Her şeyden önce, bu projeye katılan annelere içtenlikle teşekkür ederiz. Sonra, örnekleme prosedürüne yardımcı olan ve kolaylaştıran tüm personeli, Anestezi uzmanı, hemşire anestezisti ve cerrahi hemşirelerini kabul ediyoruz. Proje, Güneydoğu Norveç Bölgesel Sağlık Otoritesi ve Norveç Kadın Sağlığı Danışma Birimi, Oslo Üniversitesi ve Oslo Üniversitesi Hastanesi tarafından sağlanan yerel fonlardan sağlanan finansman olmaksızın mümkün olmazdı.

Çalışma, Oslo Üniversitesi Hastanesi&#39;ndeki veri koruma görevlileri ve Güney Norveç 2419/2011 Tıbbi ve Sağlık Araştırma Etikleri Bölgesel Komitesi tarafından onaylandı. Tüm katılımcılar, dahil edilme konusunda yazılı bir bilgilendirilmiş onam imzaladılar. 1. Preparatlar NOT: İşlemler için bir zaman çizelgesi Şekil 1&#39;de özetlenmiştir. <img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig1.jpg" /> Şekil 1 : 4 damarlı Numune Alma İşleminde Zamanlamayı ve Personel İfadesini Tanımlayan Akış Şeması. Tek renk bir kişiyi temsil eder. Yöntemin ayrıntılı açıklaması protokolde verilmiştir. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55847/55847fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <ol><li> Personel <ol><lI&gt; Gerekli tüm personelin mevcut olduğundan emin olun: Ultrason ölçümlerini yapan oldukça yetenekli bir Fetal Tıp uzmanı, cerrahiyi yürüten iki doğum uzmanı, doğum uzmanlarından ve numuneleri toplayan iki hemşireden biri, kan gazı analizlerini yapan bir asistanı ve Diğer numuneler toplama işlemini ard arda ve derhal gerçekleştirdikten sonra. NOT: Plasental dokunun daha gelişmiş toplanması durumunda ilave bir kişiye ihtiyaç vardır. </li></ol></li><li> ekipman <ol><li> Ekipman, buz soğukluğunda 1 M fosfat tamponlu salin (PBS), 25 mL soğuk RNA stabilize edici çözelti ve 5 x 0.5 mL optimal kesme sıcaklığı bileşiği (OCT) hazırlayın. Vacutainers ve tüpleri etiketleyin. Deneysel ekipman listesini görün. </li></ol></li></ol> 2. Anaokulleri <ol><li> Annelik klinik ve klinik dışı özelliklerini dahil ederek kaydedin ve ilgili soruları tekrarlayın veDoğumlar, doğum sırasında ağırlık dahil olmak üzere. Sezaryen öncesi oruç tutma süresini ve cerrahi sırasında meydana gelen herhangi bir hipotansif bölüme dikkat edin. Not: Global pregnancy coLaboratory (COLAB) &#39;dan yeni yayınlanan en az maternal klinik veri kümesini ekleyin. Bu makale aynı zamanda çalışma popülasyonlarının seçiminde çok önemli bazı yönleri içermektedir ve çalışmayı planlarken ele alınmalıdır 18 . </li><li> Etnik köken, yaş ve beden kitle indeksi (BKİ) de dahil olmak üzere baba özelliklerini kaydetmeyi düşünün. </li></ol> 3. Ultrason <ol><li> Doppler ultrason muayenesini doğum gününde, kadınlar açlıkta gerçekleştirin. Muayene, aort ve vena kava basısından kaçınmak için, yarı-sırtüstü konumdaki kadının fetal durgunluk döneminde, ilgi bölgesinin biraz lateralinde eğildiğinde gerçekleştirilir. Içindeki çıktıyı izleyinYoğunluğu ekrandaki mekanik ve termik indekslerle belirtir. </li><li> Umbilikal ven <ol><li> Göbek karını sagital veya oblik bir transeksiyonda göbekten damarı görselleştirin. Karın içi umbilikal venin düz bölümündeki iç büzgeci çapını, görülebilen dallardan önce ölçün. Normal B-modunu kullanın ve çap ölçümleri için tekneyi dik açılım açısı ile görselleştirin ve pulsatil çap değişikliklerinin etkisini en aza indirgemek için sonraki ölçümler için birkaç optimum kareyi tutun. <ol><li> Ölçümleri 5-10 kez tekrarlayın 19 . </li></ol></li><li> Aynı yerde, Doppler ultrasonu kullanın ve zaman ortalamalı maksimum hızı (TAMX) ölçmek için mümkün olduğunca düşük (30 ° &#39;lik) bir insonasyon açısı elde etmek için probu ayarlayın. Hızı 3 - 5 s&#39;lik bir periyot boyunca elde edin (titreşimsiz akış). </li></ol></li><li> Uterus arteri <ol><li> Doppler kullanUltrason, internal iliyak arterden dallandıktan hemen sonra, harici iliak arteri geçtiği için uterin arteri görselleştirir. Düşük insonasyon açısı (her zaman &lt;30 °) elde etmek için probu bu bölgede ayarlayın ve TAMX&#39;i ölçün. Hızı üç kalp çevriminin ortalama hızı olarak alın. </li><li> TAMX ölçülene kadar aynı yerde dikey bir açı elde etmesi pek mümkün olmadığından, çap ölçümleri alanlarına yakın ulaşılabilen çap ölçümleri için doğru bir açı elde etmek için, distal olarak damarı takip edin. Renkli Doppler ultrasonografi ile değerlendirildiğinde görünür damarlar bu bölgeden önce kesilirse çap ölçümlerini hariç tutun. <ol><li> Normal B-modunu kullanın ve çap ölçümleri için tekneyi dik açılım açısı ile görselleştirin ve pulsatil çap değişikliklerinin etkisini en aza indirgemek için sonraki ölçümler için birkaç optimum kareyi tutun. </li><li> Ölçümleri 5-10 kez tekrarlayın 19 . </li></ol></<html> li&gt; </ol></li><li> Plasentanın konumunu not edin. </li></ol> 4. 4 damarlı Kan Örneklemesi NOT: İşlemler için zaman çizelgesi Şekil 1&#39;de özetlenmiştir ve örneklerin genel görünümü Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. <img alt="şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig2.jpg" /> Şekil 2 : Plasental Vasküler Yapının Şematik Gösterimi ve Numune Alma Siteleri. 4 damarlı örnekleme yönteminde, uterin ven, radial arter (uterin arter için bir vekil olarak) ve göbek arterleri ve damardan kan örnekleri alınır. Uterin arter ve göbek bağı kan akımı ultrason ile ölçülür. Plasentanın doku örnekleri toplanır. Resim: Øystein H. Horgmo, Oslo Üniversitesi.5847fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bu figürde daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız. <ol><li> Güvenlik prosedürleri <ol><li> Operasyon tiyatrosundaki tüm personele eldiven, cerrahi eldiven takımı, maskeler ve şapkalar takın. </li><li> Operasyon alanıyla temas halindeki cerrahları ve araştırma personelini cerrahi kese elbiseleri, maskeler, şapkalar, önlüklar ve çift eldiven ile sağlayın. Gözlük isteğe bağlıdır. </li><li> Kan numunelerini eldivenlerle tutan personel sağlayın. </li><li> Plasenta numunelerine eldiven ve cerrahi maskeyle müdahale eden personel sağlayın. Homojenizasyon kaputların kullanılmasını gerektirir. </li></ol></li><li> Operasyon tiyatrosunda hazırlık <ol><li> Bir brifing verin ve ekipmanı ameliyat başlamadan önce numuneye yardımcı olacak tüm personele verin. </li><li> Gerekli periferik arteryel ve venöz girişe yardımcı olacak anestezi uzmanı ve anestezi hemşiresinin adresini öğrenin veNumune almadan önce intravenöz olarak hiçbir sıvı verilmez. </li><li> Antakübital ven örneğini ve iki şırıngayı (biri 20 mL ve bir tane de 10 mL) ve radial arteri destekleyen kişiye bir kan gazı şırıngasını (heparin ile) destekleyen kişiye iğneler olmadan üç şırınga (10 mL) verin. </li><li> Ameliyat sahası için iki steril şırınga (20 mL), beş steril şırınga (10 mL), üç &quot;kelebek iğne&quot; ve iki kan gazı şırıngası hazırlayın. </li></ol></li><li> Kan damarlarına erişim. <ol><li> Periferik intravenöz (iv) erişimi