Bu çalışma NSFC 81570244, FoKo 23/2013 ve SFB 1116 / B01 tarafından ve Kardiyovasküler Araştırma Enstitüsü Düsseldorf (CARID) tarafından finanse edildi.

Tüm deneyler yerel düzenleyici kurum (Nordrhein-Westfalen, Almanya&#39;nın LANUV) tarafından onaylandı ve hayvan kullanımı yönergelerine göre gerçekleştirildi. Hayvanlar standart dondurma diyeti ile beslendi ve ad libitum musluk suyu aldı. Deneyin her adımında gerekli olan tüm ekipman ve kimyasallar Malzeme Tablosu&#39;nda mevcuttur. 1. Lateks Kapağı ve İntraventriküler Balonun Hazırlanması <ol><li> Sıçan kalbinin ortalama boyuyla (vücut ağırlığı 300-350 g) eşleşen bir freze makinesini kullanarak alüminyum kalıp yapın. Süper ince (10/0) ​​zımpara kağıdıyla kalıpları silin. NOT: Kalıbın ayrıntılı ölçümleri Şekil 1A&#39;da gösterilmiştir. </li><li> Lateks kapağını hazırlamak için alüminyum kalıbın boynunu freze makinesine dikey olarak sabitleyin. NOT: Freze makinesi, kalıbın yavaş yavaş döndürülmesine neden olur. Alternatif olarak, bir elektrik motoru kullanılabilir. </<html> li&gt; <li> 20 mL sıvı lateks (ticari olarak satın alın, Malzeme Tablosu&#39;na bakın) 50 mL cam beher içine dökün. </li><li> Kalıbın tüm gövdesi lateks solüsyona dalıncaya kadar kalıp indirin. </li><li> Döndürürken kalıbı yavaşça kaldırın (5 cm / dak.). </li><li> Kalıp yüzeyindeki lateks katılaşıncaya kadar, kalıbı 15 dakika daha karıştırmaya devam edin. </li><li> Ayırırken hasar görmesini önlemek için kalıbın yüzeyine (zaten ince bir lateks film ile kaplı) yaklaşık 1 g talk pudrası ekleyin. </li><li> Kalıp yüzeyinden önceden kurutulmuş lateks kapağı parmaklarla hafifçe ayırın; Lateks kapağı şimdi kullanıma hazırdır ( Şekil 1B ). </li><li> Lateks kapağının çıkışını daha sonra CT&#39;nin toplanması için kullanılan 15 cm silikon tüpüne (KIM. = 0.2 mm) bağlayın. </li><li> Ventriküler lateks balonu su ile doldurun ve 1 mL&#39;lik, su dolu bir şırıngaya bağlı bir L şeklinde metal kanül üzerine sıkıca sabitleyin (&gt; Şekil 1C). NOT: Bu, kalbin dik konumda olmasını sağlamak için kullanılacaktır (aşağıya bakınız). </li><li> Ekli 1 mL şırınga ile birkaç deflasyon / şişirme testi gerçekleştirerek balonun hava geçirmez olduğundan emin olun. </li><li> İlerletilmiş intraventriküler basınç gelişimini ölçmek için kanülü üç yönlü bir durdurucu vasıtasıyla bir basınç transdüktörüne bağlayın ( Şekil 1C ). </li></ol> 2. Krebs-Henseleit Tampon (KHB) ve Langendorff Perfüzyon Sisteminin Hazırlanması <ol><li> Sabit akış (bir silindir pompa tarafından tahrik edilen) veya sabit basınç (bir cam kolondaki statik basınç ile üretilen) modunu kullanarak bir Langendorff perfüzyon sistemi oluşturun. NOT: Langendorff kalp preparatının ayrıntıları daha önce 12 açıklanmıştır. </li><li> Modifiye edilmiş bir KHB&#39;nin 2 L&#39;si hazırlayın (mM: 116.02 NaCl, 4.63 KC1, 1.10 MgS04.7H20, 1.21 K2 HPO4 </suB&gt;, 2.52 CaCl2 · 2H20, 24.88 NaHC03, 8.30 D-glikoz ve 2.0 sodyum piruvat). <ol><li> Tüm kimyasalları ancak CaCl 2 tartın ve 2 L&#39;lik bir şişede 1.8 L&#39;lik iki damıtık suda çözündürün. </li><li> Ortamı karboksilik (% 95 O 2 /% 5 CO 2 ) ile manyetik karıştırma altında dengelemede (pH: 7.4) en az 5 dakika kabarcık haline getirin. </li><li> 0.74 g CaCI2.2H20 ilave edin ve toplam hacmi, iki kez damıtılmış su ile 2 L&#39;ye getirin. </li><li> Karbondioksit ile ortamı 5 dakika daha karıştırıp köpürtmeye devam edin. </li><li> Kalbin mikrosirkülasyonunu engelleyebilecek küçük parçacıkları ortadan kaldırmak için KHB&#39;yi 0.2 um filtreyle filtreleyin. </li></ol></li><li> Langendorff perfüzyon sisteminin hazırlanması. <ol><li> Filtrelenen KHB&#39;yi önceden ısıtılmış su banyosuna (38 ° C) yerleştirin; 100 cmH2O basınç içerecek şekilde karbogen ile kabarcık tutunE KHB rezervuarını. </li><li> KHB ile Langendorff perfüzyonu için 100 cmH2O hidrostatik basıncı oluşturmak için rezervuarı cam kolona bağlayın; Karbon ile kolonun içindeki KHB&#39;yi kabarcıklandırmaya devam edin. </li><li> Aortik kanül çıkışındaki sıcaklık 37 ° C olacak şekilde ısıtma sisteminin sıcaklığını ayarlayın. </li><li> Boru sisteminin kabarcıksız olduğundan emin olun. </li><li> KHB&#39;deki PO2 500-600 mmHg&#39;ye (bir kan gazı analizörü ile ölçülene kadar) ulaşana kadar, KHB&#39;yi karbojen ile oksijenle ilave 5 dakika oksijenleyin. </li></ol></li><li> Perfüzyon sistemini, 100 cmH2O sabit bir basınçta veya manuel anahtarlama kullanarak yaklaşık 10-20 mL / dakika sabit bir akış halinde çalıştırmak üzere ayarlayın. Alternatif