Name: the dimethylnitrosamine induced liver fibrosis model in the rat
Uploaded: 2016-06-17T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat at JoVE.com

The authors acknowledge the funding support from the Ministry of Education, Singapore, grant number MOE2010-IF-1-025.

Tüm hayvan deneyleri Uygulamalı Bilimler Yüksekokulu, Temasek Polytechnic hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylandı. DMN 1. Hazırlık <ol><li> Pipet 200 DMN&#39;nin ul (1 ug / ml stok çözelti) ve enjeksiyon için 10 mg / ml DMN çözelti hazırlamak için PBS 19.8 ml ekleyin. Not: DMN kanserojen. Hayvan enjeksiyonları DMN hazırlamak ve gerçekleştirmek için bir davlumbaz kullanın. </li></ol> DMN 2. intraperitoneal enjeksiyon <ol><li> 200 g - 150 ortalama ağırlığı erkek sıçan kullanın. Deneyin başlamasından önce 7 gün - 4 sıçan alıştırıldı. </li><li> 12 saat ışık ve 12 saat karanlık çevrimi ile 22 ± 1 ° C, oda sıcaklığında fareleri koruyun. Sıçan yemi ve su ad libitum sağlamak. </li><li> günlük yiyecek ve su alımı ölçün. vücut ağırlığı haftalık ölçün. </li><li> 10 mg / kg vücut ağırlığı dozunda bağlı olarak, her bir sıçan için DMN miktarını hesaplayın. 25 gauge iğne t 1 ml şırınga kullanıno şırıngaya DMN solüsyonu hesaplanan hacmi çizin. </li><li> Periton içine enjekte 21 sıçan kısıtlamaktadır. </li><li> Sıçan düzgün ölçülü beraber, karın sağ alt kadranda içine iğne tanıtmak karın boşluğunda iğnenin doğru yerleştirilmesi için kontrol edin ve yavaş yavaş DMN çözüm enjekte etmek (hiçbir şey aspire edilmelidir) şırınga pistonu geri çekin. </li><li> DMN dozu edildiğinde, yavaş yavaş iğneyi çek ve kesici kutusu içine atın. </li><li> 4 hafta boyunca haftada 3 gün üst üste DMN intraperitoneal gerçekleştirin. Her gün aynı anda enjeksiyon yönetmek. enjeksiyon haftanın başlangıcında vücut ağırlığına göre dozaj yeniden hesaplar. </li><li> Biyokimyasal parametreleri ölçmek için kuyruk ven haftalık kan toplayın: alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) 22. </li><li> ticari bir Vet kullanarak Tedbir serum ALT ve ASTDeney Kimya Analiz. </li></ol> 3. Brüt Sınav ve Karaciğer Hasat <ol><li> 100 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda pentobarbital intraperitonal enjeksiyonu ile sıçanlarda öldürülür. kalp atışı eksikliği denetleyerek ölümü sağlayın. </li><li> Otopsisi için hazırlayın ve karın yukarı bakacak şekilde sırt yatma diseksiyon karta Parkinson ve ark., 23 yerleştirin ölü fareler tarafından tarif edildiği gibi hayvan durumunu değerlendirmek. </li><li> Dezenfekte ve% 70 etanol ile cildi nemlendirmek. </li><li> makas kullanarak, cilde çene anüs ventrum tam uzunlukta insizyon ve cildi yansıtmaktadır. makasla, karın iç organ maruz, kılıç şeklinde kıkırdak anüs karın duvarı insizyon. </li><li> Herhangi bir anormallik olup olmadığını kontrol etmek yerinde karın organları inceleyin. herhangi bir renk, boyut değişiklikleri, organların yerini ve periton boşluğu içinde sıvı varlığını unutmayın. Muayene etmekorganların tutarlılığı ve herhangi bir koku varlığı not edin. </li><li> makas ve forseps kullanarak, kendi bağ ve ekleri tüm karaciğer Free teşrih. <ol><li> o diyaframa bağlı olduğu hilusunda başlayın ve tüm ekleri karaciğer lobları serbest çalışmak. Dikkatle tüm bağ ve kan damarlarını kesti. </li></ol></li><li> petri üzerine karaciğer aktarın ve karaciğer tartın. </li><li> 5 mm karaciğer lobları kalın kesitler - Bir neşter kullanılarak, 2 kesti. Tutarlılık için, hep aynı karaciğer lobunda numune alır. Tespiti için sağ yan lob kalınlığında bir kama% 10 tamponlu formalin içine lobe.Immediately yer kenarından 24 yaklaşık 1 cm yaklaşık 5 mm çapında al. formalin hacmine doku 01:10 ya da daha fazla olduğundan emin olun. </li><li> diğer çalışmalar için gerekirse hasat ve hemen bu noktada karaciğer lobu (sıvı azot kullanılarak) bölümlerini dondurma. tutarlılık için aynı karaciğer lob (3.8), numune gelince. </li></ol><ol><li> 24 saat en az% 10 tamponlu formalin karaciğer örnekleri saptamak. </li><li> Tespit edildikten sonra, karaciğer Döşeme kasetler içine yerleştirin ve otomatik doku işlemci sepet içine yerleştirin. </li><li> % 10 tamponlu formalin içeren ilk istasyonu kasetleri ile sepet yerleştirin. Emin olun kasetler tamamen su altında. döngüsü başlar dek en fazla 12 saat boyunca bu odada kalabilir. </li><li> (% 50,% 70,% 90,% 100 (2 istasyon), iksilen (2 istasyon) ve sıvı parafin konsantrasyonlarda etanol: aşağıdaki çözümleri içeren istasyonlardan ile 1 saat için her kasetleri döndürmek için doku işlemci program 2 istasyon). </li><li> gömme istasyonunun balmumu banyosu içine karaciğer örnekleri aktarın. gömme makinesi, en az bir saat önce açık olduğundan emin olun. </li><li> Kullanılarak