sağlamak için sezaryen öncesi standart prosedür izleyin. NOT: Antecubital ven tercih edilir, çünkü bu siteden örnek almak daha kolaydır. </li><li> Radial arteri ultrasonla veya palpasyonla bilekte lokalize edin. 0.5 mL subkutanöz lidokain analjeziyi takiben, radial artere bir arteriyel hat yerleştirin. Üç başarısız ekleme olması durumunda örneklemeyi bu siteden terk edin veyaEğer kadın yerleştirme sırasında acı çekerse. NOT: Standart prosedüre göre sezaryonun cerrahi prosedürünü uygulayın. Yalnızca örnekleme prosedürü için gereken ayarlamalar aşağıda belirtilmiştir. </li></ol></li><li> Anne kan örnekleri NOT: Uterus insizyonundan önce aynı anda üç anne kan örneğini (uterin ven, radial arter ve antekübital ven) elde edin. <ol><li> Uterin damar için, karın boşluğunu açtıktan sonra, karın duvarını kaldırmak ve uterusun anterolateral kenarlarındaki uterin venlerin ana dallarını ortaya çıkarmak için bir geri çekici kullanın. Mümkün olduğunca plasenta ile aynı yönde uterin damar dallarından kan alın veya plasenta rahim orta çizgisinde bulunduğu takdirde en belirgin damarı pleksus kullanın. <ol><li> Uterin damardaki bir kan gazı şırıngasına yaklaşık 30 derecelik bir açıda bir kelebek iğne takın ve önlemek için nazik bir aspirasyon ile kan toplamayınhemoliz. Kelebek iğnenin iv konumunu özenle sabitlerken dolu kan gazı şırıngasını 20 mL&#39;lik ve 10 mL&#39;lik şırıngayla ardışık olarak değiştirin. NOT: Seçilen rahim damarının kontralateral tarafında durduğunuzda en iyi verimi sağlamak en iyisidir. </li></ol></li><li> Radial arter için, intra-arteriyel hattan aspire edin. İlk 5 mL&#39;yi atın ve daha sonra kan gazı analizleri için heparin enjektöründe 3 mL aspirat ve bunu takiben iki şırınga (20 + 10 mL) içinde 3 mL aspire edin. </li><li> Antekübital ven için, intravenöz kateterden hafifçe aspire edin. İlk 5 mL&#39;yi atın ve üç şırıngada (10 mL) 30 mL aspire edin. </li><li> Karnı kapatmaya başlamadan önce uterin ven üzerindeki örnekleme alanının son muayenesini yapın. </li></ol></li><li> Fetal kan örnekleri <ol><li> Çocuğunuz doğduğunda, umbilikal kordonu kelepçelemeden veya plasentayı göndermeden umblikal arterden hemen kan alın. Zekayı başlatH kan gazı analizi şırınga ve mümkünse üç 10 ml şırınga ile izleyin. </li><li> Arteryel numuneler güvenceye alındığında, umblikal ven (kan gazı ve 20 + 10 mL şırınga) örneklemeden önce kordonu sıkıştırın ve çocuğu ebeye verin. NOT: Teslimat saniye içinde ve kendiliğinden müstakil sürece yerinde plasenta ile tüm göbek örnekleri alın. </li><li> Geç kordon kelepçesi ile ilgili Norveç önerilerini izleyin. Bozulmuş bir çocuğun olması durumunda, kelepçeyi kelepçeleyin ve kesin derhal ve elini çocuğu ebe ve neonatologla görüşün. </li></ol></li><li> Kan örneklerinin taşınması <ol><li> Geri kalan kan numunelerini hazırlarken kan gaz şırıngalarını buz üzerine koyun ve 5 dakika içinde bir kan gazı analizöründe analiz edin. </li><li> Kan numunelerini derhal vacutainers&#39;a aktarın ve buz üzerine koymadan önce plazma tüplerini 1 - 2 dakika boyunca bir rocker üzerine koyun. Serum tüplerini emek üzerine bırakın.Atory tezgah 30 dakika yerleşmek için. NOT: Prosedürdeki ekstra dikkat gerektiren kritik bir adımdır, çünkü beş bölgeden alınan numunelerin aynı kalitede olması için aynı anda hazırlanması gerekir. </li><li> Plazma örneklerini mümkün olan en kısa sürede santrifüj edin ve 30 dakika içinde, 6 ° C&#39;de, 20 dakika süreyle 2,500 xg santrifüjleyin. </li><li> 30 dakika sonra, serum örneklerini 10 dakika 2.500 x g&#39;de oda sıcaklığında santrifüjleyin. </li><li> Trombosit içermeyen plazma sağlamak için süpernatantları peletin üstünde 0,5 mL bırakarak, 2 mL cryo tüplerine dikkatle ayırın. </li><li> Örnekleri -80 ° C&#39;de saklayın. </li></ol></li></ol> 5. Plasental Dokunun Toplanması <ol><li> Plasenta, buzağı soğutulmuş diseksiyon tepsisine mümkün olduğunca kısa sürede düz bir şekilde koyun. En uzun çapı ve çapı 90 derece fotoğraflayın ve ölçün. </li><li> Plasentayı tartın. </li><li> Ağırlığı, iki çapını, herhangi bir gRoss patolojisi, kordtaki damar sayısı ve doğumdan plasenta buza yerleştirilme zaman aralığı. NOT: Plasenta, klinik olarak belirtilmişse, patolojik muayene için gönderilir. </li><li> Plasenta, maternal yüzeyi yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve açık pozitif patolojilerin bulunduğu bölgeden kaçınarak, plasentanın her bir çeyreğinde tesadüfen bulunan 4-5 örnekleme bölgesini belirleyin. Anne yüzeyinden 3-5 mm kesmek için desiduyu makas kullanarak çıkartın. Her bir alandan 1 - 2 cm&#39;lik 3 adet villous doku toplayın. </li><li> Toplanan dokuyu yavaşça 50 mL soğuk 1M PBS içerisinde yıkayın. Her numune alanından birkaç parça halinde bölün. Not: Plasenta parçalarının boyutu, planlanan analizlere bağlı olacaktır. </li><li> 5 kriyo boruları 0,5 cm3 doku örnekleri ve sıvı azot içinde dondurulması ek - 0.1 alikotları ekleyin. </li><li> RNA, sabitleme çözeltisi 25 mL tüpe 0.2 cm 3-0,1 küçük parçalar ekleyin. 4&#39;te saklama6 ° C&#39;de 24 saat bekletin, RNA stabilizasyon solüsyonunu atın ve değiştirin. Donmak. </li><li> Karıştırmak ve dondurularak, OKT ile OCT, yukarı 0.5 mL, 5 kriyo boruları 0,5 cm3 parçaları ekleyin. </li><li> Analiz edilene kadar numuneleri -80 ° C&#39;de saklayın. NOT: Burton ve ark. Planlanan analizlere bağlı olarak plasental numunenin pratik yönlerine mükemmel bir genel bakış sağlar. 20 Kalan dokuyu, mikrovillus ve bazal zarları izole etmek için hazırlamayı ve vakum emme tekniği ile desidual dokuyu toplamayı düşünün. 21 , 22 </li></ol> 6. Yenidoğan Özellikleri <ol><li> Apgar skoru (1, 5 ve 10 dakika), cinsiyet, kilo, uzunluk, gebelik haftası ve Yenidoğan Yoğun Bakım Ünitesine kabulün (kalışın uzunluğu ve sonucuna) dahil yenidoğanın özelliklerini kaydedin. </li><li> Yenidoğan vücut kompozisyonunu antropometrik ölçümlerle, havayı yerinden değiştirerek ölçmeyi düşünün.Ment pletismograf veya çift X-ışını absorptiometrisi. 23 , 24 </li></ol> 7. Hesaplamalar <ol><li> Radial ve uterin arterde benzer kan kompozisyonu varsayın ve uteroplasental arteriovenöz konsantrasyon farkını hesaplayın. Uteroplasental arteriovenöz konsantrasyon farkı = C A - C V Umbilikal venöz arteriyel konsantrasyon farkı = C v - C a C, alt simgelerle konsantrasyon: A, radyal arter; V, rahim damarı; V göbek bağı ve a, göbek bağı. </li><li> Hacimdeki kan akışını, mL / dak (Q) hesaplayın: <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/55847/55847eq1.jpg" /> D, damar çapı (cm) olduğunda, TAMX, zaman ortalamalı maksimum hız ve h, uzaysal kan hızı profili için katsayıdır. Umblikal ven katsayısı olarak 0.5 kullanın veUterin arter 25, 26 için 0.6. </li><li> Plasental alımını hesaplayın ve Fick&#39;in prensibine göre serbest bırakın: Uteroplasental alım = ( C A - C V ) x Qm Fetal alımı = (Cı-V - C) X Q f Alt simgeler: m, maternal ve f, fetus. </li></ol>