olarak, perfüzyon moduna anında geçiş yapmak için değiştirilebilir bir STH pompa kontrol cihazı kullanın. </li></ol> 3. Kalp Yalıtımı ve Kanülasyon NOT: Vücut ağırlığı 30 olan erkek Wistar sıçanları0-350 g kalp boyutları ön dökme lateks kapağı ile eşleşecek şekilde kullanılmıştır. Sıçanlar sol atardamardan 50 dakika boyunca inen (LAD) bağlandıktan sonra reperfüzyon uygulandı veya sahte ameliyat edildi. Miyokard infarktüsünün (MI) indüksiyonu için metodolojinin ayrıntıları başka yerlerde bildirilmiştir 13 . Enfarktüslü hayvanlarda yapılan ters kalp deneyleri ameliyattan 5 gün sonra gerçekleştirildi. <ol><li> Bir hayvan tutma odasına (20 L) bağlı bir izofluran buharlaştırıcı (% 2 V / V) kullanarak sıçanlara anestezi uygulayın. </li><li> Derin anesteziye ulaşıldıktan sonra sıçanları bir çalışma masasına (sıcaklık kontrollü değil) aktarın. </li><li> Forseps kullanarak göğüs kemiğinin hemen altındaki cildi ve kasları kaldırın ve ağır makaslarla kaburgaların alt kenarlarında kesin. </li><li> İnce makas kullanarak, kaburga kenarında diyaframın içine küçük bir kesit yapın. Tüm ventral göğüs duvarının bir flebi yapmak için kaburgaları kaudally kesin. </li><li> Kalbi başparmak ile hafifçe kapın aIndeks ve orta parmakları kaldırın ve yavaşça kaldırın böylece kalp damarları hafif gerilir. </li><li> Aort tamamen açığa çıkıncaya kadar kalbi tüketin. </li><li> Kalbi, 50 mL buz soğukluğundaki KHB (4 ° C) içeren 100 mL&#39;lik bir behergreye yerleştirin ve perfüzyon aparatına taşıyın. </li><li> Hemen kalpten aort yoluyla damlayan bir kanül üzerine monte edin ve dikişle sıkıca tutun (4-0). Kalbe giren hava kabarcığından kaçının. </li><li> Sabit perfüzyon basıncı uygulayın (100 cmH 2 O). Alternatif olarak, tam akış hızı (20 mL / dakika ile başlanarak) uygulanabilir. Not: Toraksın açılmasından yüreğin perfüzyon kanülüne bağlanmasına kadar olan süre deneyimli bir operatörün elinde yaklaşık 3 dakika sürmelidir. </li></ol> 4. Reversed-heart Model <ol><li> Kalbin arka duvarı yüzü görünene dek aortik kanülü yavaşça döndürün. </li><li> Bağ dokusunu makasla çıkartınSol atriyumun açılmasını açığa çıkararak intraventriküler kanülasyona hazır hale getirir. </li><li> Sol atriyum yoluyla katı bir katetere tutturulmuş havalandırılmış lateks balonu sol ventriküle yerleştirin. </li><li> Balonu, tüm ventriküler boşluğu doldurana kadar şişirin (şişirme hacmi şırıngada önceden işaretlenmiştir). </li><li> Kalbi ters çevene kadar ters çevirin, bunu intraventriküler balon kateteri ile destekleyin. </li><li> Şekil 1C&#39;de gösterildiği gibi, sert bir metal kateteri ile intraventriküler balon kullanılarak ters çevrilmiş kalbi dik konumda mekanik olarak stabilize eder. </li><li> Aort kökünün aşırı bükülmesini önlemek için kalbin pozisyonunu ayarlayın. </li><li> Diyastolik basıncı 3-5 mmHg&#39;ye ayarlayın (intra-ventriküler balon ile ölçülür; bkz. Şekil 1C ). </li><li> Kalbin epikardiyal yüzeyini gözleyin ve küçük damlacıkların oluşmasını sağlayın. </li><li> Lateks kapağı o yerleştirinParmaklarını kullanarak tüm kalbi hafifçe bastırarak kalbe yüzeye sürükleyin. </li><li> Lateks kapağın ventriküler yüzeyin çoğunu kapladığından emin olun. </li><li> Varsa, kapak ve tüp içindeki hava kabarcıklarını 1 mL&#39;lik şırıngayla hafifçe emerek çıkarın. </li><li> CT-letting hortumunun distal açıklığını kalbin yatay seviyesinin 10 cm altına ayarlayın. NOT: Bu prosedür, negatif hidrostatik basınca karşı hafif emmeyi sağlar. </li><li> NaCl ile 1: 1 oranında karıştırılmış buz içine yerleştirilmiş 1.5 mL&#39;lik bir toplama tüpünde damlalar toplayın. Yaklaşık 0.15-1.5 mL BT toplayın. NOT: Buz / NaCl karışımı, toplama borusundaki sıcaklığı sıfırdan (yaklaşık -4 ° C) sabitleştirir. NOT: Örnekleme süresi, deneysel amaca bağlıdır. BT&#39;nin akış hızı, sahte işletilen hayvanlarda (n = 3) yaklaşık 27 ± 20 μL / dk ve koroner lige olan hayvanlar için (n = 11) 100 ± 47 μL / dk&#39;dır. </li><li> BT örneklerini tartın ve snap-freeze edinSıvı azot içinde eritin ve sonraki ölçümler için onları -80 ° C&#39;de saklayın. </li></ol> 5. CT&#39;nin analizi <ol><li> Bilimsel soruna bağlı olarak, metabolitlerin analizi için CT sıvısını kullanın. NOT: Şekil 2 ve Şekil 3&#39;te gösterilen veriler sabit basınçlı bir perfüzyon (100 cmH20) &#39;dan toplanmış ve yaklaşık 0.15-1.5 mL CT sıvısı 10 dakika içinde toplanmıştır. Bu zaman ve hacim, çeşitli purinlerin proteomik (minimum 50 μL; Şekil 2 ) 14 ve HPLC (minimum: 20 μL; Şekil 3 ) için yeterliydi. </li></ol>

