Yazarlar Scott Howard ve Abigail Marinack&#39;ın bu çalışmanın genel destek ve koordinasyonu için onaylarlar.

İnsan idrar örneklerini içeren tüm çalışmalar, Pharmasan / Neuroscience Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanan prosedüre uyularak gerçekleştirildi. 1. İdrar Numunesi Toplama ve Kreatinin (Cr) Tayini <ol><li> Yaklaşık 5 mL sonra ertesi sabah idrar örnekleri toplayın. Koruyucu olarak 250 μL 3 N HC1 içeren 5 mL&#39;lik bir taşıma tüpünde gece boyunca 10 saat boyunca aç bırakın ve kullanıma kadar -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Çözünür ve vorteks 5 mL nakliye idrarını Bir santrifüjde bir tüp ve santrifüj ( örn. Sorvall) (2297 xg, 10 dakika). </li><li> 5 mL nakliye borusundan iki kez 1 mL idrar ekleyin. </li><li> Bir idrar kreatin yöntemi ile Cr&#39;yi belirleyin 26 . </li></ol> 2. Standart, IS ve Kalite Kontrol (QC) Örneklerinin Hazırlanması <ol><li> % 0.01 HCOOH mobil faz A (MA) ile 100 μg / mL&#39;de 3-NT stok solüsyonu hazırlayın ve -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> YapmakMA ile 100 ug / mL 3-NT stok solüsyonu seyreltilerek 100 ng / mL konsantrasyonda bir 3-NT çalışma standart solüsyonu. </li><li> 100 ng / mL çalışma standardının, boşluklu ve çift boş örnekler ile birlikte 3-NT içermeyen 0,15 M HC1 ile asitlendirilmiş boş idrarla seyreltilmesi ile 5 ila 2500 pg / mL arasında değişen standartları oluşturun. </li><li> MA ile suda 100 μg / mL&#39;de IS 13 C 9 -3-NT stok solüsyonu hazırlayın ve -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> 100 ug / ml 13 ° C 9-3-NT seyreltilmesi ile 500 pg / ml bir çalışma IS çözeltisi yapmak MA stok çözeltisi IS. </li><li> Asitli boş idrarda 3-NT çalışma standardının seyreltilmesi ile LLOQ, düşük, orta ve yüksek seviyeleri ( yani , 10, 25, 100, 500 ve 1,250 pg / mL) kapsayan beş kalite QC örneği oluşturun. </li></ol> 3. Katı Faz Çıkarma Prosedürü <ol><li> Çözünme ve girdaplı idrar örnekleri, standartlar ve QC örnekleri. </li><li> İdrar numuneleri, standartlar ve QC sampayı ekleyinLes (her biri 250 uL) ile temiz 2 mL&#39;lik 96 gözlü toplama plakasının 32 oyuğuna eklendi. </li><li> Çifte boş numune hariç her göze 500 pg / mL IS çalışma solüsyonu (50 μL) ekleyin. Çifte boş örnek kuyusuna% 0.01 HCOOH (50 uL) ilave edin. </li><li> % 0.1 HCOOH (250 uL) ile LC-MS / MS suyu ekleyin. </li><li> Yukarıdaki karışımı üç kez 8 kanallı bir pipetle karıştırın. </li><li> SPE yükleninceye kadar plakayı örtün. </li><li> Bir pozitif basınç işlemcisine bir MCX 96 gözlü çıkarma plakası ve toplama haznesi yerleştirin. </li><li> Emme plakasını sorbent boyunca MeOH (200 uL) akan ile şartlandırın. </li><li> Sorbent boyunca% 2 HCOOH (200 uL) su akıtılarak dengeye getirilir. </li><li> Önceden karıştırılmış örneklerin her birinin hacmini, 8 kanallı bir pipetle dikkatlice önceden şartlandırılmış ekstraksiyon plakasına yükleyin. </li><li> Pozitif basınçlı işlemci üzerinde düşük pozitif basıncı ( örneğin 3 psi) ayarlayarak karışımın thrSorbent yavaşça, gerekirse basıncı ayarlayın. </li><li> Sorguyu kullanarak% 2 HCOOH (200 μL) su akıtılarak oyukları yıkayın. </li><li> Sorguyu kullanarak metanol (200 μL) akıtılarak kuyuları yıkayın. </li><li> Sorguyu akan su (200 μL) ile oyukları yıkayın. </li><li> Pozitif basınçlı işlemcide kuyuları tamamen yüksek pozitif basınç ayarı ( örn. , 40 psi) ile kurutun. </li><li> Hazneyi temiz bir 2 mL&#39;lik 96 gözlü toplama plakası ile değiştirin. </li><li> Muhafaza analiti çıkarmak için arta pH 9 (50 uL) 25 mM NH4 OAc uygulayın ve ekstraksiyon plakadan IS. </li><li> Eluatın nötralize edilmesi için LC-MS suyunu% 5 HCOOH (50 uL) ile pipetleyin. </li><li> 8 kanallı pipetle üç kez karıştırın ve analiz için LC-MS / MS istasyonuna gönderin. </li></ol> 4. LC-MS / MS Analizi <ol><li> Dereceli silindirle 2.000 mL LC-MS suyunu doğru olarak ölçün ve 2 L&#39;lik bir şişeye aktarın. </li><li> PIpette 200 uL saf HCOOH, LC-MS su içeren yukarıdaki şişeye yerleştirilir. </li><li> Harman hallaç iyice karıştırın ve mobil faz A (MA) olarak etiketleyin. Baş harflerini, hazırlanma tarihini ve son kullanma tarihini ekleyin. </li><li> LC-MS metanolden 2 L şişe alın ve başlangıç ​​ve son kullanma tarihleri ​​olan mobil faz B (MB) olarak etiketleyin. </li><li> Otomatik örnekleyicinin sıcaklığını 4 ° C&#39;ye ayarlayın. </li><li> Hazırlanan örneklerle birlikte toplama plakasını otomatik örnekleyiciye yerleştirin. </li><li> Fırında bir PFP sütunu (150 mm x 2.1 mm id, 3 μm) ve koruma sütunu yerleştirin. </li><li> Fırın sıcaklığını 30 ° C&#39;ye ayarlayın. </li><li> Tablo 1&#39;de gösterildiği gibi LC gradyanı elüsyonu ile edinme metodu kullanılarak 10 dakika dengelenir. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Zaman (dak) </td><td> modül </td><td> Olaylar </td><td> Parametre </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 5 </td></tr><tr><td> 0.5 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 20 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 50 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 80 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 90 </td></tr><tr><td> 4.01 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 95 </td></tr><tr><td> 5.5 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 95 </td></tr><tr><td> 5.6 </td><td> Pompalar </td><td> Pompa B Kons. </td><td> 5 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> kontrolör </td><td> Dur </td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1: Sıvı Kromatografi Gradyan Elüsyon Koşulları <ol start="10"><li> Dahil olmak üzere bir toplu iş listesi oluşturunStandartlar, QC ve idrar örnekleri. </li><li> Hazırlanan örneklerin (12 μL) enjekte edilmesi ile partiye başlayın. </li></ol> 5. Tepe Tanımlama, Entegrasyon ve Veri İşlemi <ol><li> Yazılımı kullanarak veri toplama ve işleme kontrol edin. </li><li> Tüm numuneler için 3-NT ve IS zirveleri tanımlayın ve entegre edin. </li><li> 3-NT niceliklemesi için 10-2,500 pg / mL aralığında standart bir eğri oluşturun ve 1 / x ağırlık faktörü ile nominal 3-NT konsantrasyonuna karşı 3-NT ve IS&#39;nin zirve alanı oranının doğrusal gerilemesi ile tayin edin. </li><li> Standart eğriyi kullanarak tüm numuneleri ölçün. </li><li> QC örneklerinin belirlenen aralıkta olup olmadığını belirleyin. </li><li> Tespit edilen idrardaki konsantrasyonları nM veya nmol / mmol Cr biriminde nihai sonuçlara dönüştürün. </li></ol>