<ol>
	<li>Jansson, T., Powell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+placenta+in+fetal+programming:+underlying+mechanisms+and+potential+interventional+approaches.">Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches.</a> Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).</li><li>Hanson, M. A., Gluckman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+developmental+conditioning+of+later+health+and+disease:+physiology+or+pathophysiology.">Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology.</a> Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).</li><li>Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+placenta+project:+it's+time+for+real+time.">The human placenta project: it's time for real time.</a> Am J Obstet Gynecol. 213, 3-5 (2015).</li><li>Battaglia, F. C., Regnault, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+and+metabolism+of+amino+acids.">Placental transport and metabolism of amino acids.</a> Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).</li><li>Hay, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental-fetal+glucose+exchange+and+fetal+glucose+metabolism.">Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).</li><li>Woollett, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Transport+of+maternal+cholesterol+to+the+fetal+circulation.">Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation.</a> Placenta. 32, 218-221 (2011).</li><li>Prenton, M. A., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Umbilical+vein-artery+and+uterine+arterio-venous+plasma+amino+acid+differences+(in+the+human+subject).">Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject).</a> J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).</li><li>Cetin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+erythrocyte+amino+acids+in+mother+and+fetus.">Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus.</a> Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).</li><li>Filshie, G. M., Anstey, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+arachidonic+acid+in+plasma+and+tissues+of+patients+near+term+undergoing+elective+or+emergency+Caesarean+section.">The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section.</a> Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).</li><li>Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+and+importance+of+fetal+lactate+in+the+human+placenta+-a+new+hypothesis.">The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis.</a> J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).</li><li>Prendergast, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+production+by+the+human+placenta+in+vivo.">Glucose production by the human placenta in vivo.</a> Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).</li><li>Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplacental+arteriovenous+gradients+for+glucose,+insulin,+glucagon+and+placental+lactogen+during+normoglycaemia+in+human+pregnancy+at+term.">Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term.</a> Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).</li><li>Zamudio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoglycemia+and+the+origin+of+hypoxia-induced+reduction+in+human+fetal+growth.">Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth.</a> PLoS One. 5 (1), 8551 (2010).</li><li>Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+glucose+transfer:+a+human+in+vivo+study.">Placental glucose transfer: a human in vivo study.</a> PLoS One. 10 (2), 0117084 (2015).</li><li>Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+uteroplacental+release+of+placental+growth+factor+and+soluble+Fms-like+tyrosine+kinase-1+in+normal+and+preeclamptic+pregnancies.">In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies.</a> Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).</li><li>Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uteroplacental+arterio-venous+difference+in+soluble+VEGFR-1+(sFlt-1),+but+not+in+soluble+endoglin+concentrations+in+preeclampsia.">Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia.</a> Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).</li><li>Brar, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uteroplacental+unit+as+a+source+of+elevated+circulating+prorenin+levels+in+normal+pregnancy.">Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy.</a> Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).</li><li>Myatt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+standardization+of+preeclampsia+research+study+design.">Strategy for standardization of preeclampsia research study design.</a> Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).</li><li>Kiserud, T., Rasmussen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+repeat+measurements+affect+the+mean+diameter+of+the+umbilical+vein+and+the+ductus+venosus.">How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).</li><li>Burton, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+sample+collection+for+placental+research.">Optimising sample collection for placental research.</a> Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).</li><li>Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+preparation+of+paired,+syncytial,+microvillous+and+basal+membranes+from+human+placenta.">Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta.</a> Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).</li><li>Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+contents+of+phospholipids,+cholesterol,+and+lipid+peroxides+in+decidua+basalis+in+women+with+preeclampsia.">Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 180 (3), 587-592 (1999).</li><li>Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropometric+estimation+of+neonatal+body+composition.">Anthropometric estimation of neonatal body composition.</a> Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).</li><li>Ellis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-composition+assessment+in+infancy:+air-displacement+plethysmography+compared+with+a+reference+4-compartment+model.">Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model.</a> Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).</li><li>Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portal+and+umbilical+venous+blood+supply+to+the+liver+in+the+human+fetus+near+term.">Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).</li><li>Acharya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+validation+of+uterine+artery+volume+blood+flow+measurement+by+Doppler+ultrasonography+in+pregnant+sheep.">Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).</li><li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate-glutamine+cycle+and+exchange+in+the+placenta-fetus+unit+during+late+pregnancy.">Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy.</a> Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).</li><li>Tuckey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+synthesis+by+the+human+placenta.">Progesterone synthesis by the human placenta.</a> Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).</li><li>Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+metabolic+response+to+maternal+starvation.">Fetal metabolic response to maternal starvation.</a> Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).</li><li>Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+effect+on+fetal+glucose+utilization.">Insulin effect on fetal glucose utilization.</a> Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).</li><li>Bujold, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+supporting+that+the+excess+of+the+sVEGFR-1+concentration+in+maternal+plasma+in+preeclampsia+has+a+uterine+origin.">Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).</li><li>Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+mTORC1+signaling+in+placental+nutrient-sensing.">The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing.</a> Placenta. 33, 23-29 (2012).</li><li>Cetin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+amino+acids+in+normal+and+growth-restricted+pregnancies.">Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, 50-54 (2003).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