<ol>
	<li>Henkel, D. M., Redfield, M. M., Weston, S. A., Gerber, Y., Roger, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+in+heart+failure:+a+community+perspective.">Death in heart failure: a community perspective.</a> Circ Heart Fail. 1 (2), 91-97 (2008).</li><li>Limana, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+induces+embryonic+reprogramming+of+epicardial+c-kit(+)+cells:+role+of+the+pericardial+fluid.">Myocardial infarction induces embryonic reprogramming of epicardial c-kit(+) cells: role of the pericardial fluid.</a> J Mol Cell Cardiol. 48 (4), 609-618 (2010).</li><li>Brunner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+tissue+endothelin-1+levels+under+basal,+stimulated,+and+ischemic+conditions.">Cardiac tissue endothelin-1 levels under basal, stimulated, and ischemic conditions.</a> J Cardiovasc Pharmacol. 26, S44-S46 (1995).</li><li>de Lannoy, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renin-angiotensin+system+components+in+the+interstitial+fluid+of+the+isolated+perfused+rat+heart.+Local+production+of+angiotensin+I.">Renin-angiotensin system components in the interstitial fluid of the isolated perfused rat heart. Local production of angiotensin I.</a> Hypertension. 29 (6), 1240-1251 (1997).</li><li>Strupp, M., Kammermeier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Lactate+And+Glucose-Concentrations+Of+the+Isolated-Perfused+Rat-Heart+before,+during+And+after+Anoxia.">Interstitial Lactate And Glucose-Concentrations Of the Isolated-Perfused Rat-Heart before, during And after Anoxia.</a> Pflugers Arch. 423 (3-4), 232-237 (1993).</li><li>Wienen, W., Jungling, E., Kammermeier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme-Release+into+the+Interstitial+Space+of+the+Isolated+Rat-Heart+Induced+by+Changes+in+Contractile+Performance.">Enzyme-Release into the Interstitial Space of the Isolated Rat-Heart Induced by Changes in Contractile Performance.</a> Cardiovasc Res. 28 (8), 1292-1298 (1994).</li><li>De Deckere, E. A., Ten Hoor, ., P, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+Langendorff+technique+for+metabolic+investigations.">A modified Langendorff technique for metabolic investigations.</a> Pflugers Arch. 370 (1), 103-105 (1977).</li><li>Tschubar, F., Rose, H., Kammermeier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+transfer+across+the+myocardial+capillary+wall.">Fatty acid transfer across the myocardial capillary wall.</a> J Mol Cell Cardiol. 25 (4), 355-366 (1993).</li><li>Wienen, W., Kammermeier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-+and+extracellular+markers+in+interstitial+transudate+of+perfused+rat+hearts.">Intra- and extracellular markers in interstitial transudate of perfused rat hearts.</a> Am J Physiol. 254 (4 Pt 2), H785-H794 (1988).</li><li>Sasse, A., Ding, Z. P., Wallich, M., Godecke, A., Schrader, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+transfer+of+adenovirus+is+augmented+by+nitric+oxide+in+the+rat+heart.">Vascular transfer of adenovirus is augmented by nitric oxide in the rat heart.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (3), H1362-H1368 (2004).</li><li>Gnecchi, M., Zhang, Z., Ni, A., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+in+adult+stem+cell+signaling+and+therapy.">Paracrine mechanisms in adult stem cell signaling and therapy.</a> Circ Res. 103 (11), 1204-1219 (2008).</li><li>Herr, D. J., Aune, S. E., Menick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+Assessment+of+Ischemia-reperfusion+Injury+in+Langendorff-perfused+Rat+Hearts.">Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts.</a> J Vis Exp. (101), e52908 (2015).</li><li>Ding, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium-Derived+Cells+Formed+After+Myocardial+Injury+Display+Phagocytic+Activity+Permitting+In+Vivo+Labeling+and+Tracking.">Epicardium-Derived Cells Formed After Myocardial Injury Display Phagocytic Activity Permitting In Vivo Labeling and Tracking.</a> Stem Cells Transl Med. 5 (5), 639-650 (2016).</li><li>Hartwig, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretome+profiling+of+primary+human+skeletal+muscle+cells.">Secretome profiling of primary human skeletal muscle cells.</a> Biochim Biophys Acta. 1844 (5), 1011-1017 (2014).</li><li>Smolenski, R. T., Lachno, D. R., Ledingham, S. J. M., Yacoub, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+sixteen+nucleotides,+nucleosides+and+bases+using+high-performance+liquid+chromatography+and+its+application+to+the+study+of+purine+metabolism+in+hearts+for+transplantation.">Determination of sixteen nucleotides, nucleosides and bases using high-performance liquid chromatography and its application to the study of purine metabolism in hearts for transplantation.</a> J Chromatogr. 527 (2), 414-420 (1990).</li><li>Decking, U. K., Juengling, E., Kammermeier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+transudate+concentration+of+adenosine+and+inosine+in+rat+and+guinea+pig+hearts.">Interstitial transudate concentration of adenosine and inosine in rat and guinea pig hearts.</a> Am J Physiol. 254 (6 Pt 2), H1125-H1132 (1988).</li><li>Heller, L. J., Mohrman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimates+of+interstitial+adenosine+from+surface+exudates+of+isolated+rat+hearts.">Estimates of interstitial adenosine from surface exudates of isolated rat hearts.</a> J Mol Cell Cardiol. 20 (6), 509-523 (1988).</li></ol>

Yazarlar rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.