önceden ısıtılmış kıskaçlar (65 ° C), W her kaseti çıkarmakgömme makinesinin sıcak plaka (65 ° C) üzerine balta banyo ve yer. paslanmaz çelik taban kalıbına sıvı parafin yeterli miktarının tevzi yarısı dolu kadar (65 ° C önceden ısıtılmış). kalıbın içine kasetinden karaciğer bölümünü aktarın. numune kesme yüzeyi ile yerleştirilir emin olun kalıbın altındaki düz (mikroskobik incelenmesi gereken). </li><li> , Sıvı parafin ile tamamen kalıp doldurun üst boş kaseti montaj ve en az 30 dakika soğumasını gömme makinenin 4 ° C plaka üzerine kalıp yerleştirin. </li><li> balmumu soğutulur ve katılaşmış olup olmadığını kontrol edin, ve kalıptan parafin blok kaldırın. Blok kolayca dışarı pop ve sopa veya çatlak olmamalıdır. Bu durumda, blok eritmek ve bu adımı tekrarlayın. katılaşır kez parafin blok kesitli olabilir. Bloklar yıllar boyunca oda sıcaklığında saklanabilir. </li><li> balmumu tabakasının kadar 10 mikron kalınlığında mikrotom ve bölüme parafin blok yerleştiringömülü karaciğer dokusu görünür olması için yeterli kaldırılır. </li><li> 5 mikron kalınlığında kesmek için mikrotom ayarı değiştirin. Forseps kullanarak, kenarında tutarak iyi olarak kesilmiş bölümü almak ve dikkatli bir şekilde 40 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta su banyosunda bölümü yüzer. </li><li> Yavaşça yüzen bölümünün altında temiz bir cam slayt yerleştirin ve cam slayt yüzeyine kaldırın. gece boyunca 37 ° C&#39;de sıcak bir slayt üzerine slayt yerleştirin. </li></ol> 5. Masson Trikrom Boyası <ol><li> aşağıdaki gibi lekeleri uygulamadan önce, balmumu kaldırmak ve dokuları rehydrate slaytlar tedavi: <ol><li> 5 dakika boyunca ksilen bölümleri daldırın. 2x tekrarlayın. </li><li> 3 dakika boyunca% 100 etanol içinde bölümleri bırakın. 1x tekrarlayın. </li><li> % 90,% 80 ve% 70: 1 dakika etanol, aşağıdaki Çözeltilerin her bölümleri bırakın. </li></ol></li><li> slayt üzerinde herhangi bir mevcut etanol kaldırmak için musluk suyu altında slayt durulayın. </li><li> çekirdeği leke 10 dakika Demir Hematoksilen slaytlar daldırın. </li><li> slayt aşırı leke çıkarmak için su ile slaytlar durulayın. </li><li> sitoplazma leke 2 dakika süreyle Biebrich Scarlet-Asit fuksin slaytlar daldırın. </li><li> Su ile slaytlar durulayın. </li><li> Anilin mavisi alımını teşvik etmek 10 dakika Fosfotungstik / fosfomolibdik asit solüsyonundan slaytlar yerleştirin. Kullanım 2 tur sonra Fosfotungstik / fosfomolibdik asit solüsyonundan değiştirin. </li><li> kolajen elyafları leke, 10 dakika boyunca anilin mavi çözelti slaytlar yerleştirin. </li><li> Su ile aşırı leke durulayın ve farklılaşma slayt rengi daha narin ve şeffaf kılmak için gerçekleşmesine izin 1 dakika süreyle% 1 asetik asit çözeltisi slaytlar yerleştirin. </li><li> Su ile slaytlar durulayın ve doku bölümleri kurutmak geçin. aşağıdaki gibi dehidrasyon adımlar şunlardır: </li><li> Aşağıdaki conce olarak, 10 saniye her zaman için arka arkaya slaytlar daldırınetanol ntrations:% 70,% 80,% 95 ve% 100. </li><li> % 100 etanol içinde 30 sn için slaytlar bırakın. 1x tekrarlayın. </li><li> 5 dakika her kaldırmak için etanol için ksilen 3 istasyonları aracılığıyla slaytlar durulayın. </li><li> Montaj medya (örneğin, DPX mountant) ile numune üzerine bir cam kapak kayma monte edin ve kurumaya bırakın. Not: DPX, çabuk kurur leke korur ve doku bölümü koruyan bir sentetik reçine olduğunu. </li></ol> Karaciğer Masson diken Lekeli Bölümleri 6. Fibrozis Puanlama <ol><li> Bir veteriner patolog var 25 puan fibrozis göre fibrozis şiddetini değerlendirmek. fibrozis puanlama bir kör şekilde bağımsız iki veya üç patolog tarafından yapılırsa Optimum olurdu. Böyle bir senaryoda, puanlama herhangi farklılıkları sıralamak için tartışma ve grup gözden geçirdikten sonra bir final skoru elde edin. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Gol </td><td> Açıklama </td></tr><tr><td> 0 </td><td> hiçbir fibrozis </td></tr><tr><td> 1 </td><td> ile veya kısa fibröz septa olmadan bazı portal alanlarda fibröz genişleme, </td></tr><tr><td> 2 </td><td> ile veya kısa fibröz septa olmaksızın en portal alanlarda fibröz genişleme, </td></tr><tr><td> 3 </td><td> En portal alanlarda fibröz genişleme, portal arada portal (PP) köprüleme </td></tr><tr><td> 4 </td><td> merkezi (PC işaretli köprüleme ((PP Portala portal) yanı sıra portal portal alanlarda fibröz genişleme) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Ara sıra nodüller (tamamlanmamış siroz) ile (PP ve / veya PC) köprü İşaretli </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Siroz, olası veya kesin </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Fibrozis Masson diken Lekeli Karaciğer Bölümler 25 Okuma için kullanılır Skoru.