<html> Plasenta 4-gemi örnekleme yöntemi, üç ana amaç için uygundur. İlk olarak, spesifik maddelerin maternal tarafta plasenta tarafından nasıl alındığını ve glikoz ve amino asit çalışmalarımızla gösterildiği gibi muhtemelen umblikal dolaşıma ve fetusa transfer edildiğini incelemek için kullanılabilir. İkincisi, yöntem progesteron sonuçlarına göre plasenta tarafından üretilen ve maternal veya fetal dolaşıma bırakılan maddelerin incelenmesi ile oldukça yakından ilgilidir. Üçüncü olarak, hızlı büyüme ve doku yeniden biçimlendirme sırasında fetusta in vivo atık ürünlerin nasıl ortadan kaldırıldığını incelemek faydalı olabilir. 4 damarlı yöntemin kritik adımları ve lojistik konuları Normal fizyolojik gebeliklerde makro besinlerin plasental transferini in vivo olarak belirlemek için plasenta 4 damar örneklemesi daha önce kullanılmıştır 8 , 10 ,Ss = &quot;xref&quot;&gt; 12, ancak sınırlı sayıda çalışma konusu vardır. 4 damarlı numunenin sınırlı kullanımı, muhtemelen prosedürün lojistik gerekliliğinden kaynaklanmaktadır. Bu yöntemin uygulanması için hasta, araştırmacılar ve fetal tıp, doğum ve anesteziyoloji bölümlerindeki personel arasında başarılı bir koordinasyon şarttır. Ana araştırmacıların birçoğunun, klinik rutinleri ve kilit personel bilen, doğum uzmanları olduğunun büyük bir avantaj olduğuna inanıyoruz. Böylece çalışma usulleri günlük klinik pratikte uygulanmıştır. İşlemin her adımını koordine ederek ve güvence altına alarak, 200&#39;den fazla anne / yenidoğan çiftinden numune aldık. Ayrıca, strateji, örneklemenin örnekleme sürecini birkaç elle tutmak olmuştur çünkü prosedürün örneklemenin başarılı sonucu için kararlı olan teknik zorluklar vardır ve çok sayıda numuneler verilerin gereksiz kaynaklara neden olabilir. ConsequTüm ultrason incelemelerinin, aynı muayene eden tarafından aynı ultrasonik makine kullanılarak yapılması önerilir. Gemi duvarının çözünürlüğü önemli olduğu için, ekipman özenle seçilmelidir. Üçüncü trimesterdeki uterin arterler özellikle teknik olarak ölçmek zorludur çünkü uterus boyutu ve içeriği hem çap ölümleri için kullanılan dik iç açısı hem de aynı akış hızı ölçümleri için düşük insonasyon açısı elde etmeyi zorlaştırır. Üstelik, başarılı kan örneklemesi, uterin venin uygun numune alanının belirlenmesi ve nazik bir aspirasyon gerektirir. Göbek banyosunda fetal eritrositlerin kırılganlığı, aspirasyon kuvvetine özel dikkat gerektirir. Bebeğe gecikmiş doğum ya da hafif stresin umbilikal arterin erken daralması ile ilişkili olduğu ve arteryal örnek hacminin azaltıldığı deneyimlerimizdir. <stronG&gt; 4 damarlı yöntemin etik konuları &quot;Plasenta 4-gemi örneklemesi&quot; yöntemi invaziv ve zorlayıcı bir prosedürdür. Dolayısıyla, gereksiz numune alma prosedürlerinden kaçınmak için, kapsama ve dışlama kriterleri araştırma sorusuna göre iyi tanımlanmalıdır. Sezaryen doğum endikasyonlarının araştırma projesine katılımdan etkilenmemesi için doğum modu kararı verildikten sonra hastalara dahil edilmesi önerilir. İşlemin ameliyathanede biraz fazla zaman gerektirmesine rağmen, numunenin neden olduğu rahatsızlıktan ve rahatsızlıktan kaçınmak için daha fazla çalışan bulundurulmasını gerektirir. Bir arteriyel hattın yerleştirilmesi daha az invaziv olduğu için radial arteri bir uterin arter için bir vekil olarak kullandık ve arteryalardan ve damardaki eşzamanlı örneklemeyi garantiledik. Bazı gruplar, daha az invaziv prosedür olan arteryelleştirilmiş kan kullanır 13 . Ancak apaArteryel hat ile ilişkili olarak bir lokal hematom insidansından birine rastlanırsa, elle geçici paresteziye neden olurken, 4 bölgeden herhangi birinden numuneleme sırasında olumsuz etkiler yaşamadık. Özellikle, delinmiş uterin ven kanaması gözlemedik. 4 damarlı yöntemin metodolojik / analitik konuları Bir plasenta 4-gemi çalışmasından elde edilen sonuçların yorumlanmasında çeşitli metodolojik konuları ele almak önemlidir. Birincisi, eğer amaç plasenta tarafından alınan veya salınan bir maddenin kütlesini hesaplamak ise, geçen kan hacminin değerlendirilmesi önemlidir. Uterin damarın yalnızca plasentayı boşaltmakla kalmayıp aynı zamanda uterus kasını da boşalttığını ve rahim vaskülatürünün çeşitli derecelerde yumurtalık ve vajinal vaskülatür ile anastomoz ettiğini akılda tutmak gerekir. Sonra, plasenta boyunca su alış verişinin konsantrasyonu etkileyebileceğini düşünmek önemlidirRasyonlar ölçülür ve böylece hesaplanan arteriovenöz konsantrasyon farklarını etkiler. İdeal olarak, bu, her ana-fetus çifti içinde kaybolan veya kazanılan suyun konsantrasyon farklarını ayarlayarak en iyi şekilde ele alınır. Bu, plasenta veya rahim tarafından alınmayan veya bırakılan bir maddeyi ölçerek elde edilebilir. Hemoglobin konsantrasyonları veya hesaplanmış eritrosit yüzdeleri (hematokrit) su değişimi için düzeltme faktörleri olarak hizmet edebilir. Ayrıca, plasentanın maternal tarafındaki bileşiklerin alımını veya serbest bırakılmasını yorumlarken, karşılaştırmak üzere diğer dokularda arteryel farklılıklar elde etmek ilginç olabilir. Bu nedenle, plasentanın üzerindeki arteriovenöz farklılıkları önkolun kılcal yatağınınkiyle karşılaştırarak plasentanın spesifik özelliklerini karakterize etmek için antekübital venden alınan bir kan örneği ekledik. SFlt-1&#39;in plasental salınımını ve plasenta büyümesini test ettiğimizde bu karşılaştırmayı özellikle ilginç bulduk.Çünkü sistemik endotel hücreleri bu bileşiklerin potansiyel bir kaynağı olabilir 14 . Araştırma sorusuna bağlı olarak plasentanın verimliliğini, yani (mmol / L) / kg veya (mmol / dak) / kg plasenta cinsinden hesaplamak için arteriovenöz farklılıkları plasentanın ağırlığı ile ilişkilendirmek önemlidir. 4 damarlı yöntemin kısıtlamaları ve güçleri Plasental fizyoloji, vajinal doğumun stresinden ziyade sezaryen ile ilgili daha az etkilenmiş olsa da, bu yöntemin çeşitli sınırlamaları vardır. Çoğu vaginal doğum, gebelik komplikasyonlarının çoğunda (preeklampsi, diyabet, obezite ve orta fetal makrozomi gibi) tavsiye edilir ve bu da işe alımını sınırlayabilir ve yönlendirebilir. Yöntemin her adımını optimize ederken bile, kan örnekleme prosedüründeki ve ultrason volümündeki teknik zorluklardan ötürü her bir hastada tam ölçümler ve numuneler elde etmek zordurUme akış ölçümleri ( Şekil 3 ). Buna ek olarak, ultrasonik ölçümler olabildiğince ameliyat zamanında yapılsa da, spinal anestezi ve kan örneklemesinden önce yapılırlar. Bundan, maternal kardiyak output (CO) değişebilir ve muhtemelen uteroplasental (hatta feto-plasental) kan akışını etkileyebilir. Spinal anestezikanın neden olduğu CO&#39;da olası değişiklik, mevcut çalışmada kullanılan fenilefrin tarafından telafi edilmelidir. Katılımcılarımızın bir alt grubunun (n = 23) ön verileri spinal anesteziden önce ve örnekleme zamanında CO&#39;da önemli bir değişiklik göstermedi (yayınlanmamış veriler). Hayvanlarda değil, insanlarda 4 damarlı örnekleme yönteminin kullanılması, hem zaman değişkeni getirme olasılığını hem de kan içeriğini manipüle etmek için 5 , 29 ve 30&#39;u sınırlar . Bu hususlardan yola çıkarak, 4 damarın<html> Örnekleme metodu kesitsel ve doğası gereği gözlemsel niteliktedir ve elde edilen veriler buna göre analiz edilmelidir. Öte yandan, 4 damarlı örnekleme yöntemi, insanda plasental fizyoloji ve patofizyolojinin in vivo olarak incelenmesi için benzersiz bir olanak sağlar ve bu etkileşim faktörlerinin hepsi de oyunda görülür ve bu durum in vitro ortamda asla üretilemez. Hayvanlardan veya diğer deneysel araştırmalardan çıkan hipotezleri test etmek için mükemmel bir fırsat sunar. Aynı şekilde, in vitro ve hayvan çalışmalarında mekanik olarak test edilmesi gereken yeni hipotezler üretebilir. 4 damarlı yöntemin potansiyel uygulamaları Patolojik gebeliklerde maternal ve fetal arteriovenöz konsantrasyon farklılıkları şimdiye kadar ayrı olarak incelenmiş ve mevcut hipotezlerin bazılarının in vivo test edilmesine izin verilmiştir 15 , 16 ,Ass = &quot;xref&quot;&gt; 31. 4 damarlı örnekleme yöntemi, patolojik gebeliklerde ayrı varlıklardan ziyade anne, plasental ve fetal üniteyi birlikte incelemek için çekici bir fırsat sunmaktadır ve anne-fetus etkileşimi kapsamında eski ve yeni sorulara yeni ışık tutabilir. 4 damarlı numune alma yöntemi, numunelerin daha ileri analizlerine bağlı olarak hem normal hem de patolojik gebeliklerde çok çeşitli araştırma soruları üzerine uygulanabilir. Vacutainers seçimi, kan hacmi, plasenta aralığı ve diğer doku numuneleri araştırma sorusuna göre kararlaştırılmalıdır. Burton ve diğ. Yakın zamanda prosedürler plasenta dokusundan kaliteli numuneleri sağlamak için, ve 20 çözülecek örneklerin büyük miktarda gereken bazı eğilmeye için farklı biyobankalar birleştirilmesi izin vermek için tarif mükemmel makale yayımlanmıştır. 4 damar örnekleri, maternale eksosomların spesifik salımını incelemek üzere analiz edilebilirIlaçların, metabolitlerin ve toksinlerin transferi. Büyük ölçekli omik (metabolomik, proteomik ve lipidomik) analizleri plasenta tarafından salgılanan maternal plazmada bulunan maddeleri ve metabolitleri belirleme potansiyeline sahiptir. Böylece, 4 damarlı örnekleme yöntemi, maternal dolaşımda plasenta kaynaklı faktörleri belirleyebilir ve plasental fonksiyonun biyolojik belirteçlerini tetikleyebilir. Sinsityotrofoblastlarda ait microvillous ve fetal bakan bazal plazma zarları bakan maternal ayırmak için teknikler ile birlikte, bir maddenin aktarımı ilgili taşıyıcı proteinler 21 aktivitesine ve yeri ile birlikte incelenebilir. Ayrıca, besin transferini in vivo olarak düzenleyen mekanizmalar, dört damardaki besin maddeleri ve mikro besin elementlerinin seviyelerini analiz ederek ve besinlerin plasentadaki besin ve enerji algılama sisteminin ölçümleriyle ilişkilendirilmesi ile aydınlatılabilir 32 </sup&gt;. Dört damarlı örneklemenin kararlı izotopların kullanımı ile kombinasyonu, amino asit transferi 33 için gösterildiği gibi daha dinamik ve mekanik bilgi sağlayacak güçlü bir yaklaşımı temsil edebilir. Teslimat öncesi glikoz infüzyonu başka olası bir yaklaşımdır. Plasental transfer, BMI, glukoz ve plazma lipid profilleri gibi maternal metabolik değişkenlerle ve doğum ağırlığı ve vücut kompozisyonu gibi fetal sonuçlarla ilişkili olabilir 18 . Bu yaklaşımlar birlikte, plasentanın bütünleyici rolünü, ana-fetal koşullar ile ihtiyaçlar arasındaki karşılıklı etkileşimin merkezine yerleştirerek aydınlatacaktır.

