Bu yayında bildirilen Araştırma Ulusal Enstitüsü yaşlanma, kemirgen kolonisi (Nancy Nadon) Yaş 14 aylık dişi CBA farelerin cömert bir hediye tarafından ve Utah State University, veteriner tıp Fak., hayvan bölümü, süt tarafından desteklenmiştir ve veterinerlik bilimleri.

Tüm yöntem tanımlamak burada kuralları bakım ve kullanım laboratuvar hayvanlar için Kılavuzu'nda bulunan ve Utah State Üniversitesi Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış olan Ulusal Araştırma Konseyi altında geliştirilmiştir.
Not: Yumurtalık nakli yordamlar için 18 ay-in yaş 21 günden fareler (CBA/J zorlanma) içerebilir. Fareler CBA/J baskı çoğalma yaş 45 ile 60 gün arasında yetkili ve çoğalma senescent 10 ila 12 ay-in yaş arasında olur.
1. yaşlı fareler için sağlam yumurtalık nakli
Not: Bu ilk protokol ve aktarımı yumurtalık aynı doğuştan baskı sırasında genç bir fareden (yaş 60 gün) bir postreproductive kadın (12 ay-in yaş) kullanılan yordamı açıklar. Aynı yordamı herhangi bir iki dişi fareler arasında yumurtalık nakli için kullanılır.
<ol><li>Tartmak ve donör hayvan mayi (IP, 27 ga iğne) tarafından anestezi enjeksiyonu, örneğin bir kokteyl ketamin, xylazine ve acepromazine kullanarak (65 mg/kg ketamin, 13 mg/kg xylazine 2.0 mg/kg, acepromazine; kokteyl doz - 6.5 ml/kg). Anestezi etkisi almıştır kadar hayvan ısıtmalı ev kafese geri bildirilir.</li>
	<li>Bir kez anestezi, hayvan ev kafes ve ısıtmalı kağıt havlu üzerinde yer kaldırın. Sadece kaburga altında başlatma ve klemple hareket, bir kirpik hazırlanıyor her tarafında orta hat için lateral 'yaklaşık 2-3 cm kare saç bir şerit bırakarak eğilimli fare her iki tarafında yama' saç birkaç mm kesme makineleri (#40 bıçak) tercih, Kaldır kullanarak yaklaşık 1-2 cm orta hat kapsayan.</li>
	<li>Hafifçe % 70 etanol ile kırpılmış alanlarını silin ve betadin çözüm pamuk uçlu bir bez ile bölünmüş site için geçerli.</li>
	<li>Göz koruması için antibiyotik jel uygulayın ve subkutan Meloksikam (2.0 mg/kg) yönetmek (S.C., 27 ga iğne) hayvanın boyun Postoperatif ağrı için yanal yönü üzerinde.</li>
	<li>Yüzükoyun ısıtmalı steril cerrahi alan hayvan yerleştirin ve kırpılmış alan % 70 etanol bulanmış 2 cm x 2 cm pamuk gazlı bezle silin.</li>
	<li>Bir 1.0-1.5 cm paralumbar ufakbir ameliyat yaparım ve açık açık temel fasya deriden incelemek. Fasya ile başka bir kesi yapmak. Açık açık yanal bu fasya altında mümkün olduğunca yüzeysel karın boşluğu erişene dek incelemek</li>
	<li>Küçük bir cerrahi örtüsü (2 cm x 2 cm tül kesim) kesi ve ıslak steril serum fizyolojik ile örtüsü üzerinde bir yer.</li>
	<li>Küçük forseps kullanarak, yumurtalık karın boşluğunda çevreleyen yağ dokusu bulun ve yavaşça içindeki yağ yastığı ve yumurtalık ve ıslak gazlı bez örtü yerleştirin. Yumurtalık yağ yastığı 'çevreleyen yağ dokusu daha fazla beyaz' görünür.</li>
	<li>1,5 inç Bulldog kelepçe (yumurtalık bursa engel değil için Bakımı) yağ yastığı üzerinde yer belgili tanımlık arazi işlem sırasında tutmak için.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskop yerine taşımak ve net bir şekilde belirlemesine yumurtalık bursa. Bursa iki saat tamircisi Forseps ile kavramak ve yumurtalık ortaya çıkarmak için yumurtalık hilus karşısında yumurtalık bursa deşmek. Bursa amaçlanan erişim alanı son derece skarların, epinefrin (1: 100, 000) bir damla yırtılma sırasında kanama azaltmak için bursal yüzeye bir şırınga ile uygulanır.</li>
	<li>Yavaşça yumurtalık yumurtalık bursa kaldır ve yumurtalık yumurtalık hilus kanama önlemek için saatçi Forseps ile sıkma tarafından tüketim.</li>
	<li>Donör Over seyretmek cam 4 ° C steril serum fizyolojik ile dolu yerleştirin, gevşek kapak ve nakli için hazır kadar bir kenara koyun. İdeal olarak, yumurtalık kolayca cerrah tarafından nakli anda anlaşılacak seyretmek cam ek bir diseksiyon mikroskop altında yerleştirin.</li>
	<li>Bu noktada, ötenazi ya da bir kenara (sürekli olarak izlenmesi gerekir) donör fare transplante yumurtalık, doku, hücre veya daha sonraki bir zamanda noktada yer tutucu cam boncuk almak için ayarlayın.</li>
	<li>Temiz cerrahi alan ve aletleri ile yukarıdaki gibi alıcı hayvan ovariectomize. Büyük fare yağ dokusu artan miktarda sahip olma eğilimi ve artan bir anestezik ilaç (% 20) gerektirebilir.</li>
	<li>Sonra eksizyon, alıcının yumurtalıktan Kan durdurucu sargı Köpük yastık kanamayı kontrol ve pıhtılaşma içinde yardımcı olmak ve serum batırılmış gazlı bez küçük bir parça üzerinde maruz sitede yer için boş bursa içinde küçük bir parça yerleştirin.</li>
	<li>Bir donör Over (veya doku, hücre, yer tutucu cam boncuk) bir forseps el ve mikroskop alan bakış açısı taşımak bir saatçi ile bulun. Başka bir forseps ters el ile gazlı bez aynı anda kan durdurucu sargı Köpük yastık bursa bursa içinde yeni yumurtalık yerleştirerek süre sökün ve.</li>
	<li>Yeni yumurtalık içinde alıcı bursa uymazsa, donör Over yarısı (veya 1/3 veya 1/4) keser ve bursa parçalar halinde içine yerleştirir. Bursa tamamen tüm yumurtalık kapsamaz, bursa, yumurtalık ve yumurtalık tutmak için geri bursa üzerinden dikiş koyun (tartışma bölümüne bakın). Not: Cam yer tutucu boncuk saatçi'nın Forseps ile ele almak zor olabilir.</li>
	<li>Cam boncuk bursa içine yerleştirirken, boncuk kadar büyük Forseps ile almak ve yumurtalık bursa yanındaki yağ yastığı üstüne bırakın. Boncuk bursa rulo.</li>
	<li>Bir Castroviejo iğne bağı konik bir iğne ve 9-0 veya 10-0 monofilament dikiş ile zaten yüklü almak, Bursa yırtık kenar bulmak ve bir ya da iki Halsted dikiş kullanarak bursa kapatın. Not: Dikiş alternatif saatçi veya diğer küçük Forseps ile yapılabilir.</li>
	<li>Sitenin steril serum fizyolojik ile hafifçe sulamak, yağ-pad kelepçe kaldırmak ve yumurtalık/yağ yastığı karında dönün.</li>
	<li>Perdeyi kaldırmak ve karın duvarı 6-0 fotokromik gut veya vicryl ile kapatın. Bu adım-ebilmek kılınmak ile ya da ezelî mikroskop.</li>
	<li>Eğer bir yana (önceki adımda taşınmaz) mikroskop hareket ve cilt 9 mm yara klipleri ile kapatın.</li>
	<li>Işık gölgeli bir ısıtmalı kurtarma kafes hayvan yerleştirin ve hayvan kurtarma anestezi kadar sürekli olarak izlemek. Ek Meloksikam post-operatively belirtilen Eğer 24 saat kullanılabilir. Yara klip yaklaşık dokuz gün post-operatively kaldırın. Not: Hiçbir immünsüpresif teknikleri istihdam edilmektedir ve Greft - versus - host hastalığı kanıtı yok sonrası nakli veya ölüm tespit edilmiştir.</li>
</ol>2. germ hücre nakli yumurtalık sağlam farelere tükenmiş.
Not: Bu protokol bir postreproductive kadın bir genç, germ hücreli tükenmiş fare yumurtalık transfer içerir. Bu protokol için yumurtalık alıcıları ve ovariectomy ve nakli yordamlar vardır yukarıdaki gibi ilkel ve birincil foliküller/germ hücrelerinin transplante yumurtalık kimyasal olmuştur özel durumla tükenmiş. İkincil ve antral folikül kalan işe alım/atrezi yumurtalık germ hücreleri yoksun bırakarak geçirecek. Germ hücreli tükenmesi 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) ile de açıklanan16' dır. VCD bir toksindir. VCD tedavi yumurtalıklarda sigara tedavi fare için nakledilen çünkü bu yordamı VCD tedavi yumurtalık VCD toksik etkileri maruz değil bir Mouse yararlanır. Bu iletişim kuralı için germ hücre-tükenmesi genç, yumurtalık-donör farelerde ile ilgili yordamı açıklamaktadır.
<ol><li>VCD (64 mg/mL) kadar kullanmak için enjeksiyon ve mağaza 4 ° C'de susam yağı oranında seyreltin.</li>
	<li>Yumurtalık bağış günde bir VCD I.P. (160 mg/kg) ile 15 yaş 28 gün başlayan gün için enjekte et. Denetim fare aynı programı aşağıdaki susam yağı ile enjekte.</li>
	<li>Yaş 50 gün VCD-tedavi ve petrol sadece tedavi fareler üreme endüstriyel kesilmesi için yukarıdaki gibi 10 gün boyunca kontrol edin. Yaş 60 gün VCD tedavi fareler Gonad giriş saytolojik bulgusuna görüntülenmelidir.</li>
	<li>Yumurtalık 60 günlük eski fare yeniden elde etmek ve yukarıdaki gibi nakli.</li>
	<li>Yumurtalık germ hücreli tükenmiş başarılı nakli tarafından üreme bisiklet bir eksikliği ve androstenedion dolaşan için daha yüksek düzeyde algılamayı belirler. Androjen: östrojen oranları artış anlamlı germ hücreli tükenmesi VCD17ile sonra.</li>
	<li>Vajinal Sitoloji 10-14 gün postoperatively başlatmak ve endüstriyel doğru belirlenmesi emin olmak en az 10 gün üst üste için veri toplamak.</li>
</ol>

