Bu eser Tıp Üniversitesi Innsbruck hibe #2008-1-596 ve #UNI-0404/1956, "Tiroler Wissenschaftsfonds (TWF)" (https://www.tirol.gv.at/en/) ve grant #2013-042018, "MUI-Start Förderungsprogramm" tarafından desteklendi.

Alloimmune yanıt-e doğru önlemek için ve kesinlikle iskemi reperfüzyon greft yaralanma ile ilgili hasar incelemek için syngeneic bir verici-alıcı çift kullanılmalıdır. Bu iletişim kuralı ' erkek C57BL6 (H2b) 10-12-hafta-yaşlı fareler 26-28 g ağırlığında boyutu eşlemeli verici-alıcı çiftleri olarak kullanılmıştır. Bütün hayvanlar bir bariyer patojen ücretsiz tesiste yer alan ve insan bakım "sorumluları laboratuvar hayvan tıbbi araştırma ve"Kılavuzu için bakım ve kullanım of Laboratory Animals"Ulusal toplum tarafından formüle bakım" uygun olarak alınan Ulusal Bilimler Akademisi tarafından hazırlanan ve ulusal sağlık Enstitüleri tarafından (NIH yayın no. 86-23, 1985 revize) yayınlandı. Eğitim, bilim ve kültür Avusturya Bakanlığı bu makale (BMWF-66.011/0056-II/3b/2011) açıklanan deneyler onayladı.
1. pankreas tedarik
<ol>
	<li>Mayi (IP) enjeksiyonu xylazine (5 mg/kg vücut ağırlığı) ve 27'lik (G) iğne kullanarak ketamin (100 mg/kg vücut ağırlığı) donör hayvanla anestezi.</li>
	<li>Karın bölgesinde bir Elektrikli tıraş makinesi kullanarak saç tıraş ve Bant tellerinin ile sırtüstü pozisyonda ameliyat alanında fare düzeltmek.</li>
	<li>Klorheksidin bulanmış gauzes ile üç kez ameliyat alanı fırçalayın.</li>
	<li>Karın bir ensizyon makas kullanarak bir ikili subcostal uzantısı ile gerçekleştirin. Yavaşça iç organlar soldaki steril pamuklu çubuklarla exteriorize ve onları bir ıslatılmış gazlı bez sarın. Xyphoid cranially maksimal karın boşluğu için aşağıdaki adımları sağlarlar için sivrisinek kelepçe ile kaldırın.</li>
	<li>19 G iğne kullanarak, bir steril, 400 µL 1:4 heparin-Sodyum Klorür çözüm için heparinisation inferior vena kava (IVC) içine enjekte. İğne kaldırdıktan sonra hayvan kan kaybı aort transecting tarafından ötenazi.</li>
	<li>Superior Mezenterik arter kökeni ve sağ renal arter arasında karın aortu hafifçe eğimli ipucu forseps kullanarak fibröz doku ayırarak incelemek. Aort zayıflatmak ve bir 8/0 ipek ip ile bağlayın.</li>
	<li>Postpyloric oniki parmak bağırsağı ve karaciğer hilus arasında çalışan hepatoduodenal bağ tanımlayın. Safra kanalını Kistik kanalının girişinde aşağıda distal bağ sonra böl ve yavaşça teşrih ve portal ven anastomoz alıcının içinde yerine getirmek için yeterli uzunluğa sahip için mümkün olduğunca klemple transect.</li>
	<li>Eğri ipucu forseps kullanarak, açık açık--dan önceki bağ başlayan karın aortu teşrih (bkz. Adım 1.6). Eğri ipucu forseps kullanarak periaortic doku zarar, bir 8/0 ipek ip ile bağlayın ve makasla transect.<ol>
		<li>İki kutuplu forseps kullanarak, lomber şubeleri koagüle ve aort damar anastomoz için yeterli uzunluk sağlayabilmek makasla diyaframa, mümkün olduğunca transect. Sonunda, sol renal arter yukarıda zaten bağlı aort transect.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Portal ven gelen açık bir atık olana pankreas ile 19 G şırıngayla 4 ° C histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm antegrade moda abdominal aort yoluyla 5 mL sıvı. Ödem oluşumunu önlemek için düşük basınç uygulayın. Not: Adımları 1.5 1.9 kurtarılan greft sıcak iskemik bozulma tarafından herhangi bir önyargı önlemek için hızlı ve standart bir şekilde gerçekleştirin.</li>
	<li>İç organlar steril pamuklu çubukları kullanarak Periton boşluğuna değiştirin.</li>
	<li>Eğri ipucu forseps kullanarak, pankreas postpyloric oniki parmak bağırsağı ve hareketli ileri Treitz bağ erişene dek başlayarak kademeli ayırın. Bu adımlar için pankreas ve duodenal duvarı arasında avaskular bağ dokusu alanları tanımlayın.<ol>
		<li>Açık açık pankreas ve duodenum arasında köprü damarları yalıtmak için eğri ipucu forseps kullanarak bu alanları incelemek. 8/0 ipek ip her izole damar yapısı etrafında geçmek ve bağla.</li>
		<li>Son olarak, vasküler yapı duodenal duvarına doğru makasla transect. Aynı şekilde bir 8/0 ipek sütür bıçaklanmasından, enine kolon ve mide pankreas ayırmak için kullanır. Not: Bu işlem sırasında choledocho-Pankreatik kanal bakmaksızın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dalak mide cranially kaldırma ve makasla kesme tarafından mide ve kısa Gastrik dalları, çalıştıran gastrosplenic bağ tanımlayın. Kurtarılan greft bağlı dalak bırakın. Not: greft ısınıyor en aza indirmek için bir 10 mL şırınga buz üzerinde depolanan soğuk histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm ile 19 G iğne ile kullanarak sürekli pankreas sulamak.</li>
	<li>Son olarak, dalak Forseps ile açgözlü tarafından donör siteden (şekil 1B) pankreas kaldırmak ve alıcının aktarın.<ol>
		<li>Alternatif olarak, şiddetli iskemi reperfüzyon hasarı tetiklemek için greft steril, 4 ° C perfüzyon çözüm 16 h için alıcı hayvan yerleştirerek önce saklayın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. alıcı hazırlık
<ol>
	<li>I.p. iğne xylazine (5 mg/kg vücut ağırlığı) ve 27 G iğne kullanarak ketamin (100 mg/kg vücut ağırlığı) alıcı hayvanla anestezi.</li>
	<li>Bir Elektrikli tıraş makinesi kullanarak hemen yan servikal bölgenin tıraş ve sırtüstü pozisyonda ameliyat alanında fareyi getirin. Bant tellerinin kullanarak fare düzeltmek. Solunum ödün önlemek için ön bacaklarda esneme önlemek.</li>
	<li>Operatif alan üç klorheksidin bulanmış gauzes kullanarak kez fırçalayın.</li>
	<li>Sağ paramedian, sağ alt çene açısı için hafifçe eğik cilt kesi Şah kesi üzerinden yapmak.</li>
	<li>Açık açık tanımlamak ve şu dış juguler ven lateral dallar seferber. Onları İki kutuplu Forseps ile koagüle ve onları makasla transect.</li>
	<li>Submandibular Tükürük bezi sağ LOB cranially Asansör, vasküler Transpediküler tanımlamak ve iki kutuplu forseps kullanarak dağlamak. LOB cauterized Transpediküler makasla transecting tarafından kaldırın.</li>
	<li>Benzetme adıma 2.5 harici juguler ven tüm medial dalları belirlemek, onları iki kutuplu Forseps ile dağlamak ve onları makasla transect.</li></ol>Dış juguler ven eğri ipucu Forseps ile mümkün olduğunca cranially zayıflatmak ve bitişik harfler arasında yeterli boşluk bırakarak iki 8/0 ipek bağı olan ligate.
	<li>Düz makasla iki önceden yerleştirilmiş bitişik harfler arasında dış juguler ven transect.</li>
	<li>Dış juguler ven polietilen kol (0,75 mm iç çap, 0.94 mm dış çapı) ile proksimal sonuna geçmek ve manşet tanıtıcısı bir Venöz microhemostat kelepçe ile düzeltin.</li>
	<li>Gemi kütüğü ucunda kravat kaldırmak ve gemi üzerinde kol çıkar. Diplidir ven kol üzerinde bir dairesel 8/0 - ipek ip ile (şekil 1A) düzeltmek.</li>
	<li>Uzağından ve klemple doğru boyun kas yüzeysel parçası dağlamak, makasla transect ve çıkarın.</li>
	<li>Yavaşça ortak Karotid arter seferber, çatallanma zayıflatmak ve iki kez, karotid çatallanma kravat değil emin ligate. Gemi arasındaki bağları kesilmiş.</li>
	<li>2,9 adım, proksimal sonuna ortak Karotid arter Poliamid kelepçe (dış 0.6 mm çapı 0.57 mm iç çap) üzerinden geçmek ve bir Arteryel mikrovasküler kelepçe ile tamir benzer.</li>
	<li>Vasküler güdük sonunda bağ kaldırın ve yavaşça gemi dilatators kullanarak Lümen genişletmek. Gemi üzerinde Arteryel kol çıkar ve bir 8/0 ipek ip (şekil 1A) ile düzeltebilirim.</li>