Ters kalp modeli, iyi kurulmuş Langendorff kalp perfüzyon tekniğine 12 dayalıdır ve kalbi ters çeviren bir pozisyona çevirerek ve bu pozisyonu katı bir intra-ventriküler balon kateteri kullanarak tutarak gerçekleştirilir. Böyle bir şekilde, kalp interstisyel transüdat, kalbin tabanından yerçekimi damlamasıyla, koroner venöz atık perfüzattan fiziksel olarak ayrılabilir. BT tüm kalbin yüzeyine yerleştirilen ince ve esnek bir lateks kap yardımıyla sürekli toplanabilir. Bu yöntem, Langendorff cihazına ek olarak en düşük maliyetle gerçekleştirmek kolaydır. Bununla birlikte, bazı basamaklar, tekrarlanabilir ve kararlı sonuçlar elde etmek için teknik açıdan kritiktir. Bunlara, lateks kapağın kalbin şekline uygun olmasını ve atriyumların değil, ventriküllerin yüzeyinin yaklaşık% 90&#39;ını kaplamasını sağlar. Exc&#39;den itibaren zamanUzamış iskemi, kalp metabolizmasını değiştirme ve kalp transüda- tının oluşumu riskini taşıdığı için kalpten hayvandan retroperfüzyonun performansına kadar geçen süre 3 dakikadan az olmalıdır. İntraventriküler balon ile ölçülen diastolik sol ventriküler basınç, ventriküler boşluğu (3-5 mmHg) dolduracak şekilde ayarlanmalıdır. Aşırı şişirilmiş balon vasküler kompresyon ile koroner akışı değiştirebilir. İlgilenilen metabolitlerin ve proteinlerin herhangi bir potansiyel bozulmasını önlemek için numune şişesi (1.5 mL tüp) buz üzerinde tutulmalıdır. Buna ek olarak, başarılı deneyler kritik olarak, kalp hazırlığı, izolasyonu ve kanülasyonu sırasında iyi manuel kullanıma bağlıdır. Bu uygulama gerektirir. Kalpleri iskemik hasardan korumak için tüm hazırlıklar buz gibi soğuk KHB ile yapılmalıdır. Kalbin boyutları, sıçanlar arasında farklılık gösterebileceğinden, benzer vücut ağırlığına rağmen, hafifçe hazırlanmış lateks kapakların kullanılması önerilirKalbin farklı boyutlarına uyan farklı boyutlar. İzole edilmiş ters kalp yöntemi, izole edilmiş sıçan 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 ve kobay kalp 16 için daha önce tanımlanmış olup farklı amaçlar için kullanılmıştır. Metodolojiyi tanımlamak için, deney düzeneğinde ve örnek işleme için bazı değişiklikler getirdik. Örneğin Deckere ve ark. Tarafından getirilen pulmoner arter kanülasyonu, 7 , burada gerçekleştirilmedi, çünkü kalbin ters çevrilmiş konumu, venöz atık perfüzat ile olası kontaminasyonu önledi. CT için toplama cihazı, CT-izin borusunun açılmasını düşürerek hafif bir negatif basınç getirerek basitleştirildiTers kalp altında 10 cm. Bu, transüda ait numunelerin derhal soğutulmasını kolaylaştırır. Numune CT&#39;sinin hızlı bir şekilde soğumasını sağlamak için, toplama bardakları, eşit hacimde bir buz ve NaCl karışımı ( ör., 1: 1 oranında) yerleştirilerek -4 ° C sıcaklığa soğutulmuştur. Bu, toplanan BT numunelerinin hızlı soğumasına izin verdi. Genellikle, izole edilmiş sıçan kalbi, interstisyel sıvı oluşumunun salinle perfüze edilmiş kalpte olduğundan daha az olması nedeniyle in vivo fizyolojik koşullardan farklı olduğunu akılda tutmalıdır. Dolayısıyla, izole kalp tarafından oluşturulan BT , canlı organizma içi interstisyel sıvının gerçek kompozisyonunu bütünüyle taklit edemez. Buna ek olarak, mevcut düzenleme, venöz atık perfüzat ile potansiyel kontaminasyonun tamamen dışlanmasına izin vermemektedir. Bununla birlikte, venöz çıkış, kardiyak tabanda (dik kalpteki en düşük seviye) bulunduğu için, inanmıyoruzBu bulaşma toplama sürecine katkıda bulunur. Bu protokol, interstisyel sıvıda kardiyomiyositler ve kalp dışı hücreler, örneğin bağışıklık hücreleri, endotel hücreleri, vasküler düz kas hücreleri, fibroblastlar tarafından salınan çok sayıda metabolit ve protein içeren örnek kardiyak interstisyel sıvıya özgü bir yöntemi açıklamaktadır. perisitler. Kardiyak interstisyel transüdat, lemfatik sıvının küçük bir kısmı ile birlikte endotel bariyeri 10 boyunca sıvı taşınmasının sonucu olarak oluşur. Kalp metabolitleri 7 , interstisyel boşlukta çözünür faktörler ve kardiyak ve / veya kardiyak olmayan hücrelerin sekretomaları karışımı 9 içerir . Bu nedenle, birkaç hücre türü CT oluşumuna katkıda bulunur. Buna ek olarak, oluşum hızını etkileyen birçok faktör vardır. İlk olarak, onkotik basınç, trans-kapiller&#39;i düzenleyen önemli bir belirteç gibi gözükmektedirPerfüzyon ortamına dekstran veya albümin ekleyerek onkotik basıncın artması CT 9 , 10&#39;un oluşumunu önemli ölçüde azalttı. İkincisi, MI da dahil olmak üzere hipoksi 9 , 16 sırasında vasküler geçirgenlikte bir artış, perfüzatın ekstravazasyonunu ve dolayısıyla BT oluşumunu arttırır. Bu nedenle gelecekteki çalışmalarında, onkotik basıncın artması BT hacminin en aza indirgenmesi için uygun bir araç olabilir ve böylece hedeflenen hedef molekülleri zenginleştirebilir.