<ol>
	<li>Dalle-Donne, I., Rossi, R., Colombo, R., Giustarini, D., Milzani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+oxidative+damage+in+human+disease.">Biomarkers of oxidative damage in human disease.</a> Clin. Chem. 52 (4), 601-623 (2006).</li><li>Pacher, P., Beckman, J. S., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+and+peroxynitrite+in+health+and+disease.">Nitric oxide and peroxynitrite in health and disease.</a> Physiol. Rev. 87 (1), 315-424 (2007).</li><li>Baraldi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Nitrotyrosine,+a+marker+of+nitrosative+stress,+is+increased+in+breath+condensate+of+allergic+asthmatic+children.">3-Nitrotyrosine, a marker of nitrosative stress, is increased in breath condensate of allergic asthmatic children.</a> Allergy. 61 (1), 90-96 (2006).</li><li>Ischiropoulos, H., Beckman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+nitration+in+neurodegeneration:+Cause,+effect,+or+association?.">Oxidative stress and nitration in neurodegeneration: Cause, effect, or association?.</a> J. Clin. Invest. 111 (2), 163-169 (2003).</li><li>Butterfield, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+levels+of+3-nitrotyrosine+in+brain+from+subjects+with+amnestic+mild+cognitive+impairment:+implications+for+the+role+of+nitration+in+the+progression+of+Alzheimer's+disease.">Elevated levels of 3-nitrotyrosine in brain from subjects with amnestic mild cognitive impairment: implications for the role of nitration in the progression of Alzheimer's disease.</a> Brain Res. 1148, 243-248 (2007).</li><li>Hui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+robust+LC-MS/MS+method+for+quantification+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+from+patients+receiving+on-pump+CABG+surgery.">A simple and robust LC-MS/MS method for quantification of free 3-nitrotyrosine in human plasma from patients receiving on-pump CABG surgery.</a> Electrophoresis. 33 (4), 697-704 (2012).</li><li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+modified+tyrosines+in+healthy+and+diabetic+human+urine+using+liquid+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Quantification of modified tyrosines in healthy and diabetic human urine using liquid chromatography/tandem mass spectrometry.</a> J. Clin. Biochem. Nutr. 44 (1), 67-78 (2009).</li><li>Duncan, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+approaches+to+the+analysis+of+3-nitrotyrosine.">A review of approaches to the analysis of 3-nitrotyrosine.</a> Amino acids. 25 (3-4), 351-361 (2003).</li><li>Ryberg, H., Caidahl, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic+and+mass+spectrometric+methods+for+quantitative+determination+of+3-nitrotyrosine+in+biological+samples+and+their+application+to+human+samples.">Chromatographic and mass spectrometric methods for quantitative determination of 3-nitrotyrosine in biological samples and their application to human samples.</a> J. Chromatogr. B. 851 (1-2), 160-171 (2007).</li><li>Tsikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+methods+for+3-nitrotyrosine+quantification+in+biological+samples:+the+unique+role+of+tandem+mass+spectrometry.">Analytical methods for 3-nitrotyrosine quantification in biological samples: the unique role of tandem mass spectrometry.</a> Amino acids. 42 (1), 45-63 (2012).</li><li>Tsikas, D., Duncan, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+and+3-nitrotyrosine:+strategies,+controversies,+and+our+current+perspective.">Mass spectrometry and 3-nitrotyrosine: strategies, controversies, and our current perspective.</a> Mass Spectrom. Rev. 33 (4), 237-276 (2014).</li><li>Iwasaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fluorescence+reagents+for+simultaneous+determination+of+hydroxylated+phenylalanine+and+nitrated+tyrosine+by+high-performance+liquid+chromatography+with+fluorescence+detection.">Comparison of fluorescence reagents for simultaneous determination of hydroxylated phenylalanine and nitrated tyrosine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.</a> Biomed. Chromatogr. 26 (1), 41-50 (2012).</li><li>Saravanabhavan, G., Blais, E., Vincent, R., Kumarathasan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+performance+liquid+chromatography-electrochemical+array+method+for+the+measurement+of+oxidative/nitrative+changes+in+human+urine.">A high performance liquid chromatography-electrochemical array method for the measurement of oxidative/nitrative changes in human urine.</a> J. Chromatogr. A. 1217 (19), 3269-3274 (2010).</li><li>Mergola, L., Scorrano, S., Del Sole, ., Lazzoi, R., R, M., Vasapollo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+in+the+synthesis+of+a+water+compatible+molecularly+imprinted+polymer+as+artificial+receptor+for+detection+of+3-nitro-L-tyrosine+in+neurological+diseases.">Developments in the synthesis of a water compatible molecularly imprinted polymer as artificial receptor for detection of 3-nitro-L-tyrosine in neurological diseases.</a> Biosens. Bioelectron. 40 (1), 336-341 (2013).</li><li>Schwedhelm, E., Tsikas, D., Gutzki, F. M., Frolich, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas+chromatographic-tandem+mass+spectrometric+quantification+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+at+the+basal+state.">Gas chromatographic-tandem mass spectrometric quantification of free 3-nitrotyrosine in human plasma at the basal state.</a> Anal. Biochem. 276 (2), 195-203 (1999).</li><li>Tsikas, D., Mitschke, A., Suchy, M. T., Gutzki, F. M., Stichtenoth, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+3-nitrotyrosine+in+human+urine+at+the+basal+state+by+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+evaluation+of+the+excretion+after+oral+intake.">Determination of 3-nitrotyrosine in human urine at the basal state by gas chromatography-tandem mass spectrometry and evaluation of the excretion after oral intake.</a> J. Chromatogr. B. 827 (1), 146-156 (2005).</li><li>Marvin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+o,o'-dityrosine,+o-nitrotyrosine,+and+o-tyrosine+in+cat+urine+samples+by+LC/electrospray+ionization-MS/MS+using+isotope+dilution.">Quantification of o,o'-dityrosine, o-nitrotyrosine, and o-tyrosine in cat urine samples by LC/electrospray ionization-MS/MS using isotope dilution.</a> Anal. Chem. 75 (2), 261-267 (2003).</li><li>Orhan, H., Vermeulen, N. P., Tump, C., Zappey, H., Meerman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+tyrosine,+phenylalanine+and+deoxyguanosine+oxidation+products+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+as+non-invasive+biomarkers+for+oxidative+damage.">Simultaneous determination of tyrosine, phenylalanine and deoxyguanosine oxidation products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry as non-invasive biomarkers for oxidative damage.</a> J. Chromatogr. B. 799 (2), 245-254 (2004).</li><li>Chen, H. J. C., Chiu, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+and+quantification+of+3-nitrotyrosine+and+3-bromotyrosine+in+human+urine+by+stable+isotope+dilution+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Simultaneous detection and quantification of 3-nitrotyrosine and 3-bromotyrosine in human urine by stable isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Toxicol. Lett. 181 (1), 31-39 (2008).</li><li>Marc, D. T., Ailts, J. W., Campeau, D. C. A., Bull, M. J., Olson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransmitters+excreted+in+the+urine+as+biomarkers+of+nervous+system+activity:+validity+and+clinical+applicability.">Neurotransmitters excreted in the urine as biomarkers of nervous system activity: validity and clinical applicability.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 35 (3), 635-644 (2011).</li><li>Li, X. G., Li, S., Wynveen, P., Mork, K., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+specific+and+sensitive+LC-MS/MS+method+for+quantification+of+urinary+catecholamines+and+application+in+biological+variation+studies.">Development and validation of a specific and sensitive LC-MS/MS method for quantification of urinary catecholamines and application in biological variation studies.</a> Anal. Bioanal. Chem. 406 (28), 7287-7297 (2014).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-analytical+and+analytical+validations+and+clinical+applications+of+a+miniaturized,+simple+and+cost-effective+solid+phase+extraction+combined+with+LC-MS/MS+for+the+simultaneous+determination+of+catecholamines+and+metanephrines+in+spot+urine+samples.">Pre-analytical and analytical validations and clinical applications of a miniaturized, simple and cost-effective solid phase extraction combined with LC-MS/MS for the simultaneous determination of catecholamines and metanephrines in spot urine samples.</a> Talanta. 159, 238-247 (2016).</li><li>Chao, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+of+3-nitrotyrosine+and+3-nitro-4-hydroxyphenylacetic+acid+in+human+urine+by+online+SPE+LC-MS/MS+and+their+association+with+oxidative+and+methylated+DNA+lesions.">Simultaneous detection of 3-nitrotyrosine and 3-nitro-4-hydroxyphenylacetic acid in human urine by online SPE LC-MS/MS and their association with oxidative and methylated DNA lesions.</a> Chem. Res. Toxicol. 28 (5), 997-1006 (2015).</li><li>Radabaugh, M. R., Nemirovskiy, O. V., Misko, T. P., Aggarwal, P., Mathews, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoaffinity+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+detection+of+nitrotyrosine+in+biological+fluids+development+of+a+clinically+translatable+biomarker.">Immunoaffinity liquid chromatography-tandem mass spectrometry detection of nitrotyrosine in biological fluids development of a clinically translatable biomarker.</a> Anal. Biochem. 380 (1), 68-76 (2008).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailored+96-well+&#181;Elution+solid-phase+extraction+combined+with+UFLC-MS/MS:+a+significantly+improved+approach+for+determination+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+urine.">Tailored 96-well &#181;Elution solid-phase extraction combined with UFLC-MS/MS: a significantly improved approach for determination of free 3-nitrotyrosine in human urine.</a> Anal. Bioanal. Chem. 407 (25), 7703-7712 (2015).</li><li>. Roche Creatinine Jaffé Gen.2, package insert 2011-11, V7 Available from: <a target="_blank" href="https://usdiagnostics.roche.com/products/06407137190/PARAM2083/overlay.html">https://usdiagnostics.roche.com/products/06407137190/PARAM2083/overlay.html</a> (2011)</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mixed-mode+solid+phase+extraction+coupled+with+LC-MS/MS+for+the+re-evaluation+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+as+an+oxidative+stress+biomarker.">A novel mixed-mode solid phase extraction coupled with LC-MS/MS for the re-evaluation of free 3-nitrotyrosine in human plasma as an oxidative stress biomarker.</a> Talanta. 140, 45-51 (2015).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+approach+for+the+ultra-sensitive+determination+of+catecholamines+in+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+to+assess+neural-immune+communication.">An integrated liquid chromatography-tandem mass spectrometry approach for the ultra-sensitive determination of catecholamines in human peripheral blood mononuclear cells to assess neural-immune communication.</a> J. Chromatogr. A. 1449, 54-61 (2016).</li></ol>