3. implantasyon
<ol>
	<li>Yer içine kafa ile bir tanıtıcı olarak dalak kullanarak alıcının boyun bölgesi greft yanal, dalak da dahil olmak üzere kuyruk ve gemi kütükleri ventro caudally yönelik. Dokuları düzgün pozisyonu kullanım pamuk yapışıyor.</li>
	<li>Pankreas nakli portal ven alıcı hayvanın dış juguler daha önce diplidir, hangi ven üzerinde yavaşça çekin ve uygun manşet sabit (bkz. Adım 2.10). Bir dairesel 8/0 ipek ip ile düzeltebilirim.</li>
	<li>Abdominal aort greft stump diplidir ortak Karotid arter alıcı hayvan çek. Bir çevresel 8/0 ipek ip ile (şekil 1 c) düzeltebilirim.</li>
	<li>Dalak damarları dalak hilusu yakın belirlemek ve onları eğri ipucu Forseps ile zayıflatmak. 8/0 ipek bitişik harfler ile kravat ve dalak kaldırmak için dalak damarları transect. Son olarak, bağları kısaltın.</li>
	<li>Forseps uygulanması bir kelepçe kullanarak, Venöz veresiye kelepçe önce kaldırın. Arteryel kelepçe kaldır. Not: nakli başarılıysa, pankreas nakli hemen bir homojen pembemsi renk ve görünür arteriyel nabız (şekil 1 d) gösterilen reperfused.</li>
	<li>Greft normothermic serum fizyolojik solüsyonu ile nemlendirin.</li>
	<li>Düz forseps kullanarak Venöz manşet kolu kaldır.</li>
	<li>Bir koşu ile cerrahi yara kapatın 6/0 dikiş.</li>
</ol>
4. ameliyat sonrası bakım (bitiş noktası)
<ol>
	<li>Aşağıdaki yordamı uygulamak ilâ 0,5 mL normal salin subkutan (SC) intraoperatif sıvı kaybı 19 G iğne kullanarak değiştirme için.</li>
	<li>Alıcı hayvan bir Isıtma yastığı anestezi tam kurtarma kadar tutun.</li>
	<li>Sonra uyanık, alıcı hayvan konut tesisi için nerede olabilir gıda dönmek ve ad libitumsu.</li>
	<li>Ameliyat sonrası ağrı önlemek için şu işlemi (1) Buprenorphin (0.1 mg/kg c.a.) sonra her 12 h ilk 5 gün ve (2) carprofen 4 mg/kg c.a. için her 12 h yönetmek SC ilk hafta için.</li>
	<li>Uygun besin alımını tahmin etmek için her gün ağırlığı (g) alıcı her hayvan izlemek. Bir kilo kaybı fazla 10-15 kilo için ameliyat günü, ilgisizlik, felç edici, çok bükülmüş bir geri yanı sıra cerrahi yan enfeksiyonlar karşılaştırıldığında % bitiş noktalarını temsil eder.<ol>
		<li>Bu durumda, hem de klinik bitiş noktası, ulaştıktan sonra terminal isoflurane inhalasyon kullanarak hayvan kurban.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Gruessner, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2011+update+on+pancreas+transplantation:+comprehensive+trend+analysis+of+25,000+cases+followed+up+over+the+course+of+twenty-four+years+at+the+International+Pancreas+Transplant+Registry+(IPTR).">2011 update on pancreas transplantation: comprehensive trend analysis of 25,000 cases followed up over the course of twenty-four years at the International Pancreas Transplant Registry (IPTR).</a> Rev Diabet Stud. 8 (1), 6-16 (2011).</li><li>Troppmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+after+pancreas+transplantation.">Complications after pancreas transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (1), 112-118 (2010).</li><li>Fern&#225;ndez-Cruz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+and+graft+pancreatitis+following+combined+pancreas-renal+transplantation.">Native and graft pancreatitis following combined pancreas-renal transplantation.</a> Br J Surg. 80 (11), 1429-1432 (1993).</li><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+and+reperfusion-from+mechanism+to+translation.">Ischemia and reperfusion-from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li><li>Konigsrainer, A., Habringer, C., Krausler, R., Margreiter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+of+pancreas+transplantation+in+the+rat+securing+pancreatic+juice+for+monitoring.">A technique of pancreas transplantation in the rat securing pancreatic juice for monitoring.</a> Transpl. Int. 3 (3), 181-182 (1990).</li><li>Lee, S., Tung, K., Koopmans, H., Chandler, J., Orloff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreaticoduodenal+transplantation+in+the+rat.">Pancreaticoduodenal transplantation in the rat.</a> Transplantation. 13 (4), 421-425 (1972).</li><li>Tori, M., Ito, T., Matsuda, H., Shirakura, R., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+of+mouse+pancreaticoduodenal+transplantation.">Model of mouse pancreaticoduodenal transplantation.</a> Microsurgery. 19 (2), 61-65 (1999).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. (92), e50753 (2014).</li><li>Brandacher, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrobiopterin+compounds+prolong+allograft+survival+independently+of+their+effect+on+nitric+oxide+synthase+activity.">Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity.</a> Transplantation. 81 (4), 583-589 (2006).</li><li>Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cervical+heterotopic+arterialized+liver+transplantation+in+the+mouse.">Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse.</a> J Surg Res. 93 (1), 97-100 (2000).</li><li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant.">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Exp Clin Transplant. 8 (3), 245-249 (2010).</li><li>Liu, X. Y., Xue, L., Zheng, X., Yan, S., Zheng, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+transplantation+in+the+mouse.">Pancreas transplantation in the mouse.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 9 (3), 254-258 (2010).</li><li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+pretreatment+with+tetrahydrobiopterin+saves+pancreatic+isografts+from+ischemia+reperfusion+injury+in+a+mouse+model.">Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model.</a> Am J Transplant. 10 (10), 2231-2240 (2010).</li><li>Drognitz, O., Obermaier, R., von Dobschuetz, E., Pisarski, P., Neeff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+transplantation+and+ischemia-reperfusion+injury:+current+considerations.">Pancreas transplantation and ischemia-reperfusion injury: current considerations.</a> Pancreas. 38 (2), 226-227 (2009).</li><li>White, S., Shaw, J., Sutherland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+transplantation.">Pancreas transplantation.</a> Lancet. 373 (9677), 1808-1817 (2009).</li><li>Morath, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+pancreas-kidney+transplantation+in+type+1+diabetes.">Simultaneous pancreas-kidney transplantation in type 1 diabetes.</a> Clin Transplant. 23 (Suppl 21), 115-120 (2009).</li><li>Perseghin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-sectional+assessment+of+the+effect+of+kidney+and+kidney-pancreas+transplantation+on+resting+left+ventricular+energy+metabolism+in+type+1+diabetic-uremic+patients:+a+phosphorous-31+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Cross-sectional assessment of the effect of kidney and kidney-pancreas transplantation on resting left ventricular energy metabolism in type 1 diabetic-uremic patients: a phosphorous-31 magnetic resonance spectroscopy study.</a> J Am Coll Cardiol. 46 (6), 1085-1092 (2005).</li><li>Secchi, A., Caldara, R., La Rocca, E., Fiorina, P., Di Carlo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+disease+and+neoplasms+after+pancreas+transplantation.">Cardiovascular disease and neoplasms after pancreas transplantation.</a> Lancet. 352 (9121), 65 (1998).</li><li>Kirk, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossing+the+bridge:+large+animal+models+in+translational+transplantation+research.">Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research.</a> Immunol Rev. 196, 176-196 (2003).</li><li>de Jong, M., Maina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+humans:+are+they+the+same?--Implications+in+cancer+translational+research.">Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research.</a> J Nucl Med. 51 (4), 501-504 (2010).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis.">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).</li><li>Cardini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+for+neuronal+nitric+oxide+synthase+in+early+microcirculatory+derangement+and+recipient+survival+following+murine+pancreas+transplantation.">Crucial role for neuronal nitric oxide synthase in early microcirculatory derangement and recipient survival following murine pancreas transplantation.</a> PLoS One. 9 (11), e112570 (2014).</li><li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+lethal+murine+pancreas+ischemia+reperfusion+injury+is+specific+for+tetrahydrobiopterin.">Prevention of lethal murine pancreas ischemia reperfusion injury is specific for tetrahydrobiopterin.</a> Transpl Int. 25 (10), 1084-1095 (2012).</li></ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