<ol>
	<li>Magee, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+liver+injury;+the+metabolism+of+dimethylnitrosamine.">Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine.</a> Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).</li><li>Pritchard, D. J., Butler, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis-the+mechanism+of+cell+death+in+dimethylnitrosamine-induced+hepatotoxicity.">Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity.</a> J Pathol. 158 (3), 253-260 (1989).</li><li>Madden, J. W., Gertman, P. M., Peacock, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylnitrosamine-induced+hepatic+cirrhosis:+a+new+canine+model+of+an+ancient+human+disease.">Dimethylnitrosamine-induced hepatic cirrhosis: a new canine model of an ancient human disease.</a> Surgery. 68 (1), 260-267 (1970).</li><li>Jenkins, S. A., Grandison, A., Baxter, J. N., Day, D. W., Taylor, I., Shields, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dimethylnitrosamine-induced+model+of+cirrhosis+and+portal+hypertension+in+the+rat.">A dimethylnitrosamine-induced model of cirrhosis and portal hypertension in the rat.</a> J Hepatol. 1 (5), 489-499 (1985).</li><li>J&#233;z&#233;quel, A. M., Mancini, R., Rinaldesi, M. L., Macarri, G., Venturini, C., Orlandi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morphological+study+of+the+early+stages+of+hepatic+fibrosis+induced+by+low+doses+of+dimethylnitrosamine+in+the+rat.">A morphological study of the early stages of hepatic fibrosis induced by low doses of dimethylnitrosamine in the rat.</a> J Hepatol. 5 (2), 174-181 (1987).</li><li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characteristics+of+dimethylnitrosamine+induced+fibrotic+liver+collagen.">Molecular characteristics of dimethylnitrosamine induced fibrotic liver collagen.</a> Biochim Biophys Acta, Protein Struct Mol Enzymol. 1292 (2), 215-222 (1996).</li><li>Winwood, P. J., Arthur, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cells:+their+activation+and+role+in+animal+models+of+liver+injury+and+human+liver+disease.">Kupffer cells: their activation and role in animal models of liver injury and human liver disease.</a> Semin Liver Dis. 13 (1), 50-59 (1993).</li><li>Nakamura, T., Sakata, R., Ueno, T., Sata, M., Ueno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+transforming+growth+factor&#946;+prevents+progression+of+liver+fibrosis+and+enhances+hepatocyte+regeneration+in+dimethylnitrosamine-treated+rats.">Inhibition of transforming growth factor&#946; prevents progression of liver fibrosis and enhances hepatocyte regeneration in dimethylnitrosamine-treated rats.</a> Hepatology. 32 (2), 247-255 (2000).</li><li>Shek, F. W., Benyon, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+can+transforming+growth+factor+beta+be+targeted+usefully+to+combat+liver+fibrosis?.">How can transforming growth factor beta be targeted usefully to combat liver fibrosis?.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. 16 (2), 123-126 (2004).</li><li>Wang, J. H., Shin, J. W., Son, J. Y., Cho, J. H., Son, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifibrotic+effects+of+CGX,+a+traditional+herbal+formula,+and+its+mechanisms+in+rats.">Antifibrotic effects of CGX, a traditional herbal formula, and its mechanisms in rats.</a> J Ethnopharmacol. 127 (2), 534-542 (2010).</li><li>Su, L. J., Hsu, S. L., Yang, J. S., Tseng, H. H., Huang, S. F., Huang, C. Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+profiling+of+dimethylnitrosamine-induced+liver+fibrosis:+from+pathological+and+biochemical+data+to+microarray+analysis.">Global gene expression profiling of dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis: from pathological and biochemical data to microarray analysis.</a> Gene Expr. 13 (2), 107-132 (2006).</li><li>M&#252;ller, A., Machnik, F., Zimmermann, T., Schubert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thioacetamide-induced+cirrhosis-like+liver+lesions+in+rats+usefulness+and+reliability+of+this+animal+model.">Thioacetamide-induced cirrhosis-like liver lesions in rats usefulness and reliability of this animal model.</a> Exp Pathol. 34 (4), 229-236 (1988).</li><li>Martinez-Hernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hepatic+extracellular+matrix.+II.+Electron+immunohistochemical+studies+in+rats+with+CCl4-induced+cirrhosis.">The hepatic extracellular matrix. II. Electron immunohistochemical studies in rats with CCl4-induced cirrhosis.</a> Lab Invest. 53 (2), 166-186 (1985).</li><li>Pritchard, M. T., Apte, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+to+Study+Liver+Regeneration.">Models to Study Liver Regeneration.</a> Liver Regeneration. , 15-40 (2015).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Marques, T. G., Chaib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+models+for+inducing+hepatic+cirrhosis+by+bile+duct+ligation+and+carbon+tetrachloride+injection.">Review of experimental models for inducing hepatic cirrhosis by bile duct ligation and carbon tetrachloride injection.</a> Acta Cir Bras. 27 (8), 589-594 (2012).</li><li>Wasser, S., Tan, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+hepatic+fibrosis+in+the+rat.">Experimental models of hepatic fibrosis in the rat.</a> Ann Acad Med Singapore. 28 (1), 109-111 (1999).</li><li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+abnormalities+during+the+progression+of+hepatic+fibrosis+induced+by+dimethylnitrosamine.">Biochemical abnormalities during the progression of hepatic fibrosis induced by dimethylnitrosamine.</a> Clin Biochem. 33 (7), 563-570 (2000).</li><li>Shimizu, I., Ma, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Sho-saiko-to,+a+Japanese+herbal+medicine,+on+hepatic+fibrosis+in+rats.">Effects of Sho-saiko-to, a Japanese herbal medicine, on hepatic fibrosis in rats.