Yazarlar, çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

İnsan idrar örneklerinde endojen serbest 3-NT için literatürde daha önce bildirilen konsantrasyonlarda önemli değişiklikler, mevcut testler 8 , 9 , 10 , 11 ile ilgili metodolojik problemleri ortaya çıkarmaktadır. İnsan idrarı altındaki düşük 3-NT seviyesinin doğru tespiti, örnek hazırlama ve LC-MS / MS analizi için özel tedbirler gerektiren zorlu bir görev olmaya devam etmektedir. Bu protokol, yüksek verimle üriner 3-NT&#39;nin spesifik ve duyarlı şekilde saptanmasına izin veren seçici bir LC-MS / MS bulgusu ile kombine edilen yeni bir SPE prosedürünü özetlemektedir. MRM parametrelerinin dikkatli seçilmesi, 3-NT&#39;nin saptanması için seçiciliği geliştirmiştir. Plazma 27&#39;de 3-NT için IS&#39;nin 236.0&gt; 96.0 m / z MRM geçişi idrar örnekleri için ciddi kontaminasyona neden olmuştur. Sinyalin daha temiz, 9 kat artışıMRM geçiş m / z 236.0&gt; 189.0 ile yanıt elde edildi. MRM geçiş m / z 227.0&gt; 90.0, 3-NT kantifikasyonu için en yoğun geçiş m / z 227.0&gt; 181.0 kullanarak şiddetli girişimden dolayı seçilmiştir. Ayrıntılı MRM geçişleri ve bileşik parametreler Tablo 2&#39;de özetlenmiştir. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Analyte </td><td> MRM geçişi (m / z) </td><td> DP (V) </td><td> EP (V) </td><td> CE (eV) </td><td> CXP (V) </td></tr><tr><td> 3-NT (nicelikçi) </td><td> 227.0&gt; 90.0 </td><td> 50 </td><td> 10 </td><td> 38 </td><td> 13 </td></tr><tr><td> 3-NT (niteleyici) </td><td> 227.0&gt; 103.9 </td><td> 50 </td><td> 10 </td><td> 45 </td><td> 16 </td></tr><tr><td> 13 C9 -NT (IS) </td><html><td> 236.0&gt; 189.0 </td><td> 50 </td><td> 10 </td><td> 21 </td><td> 14 </td></tr><tr><td colspan="6"> Bir İyon sprey voltajı: 2200 V; Sıcaklık: 600 ° C; Perde gazı: 35; CAD gazı: 9; Nebulizatör gazı (GS1): 50; Isıtıcı gaz (GS2): 55. </td></tr></tbody></table> Tablo 2: Optimize MRM Koşulları. Literatürde 12 , 13 , 17 , 19 LC&#39;de 3-NT&#39;nin LC kromatografik olarak ayrılması için yaygın olarak kullanılan geleneksel C18 tipi sütun , genellikle girişimin azaltılması için uzun bir geri dönüş süresine ihtiyaç duyuyor ve yüksek verim için elverişli olmuyor. Bu protokolde, 3-NT&#39;nin LC kromatografik ayrımının optimum hale getirilmesi için polar bileşiklerin 22 ,&gt; 27 , 28 . Mobil faz katkılarının konsantrasyonu, sinyal yoğunluğu 25 , 28 üzerinde önemli bir etkiye sahiptir. % 0.01 konsantrasyondaki HCOOH, MA&#39;da 2.5 katlık bir sinyal kazancı sağladığı ve konsantrasyonda azaltılmış sinyal tepkisinde daha da azaldığı için, MA&#39;da optimal katkı olarak bulunmuştur. Su (MA) ve metanol (MB) içinde% 0.01 HCOOH kullanılarak gradiyentli bir elüsyon profili 0.45 mL / dak&#39;lık bir akış hızı ile gerçekleştirildi ve 3 dakikalık bir sürede optimal bir ayırma ve hızlı bir şekilde 3-NT&#39;nin hızlı bir şekilde elüsyona uğratılması sağlandı. literatürde 12, 13, 17, 19 rapor daha karmaşık biyolojik matrisler 3-NT önemli ölçüde daha hızlı analiz izin sadece 7 dk. Geleneksel ters fazlı kartuşun (C18 tipi) etkisiz hale getirilmesi içinBiyolojik örneklerin 6 , 7 SPE&#39;si için art arda kullanıldık, SPE&#39;nin insan plazmasındaki 3-NT&#39;yi tek bir çift işlevli 96 kuyulu MCX plakası 27 üzerinde belirlemek için kısa süre önce bir LC-MS / MS yöntemi geliştirdik ve SPE&#39;de iyileşme sağladı Verimlilik ve seçicilik. Bununla birlikte, literatürdeki tüm SPE yaklaşımlarının belirgin bir dezavantajı zahmetli ve riske bağlı buharlaşma ve yeniden yapılandırma adımlarıdır. Buna ek olarak, plazma yöntemi, sorbentten kirliliği ortadan kaldırmak için ekstraksiyon plakasının fazladan bir ön yıkamasını gerektiriyordu. Bu protokolde, bu dezavantajlar minyatür 96-çukurlu bir mikroplakanın kullanımı ile özel bir SPE tarafından ortadan kaldırılmıştır. Elüsyon çözeltisi seçimi, ekstraksiyon verimliliği için çok önemli bulundu. Önemli müdahaleler MeOH çeşitli bileşimi ile yaygın NH4OH elüsyon çözeltisi uygulayarak idrar örneklerinde gözlenmiştir. İnterfer&#39;ining maddeler dolayısıyla düşük seçicilik ile sonuçlanan bu metanolik NH4OH elüsyon çözeltisi güçlü elüsyon gücüne analit ile birlikte yıkandı. Seçiciliği geliştirmek için, hem 3-NT&#39;ye karşı yeterince güçlü, hem de müdahale eden bileşiklerin yıkanmasına neden olmayacak kadar zayıf bir çözeltinin belirlenmesi gerekliydi. Farklı pH ve konsantrasyonlarda daha az bazik NH4OAc detaylı araştırma sonrasında, pH 9 ile 25 mM bir NH4OAc çözeltisi elüsyon çözeltisi olarak uygun olduğu tespit edilmiştir. Optimize edilmiş elüsyon çözeltisi ile müdahale bileşiklerin sorun çözüldü ve duyarlılık% 40 kazanç normal metanolik NH4OH elüsyon çözeltisi ile karşılaştırıldığında elde edilmiştir. Tablo 3, bu protokolün analitik performansının 25 ayrıntılı bir özetini sağlar, biyolojik matristeki serbest 3-NT tayini için diğer mevcut yöntemlerle karşılaştırılmıştır. Bu protokol<html> Daha önce bildirilen testlere kıyasla birçok farklı avantaja sahiptir. İlk olarak, 96 oyuklu ekstraksiyon mikroplakası kullanılarak, örnek