<ol>
	<li>National Institutes of Health, Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development, Fertility and Infertility Branch. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Fertility+Status+as+a+Marker+of+Overall+Health'.+"Support+studies+that+investigate+fertility+status+as+a+marker+of+overall+health+for+both+men+and+women".">'Fertility Status as a Marker of Overall Health'. "Support studies that investigate fertility status as a marker of overall health for both men and women".</a> New Research Priorities. , (2016).</li><li>Eisenberg, M. L., Li, S. F., Behr, B., Cullen, M. R., Galusha, D., Lamb, D. J., Lipshultz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semen+quality,+infertility+and+mortality+in+the+USA.">Semen quality, infertility and mortality in the USA.</a> Hum. Reprod. 29 (7), 1567-1574 (2014).</li><li>Thom, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.+Heart+disease+and+stroke+statistics+-+2006+update+-+A+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Heart disease and stroke statistics - 2006 update - A report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113 (6), E85-E151 (2006).</li><li>Shuster, L. T., Rhodes, D. J., Gostout, B. S., Grossardt, B. R., Rocca, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Premature+menopause+or+early+menopause:+Long-term+health+consequences.">Premature menopause or early menopause: Long-term health consequences.</a> Maturitas. 65 (2), 161-166 (2010).</li><li>Jacobsen, B. K., Knutsen, S. F., Fraser, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+at+natural+menopause+and+total+mortality+and+mortality+from+ischemic+heart+disease:+The+Adventist+health+study.">Age at natural menopause and total mortality and mortality from ischemic heart disease: The Adventist health study.</a> J Clin Epidemiol. 52 (4), 303-307 (1999).</li><li>Kulaksizoglu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+Factors+for+Diabetes+Mellitus+in+Women+with+Primary+Ovarian+Insufficiency.">Risk Factors for Diabetes Mellitus in Women with Primary Ovarian Insufficiency.</a> Biol Trace Elem Res. 154 (3), 313-320 (2013).</li><li>Johnell, O., Kanis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+estimate+of+the+worldwide+prevalence+and+disability+associated+with+osteoporotic+fractures.">An estimate of the worldwide prevalence and disability associated with osteoporotic fractures.</a> Osteoporos Int. 17 (12), 1726-1733 (2006).</li><li>Rosario, E. R., Chang, L., Head, E. H., Stanczyk, F. Z., Pike, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+levels+of+sex+steroid+hormones+in+men+and+women+during+normal+aging+and+in+Alzheimer's+disease.">Brain levels of sex steroid hormones in men and women during normal aging and in Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Aging. 32 (4), 604-613 (2011).</li><li>Cargill, S. L., Medrano, J. F., Anderson, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infertility+in+a+line+of+mice+with+the+high+growth+mutation+is+due+to+luteal+insufficiency+resulting+from+disruption+at+the+hypothalamic-pituitary+axis.">Infertility in a line of mice with the high growth mutation is due to luteal insufficiency resulting from disruption at the hypothalamic-pituitary axis.</a> Biol Reproduction. 61 (1), 283-287 (1999).</li><li>Mason, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+young+ovaries+restored+cardioprotective+influence+in+postreproductive-aged+mice.">Transplantation of young ovaries restored cardioprotective influence in postreproductive-aged mice.</a> Aging Cell. 10 (3), 448-456 (2011).</li><li>Mason, J. B., Terry, B. C., Merchant, S. S., Mason, H. M., Nazokkarmaher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+Ovarian+Function+Significantly+Influenced+Trabecular+and+Cortical+Bone+Volume,+Architecture+and+Density+in+Mice+at+Death.">Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Trabecular and Cortical Bone Volume, Architecture and Density in Mice at Death.</a> Plos One. 10 (12), 15 (2015).</li><li>Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+Ovarian+Function+Significantly+Influenced+Sarcopenia+in+Postreproductive-Age+Mice.">Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Sarcopenia in Postreproductive-Age Mice.</a> J. Transplant. , (2016).</li><li>Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+immune+and+renal+function+in+aged+females+by+re-establishment+of+active+ovarian+function.">Restoration of immune and renal function in aged females by re-establishment of active ovarian function.</a> Reprod. Fertil. Dev. , (2017).</li><li>Parkinson, K. C., Peterson, R. L., Mason, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+behavior+and+sensory+function+were+significantly+influenced+by+restoration+of+active+ovarian+function+in+postreproductive+mice.">Cognitive behavior and sensory function were significantly influenced by restoration of active ovarian function in postreproductive mice.</a> Exp. Geront. 92, 28-33 (2017).</li><li>Cargill, S. L., Carey, J. R., Muller, H. G., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+of+ovary+determines+remaining+life+expectancy+in+old+ovariectomized+mice.">Age of ovary determines remaining life expectancy in old ovariectomized mice.</a> Aging Cell. 2 (3), 185-190 (2003).</li><li>Brooks, H. L., Pollow, D. P., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VCD+Mouse+Model+of+Menopause+and+Perimenopause+for+the+Study+of+Sex+Differences+in+Cardiovascular+Disease+and+the+Metabolic+Syndrome.">The VCD Mouse Model of Menopause and Perimenopause for the Study of Sex Differences in Cardiovascular Disease and the Metabolic Syndrome.</a> Physiology. 31 (4), 250-257 (2016).</li><li>Rivera, Z., Christian, P. J., Marion, S. L., Brooks, H. L., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+Capacity+of+Residual+Ovarian+Tissue+in+4-Vinylcyclohexene+Diepoxide-Treated+Mice.">Steroidogenic Capacity of Residual Ovarian Tissue in 4-Vinylcyclohexene Diepoxide-Treated Mice.</a> Biol. Reprod. 80 (2), 328-336 (2009).</li><li>Yuan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+inbred+strains+of+mice:+study+design+and+interim+report+on+median+lifespans+and+circulating+IGF1+levels.">Aging in inbred strains of mice: study design and interim report on median lifespans and circulating IGF1 levels.</a> Aging Cell. 8 (3), 277-287 (2009).</li><li>Mason, J. B., Cargill, S. L., Anderson, G. B., Carey, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Young+Ovaries+to+Old+Mice+Increased+Life+Span+in+Transplant+Recipients.">Transplantation of Young Ovaries to Old Mice Increased Life Span in Transplant Recipients.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 64 (12), 1207-1211 (2009).</li><li>Harrison, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acarbose,+17-alpha-estradiol,+and+nordihydroguaiaretic+acid+extend+mouse+lifespan+preferentially+in+males.">Acarbose, 17-alpha-estradiol, and nordihydroguaiaretic acid extend mouse lifespan preferentially in males.</a> Aging Cell. 13 (2), 273-282 (2013).</li><li>Manay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#945;-Estradiol+Attenuates+Neuron+Loss+in+Ovariectomized+Dtg+A&#946;PP/PS1+Mice.">17&#945;-Estradiol Attenuates Neuron Loss in Ovariectomized Dtg A&#946;PP/PS1 Mice.</a> J. Alzheimers Dis. 23 (4), 629-639 (2011).</li><li>Parker, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+conservation+at+the+time+of+hysterectomy+and+long-term+health+outcomes+in+the+nurses'+health+study.">Ovarian conservation at the time of hysterectomy and long-term health outcomes in the nurses' health study.</a> Obstet Gynecol. 113, 1027-1037 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Ovariectomy ve bozulmamış ve germ hücreli tükenmiş yumurtalık nakli için 18 ay-in yaş 21 gün arasında değişen farelerde yapılmıştır. Nerede bu yumurtalık bursa olduğu gibi korumak için arzu edilir bir ovariectomy işlemi sırasında bursal doku incising zaman bakım alınması gerekir. Fareler altı ay-in yaş büyük, bursa çoğunu erişim için kullanılan alanları sınırlar yağ yastığı ile overlaid olur. Bu gibi durumlarda, bursa yağ yastığı sınırına yakın açık gözyaşı daha avantajlıdır. Bu yöntem genellikle 'yeni yumurtalık bursa içeri sokmak için ' bursal doku daha kolay erişilebilir bir 'cep' bırakır. Bu yaklaşım aynı zamanda daha az bursal doku kapatmak için dikiş gerekebilir. Bursa'da açılış yanal dönen de yeni yumurtalık dikiş sırasında tutmak yardımcı olabilir.
Bazen, bursal doku nedeniyle aşırı yağ yastığı kapsamı, sıra dışı yönlendirme sistemi yaygın olarak açılacak ya da almak zor yumurtalık dokusu parçaları yeniden elde etmek için gerekir. Bu gibi durumlarda, yeni yumurtalık etkili 'bursa sıkışmış değil'. Yumurtalık üstüne açık bursa ayarlanır ve yumurtalık yarısından fazlası kalan bursal doku ile kaplıdır, çanta-dize dikiş de yırtık kenarından bursa ve yumurtalık çevreleyen yerleştirilir. Çanta-dize yavaş yavaş sıkılır gibi yumurtalık kalan bursa itti ve bursa yeterince yumurtalık tutmak için kapalı, ama tamamen yakın olmayabilir. Yumurtalık üstüne açık bursa ayarlanır ve yumurtalık yarısından daha az kalan bursal doku ile kaplıdır, dikiş iyi kapalı yırtık bursa bursa karşı tarafta aracılığıyla yumurtalık aracılığıyla bir tarafta kenarına yerleştirilir ve üst üzerinde dokuma Yumurtalık. Bu yöntem birden fazla dikiş gerekli olabilir ve yumurtalık tam kapsamýnda bursal doku tarafından oluşturmayacaktır. Ancak, bu yöntem yumurtalık yere tutun ve etkili revaskülarizasyon ve yumurtalık faaliyetinin nihai yeniden başlamasını sağlar.
Nerede bu yumurtalık bursa olduğu gibi korumak için arzu edilir bir ovariectomy işlemi sırasında tüm endojen Yumurtalık dokusunun kaldırılır emin olmak için de bakım alınmalıdır. Bu büyük bir endojen yumurtalık ile zor olabilir. Mümkün olduğunca çok bursal doku olarak korumak için büyük yumurtalıklar parçalar halinde kaldırılabilir. Ancak, bu yöntemi kullanırken, ekstra dikkat tüm endojen yumurtalık dokusu kaldırılır emin olmak için kullanılmalıdır. Sonra yumurtalık parçası kaldırılır ve bursa kan ile dolu bu zor olabilir. Kan durdurucu sargı Köpük yastık küçük bir parça kan yerinden ve bursa içinde pıhtı yardım açık bursa içine yerleştirilebilir. Sonra 30-60 s, Kan durdurucu sargı Köpük yastık kaldırılır ve bursa denetlenir (bursa da hafifçe tuz ile durulanır) kalan herhangi bir yumurtalık parçaları varlığı için.
Transplante yumurtalık kendine kurulan kan kaynağı ayrılması yumurtalık nakli gerektirir ve onun yeni ev yumurtalık revaskülarizasyon hemen değil. Bu nedenle, özellikle olgun ve/veya işe köklerinin içeren bazı nekroz transplante yumurtalık uğrar. Ancak, transplante yumurtalıklar büyük çoğunluğu kısa bir süre sonra nakli döngüsel etkinliği görüntülemek ve bazı nakli alıcılar ölene kadar geçiş yapmak devam edecektir. Bu nedenle, köklerinin nakli nekroz nedeniyle kaybı güçlü yeni ana bilgisayar entegrasyonu transplante yumurtalık'ın kurulması etkilemek için görünmez.
Memeli yaşlanma hakim bir görünümde östrojen sağlık önemli üreme etkisi temsil eder. Dramatik değişiklikler sağlık eski yeni yumurtalık alınan fareler kolayca östrojen düzeyleri dolaşan basit bir geri yükleme görevden görülmektedir. Ancak, bağımsız olarak üç laboratuvarları20tarafından çoğaltılmış bir son çalışmada 17-α-estradiol kadın yaşam ne zaman 10 aydan fed süresi üzerinde bir etkisi vardı. Bu kesinlikle daha iyi bilinen 17-β-estradiol olarak aynı hormon değil ama birçok sağlık ilişkili östrojen etkileri 17-α-estradiol sinyal21' e atfedilen. Östrojen tedavisi çok yaşa bağlı patolojiler üzerinde hem olumlu hem de olumsuz etkileri Postmenopozal Kadınlarda var olduğu gösterilmiştir ve genç kadınlarda olduğu gibi açıkça Postmenopozal Kadınlarda aynı etkiye sahip değil. Germ hücreli uyarılmış östrojen üretimi, menopoz, üreme için kritik olmakla birlikte daha da postreproductive yumurtalıkların çıkarılması ölüm oranları arttıkça yumurtalık germ hücreli tükenmiş hala öznitelikleri, sağlık teşvik sahip dahil olmak üzere yaşa bağlı hastalıkların22. Fareler Ovariektomili biraz daha kısa ömürleri sham cerrahi fareler (715 gün 728 gün, sırasıyla19vs) daha var. Uzun ömürlü etkileyen mekanizmaları örümceklerle korunmuş, sağlık span için uzantısı memelilerde model organizmalar kanıtlardan bir salt östrojen açıklama karşı savunuyor.
Yumurtalık olan ve olmayan etkin germ hücre nakli sağlık yararları hormon tedavisi yalnız ulaşmak için mücadele ettiğini bir seviyeye geri yükledi. Olumsuz yaşlanma dişilerde etkilenmiştir, sağlık, birçok açıdan olumlu yaşlı farelerde etkin yumurtalık işlevi yeniden kurulması tarafından etkilenebilir. Ancak son pilot çalışmalar bu etkiler, bir dereceye kadar yumurtalık germ hücreli hormona bağımsız olabileceğini düşündürmektedir.