</a> Hepatology. 29 (1), 149-160 (1999).</li><li>Wang, Y., Gao, J., Zhang, D., Zhang, J., Ma, J., Jiang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+antifibrotic+effects+of+sorafenib+on+hepatic+stellate+cells+and+liver+fibrosis.">New insights into the antifibrotic effects of sorafenib on hepatic stellate cells and liver fibrosis.</a> J Hepatol. 53 (1), 132-144 (2010).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+Blood+from+the+Lateral+Tail+Vein+of+the+Rat.">Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat.</a> J Vis Exp. (99), (2015).</li><li>Parkinson, C. M., O'Brien, A., Albers, T. M., Simon, M. A., Clifford, C. B., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Necropsy+and+Selected+Tissue+and+Sample+Collection+in+Rats+and+Mice.">Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).</li><li>Ishak, K., Baptista, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+grading+and+staging+of+chronic+hepatitis.">Histological grading and staging of chronic hepatitis.</a> J Hepatol. 22 (6), 696-699 (1995).</li><li>Sant'Anna, L. B., Sant'Anna, N., Parolini, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+computer+assisted+image+analysis+for+identifying+and+quantifying+liver+fibrosis+in+a+experimental+model.">Application of computer assisted image analysis for identifying and quantifying liver fibrosis in a experimental model.</a> J Comput Interdiscip Sci. 2 (2), 139-148 (2011).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Biz karaciğer fibroz bir hayvan modeli yapmak ve karaciğer fibroz şiddetini değerlendirmek için bir yöntem tanımlanmıştır. DMN doğru doz teslim ve haftalık intraperitoneal enjeksiyon programa uymak önemlidir. Deneme ilerledikçe, o fareler tartmak ve DMN enjeksiyonları her hafta başında dozu yeniden hesaplamak için çok önemlidir. DMN toksik ve duman kabinesinde ele alınması gereken unutmayın. Biz de duman kabinede intraperitoneal gerçekleştirin. Tekrarlanan enjeksiyonlar ihtiyacı ile, enjeksiyon doğru kısıtlama ve teknik iç organlara kirleticilerin giriş ve zarar görmesini önlemek için önemlidir. Biz nadiren intraperitoneal enjeksiyonu gelen mortalite var. Sıçanlar, deney süresi boyunca günde 2x izlenmelidir. DMN enjeksiyon son haftasında, hayvanlar can çekişen işaretleri için daha sık ve yakından izlenmelidir. Bu peri olduğunukaraciğer hasarı en ağır ve etkilenen sıçanlar inappetent ne zaman od, vücut ağırlığı ve durumu kaybederler. 25 - Hiçbir veteriner müdahale varsa farelerin% 40 bu dönemde ciddi hasta olma ve ölebilir. Bu nedenle yakından takip araştırmacı hayvanın durumunu değerlendirmek ve organları taze yerine beklenmedik ölümden çürümeye kaybetmiş olmanın bir ötenazi sıçan hasat edilebilir sırayla deney uygun fesih planı yapabilirsiniz. Biz karaciğer hasarının ilerlemesi yararlı göstergeler olmak ALT ve AST düzeylerinin haftalık ölçümünü bulduk. Biz de AST ALT daha az spesifik olduğu görülmektedir ve karaciğere ek olarak hasarlı eritrositler ve kas dokusundan Piyasaya bu özellik var. kan yeterli hacmi sağlamak analiz için serum gerekli hacmi elde etmek için toplanır. sıçan başına kan 300 ul - Biz tipik olarak 200 toplamak. c sırasındahistolojik inceleme için karaciğer doku ollection, biz örnek aynı lob elde edilebilir öneriyoruz. Bu karaciğer değişiklikleri üniforma olduğunu kontrol ettikten sonra yapılır. DMN karaciğerde genel değişikliklere neden olur. Çalışmanın ilk aşamalarında, sol lateral ve medial lob yanı sıra sağ medial lob örneklenmiş. Biz bu loblar arasındaki mikroskobik değişiklikler herhangi bir farklılık gözlenmedi. Karaciğer bölümleri en az 24 saat süreyle% 10 tamponlu formalin sabit ve kısa bir süre sonra işleme tabi tutulmalıdır. Bir hafta ötesinde uzun süreli daldırma parafine sonra bölümüne kırılgan ve zor hale dokuda neden olabilir. Uygun 5 mikron ince kesitler Kesme uygulama ve sabır gerektirir. Çıplak gözle (Adım 4.11) ile uygun olduğu değerlendirilmektedir Bölümler onlar bölümünde kıvrımlar veya yırtılma gibi eserleri yok kontrol etmek için mikroskop ile muayene edilebilir. boyama işlemi en uygun t tamamlandıdinlenme molaları olmadan her adımda bir slayt daldırma için zaman dilimleri o. boyama işlemi sırasında bölümler sürekli nemli tutulan ve mümkün olduğu kadar kısa bir süre sonraki bir boyama çözeltisi üzerine transfer edilmesini sağlar. fibrozis derecesi için Masson diken boyanan kesitler değerlendirilmesi bir veteriner patolog girişini gerektirir. O / O o / o tavsiye ve deney her aşamasında organların doğru hasat katılmak mümkün olurdu, baştan çalışmanın parçası olmalıdır önemli bir ekip üyesidir. Böylece karaciğer fibroz puanlama için geçerli altın standart bir patolog tarafından uygun boyanan doku kesitlerinde değerlendirilmesidir. birden fazla patoloğun girişi var optimum olurdu ama, bu küçük organizasyonlarda mümkün olmayabilir. Bu gibi durumlarda, nesnellik görüntüleme teknolojisi 26 kullanılması ile iyileştirilebilir. Bu bulduk görüntüleme tekniği sonuçlarıpatolojik puanlama (yayınlanmamış veri) karşılaştırılabilir ve bu değerlendirme bir ek yöntem olarak kullanılmasını öneririz. Özetle, karaciğer fibroz DMN kaynaklı modeli diğer hayvan modelleri üzerinde birçok avantajı vardır. Cerrahi beceri gerektirmez olarak yapmak için nispeten kolay bir modeldir. DMN çevre güvenli ve CCl4 göre insanlarda ve hayvanlarda daha az toksik olan ve TAA daha hastalık oluşturmak için daha kısa bir zaman alır. CCl 4, TAA tarafından üretilen karaciğer hastalığı ve safra kanalı ligasyonu ile karşılaştırıldığında, DMN insan karaciğer fibrozu yakından temsilini üretir. Bu nedenlerden dolayı, bir model karaciğer fibrozu mekanizmaları incelemek için ve potansiyel anti-fibrotik maddeler taranması için yaygın olarak kullanılmaya devam öngörmekteyiz.