IRI ilişkili greft hasar solid organ nakli için doğasında vardır ve bu mikro bir karışıklık ile karakterizedir. Birkaç metabolit birikimi iskemik faz ve inflamatuar cascades ağırlıklı olarak Reaktif oksijen ve azot türleri, doku hasarı sırasında greft reperfüzyon4sonuçlarında aracılı başlatma sırasında. Bu cascade sadece kısa vadeli, ama aynı zamanda uzun vadeli başarı tehlikeye ve bu nedenle, hastaların hayatta kalma14önemli ölçüde etkiler. Bugüne kadar kombine böbrek pankreas nakli tercih terapi türünden acı son sahne böbrek hastalığı15ile 1 diyabet hastaları için temsil eder. Çeşitli çalışmalarda başarılı kombine böbrek pankreas nakli does değil yalnızca geri yükleme ve diyabetik alıcılar, böbrek nakli işlevinde korumak ama aynı zamanda stabilize bile nöropati gibi ikincil komplikasyonlara tersine çevirir göstermiştir veya yanı sıra mikro - ve macroangiopathy16,17,18.
Hayvan araştırma azaltma, değiştirme ve iyileştirme (3 R's) sürekli çabalara rağmen üreme IRI gibi karmaşık patofizyolojik süreçlerin vitro ayarlarında sadece mümkün değildir. Bu nedenle, hayvan modelleri hala translasyonel araştırma19,20için ideal bir araçtır olarak kabul edilir. Burada açıklanan gibi fare modellerinde fare ya da diğer hayvan göre birçok avantajı modelleri. Bunlar genetik olarak iyi tanımlanmış doğuştan fare suşları (örneğin transgenik ve knock-out suşları) büyük bir miktarı, moleküler analiz araçları, bir bolluk gibi bir kolay ve ucuz21işleme kullanılabilirliğini içerir. Açıklanan modeli önemli bir avantajı olmayan dikiş kol teknikte yatıyor. Burada sunulan teknik, başarı oranları kullanarak &#62; % 90 ulaşılabilir, kıyasla daha önce açıklanan modelleri22önemli ölçüde daha iyi olduğu. Bu sigara dikiş tekniği kullanarak, biz önemli ölçüde azaltılmış hipovolemik şok, tromboz ve anastomoses12stenoz gibi ortak komplikasyonlar. Bu yöntemin daha fazla avantajı alıcı hızlı ameliyat sonrası iyileşme ile ilişkili greft ekstra karın konumunu içerir. Ayrıca, servikal konumu mükemmel greft exterioration olmadan herhangi bir gerginlik22tarafından canlı görüntüleme gibi vivo içinde analizleri için uygun yapar.
Bu modelin en büyük dezavantajı klinik gerçeklik benzemez Pankreatik kanal tıkanıklığı var. Bu modelde, ekzokrin drenaj choledocho pankreas Kanal bağlama tarafından yönetilir. Uzun vadede, bu sonuçlar bir işaretli fibrozis ve Atrofi bezinin pankreatit22gerek önde gelen olmadan. Biz erken gözlenen ekzokrin doku bu bozulma nedeniyle gün 30 nakli sonra biz bu modeli uzun vadeli gözlem için uygun değildir inanıyoruz. Buna ek olarak, zarar görmemiş endokrin işlev gylcemic denetimler alıcının greft13,23,24işlevinin günlük değerlendirme için kolay bir araç yapar.
Bu özellikleri bu erken greft yaralanma uzun koruma dönemleri ile veya farklı koruma çözümleri ve teknikleri ile ilgili analiz etmek için ideal bir model yapar. Bu model ile en iyi başarı elde etmek için bazı önemli adımları dikkate alınmalıdır. Pankreas kendisi manipülasyon için çok duyarlıdır. Bu nedenle, nazik işleme organ kurtarma ve implantasyon sırasında pamuk çubukları kullanarak mekanik travma en aza indirir. Kaçınılmaz olarak şiddetli greft hasara neden olur bu yana doğrudan bezi Forseps ile açgözlü, kaçınılmalıdır. Aynı nedenle, dalak ile birlikte pankreas kurtarılır ve bir kolu kullanılır. Bu da klinik pratikte kurulur. Başka bir tuzak 4 ° C histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm kullanarak perfüzyon aort güdük yoluyla elde edilir soğuk perfüzyon içerir. Bu vesileyle, aşırı bir bezi şişmesi yavaşça greft Ventriküler tarafından önlenebilir. Kalan perfüzyon çözüm greft nemlendirme için sıcaklık organ kurtarma sırasında düşük tutmak amacıyla kullanılmalıdır.
İle ilgili olarak alıcı hazırlık hem dış juguler ven, hem de ortak Karotid arter dikkatli bir diseksiyon başarılı revascularisation için temel ayarlar. Özellikle, tam maruz kalma Bütün dereleri, hem de çevresindeki yağ dokusu kaldırarak damarın içinde dış sıkıştırma ve stenoz kalan yağ dokusu tarafından önlemek için gereklidir. Uygun kol çapı seçimi çok önemlidir. 25-28 g arasında tartma fareler için paylaşılan deneyim dayalı bir iç çapı 0.57 mm 0,75 Venöz kol için 0.8 mm arasında ve Arteryel kol için uygundur. Kesin, temiz kelepçeleri kenarlarını kesme gemi güdük yırtılma önlemek için zorunludur. Kaplar, özellikle arter dilatasyonu en iyi gemisi dilatators ile iyi ipuçları kullanılarak elde edilir. Pratik bir kural olarak, gemi iki kez manşet Lümen için genişletmek gerekir. Gemi üzerinde everting ve kol üzerinde sabitleme işlemi sırasında bu çok önemli bu adımı kolaylaştırır gibi vasküler kelepçeler bir cilt kapağı altında yerleştirerek sabitleme öneririz.
Zaten belirtildiği gibi dikiş manşet-teknik vasküler anastomoz için kolay bir yöntemi temsil eder ve 5 dk içinde gerçekleştirilebilir. Ancak, alıcının boyun bölgesinde greft doğru konumlandırma olduğunu doğru revaskülarizasyon için son derece önemlidir. Bu vesile ile en son doğru konumlandırma-boyun bölgesinde greft güvenli, düz ve gerginlik-Alerjik anastomoz arter ve ven izni vermesi için beklenebilir gerekiyor. Bu çıkış obstrüksiyonu kırışma nedeniyle neden olabilir beri kaçınılması gereken uzun olan gemileri var. Aynı nedenle, Venöz anastomoz manşet tutamaç reperfüzyon takip da kaldırılmalıdır. Pankreas nakli üzerinden yerelleştirilmiş kanamalar durumlarda, başarılı hemostaz yavaşça pamuk çubukları kullanarak 5 min için kanama yan sıkıştırarak elde edilebilir. Bu tür bir komplikasyon yönetmek için yalnızca başarılı bir yol bu.Koterizasyon, düz-se bile çok seçici, greft kaybı nekrotizan pankreatit nedeniyle hemen hemen her durumda sonuçlandı.
Özet olarak, teknik olarak mümkün ve microsurgically ve mükemmel başarı oranları olduğu bir dikiş manşet tekniği kullanarak farelerde pankreas nakli için bir yöntem geliştirdik. Progredient fibrozis pankreas kanal tıkanıklığı nedeniyle göz önüne alındığında, bu model en iyi erken greft hasar üzerinde odaklanan araştırma konuları için uygundur. Bu el yazması araştırmacılar güvenli bir şekilde bu modeli kendi laboratuarlarında kurmak izin vermek için tasarlanmıştır.