Ulusal Sağlık Enstitüsüne (ABD) göre, plasenta insan vücudunda en az anlaşılmış organ 1 , 2 , 3&#39;tür . Devam eden gebelikte etik olmayan riskler getirmeksizin insan plasentasını in vivo erişmek ve incelemek zordur. İnsandaki plasental fonksiyon çalışmaları büyük oranda in vitro ve ex vivo modellere dayanır. Plasental nakil ve metabolizma ile ilgili önceki in vivo çalışmaların çoğunluğu hayvanlar 4 , 5 , 6&#39;da gerçekleştirilmiştir . Bununla birlikte, plasental yapı ve fonksiyonlar türler arasında önemli farklılık gösterdiğinden, hayvanlardan insanlara yapılan sonuçların dikkatle kullanılması gerekir. İn vivo çalışmaların sadece birkaç küçük insan plasental ve fetal alımını ve normal fizyolojikVe hiçbiri 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 numaralı bileşiklerin bir bütün olarak transferini araştırmamıştır. Bu temel çalışmalar insan plasentasının in vivo çalışmalarının uygulanabilir olduğunu ve çeşitli amaçlara hizmet edebileceğini göstermektedir. Birincisi, plasental fonksiyonların temelde in vitro , ex vivo ve hayvan çalışmalarından türetilen güncel kavramları insan ortamında test edilerek insan plasentasına yeni ve daha spesifik bir bakış açısı getirilebilir. İkincisi, anormal fetal büyüme, preeklampsi, maternal diyabet, metabolik sendrom ve diğer maternal metabolik bozukluklarla ilişkili disfonksiyonel plasentanın özellikleri daha iyi karakterize edilebilir. Üçüncü olarak, insan in vivo çalışmalar teşhis geliştirme fırsatı sağlarPlasental fonksiyonun tik ve prediktif araçları. Bu arka planda insan plasental fonksiyonunu in vivo araştırmak için kapsamlı bir fizyolojik veri topluluğu oluşturmayı amaçladık . Planlı bir sezaryen sırasında, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki (4 damarlı örnekleme yöntemi) gelen ve giden damarlardan kan örnekleri toplamak için intraabdominal uterin ven girişini kullanırız. Bu numuneler besin maddeleri ve diğer maddelerin eşleştirilmiş arteriovenöz konsantrasyon farklılıklarını hesaplamak için kullanılır 14 . Buna ek olarak, ultrason ile plasentanın her iki tarafındaki hacimsel kan akışını ölçüyoruz. Sonuç olarak, herhangi bir bileşiğin plasental ve fetal alım miktarı belirlenebilir. Ayrıca plasenta tarafından maternal ve fetal dolaşımlara 15 , 16 , 17 serbest bırakılan maddelerin belirlenmesi mümkündür. BirleştirildiğindeD anne ve çocuğun klinik parametreleri ile birlikte, ve plasental ve diğer ilgili dokuların analizleri ile, bu yöntem, plasenta fonksiyonlarının birçok yönünü in vivo aynı anne-fetus çiftlerine entegre etmek için heyecan verici bir potansiyele sahiptir.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Maternal body composition&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Impedance scale</td><td>Tanita</td><td></td><td>or similar</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Ultrasound measurements&amp;nbsp;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sequoia 512 ultrasound machine</td><td>Acuson</td><td></td><td>equipped with a curved transducer with colour and pulsewave Doppler (frequency bandwidth 2 - 6 MHz)</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Blood samples&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arerial cannula</td><td>BD Medical</td><td>682245</td><td>or similar</td></tr><tr><td>20 cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle</td><td>Termo</td><td>SS-20ES</td><td>or similar. 3 needed.</td></tr><tr><td>10 cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle</td><td>Termo</td><td>SS-10ES</td><td>or similar. 9 needed.</td></tr><tr><td>5 cc 6% Luer Syringe without Needle</td><td>Termo</td><td>SS-05S1</td><td>or similar. 2 needed.</td></tr><tr><td>Arterial blood gas syringe&amp;nbsp;</td><td>Radiometer Medical</td><td></td><td>or similar. 4 needed.</td></tr><tr><td>Sterile winged needle connected to flexible tubing, 21 gauge</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>(intended for single use).3 needed.</td></tr><tr><td>Vacutainer tube 6 mL EDTA&amp;nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456043</td><td>or similar. Label with sample site. 10 needed.</td></tr><tr><td>Vacutainer tube 5 mL LH Lithium Heparin Separator</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456305</td><td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td></tr><tr><td>Vacutainer tube 6 mL Serum Clot Activator&amp;nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456089</td><td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td></tr><tr><td>Vacutainer tube 3 mL&amp;nbsp; 9NC Coagulation sodium citrate 3.2%</td><td>Greiner Bio-One</td><td>454334</td><td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td></tr><tr><td>Cryogenic vials, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>or similar. Label with sample site, serum/type of plasma and ID. 90 needed.</td></tr><tr><td>Marked trays to transport the syringes</td><td></td><td></td><td>to transport the blood samples in the operation theatre</td></tr><tr><td>Rocker</td><td></td><td></td><td>for gentle mixing of the samples</td></tr><tr><td>Ice</td><td></td><td></td><td>in styrofoam box</td></tr><tr><td>Liquid nitrogen</td><td></td><td></td><td>in appropriate container</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Placenta samples&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal tray</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ice</td><td></td><td></td><td>in styrofoam box</td></tr><tr><td>Calibrated scale</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal ruler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 M Phosphate buffered saline</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td>or similar. Dilute 10 M to&amp;nbsp; 1 M before use</td></tr><tr><td>RNA stabilization solution</td><td>Sigma</td><td>R0901-500ML&amp;nbsp;</td><td>or similar</td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) compound</td><td>vwr</td><td>361603E</td><td>or similar</td></tr><tr><td>Cryogenic vials, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>or similar. Label with sample site. content and ID. 10 needed.</td></tr><tr><td>Centrifuge tubes, conical bottom 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227,285</td><td>or similar. Label with &quot;RNA later&quot;, sample site and ID. 2 needed.</td></tr><tr><td>Liquid nitrogen</td><td></td><td></td><td>in appropriate container</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Fetal body composition&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calibrated scale</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Measuring tape</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the 4-vessel sampling approach to integrative studies of human placental physiology in vivo