DMN güçlü bir karaciğere özgü bir toksindir. Sıçanların karaciğerlerinde yaralanmasına neden olan metabolizma, doku dağılımı ve yetenek Magee 1 tarafından rapor edildi ve apoptoz ile hepatosit hasarı ve hücre ölümü mekanizması Pritchard ve Butler 2 tarafından tarif edilmiştir. Bu bileşiğin aralıklı idaresi için köpekler ve fareler 3,4 karaciğer fibrozu indüklediği rapor edilmiştir. mekanizmaları ve karaciğer fibroz morfolojik değişiklikler yaygın bu modeli kullanarak incelenmiştir. Sıçan kullanarak erken çalışmalarda, DMN ile 3 haftalık tedavi steatoz 5 olmadan mikronodüler siroz ardından sentrilobuler hemorajik nekroz üretti. Erken fibrozis olduğu gösterilmiştir, oluşan kollajen daha fazla çapraz tip I 6 daha belirgin olmak tip III bağlantılı idi. Diğer nedenler ile ortak olarak, DMN kaynaklı fibrotik değişiklikler Kupffer hücrelerinde bir artış ile ilişkili olduğunu; i ikamet karaciğer makrofajlarn sinüzoidlerinde. Bu hücreler miyofibroblastlar içine morph ve fibrozis 7 birincil sorundur hücre dışı matriks aşırı miktarda üretir. Hücresel sinyal açısından, Nakamura ve ark., TGF-β karaciğer fibrozu 8 ilerlemesinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Özel olarak, TGF-β sinyalini inhibe etmek için bir tepe bölümü kesik tip II TGF-β reseptörünü sentezleyen bir adenovirüs kullanılan. kontrol grubuna kıyasla bu sıçanlarda karaciğer fibroz olağanüstü DMN tedavisi sırasında durduruldu. Diğer çalışmalar TGF-ß bastırılması karaciğer fibroz gelişimi 9,10 azaltılmasına yol açtığını doğruladı. Model, aynı zamanda anti-fibrotik tedavi 11 ilaç hedefleri olarak kullanılabilecek diğer fibroz belirteçleri ve proteinleri belirlemek için genel bir gen profili çalışmada kullanılmıştır. Diğer kimyasal maddeler arasında tiyoasetamid (TAA) ve C karaciğer fibrozu uyarılması için kullanılanarbon tetraklorür (CCl4). TAA sıçanlarda ve daha sonra fareler 12 birinci kullanıldı. Bu modelin avantajları şunlardır: Kimyasal yönetim kolaylığı suyu, karakteristik mikronodüler siroz ve biyokimyasal değişiklikler ile modelin tekrarlanabilirliği içme. sakıncaları şunlardır: karaciğer fibrozu için 3 aylık uzun süre geliştirmek ve karaciğer fibrozis indüksiyonu için moleküler mekanizmasının anlaşılması eksikliği için. CCl4 gelince, kullanımı aşağıdaki nedenlerle azalmıştır: insan karaciğer hastalığı taklit değil, ozon tabakası üzerinde zararlı etkileri vardır hayvanlara acı ve sıkıntı neden olur, insanlar için çok toksiktir ve kullanımı konusunda ek önlemler gerektirir ve bertaraf 13,14. Karaciğer sirozu için deneysel bir model olarak (cerrahi müdahale ile) Uzun süreli safra kanalı tıkanıklığı ilk Kountouras ve ark., 15 tarafından rapor edilmiştir. Bu yöntem, insan ve hayvanlar için toksik olan. However geliştirilmesi karaciğer fibrozu için gerekli süre arasında değişir. Marques ve arkadaşları. 16 ile 30 raporların bir yorum, karaciğer fibroz geliştirmek için ameliyattan sonra dört hafta yedi gün sürdü bulundu. açıklanan patolojik değişiklikler insan kronik safra fibrozis taklit ve model bu alanda ilgilenen araştırmacılar için daha uygun olacaktır. Özetle, 4 hafta boyunca farede DMN sabit bir doz aralıklı idaresi, insan hastalığı taklit karaciğer fibrozu üretir. Uygulanan farelerde karaciğer hasarı ve parankimal fibrozis 4,17 progresif gelişim gösterirler. Hastalığın ilerlemesi ve şiddeti belirli zaman noktalarında kan örneklerinin veya hayvanların kurban aracılığıyla izlenebilir ve etkisi 18 derece tekrarlanabilir. Böylece modeli genel olarak, karaciğer fibrozu ve siroz mekanizmaları incelemek için ve potansiyel anti-fibrotik maddeler 10,19,20 taranması için kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Dimethylnitrosamine</td><td>Wako</td><td>147-03781</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sinopharm chemicals</td><td>F63257009</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Masson trichome stains</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aniline Blue</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#42755</td><td></td></tr><tr><td>Acid Fuschin</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>RT42685</td><td></td></tr><tr><td>Scarlet Red</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#26905</td><td></td></tr><tr><td>Phosphotungstic Acid Hydrate</td><td>ALFA AESAR</td><td>ALFA40116.4</td><td></td></tr><tr><td>Phosphomolybdic Acid Hydrate</td><td>Sigma SG</td><td>221856-25G</td><td></td></tr><tr><td>Weigert&#039;s Iron Hematoxilyn</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mounting Medium</td><td>Merck</td><td>HX066873</td><td></td></tr><tr><td>Tissue processor</td><td>Leica</td><td>Leica TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Embedding machine</td><td>Sakura</td><td>&amp;nbsp;Sakura Tissue Tek TEC5 Embedding System</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>Leica RM 2235</td><td></td></tr><tr><td>Vet Test Analyzer</td><td>Idexx</td><td>Vet Test 8008</td><td></td></tr></tbody></table>