Üreme sağlığı ve yaşam süresi çoğu zaman yanlışlıkla biri olarak sadece üreme yetkinlik kapsayan dönemle sınırlı düşündüm. Yaşam tarzı ve yaşam süresi çoğalma yetkili aşaması ile ilişkili fenotipleri kolayca ön ve postreproductive aşamaları ayrıştırılan iken, sağlık yaşam süresi tüm aşamaları boyunca üreme durumu etkiler. Üreme yetkinlik süre kez kendisi kronolojik hayatı yayılma alanından ayırt üreme yaşam süresi olarak adlandırılır. Bu terminoloji zaman gerçekte iki ömrü belirtme yapay bir ayrılması için oldukça rahat, her ikisi de olayları ile her diğer için yakından bağlı etkileyen, daha sık sık--dan değil, diğeri de etkileyen sensin.
Kanıt son on yıl içinde bireyin üreme durumu kronik sağlık koşulları1geliştirme riski ile ilişkili olduğunu gösterir. Bir çalışmada daha kısa ömürleri ve üreme başarısızlık arasındaki erkekler2bir kohort için belgelenmiştir. Kadınlarda daha da çarpıcı bir ilişkilendirmedir. Kardiyovasküler hastalık Premenopozal kadınlar3' te nadirdir, ancak keskin menopoz4 ve erken yumurtalık yetmezliği5genç kadınlarda kalp-damar hastalıkları yumurtalık yetmezliği artar. İnsülin direnci6 ve kemik kaybı menopoz7 ' de artırmak ve neredeyse üçte iki Amerikalılar Alzheimer hastalığı olan kadınların8vardır. Yumurtalık sinyal sabit değişiklikler Premenopozal, hastalık dayanıklı bir devlet, geçiş Postmenopozal, hastalık yükü devlet için işaretleyin. Bu kararlı geçiş yaşlanma hastalığı riskler hızlandırmak mekanizmaları tanımlamak için bir fırsat sunuyor.
Son zamanlarda, cryopreserved Yumurtalık dokusunun nakli germ hattı hücreleri kemoterapi gibi ortamlardan tıbbi prosedürler geçmesi kadınlarda doğurganlık geri yüklemek için kullanılır. Yumurtalık dokusunun nakli transgenik fareler9dahil olmak üzere yumurtalık tabanlı infertilite ile hayvanlarda uygun yavrular üretmek için kullanılabilir. Yumurtalık nakli üreme işlevi veya kronolojik yaşlanma başına gelen üreme yaşlanma etkisi ayırmak için verimli bir yöntemdir.
Sağlık birçok yönleriyle Yumurtalık hormonlarının köklü destekleyici rolüyle aktif olarak germ hücreleri, artan hastalık riskleri asıl nedeni, menopoz olarak Bisiklete binme üzerinden hormon üretim kaybı implicates. Kadın sağlığı Yumurtalık hormonlarının değeri tartışılmaz olmakla birlikte, bu hormonların peri - ve Postmenopozal Kadınlarda yerine restorasyon genç yumurtalık olan genç kadın tarafından zevk sağlık yararları güvenilmez oldu. Bu sağlık yararları güvenilir heterochronic nakli postreproductive dişi fareler10,11,12,13,14genç yumurtalıklar tarafından geri yüklenir.
Donör ve alıcı fareler üreme durumunu öncesinde ve nakli veya ovariectomy yordamlar sonra tespit edilmelidir. Gonad giriş 12 ay-in yaş, ameliyat öncesi belirtileri görüntülemek meşru postreproductive fareler Bu deneylerden hariç tutulur. Gonad giriş vajinal Sitoloji tarafından belirlenir. Vajinal Sitoloji Datası alıcı fare postreproductive bir durumda ve aktif olarak Bisiklete binme yumurtalık donör farelerde emin olmak en az 10 gün üst üste ön-cerrahi için toplanır. İlk gözükmek bir estrous döngüsü gün döneminden epitel hücreleri parçalanmayabilir olarak tanımlanır (örneğin, proestrus) leukocytic bir süre koşuluyla vajinal smear, çekirdekli epitel hücrelerinin sonraki görünümü önceki gün (örneğin, diestrus) varlığı arasında. Estrus büyük, Skuamöz epitel hücreleri veya hücre çekirdeği olmadan varlığı tarafından belirlenir. Fareler bu döngüsel aktivite önce 10 gün süreyle ekran ve/veya cerrahi belirlenir sonra Gonad girdi süre için sahip olmak. Fareler bu 10 günlük süre önce ve/veya cerrahi belirlenir sonra süre için Gonad giriş için en az bir tam estrous döngüsü görüntüler. Dişi fareler erkek fare varlığında yer alan ya da kirli yatak için gelen bir erkeğin kafes döngüsü-inducing uyaranlara karşı tutarlı pozlama sağlamak için ortaya çıkar.
Bu nakli yordamları iki cerrahlar aynı anda donör ve alıcı fareler üzerinde çalışma ile en verimli bir şekilde gerçekleştirilir. Ancak, yordamları kolayca en sık alıcı fare ovariectomy yordama başlamadan önce Kurtarılan donör yumurtalık ile bir cerrah tarafından yapılır. Bu iletişim kuralı için tek cerrah ile ilgili yordamı açıklamaktadır. Kaldırma ve değiştirme yumurtalık yapılıyor ise mikroskop altında pozlama üreme sistemi ve site kapatma normal bir mikroskop yapılır. Her cerrahi işlemde öğrenme ile kesi siteleri daha büyük olabilir ve ameliyatlar yordamı öğrenirken daha uzun sürer ve genellikle olacak deneyim ile azaltabilirsiniz.