Eşzamanlı böbrek-pankreas nakli (SPK) geçerli standart tedavi diyabet ve son aşama böbrek hastalığı hastaları için temsil eder. Sabitleme veya diyabetik microangiopathy ve daha iyi bir yaşam kalitesi1' in bile regresyon ile ilgili uzun vadeli insülin bağımsızlık başarılı transplantasyon sonuçlanır. Ancak, böbrek ve karaciğer nakli, gibi diğer ortak katı organ nakillerine aksine pankreas Greftler iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) daha yatkındır. % 35'e kadar bildirilen olaylar sadece greft, ama hatta hasta, hayatta kalma2,3tehlikeye.
Oksidatif stres, microcirculatory bozuklukları, artan ifade pro-inflamatuar sitokinlerin ve adezyon molekülleri kaynaklanan son olarak endotel harekete geçirmek ve kendi bütünlüğü kaybı tüm atfedilen bu allojeneik sigara greft yaralanma 4. defa, IRI tam moleküler mekanizmaları büyük ölçüde bilinmeyen ve organ organ değişebilir.
Vitro modelleri kullanan büyük ilerlemeye rağmen hayvan modelleri geliştirilmesi moleküler mekanizmaları greft IRI ilişkili değişiklikler pankreas nakli takip ilgili bilgi derinleştirmek çok önemlidir. Pankreas nakli modelleri çeşitli kemirgenler5,6' geliştirilmiştir ancak tek fare7' bildirdi. Bu son derece düşük sağkalım oranı % 46, mikrocerrahi işlemdir talep Aşil topuğu. Ancak, moleküler analiz araçları geniş çeşitli kendilerine uygulanacak bu yana fare modelleri için organ nakli ile ilgili araştırma, en iyi modeli temsil eder. Farklı organ nakillerine8,9,10ile farelerde geniş mikrocerrahi deneyime dayalı, yeni, son derece tekrarlanabilir tekniği heterotopik, servikal pankreas için geliştirdiğimiz nakli ile farelerde &#62; % 90 başarı oranı bir dikiş manşet tekniği kullanarak. Bu teknik ile anastomoses ile ilgili komplikasyonlar minimuma indirgenmiştir ve yüksek başarı oranı dikiş modeli11' e göre elde edilebilir. Şimdiye kadar sadece bir fare modeli ile benzer başarı oranları Liu ve ark12tarafından tanımlanmıştır. Ancak, bugüne kadar bu modeli kullanarak yayınlanan hiçbir çalışma vardır.