Kalp yetmezliği (HF) dünya çapındaki insanlarda önde gelen ölüm nedenidir 1 . HF genellikle miyokardit, iskemik miyokard hasarları ve sol ventriküler yeniden modelleme nedeniyle ortaya çıkar ve kardiyak kontraktil fonksiyonun ve hastaların yaşam kalitesinin ilerleyici bozulmasına neden olur. Kardiyoloji ve kardiyak cerrahideki gelişmeler HF mortalitesinde belirgin bir düşüşe sahip olmakla birlikte, önemli bir morbiditeye sahip olan kaçınılmaz ilerleyici bir hastalık sürecinin geçici &quot;geciktiricileri&quot; olarak görev yapmaktadır. Bu nedenle, mevcut etkin tedavi eksikliği, HF&#39;yi önleyebilecek veya hatta tersine çevirebilecek yeni moleküler hedefleri tanımlama gereksinimini ortaya koymaktadır. Bu, hücre dışı matriksteki değişiklikler, kontrol edilemeyen kardiyak immün yanıt ve kardiyak ve non-kardiyak hücreler arasındaki etkileşimleri içerir 2 . Kardiyak hücrelerin direkt olarak maruz kaldıkları mikro çevreyi tanımak önemlidirYaralı kalbin bağışıklık ve rejeneratif tepkisini şekillendirir. İzole edilmiş salinle perfüze edilen kalpte, CT, fizyolojik ve patofizyolojik koşullar altında 3 , 4 , 5 olmak üzere, interstisyel sıvı boşluğundan ( yani, mikro çevre) türemiş küçük damlacıklar şeklinde kalp yüzeyinde üretilir. Bu nedenle, BT&#39;nin ( yani, interstisyel sıvı) analizi, kalp metabolizmasını ve kontraktil fonksiyonunu düzenleyen faktörlerin belirlenmesine veya hasar gören kalbe göç ettikten sonra immün hücre fonksiyonlarını etkilemesine yardımcı olabilir. Potansiyel olarak, bu, KY tedavisi için yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesine yol açabilir. Kemirgen kalplerdeki BT koleksiyonu teknik açıdan zorlayıcıdır. Düzenli Langendorff perfüze edilen kalpte, BT&#39;nin özel koleksiyonu zordur çünkü BT&#39;nin koronar ile karışımıY venöz atık perfüzat, interstisyel boşluktan salınan herhangi bir metabolit / enzim konsantrasyonunu beklenmedik şekilde inceltir. Bu kısıtlılığın üstesinden gelmek için olası bir strateji, pulmoner kanülle venöz atığın dışlanması ve aynı anda pulmoner ven 7&#39;nin bağlanmasıdır . Bununla birlikte, bu yöntem pulmoner arter ve venin bağlanması ve bağlanması ile ilgili zorluklarla karşı karşıya olup, venöz atığın kardiyak transüda sızmasına neden olabilir. Bir ters kalp modeli kullanma kavramı, ilk önce izole edilmiş, perfüze edilmiş kalbi ters çeviren Kammermeier grubu tarafından ortaya atıldı ve venöz atıkların kontaminasyonu olmaksızın BT&#39;yi sürekli örneklemek için epikardiyal yüzeye ince bir lateks kap yerleştirdi. 8 , 9 . Bu prosedürü kullanarak BT&#39;nin kalpten 9 salınan metabolitlerin çok hassas bir ölçümü sağladığı gösterildi,Yağlı asitlerin 8 kılcal aktarımı ve viral parçacıklar 10 . Daha yakın zamanlarda, lokal immün yanıtı düzenleyen ve kalp anjiyogenezisini 11 arttıran parakrin faktörler, kök hücre temelli kalp hastalığı tedavisinin yararlı etkileri ile ilişkilendirilmiştir. Ters çevrilmiş kalpteki CT&#39;nin analizi, bu bireysel parakrin faktörleri kimyasal olarak tanımlamaya yardımcı olabilir. Buna ek olarak, BT, kalpteki bağışıklık hücrelerinin in vivo aktivasyonuyla ilgili faktörleri tanımlamaya yardımcı olabilir. Burada verilen kalp yüzeyinden CT koleksiyonunun ayrıntılı açıklaması, genel kardiyak fonksiyonla ilişkili bağışıklık hücreleri, fibroblastlar, endotel hücreleri ve kardiyomiyositlerin etkileşimini inceleyen araştırmacılar için deneysel açıdan yararlıdır. Yukarıda belirtildiği gibi, interstisyel sıvı, hücreden hücreye iletişim için bilgiyi kalp içinde taşır;BT uygun bir şekilde toplanarak değerlendirilebilir. Ters çevrilmiş kalpten BT nasıl toplanacağına dair bir video protokolü de dahil olmak üzere ayrıntılı teknik açıklama, bu benzersiz tekniğin gelecekteki uygulamasını kolaylaştırmalıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="815">
	<tbody>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Latex Solution</td>
			<td style="width:129px;">ProChemie</td>
			<td style="width:184px;">Z-Latex LA-TZ</td>
			<td style="width:201px;">&#160;http://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latexla-tz%E2%80%A8</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Aluminum Mold</td>
			<td style="width:129px;">Home made</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Reverse heart model</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Universal Ovens</td>
			<td style="width:129px;">Memmert</td>
			<td style="width:184px;">UNB 400</td>
			<td>Reverse heart model</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Latex Balloon</td>
			<td style="width:129px;">Hugo Sachs</td>
			<td style="width:184px;">Size 4</td>
			<td>Reverse heart model</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Milling Machine</td>
			<td style="width:129px;">Proxxon</td>
			<td style="width:184px;">MF70</td>
			<td>Reverse heart model</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:184px;">SZBD0810V</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Sodium Hydrogen Carbonate</td>
			<td style="width:129px;">Roth</td>
			<td style="width:184px;">68852</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:129px;">Merck</td>
			<td style="width:184px;">49361</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Magnesium Sulphate Heptahydrate</td>
			<td style="width:129px;">Merck</td>
			<td style="width:184px;">58861</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td style="width:129px;">Merck</td>
			<td style="width:184px;">48731</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">D(+)-Glucose Anhydrous</td>
			<td style="width:129px;">Merck</td>
			<td style="width:184px;">83371</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Calcium Chloride Dihydrate</td>
			<td style="width:129px;">Fluka</td>
			<td style="width:184px;">21097</td>
			<td>Chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Balance</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>SE 1202&#160;</td>
			<td>Weighing chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Double Distilled Water</td>
			<td style="width:129px;">Millpore</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Disolving chemicals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Medical Pressure Transducer</td>
			<td style="width:129px;">Gold</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Medical Flow Probe</td>
			<td style="width:129px;">Transonic</td>
			<td style="width:184px;">3PXN</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Heating Circulating Bath</td>
			<td style="width:129px;">Haake&#160;</td>
			<td style="width:184px;">B3 ; DC1</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Laboratory and Vaccum Tubing</td>
			<td style="width:129px;">Tygon</td>
			<td style="width:184px;">R-3603</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Animal Research Flowmeters</td>
			<td style="width:129px;">Transonic</td>
			<td style="width:184px;">T206</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">PowerLab Data Acquisition Device</td>
			<td style="width:129px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:184px;">Chart 7.1</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">LabChart Data Acquisition Software</td>
			<td style="width:129px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:184px;">Chart 7.1</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Peristaltic Pump</td>
			<td style="width:129px;">Glison</td>
			<td style="width:184px;">MINIPULS 3</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Glass Water Column</td>
			<td style="width:129px;">home made</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Water Bath Protective Agent</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td style="width:184px;">462-7000</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:301px;">Sterile Disposable&#160; Filters (0.2&#181;m)</td>
			<td style="width:129px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:184px;">595-4520</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Blood gas analyzers</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td style="width:184px;">ABL90 FLEX PLUS</td>
			<td>Gas analyzer</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td style="width:184px;">UN1170</td>
			<td>Cleaning&#160; tubings</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">100% ethanol</td>
			<td style="width:129px;">Merck</td>
			<td style="width:184px;">64-17-5</td>
			<td>Cleaning tubings</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;">Wistar Rats</td>
			<td style="width:129px;">Janvier</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Animals</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Stainless Scissors</td>
			<td style="width:129px;">AESCULAP</td>
			<td style="width:184px;">BC702R</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Stainless Scissors</td>
			<td style="width:129px;">AESCULAP</td>
			<td style="width:184px;">BC257R</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">Big Forceps&#160;</td>
			<td style="width:129px;">AESCULAP</td>
			<td style="width:184px;">-</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">8m/m Stainless Forceps</td>
			<td style="width:129px;">F.S.T</td>
			<td style="width:184px;">11052-10</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:301px;">superfine (10/0) emery paper</td>
			<td style="width:129px;">3M</td>
			<td style="width:184px;">051111-11694</td>
			<td>Reverse heart model</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the inverted heart model for interstitial transudate collection from the isolated rat heart