<table><tbody><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Any dissecting scope with an adjustable working distance.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field.</td><td>Stryker/Gaymar</td><td>TP700</td><td>Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields.</td></tr><tr><td>Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract</td><td></td><td></td><td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td></tr><tr><td>Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure.</td><td></td><td></td><td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td></tr><tr><td>Suture material for abdominal wall</td><td>eSutures</td><td>G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18&quot; HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED</td><td></td></tr><tr><td>Suture material for ovarian bursa</td><td>eSutures</td><td>2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5&quot; BV130-5 TAPER</td><td>10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field.</td></tr><tr><td>Absorbable gelatin sponge</td><td>PFIZER.</td><td>Gelfoam- PFIZER 09-0315-08.</td><td>cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions.</td></tr><tr><td>Staples for skin closure</td><td>Becton Dickinson</td><td>MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)</td><td></td></tr><tr><td>Eye ointment.</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>Puralube sterile opthalmic ointment</td><td></td></tr><tr><td>Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>BD 305536</td><td>27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml</td></tr><tr><td>Syringes for saline.</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>BD 309657.</td><td>3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle</td></tr><tr><td>Clippers/blade</td><td>Andis</td><td>Super AGR+&amp;trade; Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge&amp;reg; #40 blade.</td><td>Any clippers with a fine blade.</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>University chemical supply</td><td></td><td>dilute to 70% for use.</td></tr><tr><td>Betadine solution</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>003233</td><td></td></tr><tr><td>2x2 gauze pads</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>003073</td><td>autoclaved with surgery packs</td></tr><tr><td>Borosilicate glass beads</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>Z273619</td><td>Autoclave in sintilation vials</td></tr><tr><td>4-vinylcyclohexene diepoxide</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>94956</td><td></td></tr><tr><td>Sesame oil</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>S3547</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopic ovarian transplantation procedures to investigate the life- and health-span influence of ovarian senescence in female mice

