Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в репродуктивной области, такие как, как определить половое созревание у мышей и крыс через предварительное разделение, вагинальное открытие, и создание первого эструса до выполнения исследования плодовитости. Основным преимуществом этого метода является то, что путем установления полового созревания с использованием продемонстрированной неинвазивный подход, можно следовать и проводить исследование фертильности у животных, которые являются сексуально зрелыми. Последствия этого метода распространяются на диагностику дефицита в воспроизводстве, вызванного генетическими мутациями или лечением, подверженным воздействию репродуктивной компетентности, таким как эндокринные разрушающие химические вещества.
Хотя этот метод может дать представление о репродуктивной компетентности у мышей, он также может быть применен к другим модельных систем, таких как крысы и хомяки. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как она требует хороших и деликатных навыков обращения с животными. Особенно важно правильно держать мышей для следующей визуальной идентификации препутиального разделения и вагинального отверстия.
Чтобы подготовить рабочую площадку, поместите площадку на стол. Затем поместите чистый верх клетки мыши с сеткой вверх, на площадку. Затем навеять шкалу в рабочей области.
Поместите чистый стакан от 500 до 1000 миллилитров на шкале и смолы его. Затем поместите лист рядом с рабочей зоной для записи данных. После этого поместите клетку мыши в рабочую зону.
Откройте клетку и снимите крышку, бутылку с водой и держатель для еды к столу. Держа мышь за хвост, поместите ее на чистую верхнюю часть клетки мыши. Сохраняя удержание хвоста, позвольте мыши исследовать сетку верхней части клетки.
Аккуратно потяните хвост назад и подойдите другой рукой к коже близко к шее и ушам. Возьмите свободную кожу между плечами и шеей большим и указательным пальцами. Затем возьмите кожу на спину оставшимися пальцами и держите мышь, осторожно прижимая ее к руке.
Свободной рукой аккуратно нажмите кожу вокруг пениса назад. При препутном разделении, препутная кожа скользит назад, подвергая головки пениса. После осмотра записывают наличие или отсутствие предварительного разделения.
После этого взвесить мышь и зафиксировать ее вес. Затем вновь ввести мышь в клетку жилья, удерживая стакан над полом клетки и позволяя мыши выйти самостоятельно. Поместите ватный шарик, большой стакан и бутылку стерильной воды в рабочей зоне.
Налейте стерильную воду в стакан. Затем увлажните ватный шарик стерильной водой в стакане и поместите его рядом с чистой верхней частью клетки. Поместите клетку мыши в рабочую зону.
Затем перенесите мышь на верхнюю часть клетки, удерживая ее у основания хвоста. Аккуратно потяните за хвост мыши, чтобы стимулировать движение вперед мышью. После этого поднимите хвост, поддерживая бедра тремя пальцами.
Аккуратно очистить вульвы с увлажненной ватным тампоном, а затем изучить вульвы, чтобы определить, если влагалище полностью открытым. Запись, если вагинальное отверстие произошло. Затем взвесить мышь и вернуть его в домашнюю клетку.
Подготовь чистую клетку мыши с крышкой, водой, пищей, постельными принадлежностями и вложенным материалом для каждой племенной пары мышей. Затем заполните клетку карты с необходимой информацией. Поместите подготовленную клетку постельных принадлежностей на чистый стол, затем медленно ввемите руку в клетку мыши и оставьте ее в клетке на короткий период времени.
Медленно приближайся к мышам в перчатках. Когда мыши перебегают руку, хватай хвост одной мыши между большим и указательным пальцами, а затем поднимите мышь за хвост. Мышь может быть проведена за хвост без поддержки тела в течение двух-трех секунд.
Поместите мышь в подготовленную клетку для размножения, а затем закройте клетку после того, как у мышей мужского и женского пола будет пища, вода и вложенный материал. С помощью представленного метода были изучены две различные трансгенные модели мыши. Вагинальное отверстие и предварительное разделение произошло в том же возрасте и весе как у гетерозиготных мышей, так и у контрольных мышей.
И наоборот, вагинальное отверстие и предварительное разделение были значительно отложены в условных нокаут женщин и мужчин, и связанные с увеличением массы тела. В возрасте 4,5 недель, женский контроль и условный нокаут мышей сопоставимый вес тела, в то время как условные нокаут мужчины были немного тяжелее, чем контроль. Это указывает на то, что задержка в вагинального отверстия и предварительное разделение условного нокаута мышей не было связано с задержкой в увеличении веса.
После завершения полового созревания, исследование фертильности было начато в возрасте от 10 до 16 недель. Как самцы, так и самки гетерозиготных мышей были субфразвимными. Heterozygote женщины произвели меньше пометов в течение трех месяцев исследования, и как мужчины, так и женщины heterozygote мышей генерируется меньше пометов.
Чтобы проиллюстрировать важность подтверждения полового созревания до создания анализа фертильности, репродуктивная компетентность была оценена в условных мышей нокаутом. Во время изучения плодородности 70 дней, ни условные мужчины knockout ни женщины не произвели никакие пометы. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы справиться с мышами с осторожностью и сохранять спокойствие при приближении и обработке животных.
После этой процедуры, другие методы, такие как измерение циркулирующих уровней половых гормонов могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы, как ли бесплодие или другие субфертильности было вызвано ненормальным тестостерона, эстрогена, фолликулостимулирующего гормона, и лютеинизирующего уровня гормонов. Не забывайте, что работа с мышами может быть опасной из-за риска укусов и развития аллергии. Чтобы уменьшить воздействие, такие меры предосторожности, как ношение перчаток и лабораторных пальто, и тщательное обращение с мышами, всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.