the dimethylnitrosamine induced liver fibrosis model in the rat

Dört eski bir hafta altı, erkek Wistar sıçanlar karaciğer fibrozis hayvan modelleri üretmek için kullanıldı. işlem, haftada üç gün boyunca intraperitonal olarak verilen 10 mg / kg dimethylnitrosamine (DMN) verilmesinden sonra dört hafta gerektirir. DMN bilinen hepatoxin ve kanserojen olduğu gibi intraperitonal enjeksiyon davlumbaz yapıldı. modeli birçok avantajı vardır. İlk olarak, karaciğer değişiklikleri ardışık olarak veya ilgi konusu özel aşamalarında incelenebilir. İkinci olarak, karaciğer hastalığı aşaması serum alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) enzim ölçümü ile takip edilebilir. Üçüncü olarak, farklı aşamalarda karaciğer hasarının şiddeti Masson diken lekeli karaciğer dokularının histolojik inceleme ardından belirlenen zaman noktalarında hayvanların kurban tarafından teyit edilebilir. DMN dört haftalık dozajlama sonrasında tipik fibroz skoru 5 Ishak ölçekte 6 etmektir. Model sürekli olarak yeniden olabilir ve olmuşturyaygın potansiyel anti-fibrotik ajanların etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

DMN tedavi sıçanlar kilo ve karıştırdı saç kaplama ile daha az şiddetli olur. DMN tedavi edilmiş sıçanların ortalama vücut ağırlıklarında önemli bir kayıp vardır; İlk tespit sonra 2 DMN tedavi haftalar ve bu fark DMN tedavisi (Şekil 1a) sonra, 3 ve 4. haftalar boyunca kalır. Sıçanlar ardışık hafta boyunca DMN aldıkça, karaciğer hasarı daha küçük hale gelmesine neden olur. Karaciğer indeksi; hangi nihai vücut ağırlığı, karaciğer ağırlığının yüzde DMN tedavi edilen sıçanlarda (Şekil 1b) için anlamlı derecede düşük olmasıdır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54208/54208fig1.jpg" /> Şekil 1: a) DMN Vücut ağırlıkları sıçanları tedavi. Veri ± SD (- 8 N = 6) vasıtasıyla temsil edilir. * P &lt;normal kontrol grubu b) Karaciğer endeksi ile karşılaştırıldığında 0.05.; DMN nihai vücut ağırlığı oranında, karaciğer ağırlığı DMN tre 4 hafta sonra tedavi edilmiş sıçanlarınolgunun yaşı. Veri ± SD (- 8 N = 6) vasıtasıyla temsil edilir. * P &lt;0.05, normal kontrol grubuyla karşılaştırıldığında. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54208/54208fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Kurban da DMN Tedaviden 4 hafta sonra, karaciğer yaş uyumlu kontrol hayvanlarından kıyasla daha küçük ve daha (Şekil 2a) (Şekil 2b) &#39;dir. Fibrin karaciğer yüzeyi ve bitişik karaciğer lobları yapıştırılır mevcut olabilir. sıçanlarda yaklaşık% 20&#39;si asite sahiptir. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54208/54208fig2.jpg" /> Şekil 2:. Yaşlı eşleştirilmiş kontrol sıçan DMN tedavi b) Karaciğer 4 hafta sonra bir sıçan a) Karaciğer. (A) karaciğer, büzülmüş firma ve sarımsı bir renk ile soluk karaciğerin ile karşılaştırıldığındaonun yaşlı uyumlu kontrolden. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54208/54208fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> karaciğer yaralanması hepatosit hücre zarının geçirgenliğinin azalması neden olur. Artmış serum ALT ve AST hepatosit hasarı göstergeleridir. Serum ALT (Şekil 3a) ve AST (Şekil 3b) DMN tedavi edilen grupta hafta 2 ve DMN enjeksiyon 4&#39;ten sonra kontrol grubuna göre anlamlı olarak yüksek bulunmaktadır. Serum ALT ve AST düzeyleri genellikle DMN tedavinin her hafta sonra artar. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54208/54208fig3.jpg" /> Şekil 3: a) Serum alanin aminotransferaz (ALT) ve b) serum aspartat aminotransferaz (AST) hafta son DMN enjeksiyonundan sonra 0, 2 ve 4 de DMN tedavi farelerin seviyeleri. veri repr vardır± SD (- 8 N = 6) vasıtası olarak esented. * P &lt;0.05, normal kontrol grubuyla karşılaştırıldığında. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54208/54208fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> DMN tedavi sıçan karaciğerinin histolojik inceleme hepatositlerin kaybı ile progresif artış ve fibröz septa genişlemesi, kontrol grubundaki sıçanlara göre zamanla olduğunu göstermektedir. Masson diken leke yaygın karaciğer dokusunda kolajen mevduat vurgulamak için kullanılır: bu mavi boyanır. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54208/54208fig4.jpg" /> Şekil 4: Masson trikomu ile lekelenmiş karaciğer kesitlerinin fotomikrograflarının: normal bir kontrol sıçan a) karaciğer bölümü, b) bir sıçan karaciğer bölümü dimethylnitrosamin 1 hafta aldıktan sonraE (DMN); DMN&#39;nin 2 hafta aldıktan sonra bir sıçan c) karaciğer bölümü. DMN 3 hafta aldıktan sonra bir sıçan köprü. D) Karaciğer bölümü portal arada portalı ile en portal alanlarda fibröz genişleme vardır. DMN 4 hafta aldıktan sonra bir sıçan merkez köprüleme. E) Karaciğer bölümüne portal yanı sıra portal belirgin portal portal alanlarda fibröz genişleme unutmayın. nodül oluşumu ile siroz vardır. grubu DMN enjeksiyon 4 hafta sonra fareler ile birlikte kurban kontrol karaciğerdir. 0 fibrozis skoru ilerici artış desen var (a); 2 (b); (E) &#39;de 5/6 (d)&#39; de 3 (c) &#39;4. Tüm fotomikrografikler, 100 um ölçek çubuğu eşdeğer 1 birim uzunluğu ile 40X bir büyütmede alınmış. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54208/54208fig4large.jpg" target="_blank">Lütfen Cı</a>Bu rakamın büyük halini görmek için buraya yalamak.