Yumurtalık nakli 1963 yılında ilk Utah State Üniversitesi'nde yapılmıştır. Daha yeni çalışmalarında, memeli yumurtalık heterochronic nakli genç kadın genç yumurtalıklarda sağlık-koruyucu etkilerini araştırmak için kullanılır. Geçerli yordamlar nerede allojenik yumurtalık yumurtalık Bursa'da özgün konumlarına geri nakledilen bir orthotopic ekimi yöntemi kullanır. Bu yumurtalık/yumurtalık dokusu daha yaygın olarak kullanılan heterotopik transplantasyon aksine subkutan veya böbrek kapsülü altında olacaktır. Tüm bu üç yerde etkili revaskülarizasyon transplante dokuların sağlar. Ancak, orthotopic transplantasyon yumurtalık ile en doğal sinyal ortamı sağlar ve hayvan doğal olarak post-operatively çoğaltmak için fırsat sağlar tek işlemdir. Bir ovariectomy işlem sırasında tüm endojen yumurtalık dokusu kaldırmak için dikkat çekmek gerekir. Eğer herhangi bir endojen doku kalır ya da bir yumurtalık kaldırılması yalnızca, varolan doku senescent olur kadar nakledilen doku uykuda kalır. Sırasında transplante yumurtalık revaskülarizasyon çok hızlı bir şekilde oluşur, organ nakli alıcı sinyal rejimi transplante ile ilişkili yeni hipotalamik/hipofiz/Gonad/böbrek üstü (HPG/A) eksene uyum için zaman önemli miktarda alabilir doku. Bu normalde fare yaklaşık 100 gün sürer. Bu nedenle, nakli deneyler bu adaptasyon dönemi karşılamak için tasarlanmış olması. Yumurtalık nakli ile tipik sonuçlar transplante yumurtalık yaş yerine alıcının kronolojik yaş yansıtmak alıcı sağlığında değişiklikleri içerir.