<table><tbody><tr><td>Adventitia Scissors</td><td>S&amp;amp;T</td><td>S-00102</td><td>Straight</td></tr><tr><td>Dumont # 7 Forceps</td><td>FST</td><td>&amp;nbsp;11271- 30</td><td>Curved Tip 0.17 x 0.1 mm</td></tr><tr><td>Yasargil Clip Mini Permanent 7mm</td><td>Aesculap</td><td>FE720K</td><td></td></tr><tr><td>Micro vessel clip</td><td>S&amp;amp;T</td><td>B1 00396 V</td><td></td></tr><tr><td>Vessel dilatator</td><td>S&amp;amp;T</td><td>D-5a.2, 00125</td><td></td></tr><tr><td>Clip applier</td><td>S &amp;amp; T</td><td>CAF-4 00072</td><td>for venous cuff</td></tr><tr><td>Clip applier</td><td>Aesculap</td><td>FE572K&amp;nbsp;</td><td>for the arterial cuff</td></tr><tr><td>Polyethylene tube</td><td>Portex Ltd</td><td></td><td>Inner diameter 0.75 mm for venous cuff</td></tr><tr><td>Polymide tubing</td><td>Vention Medical&amp;nbsp;</td><td>141-0051</td><td>Inner diameter 0.8 mm (Alternative for polyethylene tube from Portex Ltd)</td></tr><tr><td>Polymide tubing</td><td>Vention Medical</td><td>141-0033</td><td>Inner diameter 0.57 mm for arteriail cuff</td></tr><tr><td>Bipolar forceps</td><td>Micromed</td><td>140-100-015</td><td></td></tr><tr><td>8/0 silk ligatures</td><td>Catgut GmbH, Merkuramed</td><td>17209008</td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK solution</td><td>Dr. Franz K&amp;ouml;hler Chemie</td><td>59997</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Graeub</td><td>aniMedica GmbH</td><td>32554</td><td></td></tr><tr><td>Xylasol Graeub</td><td>aniMedica GmbH</td><td>50855</td><td></td></tr></tbody></table>