temizleme ve analit zenginleştirme için tek bir adım elde edildi ve SPE&#39;yi içeren 3-NT yöntemlerinde tipik olarak gerekli olan buharlaşma ve yeniden yapılandırma işlemlerinin 1 - 5 devrinden kaçınıldı. İkinci olarak, SPE için örnek başına çözücü kullanımı, 5.5 - 118 mL&#39;den sadece 1.1 mL&#39;ye düşürüldü ve solvent ve atık bertarafında 5-107 kez azalma oldu. Üçüncü olarak, örnek başına LC dönüş süresi, diğer analizlerle karşılaştırıldığında 2-7 kat azaldı ve önceki plazma yöntemimizden% 30 daha hızlıydı. Dördüncüsü, matris etkisinin telafisi için tercihen 13 C etiketli IS&#39;den 10-3,000 kat daha düşük bir miktar gerekmiştir. Son olarak, bu tahlil üriner 3-NT miktarının nicelendirilmesi için diğer konvansiyonel SPE tabanlı LC-MS / MS yöntemlerine kıyasla belirgin bir hassasiyet artışını temsil eder. yolları &quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="2"> örnek hazırlama </td><td> Analitik yöntem </td><td> Matris </td><td> LOD (nM) </td><td> LOQ (nM) </td><td> LC koşu (dakika) </td><td> Evap c </td><td> Sol D (mi) </td><td colspan="2"> IS (ng) </td><td> Ref. </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (C18) filtrasyon </td><td> LC-MS / MS </td><td> Plazma </td><td> 0.034 </td><td> 0.112 </td><td> 20 </td><td> 1 </td><td> 13 </td><td> Analog f </td><td> 2 </td><td> [6] </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (MCX plakası) </td><td> LC-MS / MS </td><td> Plazma </td><td> 0.0088 </td><td> 0.022 </td><td> 10 </td><td> 1 </td><td> 5.6 </td><td> 13 C9 -NT </td><td> 0.25 </td><td> [27] </td></tr><tr><td colspan="2"> PPT + SPE (MCX) + der a </td><td> HPLC-UV </td><td> Serum </td><td> NA b </td><td> 100 </td><td> 40 </td><td> 1 </td><td> 7.3 </td><td> NA b </td><td> NA b </td><td> [12] </td></tr><tr><td colspan="2"> HPLC + der a </td><td> GC-MS / MS </td><td> İdrar </td><td> 0.004 </td><td> 0.125 </td><td> NA b </td><td> 5 </td><td> NA b </td><td> d3 -NT </td><td> 4.6 </td><td> [16] </td></tr><tr><td colspan="2"> PPT + SPE (amino) + der a </td><td> LC-MS / MS </td><td> Kedi idrar </td><td> NA b </td><td> 14.5 </td><td> 40 </td><td> 3 </td><td> 23 </td><td> d3 -NT </td><td> 75 </td><td> [17] </td></tr><tr><td colspan="2"> PPT + hidroliz + SPE (SCX-C18) </td><td> LC-MS / MS </td><td> İdrar (protein) </td><td> 400 </td><td> NA </td><td> 50 </td><td> 2 </td><td> 118 </td><td> d3 -NT</td><td> 2 </td><td> [19] </td></tr><tr><td colspan="2"> IA-2D LC e </td><td> LC-MS / MS </td><td> İdrar </td><td> 0.022 </td><td> NA </td><td> 14 </td><td> NA b </td><td> NA b </td><td> 13 C9 -NT </td><td> 0.85 </td><td> [24] </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (C18) + hidroliz </td><td> HPLC-ECD </td><td> İdrar (toplam) </td><td> NA b </td><td> 4 </td><td> 40 </td><td> 2 </td><td> 5.5 </td><td> NA b </td><td> NA b </td><td> [13] </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (C18) + Hazırlama LC g + Çevrimiçi SPE </td><td> LC-MS / MS </td><td> İdrar </td><td> 0.0088 </td><td> 0.041 </td><td> 30 </td><td> 2 </td><td> 38 </td><td> d3 -NT </td><td> 5 </td><td> [23] </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (MIP) </td><td> HPLC-UV </td><td> Çivili İdrar </td><td> 700 </td><td> NA </td><td> 20 </td><td&gt; 1 </td><td> 18 </td><td> NA b </td><td> NA b </td><td> [14] </td></tr><tr><td colspan="2"> SPE (MCX μElution) </td><td> LC-MS / MS </td><td> İdrar </td><td> 0.0088 </td><td> 0.044 </td><td> 7 </td><td> YOK HAYIR </td><td> 1.1 </td><td> 13 C9 -NT </td><td> 0.03 </td><td> Bu iş </td></tr><tr><td colspan="12"> Bir der: türetme; B NA: mevcut değil; C Evap: Buharlaşma; D Sol: Örnek başına çözücü; E IA-2D LC: immünoafinite kromatografisi ve iki boyutlu LC; F Analog: o-Metil-Tirosin; G Hazırlama LC: preparatif HPLC saflaştırması. </td></tr></tbody></table> Tablo 3: Compari3-NT&#39;nin Biyolojik Matrislerde Tespiti İçin Mevcut Deneylerle Bu Protokolün Analitik Performansının Oğlu Önerilen analizin analitik ve klinik geçerliliği, 82 sağlıklı kişinin otantik idrar örneklerinden oluşturulmuş üriner 3-NT için referans aralığının saptanması yoluyla daha da değerlendirildi 25 . İyileştirilmiş sadelik ve işleme yöntemi, iki idrar örneği tabakasının (n = 192) 24 saatlik bir süre içinde işlenmesine ve analiz edilmesine olanak tanır. Basit, hızlı, hassas ve seçici olan invaziv olmayan idrar örneklemesini kullanan gelişmiş yöntemin, klinik koşullarda 3-NT rolünü doğrulamada ve oksidatif stresin etkisini daha ileri düzeyde araştırmada güçlü bir araç olması beklenmektedir. Protokolün kritik aşamaları, bir akıcılaştırma tamponu olarak hafif NH4OAc kullanan bir MCX mikroplakasında SPE, bir katkı maddesi olarak% 0.01 HCOOH ve 3-NT kantifikası için MRM seçimi olan bir PFP kolonu üzerinde LC ayrımı içermektedirsiyon. Yöntemin gelecekte uygulanması, enflamatuar ve nörodejeneratif bozukluklar gibi patolojik koşullardaki hastalarda 3-NT konsantrasyonlarının miktarının belirlenmesidir . Klinik uygulamalarda önerilen protokolün potansiyel tuzakları ele alınmamaktadır.