Watch this Scientific Journal Video about The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat at JoVE.com

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

the-dimethylnitrosamine-induced-liver-fibrosis-model-in-the-rat

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K Görüntüleme.  Temasek Polytechnic. We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

Video: The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading to cirrhosis with hepatocellular dysfunction. Among multiple hepatic insults, alcohol abuse can lead to significant health problems including liver failure and hepatocellular carcinoma. Nonetheless, the identity of endogenous cellular sources that regenerate hepatocytes in response to alcohol has not been properly investigated. Moreover, few studies have effectively modeled hepatocyte regeneration upon alcohol-induced injury. We recently reported on establishing an ethanol (EtOH)-induced fibrotic liver model in zebrafish in which hepatic progenitor cells (HPCs) gave rise to hepatocytes upon near-complete hepatocyte loss in the presence of fibrogenic stimulus. Furthermore, through chemical screens using this model, we identified multiple small molecules that enhance hepatocyte regeneration. Here we describe in detail the procedures to develop an EtOH-induced fibrotic liver model and to perform chemical screens using this model in zebrafish. This protocol will be a critical tool to delineate the molecular and cellular mechanisms of how hepatocyte regenerates in the fibrotic liver. Furthermore, these methods will facilitate potential discovery of novel therapeutic strategies for chronic liver disease in vivo.

Sustained fibrosis with deposition of excessive extracellular matrix proteins leads to cirrhosis. Alcohol abuse is one of the main causes of severe liver disease. We established an ethanol-induced zebrafish fibrotic liver model to study the mechanisms and strategies of promoting hepatocyte regeneration upon alcohol-induced injury.

Zebra balığı bir Etanol kaynaklı Fibrotik Karaciğer Modelinin Geliştirilmesi progenitör hücre-aracılı Hepatosit Rejenerasyon Eğitim

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Gelişim Biyolojisi

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently host immune responses to microbial and environmental agents. Dinitrobenzene sulfonic acid (DNBS)-induced colitis allows one to study the pathogenesis of IBD associated environmental triggers such as stress and diet, the effects of potential therapies, and the mechanisms underlying intestinal inflammation and mucosal injury. In this paper, we investigated the effects of dietary n-3 and n-6 fatty acids on the colonic mucosal inflammatory response to DNBS-induced colitis in rats. All rats were fed identical diets with the exception of different types of fatty acids [safflower oil (SO), canola oil (CO), or fish oil (FO)] for three&#160;weeks prior to exposure to intrarectal DNBS. Control rats given intrarectal ethanol continued gaining weight over the 5 day study, whereas, DNBS-treated rats fed lipid diets all lost weight with FO and CO fed rats demonstrating significant weight loss by 48&#160;hr and rats fed SO by 72&#160;hr. Weight gain resumed after 72&#160;hr post DNBS, and by 5 days post DNBS, the FO group had a higher body weight than SO or CO groups. Colonic sections collected 5&#160;days post DNBS-treatment showed focal ulceration, crypt destruction, goblet cell depletion, and mucosal infiltration of both acute and chronic inflammatory cells that differed in severity among diet groups. The SO fed group showed the most severe damage followed by the CO, and FO fed groups that showed the mildest degree of tissue injury. Similarly, colonic myeloperoxidase (MPO) activity, a marker of neutrophil activity was significantly higher in SO followed by CO fed rats, with FO fed rats having significantly lower MPO activity. These results demonstrate the use of DNBS-induced colitis, as outlined in this protocol, to determine the impact of diet in the pathogenesis of IBD.

DNBS/TNBS induced colitis offers an alternative and inexpensive method to study the pathobiology of inflammatory bowel disease. The protocol discussed in this paper outlines the successful application of DNBS to induce colitis in mice and rats and allows one to thoroughly study host-mediated intestinal responses.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Tıp

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which causes significant deterioration in lung function and subsequent death from respiratory failure.
The pathogenesis of IPF in experimental animal models has been induced by bleomycin administration. In this study, we investigate an IPF-like mouse model induced by a double intratracheal bleomycin instillation. Standard histological assessments used for studying lung fibrosis are invasive terminal procedures. The goal of this work is to monitor lung fibrosis through noninvasive imaging techniques such as Fluorescent Molecular Tomography (FMT) and Micro-CT. These two technologies validated with histology findings could represent a revolutionary functional approach for real time non-invasive monitoring of IPF disease severity and progression. The fusion of different approaches represents a step further for understanding the IPF disease, where the molecular events occurring in a pathological condition can be observed with FMT and the subsequent anatomical changes can be monitored by Micro-CT.

We describe a non-invasive multimodal imaging approach based on Micro-CT and fluorescence molecular tomography for longitudinal assessment of the mouse lung fibrosis model induced by double intratracheal instillation of bleomycin.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of robust, predictive in vitro test systems is essential. Hepatic toxicology is key when considering ENM exposure, as the liver serves a vital role in metabolic homeostasis and detoxification as well as being a major site of ENM accumulation post exposure. Based upon this and the accepted understanding that 2D hepatocyte models do not accurately mimic the complexities of intricate multi-cellular interactions and metabolic activity observed in vivo, there is a greater focus on the development of physiologically relevant 3D liver models tailored for ENM hazard assessment purposes in vitro. In line with the principles of the 3Rs to replace, reduce and refine animal experimentation, a 3D HepG2 cell-line based liver model has been developed, which is a user friendly, cost effective system that can support both extended and repeated ENM exposure regimes (&#8804;14 days). These spheroid models (&#8805;500 &#181;m in diameter) retain their proliferative capacity (i.e., dividing cell models) allowing them to be coupled with the &#8216;gold standard&#8217; micronucleus assay to effectively assess genotoxicity in vitro. Their ability to report on a range of toxicological endpoints (e.g., liver function, (pro-)inflammatory response, cytotoxicity and genotoxicity) has been characterized using several ENMs across both acute (24 h) and long-term (120 h) exposure regimes. This 3D in vitro hepatic model has the capacity to be utilized for evaluating more realistic ENM exposures, thereby providing a future in vitro approach to better support ENM hazard assessment in a routine and easily accessible manner.