mouse model for pancreas transplantation using a modified cuff technique

Fare modelleri nakli araştırmada, kolay kullanım, iyi tanımlanmış genetik suşların çeşitli ve moleküler probları ve Kimyasalları vivo içinde yanı sıra gerçekleştirmek için en geniş kullanılabilirliği de dahil olmak üzere çeşitli avantajları var in vitro çalışmalar. Deneyimlerimiz çeşitli fare nakli modelleri ile bağlı olarak, biz heterotopik pankreas nakli manken farelerde şiddetli iskemi reperfüzyon hasarı ilişkili erken greft hasar yatan mekanizmaları analiz etmek amacıyla geliştirilmiştir. Aksine daha önce açıklanan teknikleri kullanarak dikiş teknikleri, burada biz bir dikiş manşet tekniği kullanarak yeni bir yordam açıklanmaktadır.
Son yıllarda, biz genel bir başarı oranı ile farelerde 300'den fazla pankreas nakillerine gerçekleştirdiyseniz &gt; % 90 başarı oranı asla açıklanan önce fare pankreas nakli. Bu dikiş manşet tekniği greft revaskülarizasyon için omurgası iki önemli adımlardan oluşur: (I) alıcı gemi polietilen/Polyamid kol çekerek ve donör gemi üzerine yerleştirerek çevresel bir bağ ve (II) ile sabitleme alıcı gemi ve ikinci bir çevresel bağ ile sabitleme diplidir. Daha az trombojenik lezyonlar yüksek a_ılabilinirse oranları ile endotel tabakası sonuçlarında sonuç sürekliliğini ve son olarak, yüksek başarı oranları.
Bu modelde, Arteryel anastomoz diplidir ortak Karotid arter alıcı hayvan üzerinde donör greft abdominal aort çekerek elde edilir. Greft Venöz drenaj diplidir dış juguler ven üzerinde alıcının portal ven greft çekerek elde edilir. Bu el yazması ayrıntıları ve organ kurtarma ve araştırmacılar mikrocerrahi becerileri ile nakli başarıyla kendi laboratuvarlarında gerçekleştirmek izin verir organ implantasyon prosedürleri çok önemli adımları sağlar.

Son on yılda 300'den fazla pankreas nakillerine farelerde yapılan. Protokolü kurulduktan sonra genel bir yaşama vardı &#62; % 90. Ameliyat sonrası kanama greft tromboz ile sonraki ölümcül nekrotik greft pankreatit ardından başarısızlığın ana neden oldu. Her iki durumda da, bitiş noktaları içinde 24 h ulaştı ve hayvan kurban edildi. Herhangi bir nörolojik bozukluklar, belirtiler disfaji ve cerrahi yan enfeksiyonları bu dizi gibi değildi.
Transplante greft endokrin işlevi araştırmak ve bu nedenle model açıklık doğrulamak için hiperglisemi alıcı farelerde ön arıtma intraperitoneally uygulanan streptozotocin (312,5 mg/kg vücut ağırlığı) tek bir doz ile indüklenen 4 Ameliyattan önce gün. Fareler kan şekeri düzeyleri olsaydı Hiperglisemik kabul &#62; 300 mg/dL. Şekil 2A kan şekeri düzeyleri farklı grupların gösterir. Greftler 16 h uzun süre soğuk iskemi zamanının olmadan alma fareler normogylcemia ekimi izleyen 24 saat içinde ulaştı ve bu metabolik durum tüm gözlem süre içinde saklanır. Buna ek olarak, Sigara nakledilen hayvanlar Hiperglisemik kaldı. İskemi reperfüzyon greft yaralanma ilişkili hasar endokrin fonksiyonları üzerine etkisi ile ilgilenen olduğumuzdan bu yana, biz 16 h uzun süredir devam eden soğuk iskemi zaman (CIT) ve 45 dk sıcak iskemi zaman (WIT) nerede greft sinin üçüncü bir grup eklendi. Bu greft alma fare normoglycemia ulaşmadı ve bu model13' te öldürücü olduğu gösterilmiştir şiddetli pankreatit gelişimi nedeniyle 48 saat sonra kurban edilmesi gerekiyordu.
Bu model iskemi reperfüzyon hasarı ilişkili erken greft hasar araştıran amaçlı çeşitli projeler için yararlıdır. Daha fazla soruşturma, diğerleri arasında confocal intravital floresan mikroskopi microcirculatory dengesizliğini 2s nakli sonrasında gerçekleştirilen miktar için dahil. Greft yüzdeki karşıtlığını 0.3 mL % 0,4 floresein isothiocyanate etiketli dextran (MW 150 000) penis damar içine enjekte edilerek geliştirilmiş oldu. Şekil 2B normal kılcal d saf fare pankreas ve uzun süreli CIT (şekil 2C) maruz bırakılmamalıdır transplante bir pankreas nakli görüntüler. Buna ek olarak, şekil 2B pankreas nakli için uzun süreli Cit maruz kalmaları sonucu olarak mikro dökümünü gösterir
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54998/54998fig1.jpg"> 
Resim 1 : İntraoperatif resimler. (A)intraoperatif görünümü alıcı gemilerin anastomoz için hazırlanmış. Dış juguler ven (1) edilmiş Venöz polietilen kol üzerinde diplidir ve bir dairesel 8/0 ipek ip ile sabit. Benzetme, ortak Karotid arter (2) edilmiş diplidir ve daha küçük atardamar poliamid kol üzerinde sabit. 1 mm. bar (B) pankreas nakli ex situçap. Portal ven (1) ve (2) gerekli için vasküler anastomoz abdominal aort güdük. Dalak (3) ile birlikte pankreas alınır ve bir kolu kullanılır. Dalak greft reperfüzyon önce kaldırılır. 1 cm. bar anastomoses (C) intraoperatif görünümünü ölçeklendirin. Portal ven (1) diplidir dış juguler ven kol çekti (2) ve bir dairesel 8/0 ipek kravat ile sabit. Benzer şekilde, abdominal aort (3) aort güdük diplidir ortak Karotid arter (4) kol üzerinde çekilir. Ölçek 1 mm. (D) intraoperatif görünümünü 5 dk reperfüzyon takip perfused pankreas nakli bar: Arteryel kelepçe tarafından takip ven, çıkarıldıktan sonra başarıyla transplante pankreas nakli homojen bir pembemsi renk görüntüler. Dalak reperfüzyon önce kaldırıldı (1: ve birleştirilmiş dalak gemi). Ölçek 1 cm. bar <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54998/54998fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54998/54998fig2.jpg"> 
Resim 2 : Endokrin işlevi pankreas nakli ve confocal vivo Floresans mikroskobu. Şekil 2A gösterir çizgi grafik kan glikoz düzeyleri CIT olmadan transplante farelerin (n = 10, PTX CIT, mavi çizgili w/o), Sigara nakledilen fareler (n = 11, yok PTX, kırmızı çizgi) ve fareler için uzun süreli CIT maruz Greftler alma (PTX + 16 h CIT, n = 10, yeşil çizgi). Tüm alıcılar daha önce 312,5 mg/kg c.a. streptozotocin IP ile Hiperglisemik render Greft CIT olmadan tüm alıcıların tüm gözlem süresi (50 gün) olduğu gibi endokrin işleviyle hayatta mümkün iken, fareler sigara nakledilen tüm gözlem döneminde Hiperglisemik kaldı. 16 h CIT maruz Greftler alma fare hiperglisemi kurtarmak değil ve 48 saat sonra % 10-15'den fazla kilo kaybı nedeniyle nakli ameliyatı kurban edilmesi gerekiyordu. Tüm gözlem dönemi yaşayan fareler bir son glycemia ölçüm takip 50 gün kurban edildi. Transplante Greftler mikro confocal intravital Floresans mikroskobu 2 h nakli takip tarafından değerlendirildi. Saf pankreas denetimleri görev yaptı. Şekil 2B normal kılcal d saf pankreasta gösterir. Düzenli bir kapiller ağ da transplante Greftler uzun süreli CIT (şekil 2C) tabi değil görülmektedir. Buna ek olarak, mikro bir dökümünü transplante Greftler uzun süreli CIT (şekil 2B) maruz görülmektedir. Ölçek çubuğu 100 µm. veri grafiği'ndeki ± standart sapma ifade. PTX: pankreas nakli; CIT: soğuk iskemi Zamanı; w/o: olmadan <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54998/54998fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique at JoVE.com