Mevcut protokol, izole edilen salinle perfüze edilen fare kalpten kardiyak transüda (BT) toplanmasına olanak tanıyan eşsiz bir yaklaşımı açıklamaktadır. Kalbin Langendorff tekniğine göre izole edilmesi ve retrograd perfüzyonundan sonra, kalp ters çevrilir ve sol ventriküle yerleştirilen bir balon kateteri ile mekanik olarak stabilize edilir. Daha sonra, daha önce sıçan kalbinin ortalama ebadına uyacak şekilde dökülen ince bir lateks kapak epikardiyal yüzeye yerleştirilir. Lateks kapağın çıkışı, silikon boruya bağlanır ve distal açıklık kalbin taban seviyesinin 10 cm altına düşer ve hafif emiş oluşturur. Epikardiyal yüzey üzerinde sürekli üretilen BT, daha ileri analiz için buzla soğutulmuş şişelerde toplanır. Koroner venöz atık perfüzatın% 0.1-1&#39;sini oluşturan kontrollü ve enfarktüslü kalpte CT oluşum hızı 17 ila 147 μL / dk (n = 14) arasında değişmektedir. Proteomik analiz ve yüksek performansRmance sıvı kromatografisi (HPLC), toplanan BT&#39;nin geniş bir protein spektrumu ve purinergik metabolitleri içerdiğini ortaya koydu.