Insan plasenta rahimde iken hala araştırma için son derece erişilemez. Bu nedenle, plasental anatomi, hemodinamik ve gebeliğin süresindeki türler arasında yüksek çeşitliliğe rağmen, insan plasental fizyolojisinin in vivo olarak mevcut anlayışı büyük oranda hayvan çalışmalarına dayanmaktadır. İnsan plasenta çalışmalarının büyük çoğunluğu ex vivo perfüzyon çalışmaları veya in vitro trofoblast çalışmalardır. In vitro çalışmalar ve hayvan modelleri çok önemlidir, ancak bu tür çalışmaların sonuçlarının insan plasentasına in vivo ekstrapolasyonu kesin değildir. İnsana plasenta fizyolojisini venöz dönemde çalışmayı ve yöntemin ayrıntılı bir protokolünü sunmayı amaçladık. Planlanan sezaryen sırasında uterin vene uterin vene girişin uterus kesi öncesi istismar edilmesi, gelen ve giden damarlardan plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki kan örneklerini toplarız. Konuyu birleştirirkenHacimsel kan akımı ölçümleri ile kan numunelerinden elde edilen santrasyon ölçümleri sayesinde, herhangi bir bileşiğin plasental ve fetal alımını ve salımını nicel olarak değerlendirebiliriz. Dahası, aynı anne-fetus çiftlerinden elde edilen plasental doku örnekleri, taşıyıcı yoğunluğunu, aktivitesini ve plasental fonksiyonların diğer yönlerini in vivo olarak ölçebilir . 4 damarlı örnekleme yönteminin bu entegre kullanımı sayesinde hem normal hem de patolojik gebeliklerde plasental besin transferinin ve metabolizmasının bazılarını in vivo olarak test edebiliyoruz. Ayrıca, bu yöntem, plasenta tarafından salgılanan maddelerin maternal dolaşımda tanımlanmasını sağlar ve bu da plasenta disfonksiyonunun biyolojik belirteçlerinin araştırılmasına önemli katkı sağlayabilir.

4 damarlı örnekleme yöntemi klinik uygulamada uygulanabilir ve 209 ana / bebek çifti kan numunesini başarıyla elde ettik. Bunların 128&#39;inde hacimsel kan akışını ölçmekteyiz. Hem ana hem de fetal damarların tam 4 damar örneklemesi ve kaliteli akış ölçümleri, 70 ana-fetus çiftinde elde edildi ( Şekil 3 ). Buna ek olarak, şimdiye kadar 30 preeklamptik hastadan alınan kan ve plasenta örneklerini aldık. Yöntemin 14 , 15 ve 16 nolu iki uygulamasını gösteren, vazoaktif faktörlerin plasental salımının yanı sıra, insan plasental aktarımı ile ilgili daha önce makaleler yayınladık. 4 damarlı yöntemin plasenta naklini incelemek için nasıl kullanıldığına örnek Önemli arteri varPlasentanın her iki tarafındaki ovenöz glukoz farklılıkları in vivo uteroplasental ve fetal glukoz alımını göstermektedir ( Tablo 1 ). Glukozun plasental transferi, anne-fetal glikoz gradyanına ve dolayısıyla maternal glukoz seviyelerine bağlıdır. Bununla birlikte, daha önce bu gradyanın ve dolayısıyla glikoz transferinin fetal insülin seviyeleri ve glukoz tüketimi tarafından önemli ölçüde etkilendiğini kanıtladık. Bu, bu yöntemin anne-fetüsün önemli etkileşimlerini nasıl örneklediğinin bir örneğidir 14 . <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> damar </td><td> Glükoz mmol / L </td><td> p-değeri * </td></tr><tr><td> Radial arter </td><td> 4,49 [4,22,4.84] </td><td></td></tr><tr><td> Uterin damar </td><td> 4.23 [3.94, 4.53] </td><td></td></tr><tr><td> Umbilikal ven </td><td>3.78 [3.52, 4.06] </td><td></td></tr><tr><td> Umbilikal arter </td><td> 3.24 [2.95, 3.56] </td><td></td></tr><tr><td> Eşleşmiş farklar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Radial arter - uterin ven </td><td> 0.29 [0.13, 0.41] </td><td> &lt;0.001 </td></tr><tr><td> Umbilikal arter - göbek bağı </td><td> 0.54 [0.29, 0.76] </td><td> &lt;0.001 </td></tr><tr><td> Radial arter - göbek arteri </td><td> 1.25 [1.03, 1.51] </td><td> &lt;0.001 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Glikozun Ortanca [Q1, Q3] Konsantrasyonları ve Arteriovenöz Farklılıklar * Wilcoxon İmzalı Sıralama Testi Göbek bağı sirkülasyonuna (plasental salınımdan) fetal glukoz alımının sadece o kadar bağımlı olmadığı düşünülmektedirAnne-fetal gradyan, ancak plasental kan akımı 5 . Aynı şekilde, fetal glukoz alımını plasenta ağırlığı veya doğum ağırlığının bir fonksiyonu olarak incelemekle de ilgili olabilir. N = 128&#39;de medyan [Q1, Q3] toplam umbilikal venöz akış 196.2 [158.3, 232.2] mL / dak bulundu ve medyan [Q1, Q3] fetal glukoz alımını (plasental salınmadan) umblikal dolaşıma kadar hesapladı 0.10 [0.05, 0.15] mmol / dak. Doğum ağırlığı için normalize edilen bu, 0.03 [0.02, 0.04] (mmol / dak) / kg&#39;ya eşittir. Plasenta, kg plasenta başına 0.16 [0.10, 0.26] (mmol / dak) serbest bırakır. 4 damarlı yöntemin plasenta alımını incelemek için nasıl kullanıldığına dair örnek Hayvan çalışmaları, glutamik asit önemli her ikisinin de amino plasentada asitler ve fetal karaciğer birbirine dönüşümü ve diğer metabolik yolların 27 oksidatif bir yakıt olarak olduğunu göstermektedir. Plasenta 4 damar örnekleme yöntemini kullanarak,Insanlardaki glutamik asitin teroplasental ve umbilikal arteriovenöz farklılıkları ( Tablo 2 ). Göbek bağı sirkülasyonundan plasenta alımını (dolayısıyla fetus salınımı) glutamik asit bulduk. Ayrıca maternal dolaşımdan glutamik asitin plasental alımını bulduk. Her iki dolaşımdan elde edilen bu plasental alım, insanda in vivo olarak besleyici plasental metabolizmasının transplasental transferi düzenlemesinin bir parçası olduğunu göstermek için 4 damarlı yöntemin nasıl kullanılabileceğine bir örnektir. <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> damar </td><td> Glutamik asit μmol / L </td><td> p-değeri * </td></tr><tr><td> Radial arter </td><td> 61.5 [51.0, 77.7] </td><td></td></tr><tr><td> Uterin damar </td><td> 51.0 [36.3, 65.0] </td><td></td></tr><tr><td> Umbilikal ven </td><td> 39.3 [24.7, 52.8] </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Umbilikal arter </td><td> 44.7 [33.1, 59.3] </td><td></td></tr><tr><td> Eşleşmiş farklar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Radial arter uterin ven </td><td> 10.4 [1.6, 21.2] </td><td> &lt;0.001 </td></tr><tr><td> Umbilikal arter-göbek damar </td><td> -8.7 [-16.0, 0.2] </td><td> &lt;0.001 </td></tr></tbody></table> Tablo 2: Glutamik Asidin Ortanca [Q1, Q3] Konsantrasyonları ve Arteriovenöz Farklılıklar * Wilcoxon İmzalı Sıralama Testi 4 damarlı yöntemin plasental salınımı incelemek için nasıl kullanıldığına ilişkin örnek Plasentanın progesteronu saldıracağı ve plasentanın maternal tarafında 4 damar yöntemimizi doğrulamak için, in vivo progesteron salınımını ölçtükRm 28 . Anne dolaşımına progesteronun önemli bir plasental salınımını bulduk ( Tablo 3 ). Gözlemlenen arteriovenöz fark, plasental 4 damar örnekleme yönteminin plasenta tarafından salınan maddelerin tespiti için nasıl kullanılabileceğini ve patolojik hamilelik incelenirken oldukça uygun olduğunu göstermektedir. <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> damar </td><td> Progesteron nmol / L </td><td> p-değeri * </td></tr><tr><td> Radial arter </td><td> 678 [514, 971] </td><td></td></tr><tr><td> Uterin damar </td><td> 1852 [1059, 2786] </td><td></td></tr><tr><td> Eşleşmiş farklar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Radial arter uterin ven </td><td> -1187 [-1855, -404] </td><td> p &lt;0.001 </td></tr></tbody></table>Tablo 3: Progesteronun [Q1, Q3] medyan konsantrasyonları ve uteroplasental arteriovenöz fark * Wilcoxon İmzalı Sıralama Testi <img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig3v2.jpg" /> Şekil 3 : Akış şemaları ve katılımcı ve kayıp katılımcıların illüstrasyonu. A. Katılımcıların katılımını göstermek, katılımcıların başta sezaryen öncesinde emek başlangıcı veya çalışmayı yürütmek için yeterli personel eksikliği nedeniyle kaybedildiğini göstermektedir. B. Normal gebeliği olan 179 kadından (mavi) 162 gebede (% 91) 4 damar kan örneği alındı ​​(eksik fetal kan örnekleri, tamamlanmamış siyah maternal kan örnekleri: gri). Lojistik sınırlamalardan dolayı elli bir (% 28) katılımcı ultrason ölçümleri için dahil edilmedi. 12 kişidenTüm katılımcılarda plasentanın fetal tarafında kan akımı ölçümleri yapıldı (açık yeşil), hem annenin hem de fetal tarafın tam kan akımı ölçümleri 77&#39;sinde (% 60) elde edildi. (koyu yeşil). Resim: Øystein H. Horgmo, Oslo Üniversitesi. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55847/55847fig3v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo at JoVE.com