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Karın solid organ nakli arasında pankreas Greftler şiddetli iskemi reperfüzyon greft yaralanma ilişkili hasar, sonunda erken greft kaybı için önde gelen geliştirmek yatkındır. Bu iletişim kuralı fare pankreas nakli bu erken, zararlı zararlardan analiz etmek için ideal bir dikiş manşet tekniği kullanarak bir modeli açıklar.

Fare modeli değiştirilmiş manşet tekniği kullanarak pankreas nakli için

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

mouse-model-for-pancreas-transplantation-using-modified-cuff

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.9K Görüntüleme.  Medical University Innsbruck. Karın solid organ nakli arasında pankreas Greftler şiddetli iskemi reperfüzyon greft yaralanma ilişkili hasar, sonunda erken greft kaybı için önde gelen geliştirmek yatkındır. Bu iletişim kuralı fare pankreas nakli bu erken, zararlı zararlardan analiz etmek için ideal bir dikiş manşet tekniği kullanarak bir modeli açıklar.

Video: Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Tıp

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice. We found that it was easier to concentrate the islets or cells into pellets in the final delivery tubing (PE50) used to transplant the cells under the kidney capsule. This technique provides both speed and ease while reducing any undue stress to the cells or to the mouse.

Loading: Settled, hand picked, islets or pelleted cells are carefully aspirated off the bottom of a 1.5 mL microcentrifuge tube using a p200 pipetteman and a straight, thin-wall pipette tip. A length of PE50 tubing is attached to the pipette tip using a small silicone adapter tubing. Cells are allowed to settle, in the tip, and then are transferred to the PE50 tubing by slowly dialing the pipetteman. Once the cells are near the end of the PE50 tubing, a kink is made and the silicone adaptor tubing is placed over the kink. The PE50 tubing is transferred to a 15 mL conical containing a cut 5 mL pipet, and the PE50 tubing is taped over the side of the 5 mL pipet to prevent curling during centrifuging. Cells are allowed to reach 1,000 rpm and stopped.
Transplantation: Recipient mice are anesthetized, shaved, and cleaned. A small incision is made on the left flank of the mouse and the kidney is exposed. The kidney, fat, and tissue are kept moist with normal saline swab. The distal end of the PE50 is attached to a Hamilton screw drive syringe, containing a pipette tip, using the silicone adaptor tubing. A small nick is made on the right flank side of the kidney, not too large nor too deep. The beveled end of the PE50 tubing, nearest the cells, is carefully placed under the capsule, the tubing is moved around gently to make space while swabbing normal saline; a dry capsule can tear easily. A small air bubble is delivered under the capsule by slowly dialing the syringe screw drive. Islets are then slowly delivered behind the air bubble. Once the islets have been delivered kidney homeostasis is maintained and the knick is cauterized with low heat. The kidney is placed back into the cavity and the peritoneum and skin are sutured and stapled. Mice are immediately treated with Flunixin and Buprenorphine s.q. and placed in a cage on a heating pad.

