Bu yöntem üreme alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, nasıl preputial ayırma yoluyla fareler ve sıçanlarda pubertal başlangıç belirlemek için, vajinal açılış, ve bir doğurganlık çalışması gerçekleştirmeden önce ilk estrus kurulması gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, gösterdi non-invaziv yaklaşım kullanarak pubertal başlangıç kurarak, cinsel olgun hayvanlarda takip ve doğurganlık çalışması yapmak mümkün olmasıdır. Bu tekniğin etkileri, genetik mutasyonlar veya endokrin bozucu kimyasallar gibi üreme yeterliliğini etkilemeye duyarlı tedavilerin neden olduğu üreme açıklarının tanısına kadar uzanır.
Bu yöntem farelerde üreme yeterliliği hakkında bilgi sağlasa da, fare ve hamster gibi diğer model sistemlerine de uygulanabilir. Bu yöntemin görsel gösteri önemlidir, iyi ve hassas hayvan işleme becerileri gerektirir gibi. Özellikle preputial ayırma ve vajinal açıklık aşağıdaki görsel tanımlama için farelerdoğru tutmak önemlidir.
Çalışma alanını hazırlamak için masaya bir ped yerleştirin. Sonra ızgara yukarı bakacak şekilde temiz bir fare kafesi üst yerleştirin, pad üzerinde. Ardından, çalışma alanında bir ölçek ayarlayın.
Ölçekte temiz bir 500 ila 1000 mililitrelik bir beher yerleştirin ve tare. Ardından, verileri kaydetmek için çalışma alanının yanına bir sayfa yerleştirin. Bundan sonra, çalışma alanına fare kafesi yerleştirin.
Kafesi açın ve kapağı, su şişesini ve yemek tutucuyu masaya kaldırın. Fareyi kuyruğundan tutarken, temiz fare kafesinin üst üstüne yerleştirin. Kuyruğu tutarken, farekafes üst ızgara keşfetmek için izin verin.
Kuyruğu yavaşça geriye çekin ve diğer elinizi boynuna ve kulaklarına yakın bir cilde yaklaştırın. Başparmak ve işaret parmağı ile omuzlar ve boyun arasındaki gevşek deri kavramak. Sonra kalan parmakları ile arka deri kapmak ve hafifçe ele bastırarak fare tutun.
Serbest el ile, yavaşça geri penis etrafında deri itin. Preputial ayırma, preputial deri geriye doğru slaytlar, glans penis açığa. Muayeneden sonra, preputial ayırmanın varlığını veya yokluğunu kaydedin.
Bundan sonra, faretartın ve ağırlığını kaydedin. Daha sonra kabı kafes zemininüzerinde tutarak fareyi kendi başına çıkararak kafese yeniden tanıyın. Çalışma alanına bir pamuk topu, büyük bir kabı ve bir şişe steril suyu yerleştirin.
Kabın içine steril su dökün. Daha sonra, kabın içinde steril su ile pamuk topu nemlenir ve temiz kafes üst yanına yerleştirin. Fare kafesini çalışma alanına yerleştirin.
Daha sonra fareyi kuyruğunun tabanındatarak kafesin tepesine aktarın. Farenin ileri hareketini teşvik etmek için farenin kuyruğunu yavaşça çekin. Bundan sonra, üç parmak ile kalça desteklerken kuyruk kaldırın.
Yavaşça nemlendirilmiş pamuk topu ile vulva temizleyin, sonra vajina tamamen açık olup olmadığını belirlemek için vulva inceleyin. Vajinal açıklık meydana geldiyse kaydedin. Sonra faretartın ve ev kafesi geri dönün.
Kapak, su, gıda, yatak ve farelerin her üreme çifti için yuvalama malzeme ile temiz bir fare kafesi hazırlayın. Daha sonra gerekli bilgilerle kafes kartlarını doldurun. Temiz bir masa üzerinde hazırlanan yatak kafesi yerleştirin, sonra yavaş yavaş fare kafesi içine eldivenli bir el tanıtmak ve kısa bir süre için kafeste bırakın.
Eldivenli el ile farelere yavaşça yaklaşın. Fareler elin üzerinden geçtiğinde, başparmak ve işaret parmağı arasında bir farenin kuyruğunu yakalayın ve fareyi kuyruktan kaldırın. Fare, gövdedesteği olmadan kuyruk tarafından 2-3 saniye kadar tutulabilir.
Hazırlanan üreme kafesi içinde fare yerleştirin, sonra erkek ve dişi fareler yiyecek, su ve yuvalama malzeme olduğundan emin olduktan sonra kafesi kapatın. Sunulan yöntem kullanılarak iki farklı transgenik fare modeli incelenmiştir. Vajinal açıklık ve preputial ayırma hem heterozigot farelerde hem de kontrol farelerinde aynı yaş ve ağırlıkta meydana geldi.
Tersine, vajinal açılış ve preputial ayırma önemli ölçüde koşullu nakavt kadın ve erkeklerde gecikti, ve artan vücut ağırlığı ile ilişkili. 4.5 haftalıkken, kadın kontrolleri ve koşullu nakavt farelerin vücut ağırlığı karşılaştırılabilirken, koşullu nakavt erkekler kontrollerden biraz daha ağırdı. Bu, koşullu nakavt farelerin vajinal açılış ve preputial ayrılmasındaki gecikmenin kilo alımındaki gecikmeyle ilişkili olmadığını gösterir.
Ergenlik başlangıcının tamamlanmasından sonra doğurganlık çalışmasına 10-16 haftalıkken başlandı. Hem erkek hem de dişi heterozigot fareler alt doğurgandı. Heterozigot dişiler üç aylık çalışmada daha az çöp ürettiler ve hem erkek hem de dişi heterozigot fareler daha küçük yavrular ürettiler.
Doğurganlık teşrisi oluşturmadan önce ergenlik başlangıcını doğrulamanın önemini göstermek için, üreme yeterliliği koşullu nakavt farelerde değerlendirildi. 70 günlük doğurganlık çalışması sırasında, ne koşullu nakavt erkek ne de kadın herhangi bir çöp üretti. Bu prosedürü denerken, fareleri dikkatli bir şekilde idare etmeyi ve hayvanlara yaklaşırken ve onlarla ilgilenirken sakin kalmayı unutmamak önemlidir.
Bu prosedürü takiben, dolaşımdaki seks hormonu düzeylerini ölçmek gibi diğer yöntemler ek soruları cevaplamak için yapılabilir, kısırlık veya diğer subfertilite anormal testosteron neden olup olmadığı gibi, östrojen, folikül uyarıcı hormon, ve luteinizing hormon düzeyleri. Farelerle çalışmanın, ısırma ve alerji gelişimi riski nedeniyle tehlikeli olabileceğini unutmayın. Maruziyeti azaltmak için, eldiven ve laboratuvar önlüğü ve farelerin dikkatli kullanımı gibi önlemler bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınmalıdır.
