerlendirerek kateter konumunu onaylayın.
Abdominal aort içine yerleştirilen kateter yoluyla yaklaşık 10 mililitre kan toplayın. Kardiyoplejik çözelti perfüzyon hattını abdominal katetere bağlayın ve saatte 800 mililitre hızında şırınga pompası ile kardiyoplejik çözelti uygulamasına başlayın. Göğüs boşluğunu diyaframdan açın ve ventriküler distansiyonu önlemek için inferior vena kava'yı diyaframa yakın kesin.
Kaburgaları torasik omurga boyunca torasik girişe kadar iki taraflı olarak kesin. Mobilize ventral göğüs duvarını sivrisinek forseps ile üstün bir şekilde yansıtın. Tüm kardiyoplejik çözeltiyi uyguladıktan sonra, aort arkını çevre dokulardan izole edin ve sol subklavyen arterin hemen altında dikkatlice inceleyin.
Aort kanülasyonu sırasında kolay kullanım için aort arkının daha uzun kütüklerini bırakarak brakiyosefalik ve sol ortak karotis arterleri uzak bir pozisyonda kesin. Daha sonra ana pulmoner arteri çatallanmaya mümkün olduğunca yakın kesin. Superior vena kava ve inferior vena kava'yı 5-0 ipek sütürlerle dikkatlice bağlayarak sağ atriyum ve koroner sinüsün tıkanmasını önleyin.
Göğüs kafesinin sol kenarlarını ıslak gazlı bezle örtün, kalbi üzerine yerleştirin ve hilumu ortaya çıkarmak için superior vena kava ve inferior vena kava ligatürlerini nazikçe geri çekin. Pulmoner ve azygos damarlarını 5-0 ipek sütür ile birlikte bağlayın. Doku dorsalini bağa kesin ve kalbi çıkarın.
Herhangi bir yaralanma olup olmadığını inceledikten sonra kalbi tartın. Tuzlu su astarlı devreyi kan hazırlama ile değiştirin ve perfüzyonu dakikada iki ila üç mililitrelik bir akış hızında başlatın ve hava kabarcıklarını gidermek için perfüzatın kanülasyon bölgesinden sızmasına izin verin. Kalıcı bağı yerleştirdikten sonra, kalbin birkaç saniye içinde kasılmaya başladığından ve 60 saniye içinde normal bir ritme ulaştığından emin olun.
37 santigrat derecede üç ila dört mililitre koroner akış hızına sahip 55 ila 65 milimetre cıvanın ortalama perfüzyon basıncı, yeterli perfüzyonu gösterir. Rezervuardan 0.15 mililitre kan toplayın ve perfüzyonun başlangıcında ve daha sonra her 20 dakikada bir kan gazı analizini kontrol edin. 120 dakikalık perfüzyondan sonra, kalbi tutuklamak için şırınga pompasından saatte 250 mililitre hızında üç mililitre Custodiol uygulayın.
Orta hat laparotomisini gerçekleştirin ve karın boşluğunu genişletmek için bir ekartör yerleştirin. Prosedür için yer açmak için pamuklu çubuklar kullanarak karın organlarını alıcının sol tarafına hareket ettirin. 10x büyütmeli bir cerrahi mikroskop kullanarak, pamuklu çubuklarla künt diseksiyon yaparak duodenum ve proksimal jejunumu mobilize edin.
abdominal aort ve inferior vena kava'yı ortaya çıkarmak için. Ana damarların hem kraniyal hem de kaudal taraflarının mezenterik dallarına 5-0 ipek ligatür yerleştirin. Karın damarlarını yükseltin ve bel dallarını 5-0 ipek dikişlerle pıhtılaştırın veya bağlayın.
Testis arterlerini ve damarlarını yedeklemeyi unutmayın ve onları klemplemeyin. Damarları kaldırmak için ligatürler kullanın ve anastomoz bölgesindeki kan akışını durdurmak için mikro kelepçeleri ana damarların mezenterik dallarına, kaudal ve kraniyal taraflarına yerleştirin. 27 gauge iğne kullanarak aortu delin ve insizyonu mikro makasla donör çıkan aortun açıklığına eşit veya biraz daha büyük bir uzunluğa kadar uzatın.
Aortotomi ile aynı şekilde inferior vena kava'nın uzunlamasına bir kesisini yapın, ancak aort insizyonuna kıyasla kaudal tarafa üç milimetre daha yakın yapın. Anastomozları başlatarak, donör kalbi alıcının karnının sağ tarafına yerleştirin ve donör yükselen aortu uzunlamasına insizyonun kraniyal köşesinde basit bir kesintili dikişle alıcının abdominal aortuna tutturun. Kalbi alıcının karnının sol tarafına hareket ettirin ve çalışan bir 9-0 polipropilen sütür kullanarak alıcının abdominal aortu ile donörün yükselen aortunun anastomozunu gerçekleştirin.
Donör pulmoner arteri, uzunlamasına insizyonun kaudal ve kraniyal köşelerinde iki kesintili sütürle inferior vena kavaya sabitleyin. Anastomozun tamamlanmasından sonra, kaudal kelepçeyi ve kraniyal kelepçeyi çıkarın. Yeterli hemostaz sağlamak, karın organlarını menderes benzeri bir şekilde değiştirmek ve sürekli 5-0 polipropilen sütürler kullanarak karın insizyonunun katmanlarını kapatmak.
Ex-situ perfüzyon sırasında kalbin canlılığını değerlendirmek için kullanılan laktat, potasyum ve ortalama aort basıncı gibi parametreler bu şekilde gösterilmiştir. Burada, normotermik ex-situ koruma kullanımı, altı başarılı olgunun toplam iskemik süresini 46.2 artı-eksi 4.7 dakikaya düşürürken, toplam vücut dışı zaman 166.2 artı-eksi 4.7 dakika idi. Kalbin donörden çıkarılması ve gerekli ex-situ perfüzyon ve heterotopik transplantasyon hazırlığı 5.8 artı-eksi 1.3 dakika idi.
Ameliyatın genel başarı oranı %70 idi ve altı başarılı olgunun ortalama anastomoz süresi 38.4 artı-eksi 3.4 dakika idi. Donör kalbin tedarik öncesi ve implantasyon sonrası elektrofizyolojik performansı bu şekilde sunulmuştur. Tüm deneylerde, kalp atış hızı implantasyondan hemen sonra önemli ölçüde azaldı, ancak zamanla iyileşti.
Burada donör kalbin normotermik ex-situ koruma öncesi, normotermik ex-situ koruma sonrası ve iki saatlik heterotopik implantasyon sonrası makroskopik ve mikroskobik görünümü gösterilmektedir. Bu işlemi yaparken, perfüzyon için yeterli miktarda kan almak, çıkan kısma zarar vermeden aortu dikkatlice kesmek ve koruma sırasında fizyolojik parametreleri yakından izlemek önemlidir. Bu prosedürü takiben, yeni koruma çözümlerinin etkinliğini ve alıcının yeni tanıtılan koruma yöntemlerine karşı bağışıklık tepkisini test edebiliriz.
Ex-situ perfüzyon ve heterotopik transplantasyon kombinasyonu ile uzun koruma süresi boyunca yeni teknikleri araştırabiliyor ve alıcı immün yanıtı üzerindeki uzun vadeli etkiyi gözlemleyebiliyoruz.
