Over dokusu nakli sonrası erken değişikliklerin gözlenmesinde TAT kullanımı, erken vaskülarizasyon ve folikül kaybı sürecini etkileyen mekanizmaların araştırılmasına olanak tanıdığı için in vitro modellere göre önemli bir avantaja sahiptir. Bu teknik ucuzdur ve ilk 17 gün boyunca doğal embriyo immün yetmezliği nedeniyle herhangi bir greft reddi riski olmadan gerçekleştirilebilir. Üstelik bu yaklaşım, Avrupa hukuku açısından herhangi bir etik veya hukuki kaygı doğurmamaktadır.
Yumurta manipülasyonu için gerekli olan el becerilerini geliştirmek için en iyi stratejiye, gerçek deneyden önce embriyonlu olmayan yumurtalarla eğitim verilerek ulaşılabilir. Başlamak için, Louvain'den seçilen beyaz leghorn civcivlerinden alınan sıfır yumurtaları bir işaretleyici kullanarak etiketleyin. Yumurtaları, sivri uçları aşağı bakacak şekilde 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.
Yumurtaları günde iki ila üç kez manuel olarak 180 derece döndürün. Karanlıkta, yumurta kabuğuna bir yumurta mumu yerleştirin ve bir işaretleyici kullanarak yumurta kabuğundaki hava cebinin merkezini belirleyin. Işıkları açın ve yaklaşık bir milimetrelik bir açıklık yapmak için işaretli konumda steril bir düz pimi döndürün.
Yumurta mumunu kullanarak karanlıkta yumurta sarısı torbasını bulun. Yumurtayı, yumurta sarısı torbasını bozmadan, yumurtanın dibine doğru 45 derece açılı 19 gauge steril bir iğne ile delin. CAM'yi kabuktan ayırmak için 1.5 ila iki mililitre albümini aspire edin.
Ardından deliği yapışkan bantla kapatın. Işıkları açın ve yatay olarak yerleştirilmiş yumurtanın üzerine 1,5 santimetre ölçülerinde dikdörtgen bir pencere çizin. Yumurtayı bir elinizde tutun ve kabuğu kırmadan bir kaydırma testere bıçağı kullanarak yumurta kabuğuna bir pencere açın.
Kabuk tozunu ve kalıntıları temizlemek için düzenli olarak üfleyin. Steril forsepsleri dikdörtgen kabuk parçasının altına kaydırın ve CAM'ye zarar vermeden temiz bir şekilde çıkarın. Daha sonra embriyoyu ve CAM'ı görmek için beyaz dış kabuk zarını atın.
Canlı embriyonlu yumurtalarda, civciv embriyo gelişiminin üçüncü gününde berrak albümin, embriyonun etrafında vasküler bir halka ve bazen atan bir kalp görülür. Laminer akış başlığının altına, yumurtayı pencere yukarı bakacak şekilde yumurta rafına yerleştirin ve bandı soyun. CAM'ın küçük bir alanını travmatize etmek için bir santimetre karelik steril eterle ekstrakte edilmiş lens kağıdı şeridini epitel yüzeyine nazikçe yerleştirin ve hemen çıkarın.
Daha sonra donmuş çözülmüş bir yumurtalık kortikal şeridini mikrocerrahi forseps ile kavrayın ve medüller tarafı CAM'a karşı olacak şekilde travmatize edilmiş CAM üzerine yerleştirin. Grefti makroskopik olarak değerlendirin ve dijital fotoğraf veya video çekmeden önce CAM'ın grefte karşı vasküler reaksiyonuna özellikle dikkat edin. Yapıldıktan sonra, dokuyu veya çevresindeki CAM'ı forseps ile kavrayarak ve grefti makas kullanarak CAM'den dikkatlice çıkararak grefti hasat edin.
Greftler, greftlemenin ilk gününden sonra vakaların %100'ünde canlıydı. Zaten CAM'a kısmen yapışıktılar ve vaskülarizasyonları için gerekli olan kan damarlarının tekerlek kollu modelini gösterdiler. Altı günlük greftlemeden sonra implantlar CAM'a yapıştırıldı.
Ekimden sonraki üçüncü gün civarında, greftler ikinci bir TAT tabakası ile kaplandı ve kapsüllendi. Greft, nakillerin %80'inin yumurtaya nüfuz etmesiyle iyi bir vaskülarizasyon gösterdi. İki greft CAM'a bağlanmadı ve nekrotik bir görünüm aldı, bu da altı gün sonra greftli doku sağkalım oranının %83 olmasına neden oldu.
Transplantasyonun histolojik değerlendirmesinde, tüm zaman noktalarında sağlıklı foliküller gözlendi. Transplantasyondan sonra folikül yoğunluklarında önemsiz bir azalma gözlendi. Folikül sağkalım oranları, greftleme döneminde birinci günde% 95 ve altıncı günde% 83'te tutuldu.
En zorlu kısım, bir pencere uygulaması oluşturmadan önce albümini aspire etmek, CAM'yi yumurta kabuğundan ayırmak için gereken küçük deliği yapmaktır. Çok fazla basınç aşırı uyarılmaya neden olabilir veya hatta yumurtayı çatlatabilir ve tahrip edebilir, bu da CAM veya damar sisteminde geri dönülmez hasara neden olabilir. Bu model, pro-anjiyojenik faktörlerin, koruyucu antioksidan ajanların, sitokinlerin, hormonların ve folikül aktivasyonunu ve erken büyümeyi kontrol eden diğer faktörlerin etkisi dahil olmak üzere, greftleme sonrası erken yumurtalık dokusunun çeşitli yönlerini test etmek için idealdir.
Bu model, yumurtalık dokusu transplantasyonundan sonra yumurtalık rezervinin azalmasına neden olan iki ana olay olan erken vaskülarizasyon ve folikül aktivasyonunun modülasyonu arasındaki bağlantıyı göstermiştir.