Ovariectomy yaş 21 gün, ergenlik başlangıçlı, üreme sisteminin büyük up-yönetmelik önlemek ve kadın erbezi Ayrıca Gonad hormonları doğrudan etkileri olabilir diğer etkileri ortadan kaldırmak. CBA/J farelerde üreme düşüş genellikle 8-10 ay-in yaş, düzensiz çevrimleri ile başlar. 11 aylıkken farelerin bu satırdaki çoğu kadın tarafından 12 ay-in yaş üreme başarısızlık15 bir noktaya duyarlı yumurtalar tam bir kaybı ile ulaşmış. Bu yaş fareler farklı suşları değişir. İkili ovariectomy/yumurtalık nakli normalde transplante yumurtalık aktivasyonu birkaç gün içinde sonuçlanır. Alıcının endojen Yumurtalık (hemi-ovariectomy) transplantasyon öncesinde her ikisi de kaldırmak için başarısız kalan endojen yumurtalık kaldırılana kadar atıl kalan transplante yumurtalık neden olur. Cerrahi işlemler en sık (exteriorizing yolu) açık bir alanda ve diseksiyon mikroskop (ovariectomy ve nakil yordamları) altında yapılmaktadır.
Ömrü uzatma Ortalama yaşam süresi CBA/J dişi fareler için 644 gün18' dir. (Sahte [yumurtalık kaldırma ve hemen değiştirilmesi] veya nakli) ameliyat fareler en az ameliyat zamanı ile yaşamak için seçildi. Deneme bağlı olarak, bu yaş 11 ila 18 ay oldu. İlk19deneyler, ameliyat yürütülen 11 aylıkken ve sham fareler 728 gün (393 gün ameliyat zaman sonra) ortalama yaşamış ve yeni yumurtalık almak olduğu gibi fare yaşadığı 811 gün (476 gün geçmiş cerrahi, GC-TX-1, şekil 1). Daha yeni bir deneyde, 17 aylıkken ameliyat yapılmıştır ve yeni yumurtalık almak fareler 798 gün yaşadı (281 gün ameliyat, GC-TX-2 süper performanslı geçmiş). Yumurtalık germ hücreli tükenmiş alınan fareler genişletilmiş bu 880 gün için ortalama yaşam süresi (363 gün post-operatively).
Sağlık yayılma alanının uzantısı Alınan yeni, germ hücre içeren yumurtalık önemli ölçüde azalmış kalp-damar hastalıkları10 ve ortopedik hastalığı11 görüntülenen ve çeşitli sağlık önemli gelişme gösterdi fareler parametreleri span. Yeni yumurtalıklar 12 ay-in yaş ve yaş, 16 ayda denetlesinler postreproductive fareler gösterdi azalma mücadele12, geliştirilmiş bağışıklık ve böbrek fonksiyonu13ve geliştirilmiş Bilişsel Davranış ve duyusal işlev14 .
Germ hücreli tükenmesi doğrulanması 28 gün-yaşlı kadın CBA/J fareler tedavisi için VCD ile 15 gün içinde ilkel ve birincil (germ hücre içeren) köklerinin tükenmesi sonuçlanır. Yumurtalık ağırlıkları CBA/J fareler sadece 37 gün üreme endüstriyel (kalıcı vajinal anormalligi), VCD görüntülenmekte tedavi kesilmesi başlanmasından sonra analiz azaltılmış (1.7 mg salt yağı içinde VCD tedavi 0.9 mg vs) ve ilkel tükenmiş ve birincil yumurtalık folikülleri, denetimleri (Şekil 2) ile karşılaştırıldığında.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56638/56638fig1.jpg"> Şekil 1: Ömrü postreproductive alıcıları içinde genç yumurtalık etkisi. Yaşam süresi 11 oranında genişletilmiş 11 aylık farelere nakledilen genç Yumurtalık (GC-Tx-1 n = 60 bayat, alınan 14, 11 ay-in yaş, yeni yumurtalık germ hücre içeren). Genç yumurtalık nakli 17 ay-in yaş, üretilen ömrü uzatma durumunda bir değişiklik yok (GC-Tx-2 süper performanslı n = 60 bayat, alınan 5, 17 ay-in yaş, yeni yumurtalık germ hücre içeren). Transplantasyon öncesi genç yumurtalık germ hücrelerinden tüketen iki katına yaşam süresi % 21 için uzantısı (GD-Tx n = 60 bayat, alınan 5, 17 ay-in yaş, yeni yumurtalık germ hücreli tükenmiş). Yaş ölüm: AAD. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56638/56638fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56638/56638fig2.jpg"> Şekil 2: VCD tükenmesi CBA/J farelerde küçük köklerinin. H & E lekeli bölümler (25 X)(a)bol küçük köklerinin yağ tedavi içinde gösterilen (n = 6) fareler, (B) azaltılmış numaraları VCD tedavi içinde küçük köklerinin (n = 4) fareler ve (C) ve ilkel ve birincil önemli farklılıklar folikül sayıları. Oklar, ilkel ve birincil foliküller gösterir. Hata çubukları temsil SE. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56638/56638fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice at JoVE.com