<html> Ters kalp modeli, izole edilmiş, retro-perfüze edilmiş sıçan kalbinde kardiyak interstisyel transüdaatın toplanmasını sağlar ( Şekil 1A- C ). 100 cmH2O sabit bir basınçta perfüze edildiğinde, interstisyel sıvı oluşumu hızı, izole edilen kalpteki koroner venöz atığın% 0.1-1&#39;i kadar, 17 ila 147 uL / ​​dakika arasında değişmektedir. Bilinçoninik asit (BCA) tahlili ile ölçülen BT&#39;nin protein içeriği, 1.08 ± 0.40 mg / mL (n = 6) olarak bulundu. Tek boyutlu jel elektroforez analizi (SDS-PAGE), kardiyak transüda ( Şekil 2A ) ait geniş bir protein spektrumu ortaya koymuştur. İki boyutlu floresan farkı jel elektroforezi (2D-DIGE), BT&#39;de kalpten 50 dakika iskemi / reperfüzyona tabi tutuldu. Da gösterildiği gibi<html> Şekil 2B&#39;de, iskemik kalplerin BT&#39;sinde birkaç proteinin yukarı doğru düzenlendiği saptanmıştır: Tanımlanan proteinlerin% 70.1&#39;i hücre dışı matris proteinleri,% 4.6&#39;sı hücresel membran proteinleri,% 17.2&#39;si sitoplazmik proteinler ve% 2.3&#39;ü nükleer Proteinler ( Tablo 1 ). Pürinler özellikle iskemik hasardan sonra kardiyak bağışıklık cevabı, vazomotor tonus ve kardiyak fonksiyonu düzenleyen önemli sinyal molekülleri olarak düşünülmüştür. CT toplanması, MI gibi patofizyolojik koşullar altında kardiyak interstisyel sıvıda bulunan çeşitli metabolitlerin ölçülmesine izin verir. Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, iskemik kalpte daha yüksek olan, daha önce diğer yöntemler 16 kullanılarak bildirilen sonuçlara benzer HPLC ile ölçülen AMP, GMP, NADP, adenosin, hipoksantin ve ürik asit konsantrasyonu ,Sınıf = &quot;xref&quot;&gt; 17. <img alt="tablo 1" src="/files/ftp_upload/55849/55849table1.jpg" /> Tablo 1: BT&#39;de iskemik kalplerin upregüle protein listesi. BT iskemik kalpten 2D-DIGE ile analiz edildi ve proteomikler ile tanımlandı. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55849/55849_Table_1_protein_IDs.xls">Bu tabloyu indirmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55849/55849fig1.jpg" /> Şekil 1: Ters kalp modelinin şematik çizimleri. ( A ) Uygun biçimde şekillendirilmiş ve boyutlandırılmış bir sıçan kalbinden bir alüminyum kalıp yapılmıştır. ( B ) Kalıbı lateks çözeltisine batırdıktan sonra, yaklaşık 0.01 mm kalınlığında bir lateks kapak dökülmüştür. ( C ) Bir LAngendorff kalp cihazı, kalp bir aortik kanül kullanılarak aort yoluyla perfüze edildi ve daha sonra ters çevrildi ve sol ventriküle yerleştirilen bir intra-ventriküler balon ile mekanik olarak desteklendi. İntraventriküler basınç gelişimi bir basınç dönüştürücü ile izlendi. Lateks kapağı hem sağ hem de sol ventrikül yüzeyinin yaklaşık% 90&#39;ını kapladı ve çıkış, distal açıklığı kalbin tabanının 10 cm altında olacak şekilde silikon boruya (ID = 0,2 mm) bağlandı. Bu, hafif negatif hidrostatik basınç oluşturdu. Kalp transüdaatı Genellikle buzla soğutulmuş 1.5 mL tüp içine toplanır. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55849/55849fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55849/55849fig2.jpg" /> Şekil 2: PrBT&#39;nin oteomik analizi. CT&#39;deki proteinler SDS-PAGE ( A ) ile ayrılmış ve 2D-DIGE analizi ( B ) ile tanımlanmıştır. (A) için, şerit 1-4 bireysel kalpten alınan kalp örneklerini göstermektedir (1 ve 2 = sahte; 3 ve 4 = enfarktüslü). (B) için, enfarktütlü bir kalpten BT&#39;de 2D-DIGE yapıldı. Protein kimliği sıvı kromatografi (LC) -MS / MS 14,15 ile teyit edildi. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55849/55849fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55849/55849fig3.jpg" /> Şekil 3: BT&#39;de pürinler. BT&#39;de bulunan çeşitli pürinler HPLC ile analiz edildi. Temsilci HPLC, sahte (mavi) ve enfarktüslü (siyah) kalpten gelir ki, enfarktüslü kalbin daha yüksek birAMP ve adenosinin interstisyel konsantrasyonu, ancak hipoksantin yok. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55849/55849fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart at JoVE.com

The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

Bu protokol, izole edilmiş perfüze edilmiş fare kalpten kardiyak interstisyel sıvıyı toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır. İnterstisyel transüdaatı koroner venöz atık perfüzattan fiziksel olarak ayırmak için, Langendorff perfüze edilen kalp ters çevrilir ve kalp yüzeyinde oluşan transüda (interstisyel sıvı) yumuşak bir lateks kapak kullanılarak toplanır.

İzole edilen fare kalpten interstisyel transüdao toplanması için ters kalp modeli

The present protocol describes a unique approach that enables the collection of cardiac transudate (CT) from the isolated, saline-perfused rat heart. ...

the-inverted-heart-model-for-interstitial-transudate-collection-from

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.3K Görüntüleme.  Second Military Medical University.  Bu protokol, izole edilmiş perfüze edilmiş fare kalpten kardiyak interstisyel sıvıyı toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır. İnterstisyel transüdaatı koroner venöz atık perfüzattan fiziksel olarak ayırmak için, Langendorff perfüze edilen kalp ters çevrilir ve kalp yüzeyinde oluşan transüda (interstisyel sıvı) yumuşak bir lateks kapak kullanılarak toplanır. 

Video: The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Tıp

Magnetic Resonance Derived Myocardial Strain Assessment Using Feature Tracking

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that strain is a more sensitive and earlier marker for contractile dysfunction than the frequently used parameter EF. Current technologies for CMR are time consuming and difficult to implement in clinical practice. Feature tracking is a technology that can lead to more automization and robustness of quantitative analysis of medical images with less time consumption than comparable methods.
Methods: An automatic or manual input in a single phase serves as an initialization from which the system starts to track the displacement of individual patterns representing anatomical structures over time. The specialty of this method is that the images do not need to be manipulated in any way beforehand like e.g. tagging of CMR images.
Results: The method is very well suited for tracking muscular tissue and with this allowing quantitative elaboration of myocardium and also blood flow.
Conclusions: This new method offers a robust and time saving procedure to quantify myocardial tissue and blood with displacement, velocity and deformation parameters on regular sequences of CMR imaging. It therefore can be implemented in clinical practice.

An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that strain is a more sensitive and earlier marker for contractile dysfunction than the frequently used parameter EF.