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

Bu dönemde in vivo insan plasental fizyoloji çalışmak için ayrıntılı bir yöntem sunulmaktadır. Yöntem, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki gelen ve giden damarlardan alınan kan örneklerini, hacimsel kan akışı ve plasental doku örneklemesi ile ilgili ultrason ölçümleri ile birleştirir.

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı<emIn vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

10.5K Görüntüleme.  Oslo University Hospital.  Bu dönemde in vivo insan plasental fizyoloji çalışmak için ayrıntılı bir yöntem sunulmaktadır. Yöntem, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki gelen ve giden damarlardan alınan kan örneklerini, hacimsel kan akışı ve plasental doku örneklemesi ile ilgili ultrason ölçümleri ile birleştirir. 

Video: The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose dependent. Human term placenta is rich in MSC and is a physically large tissue that is generally discarded following birth. Placenta is an ideal starting material for the large-scale manufacture of multiple cell doses of allogeneic MSC. The placenta is a fetomaternal organ from which either fetal or maternal tissue can be isolated. This article describes the placental anatomy and procedure to dissect apart the decidua (maternal), chorionic villi (fetal), and chorionic plate (fetal) tissue. The protocol then outlines how to isolate MSC from each dissected tissue region, and provides representative analysis of expanded MSC derived from the respective tissue types. These methods are intended for pre-clinical MSC isolation, but have also been adapted for clinical manufacture of placental MSC for human therapeutic use.

Herein we describe methods for the dissection of fetal and maternal tissues from human term placenta, followed by isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells (MSC) from these tissues.

İnsan Plasenta Doku türetilen İzolasyon ve mezenkimal kök Genişleme / Stromal hücreler

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Gelişim Biyolojisi

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. All HSCs emerge during embryonic development, after which their pool size is maintained by self-renewing cell divisions. Identifying the anatomical origin of HSCs and the critical developmental events regulating the process of HSC development has been complicated as many anatomical sites participate during fetal hematopoiesis. Recently, we identified the placenta as a major hematopoietic organ where HSCs are generated and expanded in unique microenvironmental niches (Gekas, et al 2005, Rhodes, et al 2008). Consequently, the placenta is an important source of HSCs during their emergence and initial expansion.
In this article, we show dissection techniques for the isolation of murine placenta from E10.5 and E12.5 embryos, corresponding to the developmental stages of initiation of HSCs and the peak in the size of the HSC pool in the placenta, respectively. In addition, we present an optimized protocol for enzymatic and mechanical dissociation of placental tissue into single-cell suspension for use in flow cytometry or functional assays. We have found that use of collagenase for single-cell suspension of placenta gives sufficient yields of HSCs. An important factor affecting HSC yield from the placenta is the degree of mechanical dissociation prior to, and duration of, enzymatic treatment.
We also provide a protocol for the preparation of fixed-frozen placental tissue sections for the visualization of developing HSCs by immunohistochemistry in their precise cellular niches. As hematopoietic specific antigens are not preserved during preparation of paraffin embedded sections, we routinely use fixed frozen sections for localizing placental HSCs and progenitors.

We have identified the placenta as a major hematopoietic organ during development. We found that hematopoietic stem cells (HSCs) are both generated and expanded in the placenta in unique microenvironmental niches. Here, we describe experimental techniques required for isolation and visualization of HSCs in the mouse placenta.

Plasenta Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu ve Analizi

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Biyoloji

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced birth defects and many later studies afterwards proved the opposite. Today several harmful xenobiotics like nicotine, heroin, methadone or drugs as well as environmental pollutants were described to overcome this barrier. With the growing use of nanotechnology, the placenta is likely to come into contact with novel nanoparticles either accidentally through exposure or intentionally in the case of potential nanomedical applications. Data from animal experiments cannot be extrapolated to humans because the placenta is the most species-specific mammalian organ 1. Therefore, the ex vivo dual recirculating human placental perfusion, developed by Panigel et al. in 1967 2 and continuously modified by Schneider et al. in 1972 3, can serve as an excellent model to study the transfer of xenobiotics or particles.
Here, we focus on the ex vivo dual recirculating human placental perfusion protocol and its further development to acquire reproducible results.
The placentae were obtained after informed consent of the mothers from uncomplicated term pregnancies undergoing caesarean delivery. The fetal and maternal vessels of an intact cotyledon were cannulated and perfused at least for five hours. As a model particle fluorescently labelled polystyrene particles with sizes of 80 and 500 nm in diameter were added to the maternal circuit. The 80 nm particles were able to cross the placental barrier and provide a perfect example for a substance which is transferred across the placenta to the fetus while the 500 nm particles were retained in the placental tissue or maternal circuit. The ex vivo human placental perfusion model is one of few models providing reliable information about the transport behavior of xenobiotics at an important tissue barrier which delivers predictive and clinical relevant data.