Son yıllarda oksidatif stresin klinik sunum üzerindeki etkileri ön plana çıkmaktadır 1 . Araştırılan biyolojik belirteçlerden biri, reaktif azot türleri (RNS), katekolamin nörotransmitter öncüsü olan tirozin ile etkileşime girdiğinde oluşan, uçta dengeli bir ürün olan 3-nitrotirosin (3-NT) &#39;dir. 3-NT, in vivo RNS için bir biyolojik belirteç olarak klinik değeri olabileceği gibi, tirozin özelliklerinin ve işlevlerinin önemli değişiklikleriyle karşılık gelen proteinleri ve hücresel işlevleri olumsuz şekilde etkileyebilir 1 , 2 . Yükselen araştırmalar, 3-NT&#39;nin inflamatuar koşullar 3 , nörodejeneratif bozukluklar 4 , 5 , kardiyovasküler hastalık 6 ve diyabet 7&#39;de ve oksidatif stresle ilgili koşullarda önemli bir rol oynayabileceğini önermektedir. Ancak, bu observations sensitivite ve / veya seçicilik 8, 9, 10, 11 eksik metodolojileri sonuçlarına dayanmaktadır. Daha önce literatürde bildirilen biyolojik numuneler için muazzam 3-NT konsantrasyon aralıkları, ciddi analitik problemlerin bu tahliller ile ilişkili olduğunu ve 3-NT seviyelerini doğru bir şekilde ölçmek ve bu koşulların patolojisindeki rolünü doğrulamak için teknik iyileştirmenin gerek duyulduğunu ortaya koymaktadır . Biyolojik matristeki serbest 3-NT&#39;nin nicelendirilmesi, insan ve enstrüman için 8 , 9 , 10 , 11 özel bir zorluk ortaya koymaktadır. Birincisi, endojen 3-NT&#39;nin iz seviyesi aşırı duyarlı bir tespit gerektirir; İkincisi, çok sayıda yapısal olarak benzer analogların varlığı, özellikle de tirozin,Aşırı derecede fazlalık, yüksek oranda seçicilik gerektirir; Üçüncüsü, her yerde bulunan nitrat ve nitrit ile tirozin nitrasyonuyla 3-NT&#39;nin artefaktik oluşumu, 3-NT&#39;nin sahte aşırı tahmin edilmesini önlemek için numune hazırlama esnasında özel olarak düşünülmesini gerektirir. 3-NT ölçmek için kullanılan metodolojilerin çeşitli arasında, MS / MS nedeniyle üstün hassasiyet ve seçicilik 11, 12, 13, 14, altın standart yöntem olarak kabul edilmiştir. Gaz kromatografisi (GC), MS / MS en yüksek duyarlılık, ancak, zorunlu örnek türetme adımları çok sıkıcı ve vardır sunmaktadır bağlanmış klinik kullanım 15, 16 için etkili olduğu zaman alır. LC-MS / MS karmaşık numune türetme işlemine ihtiyaç duymaz, bu da daha umut vericidir. Bununla birlikte, üstesinden gelinmesi gereken bazı engeller var.Literatürde bildirilen LC-MS / MS yöntemlerinin nsitivitesi, düşük miktarda 3-NT 7 , 17 , 18 ölçümü için iyileştirilmesi ve yüksek verimli uygulamalar için nispeten uzun dönüş süresi kısaltılmalıdır 12 , 13 , 17 , 19 . Ek olarak, klinik uygulamalar göz önüne alındığında, kullanılan biyolojik matris önemli bir rol oynamaktadır. Mümkünse bulaşıcı olmayan, kolay ve ucuz olmalıdır 20 , 21 , 22 . Literatürde geleneksel olarak kullanılan örnek olan plazma klinik olarak istenen bir matristir, bu nedenle invaziv olmayan ve maliyet-etkinliği olan idrarı kullanan bir metod aranmıştır. Rel geliştirmek için çeşitli girişimlerKullanılabilir ve spesifik LC-MS / MS metodolojileri idrar 9 , 10 , 11 kullanılarak yapılmıştır . Bununla birlikte, hepsi seçici, güvenilir ya da klinik kullanım için yeterince etkili olmamaktadır. Geleneksel ters fazlı kartuş (C18 tipi) kullanılarak 3-NT analizi için numune temizliği olarak baskın SPE&#39;nin etkinliği sorgulanmış ve ardışık bir şekilde güçlü katyon değişimi (SCX) ve ters faz C18-OH SPE&#39;si önerilmiştir 6 , 7 , 19 . Yakın zamanda geliştirilen bir LC-MS / MS yöntemi, manuel C18 SPE, preparatif yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) ve 3-NT 23&#39;ün analizi için online SPE&#39;nin çok aşamalı bir saflaştırma prosesini kullanmıştır. Bu yöntem 0.041 nM LLOQ ile klinik amaçlar için yeterince hassas olsa da, temizleme işlemi yoğun ve sıkıcıydı ve requiKırmızı 3 mL idrar, yüksek verim için fizibilitesini sınırlıyor. Bir moleküler olarak basılmış bir polimer temizleme işlemi 14 verimliliğini artırmak için SPE emici olarak kullanıldı, ancak elde edilen LLOQ (0.7 ug / mL) klinik örnekler için yeterince düşük değildi. Bir başka yöntem, 0.022 nM 24&#39;lük bir saptama limiti (LOD) elde etmek için numunenin temizlenmesi için iki boyutlu (2D) LC-MS / MS ve immünoafinite kromatografisini gerektirdi. Tüm bu yöntemler 3-NT değerlendirmesinde ilerleme kaydederken, hiçbiri klinik uygulamalar için gerekli duyarlılık, güvenilirlik ve verimliliği sağlamamıştır. Serbest 3-NT patolojisini ve bunun klinik ortamdaki oksidatif stresin bir biyobelirteç olarak rolünü araştırmak için basit, verimli, doğru ve kesin, yüksek verimli klinik uygulamalar için bir yöntem geliştirdik 25 . Minyatür karışık mod katyonuTürevlendirme, buharlaştırma ve 2D-LC&#39;yi gerektiren mevcut yöntemlerde görülen dezavantajları atlayarak basit ve etkili numune temizleme ve 3-NT&#39;nin zenginleştirilmesi için tek bir ekstraksiyonda elde edilen hange (MCX) 96 oyuklu ekstraksiyon mikroplağı uygulandı. Hareketli fazda katkı maddesi olarak% 0.01 HCOOH ile sıvı kromatografisi hızlı çevrim süresi ile gelişmiş bir sinyal yanıtı sundu. Seçicilik daha 3-NT ve iç standart (IS) her ikisi içinde selektif 3-NT ayrıştırma ve MRM geçişi kullanımı için hafif bir NH4OAc elüsyon çözeltisi uygulamasıyla geliştirilmiştir. Matris etkisi, kantifikasyon için indirgenmiş miktarda bir 13 C işaretli izotopik IS kullanılarak telafi edildi. Bu metodolojinin ortaya çıkmasıyla araştırmacılar ve klinisyenler klinik koşullardaki 3-NT rolünü doğrulayacak ve oksidatif stresin etkisini daha da keşfedebileceklerdir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="912">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">3-Nitro-L-tyrosine</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">N7389-5g</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">3-Nitro-L-tyrosine-13C9</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>652296-5.0mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mass Spec Gold Urine</td>
			<td>Golden West Biologicals</td>
			<td>MSG 5000-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oasis MCX 96-well &#181;Elution plate</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>186001830BA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2mL 96 well collection plate</td>
			<td style="width:161px;">Phenomenex&#160;&#160;</td>
			<td style="width:115px;">AH0-7194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 positive processor</td>
			<td style="width:161px;">Waters&#160;</td>
			<td style="width:115px;">186005521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS Ultra CHROMASOLV methanol&#160;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">14262-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS Ultra CHROMASOLV water</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">14263-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formic acid for mass spectrometry</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td>94318-50ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium hydroxide solution</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">338818-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra PFP propyl columns</td>
			<td style="width:161px;">Restek</td>
			<td style="width:115px;">9179362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5500 Triple quad</td>
			<td style="width:161px;">AB Sciex&#160;</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Contact manufacture for more detail</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UFLC-XR</td>
			<td style="width:161px;">Shimadzu&#160;</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Contact manufacture for more detail</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Integra 400 Plus&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Urinary Creatinine Jaff&#233; Gen 2 method</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCMS certified 12 x 32mm screw neck vial</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>600000751CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCGC certified 12 x 32mm screw neck total recovery vial</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>186000384C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL transport tube</td>
			<td style="width:161px;">Phenix</td>
			<td>TT-3205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">50 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:161px;">Crystalgen&#160;</td>
			<td style="width:115px;">23-2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">15 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:161px;">Crystalgen&#160;</td>
			<td style="width:115px;">23-2266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">eLine electronic pipette</td>
			<td style="width:161px;">Sartorius</td>
			<td style="width:115px;">730391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microfuge centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">A46474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OHAUS balance&#160;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Kennedy Scales, inc.</td>
			<td style="width:115px;">735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vortex mixer&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Bernstead Thermolyne</td>
			<td style="width:115px;">M16715</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

integration of miniaturized solid phase extraction and lc-ms/ms detection of 3-nitrotyrosine in human urine for clinical applications