Özellik Takibi Manyetik Rezonans Türetilmiş Miyokard Gerinim Değerlendirmesi

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Implantation of Total Artificial Heart in Congenital Heart Disease

In patients with end-stage heart failure (HF), a total artificial heart (TAH) may be implanted as a bridge to cardiac transplant. However, in congenital heart disease (CHD), the malformed heart presents a challenge to TAH implantation. 
In the case presented here, a 17 year-old patient with congenital transposition of the great arteries (CCTGA) experienced progressively worsening HF due to his congenital condition. He was hospitalized multiple times and received an implantable cardioverter defibrillator (ICD). However, his condition soon deteriorated to end-stage HF with multisystem organ failure. 
Due to the patient's grave clinical condition and the presence of complex cardiac lesions, the decision was made to proceed with a TAH. The abnormal arrangement of the patient's ventricles and great arteries required modifications to the TAH during implantation.
With the TAH in place, the patient was able to return home and regain strength and physical well-being while awaiting a donor heart. He was successfully bridged to heart transplantation 5 months after receiving the device. This report highlights the TAH is feasible even in patients with structurally abnormal hearts, with technical modification.

This is a case report of a patient with congenitally corrected transposition of the great arteries (CCTGA) who received a total artificial heart (TAH) as a bridge to heart transplant. The TAH was successfully implanted with modifications to accommodate the patient's congenitally malformed heart.

Konjenital Kalp Hastalıklarında Total Yapay Kalp İmplantasyonu

In patients with end-stage heart failure (HF), a total artificial heart (TAH) may be implanted as a bridge to cardiac transplant. However, in congenital ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart model, have been invaluable tools for studying cardiovascular function and disease1-15. Although the Langendorff heart preparation can be used for any mammalian heart, most studies involving this apparatus use small animal models (e.g., mouse, rat, and rabbit) due to the increased complexity of systems for larger mammals1,3,11. One major difficulty is ensuring a constant coronary perfusion pressure over a range of different heart sizes &#8211; a key component of any experiment utilizing this device1,11. By replacing the classic hydrostatic afterload column with a centrifugal pump, the Langendorff working heart apparatus described below allows for easy adjustment and tight regulation of perfusion pressures, meaning the same set-up can be used for various species or heart sizes. Furthermore, this configuration can also seamlessly switch between constant pressure or constant flow during reperfusion, depending on the user&#8217;s preferences. The open nature of this setup, despite making temperature regulation more difficult than other designs, allows for easy collection of effluent and ventricular pressure-volume data.

Most studies involving the Langendorff apparatus use small animal models due to the increased complexity of systems for larger mammals. We describe a Langendorff system for large animal models that allows for use across a range of species, including humans, and relatively easy data acquisition.

Büyük Hayvan Modelleri için bir İzole Çalışma Kalp Sistemi

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful for modeling ischemic injury associated with numerous clinically relevant phenomenon including cardiac surgery with cardioplegic arrest and cardiopulmonary bypass, off-pump CABG, transplant, angina, brief ischemia, etc. The protocol presents a general method to model hypothermic hyperkalemic cardioplegic arrest and reperfusion in rodent hearts focusing on measurement of myocardial contractile function. In brief, a mouse heart is perfused in langendorff mode, instrumented with an intraventricular balloon, and baseline cardiac functional parameters are recorded. Following stabilization, the heart is then subject to brief infusion of a cardioprotective hypothermic cardioplegia solution to initiate diastolic arrest. Cardioplegia is delivered intermittently over 2 hr. The heart is then reperfused and warmed to normothermic temperatures and recovery of myocardial function is monitored. Use of this protocol results in reliable depressed cardiac contractile function free from gross myocardial tissue damage in rodents.

The goal of this protocol to assess myocardial stunning following ischemic cardioplegic arrest in rodents.

Kardiyoplejik Tutuklanma ile Miyokard Çarpıcı İlişkili sıçan İzole Kalp Modeli

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

Kuyruk damar anestezi sıçan bir vakum kan toplama sistemi ile kan koleksiyonundan tekrarlanan

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we demonstrate a murine cryoinjury infarct model that generates precise infarct sizes with high reproducibility and replicability. In brief, after intubation and sternotomy of the animal, the heart is lifted from the thorax. The probe of a handheld liquid nitrogen delivery system is applied onto the myocardial wall to induce cryoinjury. Impaired ventricular function and electrical conduction can be monitored with echocardiography or optical mapping. Transmural myocardial remodeling of the infarcted area is characterized by collagen deposition and loss of cardiomyocytes. Compared to other models (e.g., LAD-ligation), this model utilizes a handheld liquid nitrogen delivery system to generate more uniform infarct sizes.

This article demonstrates a model to study cardiac remodeling after myocardial cryoinjury in mice.

Farede Miyokard Enfarktüsü Çalışması İçin Kriyoyaralanma Modeli

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

An Image Guided Transapical Mitral Valve Leaflet Puncture Model of Controlled Volume Overload from Mitral Regurgitation in the Rat

Mitral regurgitation (MR) is a widely prevalent heart valve lesion, which causes cardiac remodeling and leads to congestive heart failure. Though the risks of uncorrected MR and its poor prognosis are known, the longitudinal changes in cardiac function, structure and remodeling are incompletely understood. This knowledge gap has limited our understanding of the optimal timing for MR correction, and the benefit that early versus late MR correction may have on the left ventricle. To investigate the molecular mechanisms that underlie left ventricular remodeling in the setting of MR, animal models are necessary. Traditionally, the aorto-caval fistula model has been used to induce volume overload, which differs from clinically relevant lesions such as MR. MR represents a low-pressure volume overload hemodynamic stressor, which requires animal models that mimic this condition. Herein, we describe a rodent model of severe MR in which the anterior leaflet of the rat mitral valve is perforated with a 23G needle, in a beating heart, with echocardiographic image guidance. The severity of MR is assessed and confirmed with echocardiography, and the reproducibility of the model is reported.&#160;&#160;

A rodent model of left heart volume overload from mitral regurgitation is reported. Mitral regurgitation of controlled severity is induced by advancing a needle of defined dimensions into the anterior leaflet of the mitral valve, in a beating heart, with ultrasound guidance.&#160;

Sıçanda Mitral Regurgitation Kontrollü Hacim Aşırı Bir Görüntü Güdümlü Transapical Mitral Kapak BroşürÜ Delinme Modeli

Mitral regurgitation (MR) is a widely prevalent heart valve lesion, which causes cardiac remodeling and leads to congestive heart failure. Though the ...