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

The ex vivo dual recirculating human placental perfusion model can be used to investigate the transfer of xenobiotics and nanoparticles across the human placenta. In this video protocol we describe the equipment and techniques required for a successful execution of a placenta perfusion.

Plasenta karşısında Ksenobiyotik ve Nanomalzemelerin Ulaştırma Hızı belirlenmesi kullanarak<em&gt; Ex vivo</em&gt; İnsan Plasental Perfüzyon Modeli

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Biyomühendislik

Isolation of Cellular Lipid Droplets: Two Purification Techniques Starting from Yeast Cells and Human Placentas

Lipid droplets are dynamic organelles that can be found in most eukaryotic and certain prokaryotic cells. Structurally, the droplets consist of a core of neutral lipids surrounded by a phospholipid monolayer. One of the most useful techniques in determining the cellular roles of droplets has been proteomic identification of bound proteins, which can be isolated along with the droplets. Here, two methods are described to isolate lipid droplets and their bound proteins from two wide-ranging eukaryotes: fission yeast and human placental villous cells. Although both techniques have differences, the main method - density gradient centrifugation -&#160;is shared by both preparations. This shows the wide applicability of the presented droplet isolation techniques.

In the first protocol, yeast cells are converted into spheroplasts by enzymatic digestion of their cell walls. The resulting spheroplasts are then gently lysed in a loose-fitting homogenizer. Ficoll is added to the lysate to provide a density gradient, and the mixture is centrifuged three times. After the first spin, the lipid droplets are localized to the white-colored floating layer of the centrifuge tubes along with the endoplasmic reticulum (ER), the plasma membrane, and vacuoles. Two subsequent spins are used to remove these other three organelles. The result is a layer that has only droplets and bound proteins.

In the second protocol, placental villous cells are isolated from human term placentas by enzymatic digestion with trypsin and DNase I. The cells are homogenized in a loose-fitting homogenizer. Low-speed and medium-speed centrifugation steps are used to remove unbroken cells, cellular debris, nuclei, and mitochondria. Sucrose is added to the homogenate to provide a density gradient and the mixture is centrifuged to separate the lipid droplets from the other cellular fractions.

The purity of the lipid droplets in both protocols is confirmed by Western Blot analysis. The droplet fractions from both preps are suitable for subsequent proteomic and lipidomic analysis.

Two techniques for isolating cellular lipid droplets from 1) yeast cells and 2) human placentas are presented. The centerpiece of both procedures is density gradient centrifugation, where the resulting floating layer containing the droplets can be readily visualized by eye, extracted, and quantified by Western Blot analysis for purity.

Hücresel Lipid damlacıklar İzolasyonu: Maya Hücreleri ve insan plasentası itibaren iki Arıtma Teknikleri

Lipid droplets are dynamic organelles that can be found in most eukaryotic and certain prokaryotic cells. Structurally, the droplets consist of a core of ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that makes up much of the parenchyma of the human placenta. The distal villous capillary network is the terminus of the fetal blood supply after several generations of branching of vessels extending out from the umbilical cord. This network has a contiguous cellular sheath, the syncytial trophoblast barrier layer, which prevents mixing of fetal blood and the maternal blood in which it is continuously bathed. Insults to the integrity of the placental capillary network, occurring in disorders such as maternal diabetes, hypertension and obesity, have consequences that present serious health risks for the fetus, infant, and adult. To better define the structural effects of these insults, a protocol was developed for this study that captures capillary network structure on the order of 1 - 2 mm3 wherein one can investigate its topological features in its full complexity. To accomplish this, clusters of terminal villi from placenta are dissected, and the trophoblast layer and the capillary endothelia are immunolabeled. These samples are then clarified with a new tissue clearing process which makes it possible to acquire confocal image stacks to z- depths of ~1 mm. The three-dimensional renderings of these stacks are then processed and analyzed to generate basic capillary network measures such as volume, number of capillary branches, and capillary branch end points, as validation of the suitability of this approach for capillary network characterization.

This study presents a protocol for the reversible tissue clearing, immunostaining, 3D-rendering and analysis of vascular networks in human placenta villi samples on the order of 1 - 2 mm3.

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Ex Vivo Perfusion of the Rodent Placenta

The placenta is a key organ during pregnancy that serves as a barrier to fetal xenobiotic exposure and mediates the exchange of nutrients for waste. An assay is described here to perfuse an isolated rat placenta and evaluate the maternal-to-fetal translocation of xenobiotics ex vivo. In addition, the evaluation of physiological processes such as fluid flow to the fetus and placental metabolism may be conducted with this methodology. This technique is suitable for evaluating maternal-to-fetal kinetics of pharmaceutical candidates or environmental contaminants. In contrast to current alternative approaches, this methodology allows the evaluation of the isolated maternal-fetal vasculature, with the systemic neural or immune involvement removed, allowing any observed changes in physiological function to be attributable to local factors within the isolated tissue.

Here is presented a protocol of ex vivo maternal-fetal vascular perfusion to enable the administration of a test article into maternal vasculature and to evaluate placental transfer of xenobiotic particles or pharmacological agents in addition to alterations in placental physiology.

Rodent placenta 'nın ex vivo perfüzyon

The placenta is a key organ during pregnancy that serves as a barrier to fetal xenobiotic exposure and mediates the exchange of nutrients for waste. An ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

İnsan Plasental ve Desidual Organ Kültürleri Maternal-Fetal Arayüz de Enfeksiyonlar Eğitim için

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Akış Tabanlı Bir Yaklaşım Kullanarak Ex Vivo Plasental Ekzplant Kültürünün İyileştirilmesi

Ex Vivo Placental Explant Flow Culture - Mimicking the Dynamic Conditions In Utero

The existing ex vivo placental explant culture models are primarily grounded in static culture systems using well plates. However, these models inadequately reflect the dynamic in utero setting, where the placenta encounters constant slight shear stress due to plasma or blood flow. To address this limitation, a flow culture system has been devised to bring ex vivo placental explant cultivation closer to the in utero flow conditions experienced within the maternal body. Within this approach, placental explants are cultivated in a sequence of five interconnected flow chambers. This setting&#160;maintains physiological oxygen concentrations and a consistent flow rate. The collected data reveals that under flow conditions, the preservation of tissue morphology exhibits notable enhancement compared to conventional static methods. This innovative technique introduces a straightforward means of ex vivo placental explant culture, offering a more faithful representation of the dynamic in vivo environment. Moreover, this study introduces new&#160;possibilities for investigating the functional dynamics of the feto-maternal interface. By embracing feasible dynamic methodologies, a deeper comprehension of placental biology is facilitated, underscoring its relevance for maternal-fetal health.

Yazar Spotlight: Plasental Dokularda Tek Hücre Dizilimi ve Mekansal Histoloji Yoluyla Araştırmayı İlerletme 

Here is a protocol for culturing placental explants under constant flow conditions. This approach enhances traditional static villous culture systems by enabling the replication of dynamic physiological environments.

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

İnsan Plasenta Doku türetilen İzolasyon ve mezenkimal kök Genişleme / Stromal hücreler

Plasenta Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu ve Analizi

Plasenta karşısında Ksenobiyotik ve Nanomalzemelerin Ulaştırma Hızı belirlenmesi kullanarak

Hücresel Lipid damlacıklar İzolasyonu: Maya Hücreleri ve insan plasentası itibaren iki Arıtma Teknikleri

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Rodent placenta 'nın ex vivo perfüzyon

İnsan Plasental ve Desidual Organ Kültürleri Maternal-Fetal Arayüz de Enfeksiyonlar Eğitim için

Ex Vivo (Canlı Canlı) Plasental Eksplant Akış Kültürü - Utero'daki Dinamik Koşulları Taklit Etmek

Ex Vivo (Canlı Canlı) Plasental Eksplant Akış Kültürü - Utero'daki Dinamik Koşulları Taklit Etmek

Ex Vivo (Canlı Canlı) Plasental Eksplant Akış Kültürü - Utero'daki Dinamik Koşulları Taklit Etmek