Serbest 3-nitrotirosin (3-NT), oksidatif stres için olası bir biyolojik belirteç olarak yaygın şekilde kullanılmıştır. Çok çeşitli patolojik koşullarda artan 3-NT seviyeleri bildirilmiştir. Bununla birlikte, mevcut yöntemler, düşük endojen seviyedeki 3-NT&#39;yi güvenilir bir şekilde ölçmek için gerekli olan yeterli duyarlılık ve / veya özgüllükten yoksundur ve klinik uygulamalar için çok hantaldır. Bu nedenle, 3-NT düzeylerini doğru bir şekilde ölçmek ve patolojik koşullardaki 3-NT rolünü doğrulamak için analitik iyileştirmeye acilen ihtiyaç duyulmaktadır. Bu protokol, non-invaziv biyolojik belirteç olarak insan idrarında 3-NT&#39;nin hızlı ve doğru ölçümü için minik bir katı faz ekstraksiyonu (SPE) ile birlikte yeni bir sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi (LC-MS / MS) algılamasının gelişimini sunar Oksidatif stres için. 96 yuvalı bir plak kullanarak SPE, numune temizleme ve analit zenginleştirmeyi sıkıcı türetme ve buharlaştırma adımları olmadan birleştirerek işlemi basitçe belirginleştirdi, Solvent tüketimini azaltmak, atık bertaraf etmek, kirlenme riski ve genel işlem süresi. SPE elüsyon çözeltisi, pH 9, 25 mM amonyum asetat iş (NH4OAc) esas olarak seçicilik geliştirilmiş. Kütle spektrometresi sinyal tepkisi, çoklu reaksiyon izleme (MRM) geçişlerinin ayarlanması yoluyla geliştirildi. Bir pentaflorofenil (PFP) kolonuna (150 mm x 2.1 mm, 3 μm) katkı maddesi olarak% 0.01 HCOOH kullanılması, sinyal tepkisini 2.5 kat daha geliştirmiş ve toplam çalışma süresini 7 dakikaya kısaltmıştır. 10 pg / mL&#39;nin (0.044 nM) düşük bir niceleme limiti (LLOQ) elde edildi, bu da bildirilen testlere kıyasla önemli bir duyarlılık geliştirmeyi temsil etti. Bu basitleştirilmiş, hızlı, seçici ve duyarlı yöntem, iki pleyt numunesi (n = 192) 24 saatlik bir süre içinde işlenmesine izin verir. Geliştirilen analitik performans ve invaziv olmayan ve ucuz idrar örneklemesi göz önüne alındığında, önerilen test, klinik öncesi ve klinikte faydalıdırçalışmaları.

Şekil 1 , 3-NT&#39;nin, optimize edilmiş LC koşulu altında diğer yapısal olarak benzer tirosin analoglarından tamamen kromatografik olarak ayrıldığını göstermekte olup, bu da aşırı derecede aşırı bileşikler nedeniyle oluşan birlikte müdahale etkileşimlerini ortadan kaldırmakta ve dolayısıyla tahlil seçiciliğini arttırmaktadır. Ek olarak MA ve metanolde katkı maddesi olarak% 0.01 HCOOH ile 0.45 mL / dak&#39;lık bir akış oranında gradiyentli olarak elüsyon, hızlı bir şekilde 3-NT&#39;nin ( yani 7 dakika dönüş süresi ile 3 dakika) elüsyon yapılmasına izin verir. <img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55778/55778fig1.jpg" /> Şekil 1: Standart Solüsyondaki Diğer Tirozin Analoglarından 3-NT&#39;nin Temel Tablosel LC Kromatografik Ayırımı. ( A ) p- Tyrosin; ( B ) m- Tyrosin; ( C ) o -tirozin; ( D ) Cl-Tyrosine; ( E ) 3-NT. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55778/55778fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> Şekil 2 , çifte boşluklu numunede hiçbir 3-NT sinyalinin gözlenmediğini ve tüm işlem boyunca artefaktik 3-NT oluşumunun olmadığını göstermektedir. Şekil 3 , sağlıklı bir birey için 3-NT ve İS&#39;nin temsili MRM kromatogramlarını göstermektedir. Görüldüğü gibi, 3-NT ve IS&#39;nin tutulma sürelerinde hiçbir girişim sinyali gözlenmemektedir. Ayrıca nitrit (50 uM), nitrat (50 μM) ve tirozin (50 mg / L) 25 olan çivilenmiş ve çakıllı toplanmış idrar örnekleri arasında 3-NT&#39;de ±% 6&#39;lık bir fark gözlemlenmekte ve bu da destek sağlamaktadır Tahlilin özgüllüğüne. Şekil 2: Temsilci Çift Boş Örneklemede 3-NT ve İS&#39;nin MRM kromatogramları. ( A ) 3-NT MRM nicelikçi 227.0&gt; 90.0; ( B ) IS MRM nicelikçi 236.0&gt; 189.0. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55778/55778fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55778/55778fig3.jpg" /> Şekil 3: Sağlıklı Kişilerin Temsilci İdrar Örneklerinde 3-NT ve İS&#39;nin MRM Kromatogramları. ( A ) 3-NT MRM nicelikçi 227.0&gt; 90.0; ( B ) IS MRM nicelikçi 236.0&gt; 189.0. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55778/55778fig3large.jpg" target="_blank">Lütfen tıklayın</a>Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için tekrar. Standart eğri, 3-NT&#39;nin spesifikasyonu ile asitlendirilmiş boş idrarın 10-2,500 pg / mL aralığında eklendiği 3-NT ve IS&#39;nin nominal konsantrasyonuna karşı 3-NT&#39;nin pik alanı oranını çizgisel bir uydurma ile çizerek oluşturulmuştur 1 / x ağırlıklandırma. Temsili bir standart eğri Şekil 4&#39;te gösterilmektedir. Sinyal / gürültü oranı üçten büyük olan en düşük konsantrasyon olarak tanımlanan LOD&#39;un, 2 pg / mL (0.0088 nM) olduğu belirlendi. LLOQ&#39;un tanımı gereği 10 pg / mL (0.044 nM) olarak belirlenmiştir; bu değer, belirsizliklerin ±% 20&#39;si içinde ölçülecek en düşük konsantrasyon ve doğruluktan daha yüksek olup, sinyal / gürültü oranı on&#39;dan fazladır. <img alt="Şekil 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55778/55778fig4.jpg" /> Şekil 4: Temsilci bir 3-NT Standart Eğrisi10-2,500 pg / mL aralığı. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55778/55778fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications at JoVE.com

Uygulamalar için Minyatürleştirilmiş Katı Faz Ekstraksiyonunun ve İnsan İdrarında 3-Nitrotirozinin LC-MS/MS Tespitinin Entegrasyonu | Kimya | Video

Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications

Karma mod katyon değiştirme (MCX) 96-kuyulu bir mikroplak üzerinde verimli bir katı faz ekstraksiyonu ile birleşmiş seçici ve duyarlı bir sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi (LC-MS / MS) yöntemi, serbest 3-nitrotirosin 3-NT) insan idrarında yüksek verimle, klinik uygulamalar için uygundur.

Klinik Uygulamalar İçin İnsan İdrarında 3-Nitrotirosinin Minyatür Katı Faz Çıkarma ve LC-MS / MS Algılamasının Entegrasyonu

Free 3-nitrotyrosine (3-NT) has been extensively used as a possible biomarker for oxidative stress. Increased levels of 3-NT have been reported in a wide ...

integration-miniaturized-solid-phase-extraction-lc-msms-detection-3

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Chemistry

Human Biology

Osmoregulation and Excretion

SCIENTISTS IN ACTION

9.2K Görüntüleme.  Pharmasan Labs, Inc..  Karma mod katyon değiştirme (MCX) 96-kuyulu bir mikroplak üzerinde verimli bir katı faz ekstraksiyonu ile birleşmiş seçici ve duyarlı bir sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi (LC-MS / MS) yöntemi, serbest 3-nitrotirosin 3-NT) insan idrarında yüksek verimle, klinik uygulamalar için uygundur. 

Video: Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications

Preparation of Hydrophobic Metal-Organic Frameworks via Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition of Perfluoroalkanes for the Removal of Ammonia

Plasma enhanced chemical vapor deposition (PECVD) of perfluoroalkanes has long been studied for tuning the wetting properties of surfaces. For high surface area microporous materials, such as metal-organic frameworks (MOFs), unique challenges present themselves for PECVD treatments. Herein the protocol for development of a MOF that was previously unstable to humid conditions is presented. The protocol describes the synthesis of Cu-BTC (also known as HKUST-1), the treatment of Cu-BTC with PECVD of perfluoroalkanes, the aging of materials under humid conditions, and the subsequent ammonia microbreakthrough experiments on milligram quantities of microporous materials. Cu-BTC has an extremely high surface area (~1,800 m2/g) when compared to most materials or surfaces that have been previously treated by PECVD methods. Parameters such as chamber pressure and treatment time are extremely important to ensure the perfluoroalkane plasma penetrates to and reacts with the inner MOF surfaces. Furthermore, the protocol for ammonia microbreakthrough experiments set forth here can be utilized for a variety of test gases and microporous materials.