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Burada açıklanan orthotopic alıcı fare fizyolojisi yumurtalık etkisi değiştirmek için yumurtalık nakli iletişim kurallarıdır. Bu cerrahi işlem yumurtalık etkisi çeşitli türlerde dişi fareler duyurmak için kullanılan ve heterochronic nakillerine ve ex vivo tedaviler uğramıştır yumurtalık nakli içerebilir.

Dişi farelerde yumurtalık yaşlanma ve sağlık-ömrü etkisini araştırmak için Orthotopic yumurtalık nakli yordamları

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

orthotopic-ovarian-transplantation-procedures-to-investigate-life

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

10.7K Görüntüleme.  Utah State University. Burada açıklanan orthotopic alıcı fare fizyolojisi yumurtalık etkisi değiştirmek için yumurtalık nakli iletişim kurallarıdır. Bu cerrahi işlem yumurtalık etkisi çeşitli türlerde dişi fareler duyurmak için kullanılan ve heterochronic nakillerine ve ex vivo tedaviler uğramıştır yumurtalık nakli içerebilir.

Video: Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, regulation occurs at the hypothalamic-pituitary-gonadal axis level and on developing follicles in the ovary. Despite active studies, follicle development mechanisms are not clear because of the several steps involved from the dormant primordial follicle activation to ovulation, and because of the regulation complexity that differs at each follicular stage. To investigate the mechanisms of follicle development, and the dynamics of follicles throughout the estrus cycle, we developed a mouse ovarian tissue culture model that can be used to observe follicle development using a microscope. Systematic follicle development, periodical ovulation, and follicle atresia can all be reproduced in the cultured ovary model, and the culture conditions can be experimentally modulated. Here, we demonstrate the usefulness of this method in the study of the regulatory mechanisms of follicle development and other ovarian phenomena.

Ovarian tissue cultures can be used as models of follicle development, ovulation, and follicle atresia and indicate regulatory mechanisms of dynamic ovarian processes.

Mouse ovarium olayları görselleştirmek için yumurtalık doku kültürü

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

Gelişim Biyolojisi

Accurate Follicle Enumeration in Adult Mouse Ovaries

Sexually reproducing female mammals are born with their entire lifetime supply of oocytes. Immature, quiescent oocytes are found within primordial follicles, the storage unit of the female germline. They are non-renewable, thus their number at birth and subsequent rate of loss largely dictates the female fertile lifespan. Accurate quantification of primordial follicle numbers in women and animals is essential for determining the impact of medicines and toxicants on the ovarian reserve. It is also necessary for evaluating the need for, and success of, existing and emerging fertility preservation techniques. Currently, no methods exist to accurately measure the number of primordial follicles comprising the ovarian reserve in women. Furthermore, obtaining ovarian tissue from large animals or endangered species for experimentation is often not feasible. Thus, mice have become an essential model for such studies, and the ability to evaluate primordial follicle numbers in whole mouse ovaries is a critical tool. However, reports of absolute follicle numbers in mouse ovaries in the literature are highly variable, making it difficult to compare and/or replicate data. This is due to a number of factors including strain, age, treatment groups, as well as technical differences in the methods of counting employed. In this article, we provide a step-by-step instructional guide for preparing histological sections and counting primordial follicles in mouse ovaries using two different methods: [1] stereology, which relies on the fractionator/optical dissector technique; and [2] the direct count technique. Some of the key advantages and drawbacks of each method will be highlighted so that reproducibility can be improved in the field and to enable researchers to select the most appropriate method for their studies.

Here, we describe, compare, and contrast two different techniques for accurate follicle counting of fixed mouse ovarian tissues.

Yetişkin Fare Yumurtalıklarında Doğru Folikül Numaralandırması

Sexually reproducing female mammals are born with their entire lifetime supply of oocytes. Immature, quiescent oocytes are found within primordial ...

Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

Female fertility and reproductive lifespan depend on the quality and quantity of the ovarian oocyte reserve. An estimated 80% of female germ cells entering meiotic prophase I are eliminated during Fetal Oocyte Attrition (FOA) and the first week of postnatal life. Three major mechanisms regulate the number of oocytes that survive during development and establish the ovarian reserve in females entering puberty. In the first wave of oocyte loss, 30-50% of the oocytes are eliminated during early FOA, a phenomenon that is attributed to high Long interspersed nuclear element-1 (LINE-1) expression. The second wave of oocyte loss is the elimination of oocytes with meiotic defects by a meiotic quality checkpoint. The third wave of oocyte loss occurs perinatally during primordial follicle formation when some oocytes fail to form follicles. It remains unclear what regulates each of these three waves of oocyte loss and how they shape the ovarian reserve in either mice or humans.
Immunofluorescence and 3D visualization have opened a new avenue to image and analyze oocyte development in the context of the whole ovary rather than in less informative 2D sections. This article provides a comprehensive protocol for whole ovary immunostaining and optical clearing, yielding preparations for imaging using multiphoton microscopy and 3D modeling using commercially available software. It shows how this method can be used to show the dynamics of oocyte attrition during ovarian development in C57BL/6J mice and quantify oocyte loss during the three waves of oocyte elimination. This protocol can be applied to prenatal and early postnatal ovaries for oocyte visualization and quantification, as well as other quantitative approaches. Importantly, the protocol was strategically developed to accommodate high-throughput, reliable, and repeatable processing that can meet the needs in toxicology, clinical diagnostics, and genomic assays of ovarian function.

Here, we present an optimized protocol for imaging entire ovaries for quantitative and qualitative analyses using whole-mount immunostaining, multiphoton microscopy, and 3D visualization and analysis. This protocol accommodates high-throughput, reliable, and repeatable processing that is applicable for toxicology, clinical diagnostics, and genomic assays of ovarian function.