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of mice. Cells are concentrated into pellets in the final tubing used for transplanting the cells under the kidney capsule. The ease of this technique reduces stress to the cells and the mouse.

Diyabetik Fare Böbrek Kapsül içine, Pankreas Islets Nakli

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Biyoloji

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Kanser Araştırmaları

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, immune cells, vessels, nerves, and extracellular matrix components. Over the years, different mouse models of PDAC have been developed to address the challenges posed by its progression, metastatic potential, and phenotypic heterogeneity. Immunocompetent mouse orthotopic allografts of PDAC have shown good promise owing to their fast and reproducible tumor progression in comparison to genetically engineered mouse models. Moreover, combined with their ability to mimic the biological features observed in autochthonous PDAC, cell line-based orthotopic allograft mouse models enable large-scale in vivo experiments. Thus, these models are widely used in preclinical studies for rapid genotype-phenotype and drug-response analyses. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach to successfully inject primary mouse PDAC cell cultures into the pancreas of syngeneic recipient mice. In addition to the technical details, important information is given that must be considered before performing these experiments.

Syngeneic mouse orthotopic allografts of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) recapitulate the biology, phenotypes, and therapeutic responses of disease subtypes. Owing to their fast, reproducible tumor progression, they are widely used in preclinical studies. Here, we show common practices to generate these models, injecting syngeneic murine PDAC cultures into the pancreas.

Pankreas Kanserini Modellemek için Sinjenik Fare Ortotopik Allogreftleri

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice

Islet transplantation has been clinically proven to be effective at treating type 1 diabetes. However, the current intrahepatic transplantation strategy may incur acute whole blood reactions and result in poor islet engraftment. Here, we report a robust protocol for the transplantation of islets at the extrahepatic transplantation site-the epididymal fat pad (EFP)-in a diabetic mouse model. A protocol to isolate and purify islets at high yields from C57BL/6J mice is described, as well as a transplantation method performed by seeding islets onto a decellularized scaffold (DCS) and implanting them at the EFP site in syngeneic C57BL/6J mice rendered diabetic by streptozotocin. The DCS graft containing 500 islets reversed the hyperglycemic condition within 10 days, while the free islets without DCS required at least 30 days. The normoglycemia was maintained for up to 3 months until the graft was explanted. In conclusion, DCS enhanced the engraftment of islets into the extrahepatic site of the EFP, which could easily be retrieved and might provide a reproducible and useful platform for investigating the scaffold materials, as well as other transplantation parameters required for a successful islet engraftment.

This protocol demonstrates murine islet isolation and seeding onto a decellularized scaffold. Scaffold-supported islets were transplanted into the epididymal fat pad of streptozotocin (STZ)-induced diabetic mice. Islets survived at the transplantation site and reversed the hyperglycemic condition.

Diyabetik Farenin Epididimal Yağ Tabağında Iskelelerin İskele Destekli Nakli

Islet transplantation has been clinically proven to be effective at treating type 1 diabetes. However, the current intrahepatic transplantation strategy ...

Biyomühendislik

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation site in experimental islet transplantation is the kidney capsule. However, as less is known about the interaction of pancreatic islets with blood constituents, it also makes sense to utilize the portal vein approach in experimental islet transplantation.
This protocol demonstrates an intraportal islet transplantation technique in NMRI nude mice. Streptozotocin (180 mg/kg) is injected intraperitoneally to induce hyperglycemia in recipient mice. They are considered as diabetic at a non-fasting blood glucose level greater than 20 mmol/L. One day prior to transplantation, mouse pancreatic islets are isolated from the donor pancreas by collagenase digestion; a minimum of 350 islets are utilized per diabetic recipient. Depending upon the islet isolation yield, two or more donor mice are utilized per recipient. After overnight culture at 37 &#176;C, islets are administered into the recipient liver via the portal vein. After surgery, the mice are protected in red Makrolon houses and observed until are awake. This protocol maintains glycemic control for 120 days in syngeneic mice and 15 days in allogeneic mice.

Pancreatic islet transplantation is a way to achieve normoglycemia in type 1 diabetes. This article focuses on the transplantation technique through the intraportal route to maintain normal glucose levels in diabetic mice.

İntraportal fare modeli pankreas adacıkları nakli

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection in preclinical studies because of their high homology with human genes. This understanding would help develop unique approaches to improving patients&#39; long-term survival treated with cardiac allografts. In a mouse model, abdominal donor heart implantation is commonly performed with an end-to-end&#160;anastomosis to the recipient&#39;s aorta and inferior vena cava using stitches. In this model, the donor&#39;s heart is implanted by end-to-end anastomosis to the recipient&#39;s carotid artery and jugular vein by the modified-Cuff technique. The transplantation surgery is performed without stitching and thus may increase the survival of the recipient since there is no interference with the blood supply and venous reflux of the lower body. This mouse model would help investigate the mechanisms underlying the immunological and pathological (acute/chronic) rejection of cardiac allografts.

In the present protocol, a mouse heart transplantation model is used for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection. In this heterotopic heart transplantation model, operation efficiency is improved, and the survival of cardiac grafts is ensured by a cervical end-to-end anastomosis of heart implantation using a modified Cuff technique.

Fare Servikal Heterotopik Kalp Transplantasyon Modeli için Modifiye Manşet Tekniği

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...

Orthotopic Homograft Tumor Transplantation: A Technique to Generate Pancreatic Tumor Mouse Models

Source: An, X. et al.&#160;<a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/57460/" target="_blank">Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry</a>. J. Vis. Exp. (2018)
The video explains a stepwise surgical method for orthotopic implantation of a tumor fragment from a cancerous donor to the pancreas of a non-cancerous recipient mice for development of pancreatic cancer. Orthotopically implanted PDAC could recapture the tissue microenvironment of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models more accurately.

Ortotopik Homogreft Tümör Transplantasyonu: Pankreas Tümörü Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Source: An, X. et al.&#160;Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry. ...