Herein the procedures for plasma enhanced chemical vapor deposition of perfluoroalkanes on microporous materials such as metal-organic frameworks to enhance their stability and hydrophobicity are described. Furthermore, breakthrough testing of milligram quantities of samples is described in detail.

Plazma ile Hidrofobik Metal-Organik Altyapıları hazırlanması Amonyak Kaldırma için perfluorobütanlar Kimyasal Buhar Kaplama Geliştirilmiş

Plasma enhanced chemical vapor deposition (PECVD) of perfluoroalkanes has long been studied for tuning the wetting properties of surfaces. For high ...

Kimya

Activating Molecules, Ions, and Solid Particles with Acoustic Cavitation

The chemical and physical effects of ultrasound arise not from a direct interaction of molecules with sound waves, but rather from the acoustic cavitation: the nucleation, growth, and implosive collapse of microbubbles in liquids submitted to power ultrasound. The violent implosion of bubbles leads to the formation of chemically reactive species and to the emission of light, named sonoluminescence. In this manuscript, we describe the techniques allowing study of extreme intrabubble conditions and chemical reactivity of acoustic cavitation in solutions. The analysis of sonoluminescence spectra of water sparged with noble gases provides evidence for nonequilibrium plasma formation. The photons and the "hot" particles generated by cavitation bubbles enable to excite the non-volatile species in solutions increasing their chemical reactivity. For example the mechanism of ultrabright sonoluminescence of uranyl ions in acidic solutions varies with uranium concentration: sonophotoluminescence dominates in diluted solutions, and collisional excitation contributes at higher uranium concentration. Secondary sonochemical products may arise from chemically active species that are formed inside the bubble, but then diffuse into the liquid phase and react with solution precursors to form a variety of products. For instance, the sonochemical reduction of Pt(IV) in pure water provides an innovative synthetic route for monodispersed nanoparticles of metallic platinum without any templates or capping agents. Many studies reveal the advantages of ultrasound to activate the divided solids. In general, the mechanical effects of ultrasound strongly contribute in heterogeneous systems in addition to chemical effects. In particular, the sonolysis of PuO2 powder in pure water yields stable colloids of plutonium due to both effects.

Acoustic cavitation in liquids submitted to power ultrasound creates transient extreme conditions inside the collapsing bubbles, which are the origin of unusual chemical reactivity and light emission, known as sonoluminescence. In the presence of noble gases, nonequilibrium plasma is formed. The "hot" particles and the photons generated by collapsing bubbles are able to excite species in solution.

Moleküller, İyonlar, ve Akustik Kavitasyon ile Katı Parçacıklar etkinleştirilmesi

The chemical and physical effects of ultrasound arise not from a direct interaction of molecules with sound waves, but rather from the acoustic ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. The most common techniques utilized are imaging modalities such as Magnetic Resonance Imaging (MRI), Positron Emission Topography (PET), and Computed Topography (CT) and are optimal for understanding the physical structure of the disease but can only be performed once every four to six weeks due to the use of imaging agents and overall cost. With this in mind, the development of &#8220;point of care&#8221; techniques, such as biosensors, which evaluate the stage of disease and/or efficacy of treatment in the clinician&#8217;s office and do so in a timely manner, would revolutionize treatment protocols.1 As a means to exploring ferrocene based biosensors for the detection of biologically relevant molecules2, methods were developed to produce ferrocene-biotin bio-conjugates described herein. This report will focus on a biotin-ferrocene-cysteine system that can be immobilized on a gold surface.

The synthesis of asymmetric species of ferrocene is challenging using solution techniques. This report focuses on the methods carried out to produce a ferrocene-biotin bioconjugate using facile and clean reactions accomplished via solid-phase synthesis. Incorporation of a thiolate moiety is shown to impart the ability for immobilization on gold surfaces.

Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder diffraction (XRPD) is presented in detail via two case studies.
The first material under investigation was sodium copper formate hydroxide oxide hydrate, Cu4Na4O(HCOO)8(OH)2&#8729;4H2O (sample 1) which forms on soda glass/copper alloy composite historic objects (e.g., enamels) in museum collections, exposed to formaldehyde and formic acid emitted from wooden storage cabinets, adhesives, etc. This degradation phenomenon has recently been characterized as &#34;glass induced metal corrosion&#34;.
For the second case study, thecotrichite, Ca3(CH3COO)3Cl(NO3)2&#8729;6H2O (sample 2), was chosen, which is an efflorescent salt forming needlelike crystallites on tiles and limestone objects which are stored in wooden cabinets and display cases. In this case, the wood acts as source for acetic acid which reacts with soluble chloride and nitrate salts from the artifact or its environment.
The knowledge of the geometrical structure helps conservation science to better understand production and decay reactions and to allow for full quantitative analysis in the frequent case of mixtures.

Modern high resolution X-ray powder diffraction (XRPD) in the laboratory is used as an efficient tool to determine crystal structures of long-known corrosion products on historic objects.

Koruma Bilimi X-ışını Toz Kırınım: Miras Sanat Objects Korozyon Ürünleri Rutin Kristal Yapı Tayini Doğru

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Measurement of Particle Size Distribution in Turbid Solutions by Dynamic Light Scattering Microscopy

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a technique used to measure the size distribution of polymer solutions or colloidal particles. Although this technique is widely used for the assessment of polymer solutions, it is difficult to measure the particle size in concentrated solutions due to the multiple scattering effect or strong light absorption. Therefore, the concentrated solutions should be diluted before measurement. Implementation of the confocal optical component in a dynamic light scattering microscope1 helps to overcome this barrier. Using such a microscopic system, both transparent and turbid systems can be analyzed under the same experimental setup without a dilution. As a representative example, a size distribution measurement of a temperature-responsive polymer solution was performed. The sizes of the polymer chains in an aqueous solution were several tens of nanometers at a temperature below the lower critical solution temperature (LCST). In contrast, the sizes increased to more than 1.0 &#181;m when above the LCST. This result is consistent with the observation that the solution turned turbid above the LCST.

A protocol for the direct measurement of particle size distribution in concentrated solutions using dynamic light scattering microscopy is presented.

Dinamik ışık saçılımı Mikroskopi Bulanık Çözümleri Tane Büyüklüğü Dağılımının Ölçümü

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a ...

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Solid-phase synthesis has been used to obtain canonical and modified polymers of nucleic acids, specifically of DNA or RNA, which has made it a popular methodology for applications in various fields and for different research purposes. The procedure described herein focuses on the synthesis, purification, and characterization of dodecamers of RNA 5&#39;-[CUA CGG AAU CAU]-3&#39; containing zero, one, or two modifications located at the C2&#39;-O-position. The probes are based on 2-thiophenylmethyl groups, incorporated into RNA nucleotides via standard organic synthesis and introduced into the corresponding oligonucleotides via their respective phosphoramidites. This report makes use of phosphoramidite chemistry via the four canonical nucleobases (Uridine (U), Cytosine (C), Guanosine (G), Adenosine (A)), as well as 2-thiophenylmethyl functionalized nucleotides modified at the 2&#39;-O-position; however, the methodology is amenable for a large variety of modifications that have been developed over the years. The oligonucleotides were synthesized on a controlled-pore glass (CPG) support followed by cleavage from the resin and deprotection under standard conditions, i.e., a mixture of ammonia and methylamine (AMA) followed by hydrogen fluoride/triethylamine/N-methylpyrrolidinone. The corresponding oligonucleotides were purified via polyacrylamide electrophoresis (20% denaturing) followed by elution, desalting, and isolation via reversed-phase chromatography (Sep-pak, C18-column). Quantification and structural parameters were assessed via ultraviolet-visible (UV-vis) and circular dichroism (CD) photometric analysis, respectively. This report aims to serve as a resource and guide for beginner and expert researchers interested in embarking in this field. It is expected to serve as a work-in-progress as new technologies and methodologies are developed. The description of the methodologies and techniques within this document correspond to a DNA/RNA synthesizer (refurbished and purchased in 2013) that uses phosphoramidite chemistry.

