Fiksasyon cihazı içinde sabit basınç hafif sigara dumanı amfizem değerlendirmek için uygun bir histolojik akciğer örneği üreten makul şişirilmiş durumda akciğerler tutar. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç kullanarak aynı anda birçok akciğer düzeltebilirsiniz. Prosedürü gösteren Naoko Arano benim laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi olacak.
Refleks hareketine yanıt eksikliği doğruladıktan sonra farenin medial hattı boyunca deri ve kas dokusunda bir kesi yapmak, sefalik bölge hedefleyen, ve yanal daha geniş bir çalışma alanı oluşturmak için kesti. Diyafram tabakası ortaya çıktıktan sonra forceps ile doku delin ve torasik boşluk açın. Akciğerlerin ve kalbin görüntülenebilmesi için göğüs kafesini kesin.
Ve sol atriyumu ve sağ ventrikülü kes. Sağ ventrikül bölgesine perfüzyon pompasına bağlı 24 gauge kanül yerleştirin ve kanüli pulmoner artere ulaşana kadar sefalik bölgeye yönlendirin. Daha sonra, pompa yı açın ve tüm akciğer dokusu beyaz bir renge dönüşene kadar bir saat boyunca pbs yaklaşık 200 mililitre ile doku perfuse.
Perfüzyon sonunda trakea, akciğerler ve kalp çevreleyen bağ dokusu kesti ve sağ ana bronş bağlamak için bir dikiş kullanın. Sonra, sağ akciğerin tüm bireysel lobları hasat ve uygun bir fiksatif içeren bireysel 10 mililitreşile şırıngaiçine sol akciğer kalp ve loblar yerleştirin. Akciğerleri şişirmek ve akciğeri şırıngadan çıkarmak için şırıngada vakum oluşturarak pistonu geri çekin.
Nefes borusuna 20 gauge kanül yerleştirin ve kanülü yerinde sabitlemek için bir dikiş kullanın. Kanül fiksatif dolu bir mililitreşşon bağlayın ve sızıntıları kontrol etmek için ek fiksatif ile akciğer doldurun. Yerleştirme bölgesinin, akciğer örneğinin fiksasyon sırasında akciğer tahtasından ayrılmasını önlemek için güvenli olduğundan emin olun.
Daha sonra dokuyu akciğer fiksasyon basınç ekipmanına aktarın, numuneyi alın ve trakeayı fiksasyon periyodunun sonunda düğümle bağlayın. Akciğer numunesinin yerleştirildiği akciğer fiksasyon basınç ekipmanının alt bileşeni, formalin akışının ucuna 20 gauge kanül ile üç yönlü stopcock ile bağlanır. Basınç alt ve üst bölmeleri arasında fiksatif farklı yüzey düzeylerinde oluşturulur.
Basınç farkı 25 santimetre sudur ancak yükseklik ayar kolu basıncı 25 ila 30 santimetre suya ayarlamak için kullanılabilir. Bir pompa, fiksatif yüzey yüksekliğinde 25 santimetrelik bir fark koruyarak alt ve üst kapları bağlar ve ajanın akışını yönlendirir. 48 saatlik fiksasyondan sonra ortam havasına maruz kalan SMP30 nakavt farelerinin akciğerleri belirgin bir hava sahası genişlemesi göstermez.
Önemli hava sahası genişleme ve alveoler duvar imha, ancak, Kronik sigara dumanına maruz SMP30 nakavt farelerde görülmektedir. Buna ek olarak, akciğer örneklerinin ortalama lineer kesişme ve yıkıcı indeksi dumanmaruz SMP30 nakavt farelerde önemli ölçüde hava maruz kalan hayvanlara göre daha büyüktür. Laboratuvarımız %10 formalin kullanır ancak araştırmacılar deneysel ihtiyaçlarına göre diğer fiksasyon ajanlarını kullanabilirler.
Biz gösterdi fiksasyon sistemi akciğer örnekleri kullanarak rapor gibi onların morfometrik değerlendirme için çeşitli fare amfizem modellerinden hasat edilebilir. Sabitleme ajanları tehlikeli olabileceğinden, her zaman uygun personel koruyucu ekipmanını giyin ve iyi havalandırılan bir odada çalışın.