Farede Gelişmekte Olan Yumurtalık Rezervinin Kantitatif 3D Analizi için Tüm Yumurtalık İmmünofloresansı, Temizleme ve Multifoton Mikroskobu

Female fertility and reproductive lifespan depend on the quality and quantity of the ovarian oocyte reserve. An estimated 80% of female germ cells ...

Mitochondrial Transfer from Mouse Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells into Aged Mouse Oocytes

Due to the decline in the quantity and quality of oocytes related to age, the fertility of women over 35 years of age has declined sharply. The molecular mechanisms that maintain oocyte quality remain unclear, thus it is difficult to increase the birth rate of women over 35 years old at present. Oocytes contain more mitochondria than any type of cell in the body, and any mitochondrial dysfunction can lead to reduced oocyte quality. In the 1990s, oocyte cytoplasmic transfer resulted in great success in human reproduction but was accompanied by ethical controversies. Autologous mitochondrial transplantation is expected to be a useful technique to increase the quality of oocytes that have decreased due to age. In the present study, we used adipose-derived stem cells from aged mice as a mitochondria donor to increase the quality of oocytes of aged mice. Further development of autologous mitochondrial transfer technology will provide a new and effective treatment for infertility in aged women.

Here, we describe the isolation of mitochondria from mouse adipose-derived mesenchymal stem cells, and then transfer the mitochondria into aged mouse oocytes to improve the quality of the oocytes.

Due to the decline in the quantity and quality of oocytes related to age, the fertility of women over 35 years of age has declined sharply. The molecular ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Fare Yumurtalık Yağ Pad içine Transplantasyon

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Tıp

Cell-Specific Paired Interrogation of the Mouse Ovarian Epigenome and Transcriptome

Assessing cell-type-specific epigenomic and transcriptomic changes are key to understanding ovarian aging. To this end, the optimization of the translating ribosome affinity purification (TRAP) method and the isolation of nuclei tagged in specific cell types (INTACT) method was performed for the subsequent paired interrogation of the cell-specific ovarian transcriptome and epigenome using a novel transgenic NuTRAP mouse model. The expression of the NuTRAP allele is under the control of a floxed STOP cassette and can be targeted to specific ovarian cell types using promoter-specific Cre lines. Since recent studies have implicated ovarian stromal cells in driving premature aging phenotypes, the NuTRAP expression system was targeted to stromal cells using a Cyp17a1-Cre driver. The induction of the NuTRAP construct was specific to ovarian stromal fibroblasts, and sufficient DNA and RNA for sequencing studies were obtained from a single ovary. The NuTRAP model and methods presented here can be used to study any ovarian cell type with an available Cre line.

In this protocol, the translating ribosome affinity purification (TRAP) method and the isolation of nuclei tagged in specific cell types (INTACT) method were optimized for the paired interrogation of the cell-specific ovarian transcriptome and epigenome using the NuTRAP mouse model crossed to a Cyp17a1-Cre mouse line.

Fare yumurtalık epigenomu ve transkriptomunun hücreye özgü eşleştirilmiş sorgulaması

Assessing cell-type-specific epigenomic and transcriptomic changes are key to understanding ovarian aging. To this end, the optimization of the ...

Biyoloji

The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Model as a Tool to Study Ovarian Tissue Transplantation

Ovarian tissue cryopreservation and transplantation is an effective strategy for preserving fertility but has one major drawback, namely massive follicle loss occurring shortly after reimplantation due to abnormal follicle activation and death. Rodents are benchmark models for investigating follicle activation, but the cost, time, and ethical considerations are becoming increasingly prohibitive, thus driving the development of alternatives. The chick chorioallantoic membrane (CAM) model is particularly attractive, being inexpensive and maintaining&#160;natural immunodeficiency up to day 17 postfertilization, making it ideal to study&#160;short-term xenografting of human ovarian tissue. The CAM is also highly vascularized and has been widely used as a model to explore angiogenesis. This gives it a remarkable advantage over in vitro models and allows the investigation of mechanisms affecting the early post-grafting follicle loss process. The protocol outlined herein aims to describe the development of a CAM xenografting model for human ovarian tissue, with specific insights into the effectiveness of the technique, the graft revascularization time frame, and the tissue viability across a 6 day grafting period.

The Chick Chorioallantoic Membrane CAM Model as a Tool to Study Ovarian Tissue Transplantation

Here, we describe a protocol for developing a chick chorioallantoic membrane (CAM) xenografting model for human ovarian tissue and demonstrate the effectiveness of the technique, the graft revascularization time frame, and the tissue viability across a 6 day grafting period.

Yumurtalık Dokusu Transplantasyonunu İncelemek İçin Bir Araç Olarak Civciv Korioallantoik Membran (CAM) Modeli

Ovarian tissue cryopreservation and transplantation is an effective strategy for preserving fertility but has one major drawback, namely massive follicle ...

FSH Düzeyi Yükseltilmiş Yumurtalıklı Fare Modeli Geliştirilmesi

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model

During the transition from a reproductive to a nonreproductive phase (menopause), many women experience significant physiological and pathological changes, including decreased bone mass, increased blood lipids, and increased visceral adiposity. Levels of follicle-stimulating hormone (FSH) rise during the menopausal transition. Many studies have shown that FSH in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. Thus, building an animal model that can help study the independent effects of FSH in vivo is particularly important. In this study, C57BL/6 female mice were ovariectomized and supplemented with estradiol valerate (OVX + E2) to eliminate the effect of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The OVX + E2 mice received solvent (N.S.) or different doses of recombinant FSH via intraperitoneal injection to create a mouse model (OVF) characterized by relatively stable estrogen and rising FSH levels. Thus, we successfully generated an experimental mouse model to mimic the early stage of menopause transition, characterized by elevated serum FSH levels. The OVF model has the advantages of being stable, low cost, and easy to operate, which is suitable for studies to explore the extragonadal actions of FSH. Here, we describe detailed protocols for the mouse OVF model.

Yazar Gündemi: Perimenopozal Kadınlarda FSH ve Patofizyolojik Değişiklikler Arasındaki İlişkinin Araştırılması - Bir Fare Modelinden Görüşler 

Follicle-stimulating hormone (FSH) in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. The ovariectomized and FSH-treated mouse model (OVF) can be used to explore the extragonadal actions of FSH.

Dişi farelerde yumurtalık yaşlanma ve sağlık-ömrü etkisini araştırmak için Orthotopic yumurtalık nakli yordamları

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo Tümör Görüntüleme ve İzleme