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

This article provides a detailed procedure on the solid-phase synthesis, purification, and characterization of dodecamers of RNA modified at the C2&#39;-O-position. UV-vis and circular dichroism photometric analyses are used to quantify and characterize structural aspects, i.e., single-strands or double-strands.

Bir 2&#39;-amino asit içeren RNA Oligomerlerinin Katı Faz Sentezi Protokolü<em&gt; Ç</em&gt; Tiyofenilmetil Değiştirme ve Sirküler Dikroizm ile Karakterizasyonlar

Solid-phase synthesis has been used to obtain canonical and modified polymers of nucleic acids, specifically of DNA or RNA, which has made it a popular ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and related diseases, but their precise measurement is still a challenge. Many protocols have been described for neurotransmitter measurement by a variety of instruments, including high-pressure liquid chromatography (HPLC). However, there are shortcomings, such as complicated operation or hard-to-detect multiple targets, which cannot be avoided, and presently, the dominant analysis technique is still HPLC coupled with sensitive electrochemical or fluorimetric detection, due to its high sensitivity and good selectivity. Here, a detailed protocol is described for the pretreatment and detection of catecholamines with high pressure liquid chromatography with electrochemical detection (HPLC-ECD) in real urine samples of infants, using electrospun composite nanofibers composed of polymeric crown ether with polystyrene as adsorbent, also known as the packed-fiber solid phase extraction (PFSPE) method. We show how urine samples can be easily precleaned by a nanofiber-packed solid phase column, and how the analytes in the sample can be rapidly enriched, desorbed, and detected on an ECD system. PFSPE greatly simplifies the pretreatment procedures for biological samples, allowing for decreased time, expense, and reduction of the loss of targets. 
Overall, this work illustrates a simple and convenient protocol for solid-phase extraction coupled to an HPLC-ECD system for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters (norepinephrine (NE), epinephrine (E), dopamine (DA)) and two of their metabolites (3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) and 3,4-dihydroxy-phenylacetic acid (DOPAC)) in infants' urine. The established protocol was applied to assess the differences of urinary catecholamines and their metabolites between high-risk infants with perinatal brain damage and healthy controls. Comparative analysis revealed a significant difference in urinary MHPG between the two groups, indicating that the catecholamine metabolites may be an important candidate marker for early diagnosis of cases at risk for brain damage in infants.

We present a convenient solid-phase extraction coupled to high-pressure liquid chromatography (HPLC) with electrochemical detection (ECD) for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters and two of their metabolites in infants' urine. We also identify the metabolite MHPG as a potential biomarker for the early diagnosis of brain damage for infants.

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Surface Properties of Synthesized Nanoporous Carbon and Silica Matrices

In this work, we report the synthesis and characterization of ordered nanoporous carbon material (also called ordered mesoporous carbon material [OMC]) with a 4.6 nm pore size, and ordered silica porous matrix, SBA-15, with a 5.3 nm pore size. This work describes the surface properties of nanoporous molecular sieves, their wettability, and the melting behavior of D2O confined in the differently ordered porous materials with similar pore sizes. For this purpose, OMC and SBA-15 with highly ordered nanoporous structures are synthesized via impregnation of the silica matrix by applying a carbon precursor and by the sol-gel method, respectively. The porous structure of investigated systems is characterized by an N2 adsorption-desorption analysis at 77 K. To determine the electrochemical character of the surface of synthesized materials, potentiometric titration measurements are conducted; the obtained results for OMC shows a significant pHpzc shift toward the higher values of pH, relative to SBA-15. This suggests that investigated OMC has surface properties related to oxygen-based functional groups. To describe the surface properties of the materials, the contact angles of liquids penetrating the studied porous beds are also determined. The capillary rise method has confirmed the increased wettability of the silica walls relative to the carbon walls and an influence of the pore roughness on the fluid/wall interactions, which is much more pronounced for silica than for carbon mesopores. We have also studied the melting behavior of D2O confined in OMC and SBA-15 by applying the dielectric method. The results show that the depression of the melting temperature of D2O in the pores of OMC is about 15 K higher relative to the depression of the melting temperature in SBA-15 pores with a comparable 5 nm size. This is caused by the influence of adsorbate/adsorbent interactions of the studied matrices.

Here we report the synthesis and characterization of ordered nanoporous carbon (with a 4.6 nm pore size) and SBA-15 (with a 5.3 nm pore size). The work describes the surface and textural properties of nanoporous molecular sieves, their wettability, and the melting behavior of D2O confined in the materials.

Silikat Matrisler ve sentezlenmiş Nanoporous karbon yüzey özellikleri

In this work, we report the synthesis and characterization of ordered nanoporous carbon material (also called ordered mesoporous carbon material [OMC]) ...

Solid-phase Synthesis of [4.4] Spirocyclic Oximes

A convenient synthetic route for spirocyclic heterocycles is well sought after due to the molecule&#39;s potential use in biological systems. By means of solid-phase synthesis, regenerating Michael (REM) linker strategies, and 1,3-dipolar cycloaddition, a library of structurally similar heterocycles, both with and without a spirocyclic center, can be constructed. The main advantages of the solid-support synthesis are as follows: first, each reaction step can be driven to completion using a large excess of reagents resulting in high yields; next, the use of commercially available starting materials and reagents keep the costs low; finally, the reaction steps are easy to purify via simple filtration. The REM linker strategy is attractive because of its recyclability and traceless nature. Once a reaction scheme is completed, the linker can be reused multiple times. In a typical solid-phase synthesis, the product contains either a part of or the whole linker, which can prove undesirable. The REM linker is &#34;traceless&#34; and the point of attachment between the product and the polymer is indistinguishable. The high diastereoselectivity of the intramolecular 1,3-dipolar cycloaddition is well documented. Limited by the insolubility of the solid support, the reaction progression can only be monitored by a change in the functional groups (if any) via infrared (IR) spectroscopy. Thus, the structural identification of intermediates cannot be characterized by conventional nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. Other limitations to this method stem from the compatibilities of the polymer/linker to the desired chemical reaction scheme. Herein we report a protocol that allows for the convenient production of spirocyclic heterocycles that, with simple modifications, can be automated with high-throughput techniques.

Here we present a protocol to demonstrate an efficient method for the synthesis of spirocyclic heterocycles. The five-step process utilizes solid-phase synthesis and regenerating Michael linker strategies. Generally difficult to synthesize, we present a customizable method for the synthesis of spirocyclic molecules otherwise inaccessible to other modern approaches.

Katı faz [4.4] Spirocyclic Oximes sentezi

A convenient synthetic route for spirocyclic heterocycles is well sought after due to the molecule&#39;s potential use in biological systems. By means of ...

Natural Product Discovery with LC-MS/MS Diagnostic Fragmentation Filtering: Application for Microcystin Analysis

Natural products are often biosynthesized as mixtures of structurally similar compounds, rather than a single compound. Due to their common structural features, many compounds within the same class undergo similar MS/MS fragmentation and have several identical product ions and/or neutral losses. The purpose of diagnostic fragmentation filtering (DFF) is to efficiently detect all compounds of a given class in a complex extract by screening non-targeted LC-MS/MS datasets for MS/MS spectra that contain class specific product ions and/or neutral losses. This method is based on a DFF module implemented within the open-source MZmine platform that requires sample extracts be analyzed by data-dependent acquisition on a high-resolution mass spectrometer such as quadrupole Orbitrap or quadrupole time-of-flight mass analyzers. The main limitation of this approach is the analyst must first define which product ions and/or neutral losses are specific for the targeted class of natural products. DFF allows for the subsequent discovery of all related natural products within a complex sample, including new compounds. In this work, we demonstrate the effectiveness of DFF by screening extracts of Microcystis aeruginosa, a prominent harmful algal bloom causing cyanobacteria, for the production of microcystins.

Diagnostic fragmentation filtering, implemented into MZmine, is an elegant, post-acquisition approach to screen LC-MS/MS datasets for entire classes of both known and unknown natural products. This tool searches MS/MS spectra for product ions and/or neutral losses that the analyst has defined as being diagnostic for the entire class of compounds.

LC-MS/MS tanılama parçalanma filtreleme ile doğal ürün keşfi: Microcystin analizi için uygulama

Natural products are often biosynthesized as mixtures of structurally similar compounds, rather than a single compound. Due to their common structural ...