This procedure was established to be used for developing advanced 3D hepatic cultures in vitro, which can provide a more physiologically relevant assessment of the genotoxic hazards associated with nanomaterial exposures over both an acute or long-term, repeated dose regimes.

Uzun Süreli Nanomalzeme Maruziyetini Takiben İn vitro Genotoksisite Testi için Gelişmiş 3D Karaciğer Modelleri

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...

Biyomühendislik

An Advanced Murine Model for Nonalcoholic Steatohepatitis in Association with Type 2 Diabetes

Obesity is associated with chronic low-grade inflammation and insulin resistance, contributing to an increasing prevalence of chronic metabolic diseases, such as type 2 diabetes and nonalcoholic steatohepatitis (NASH). Recent research has established that pro-inflammatory immune cells infiltrate obese hypertrophic adipose tissue and liver. Given the emerging importance of immune cells in the context of metabolic homeostasis, there is a critical need to quantify and characterize their modification during the development of type 2 diabetes and NASH. However, animal models that induce pathophysiological features typical of human NASH are sparse.
In this article, we provide a detailed protocol to identify immune cell subsets isolated from liver and adipose tissue in a reliable mouse model of NASH, established by housing high-fat diet (HFD) mice under non-specific pathogen-free (SPF) conditions without a barrier for at least seven weeks. We demonstrate the handling of mice in non-SPF conditions, digestion of the tissues and identification of macrophages, natural killer (NK) cells, dendritic cells, B and T cell subsets by flow cytometry. Representative flow cytometry plots from SPF HFD mice and non-SPF mice are provided. To obtain reliable and interpretable data, the use of antibodies, accurate and precise methods for tissue digestion and proper gating in flow cytometry experiments are critical elements.
The intervention to restore physiological antigen exposure in mice by housing them in non-SPF conditions and unspecific exposure to microbial antigens could provide a relevant tool for investigating the link between immunological alterations, diet-induced obesity and related long term complications.

A simple and reliable diet-induced rodent animal model for nonalcoholic steatohepatitis (NASH) is described, achieved through non-SPF housing of the animals and administration of a specific high-fat diet. We describe identification of hepatic and adipose immune cell subsets to recapitulate human immunological conditions by exposing mice to environmental germs.

Tip 2 diyabet ile Ilişkisi olmayan alkollü steatohepatit için gelişmiş bir Murine modeli

Obesity is associated with chronic low-grade inflammation and insulin resistance, contributing to an increasing prevalence of chronic metabolic diseases, ...

Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has hindered the development of a preventative drug. Primarily, finding a suitable animal model is challenging in understanding the mechanism of Crohn&#39;s-associated intestinal fibrosis pathology. Here, we adopted an effective method where TNBS chemical exposure to mice rectums produces substantially deep ulceration and chronic inflammation, and the mice then chronically develop intestinal fibrosis. Also, we describe a technique where a rapamycin injection shows inhibitory effects on TNBS-mediated fibrosis in the mouse model. To assess the underlying mechanism of fibrosis, we methodically discuss a procedure for purifying Cx3Cr1+ cells from the lamina propria of TNBS-treated and control mice. This detailed protocol will be helpful to researchers who are investigating the mechanism of fibrosis and pave the path to find a better therapeutic invention for Crohn&#39;s-associated intestinal fibrosis.

In this study, we describe a detailed procedure of TNBS-mediated intestinal fibrosis, which exhibits comparable pathophysiology to Crohn&#39;s fibrosis. We also discuss this approach in light of rapamycin facilitated inhibitory effects on intestinal fibrosis.

TNBS Aracılı Intestinal Fibrozis Gelişimi ve Rapamisin Inhibitör Etkilerinin Değerlendirilmesi Üzerine Mekanistik Bakış

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has ...

Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and detoxifying functions of the liver. In most irreversible liver damage cases, orthotropic liver transplant (OLT) remains the only available treatment. To study the therapeutic potential of a treatment for ALF, its prior testing in an animal model of ALF is essential. In the current study, an ALF model in rats was developed by combining 70% partial hepatectomy (PHx) and injections of acetaminophen (APAP) that provides a therapeutic window of 48 h. The median and left lateral lobes of the liver were removed to excise 70% of the liver mass and APAP was given 24 h postsurgically for 2 days. Survival in ALF-induced animals was found to be severely decreased. The development of ALF was confirmed by altered serum levels of the enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP); changes in prothrombin time (PT); and assessment of the international normalized ratio (INR). Study of the gene expression profile by qPCR revealed an increase in expression levels of genes involved in apoptosis, inflammation, and in the progression of liver injury. Diffused degeneration of hepatocytes and infiltration of immune cells was observed by histological evaluation. The reversibility of ALF was confirmed by the restoration of survival and serum levels of ALT, AST, and ALP after intrasplenic transplantation of syngeneic healthy rat hepatocytes. This model presents a reliable alternative to the available ALF animal models to study the pathophysiology of ALF as well as to evaluate the potential of a novel therapy for ALF. The use of two different approaches also makes it possible to study the combined effect of physical and drug-induced liver injury. The reproducibility and feasibility of current procedure is an added benefit of the model.

The acute liver failure animal model developed in the current study presents a feasible alternative for the study of potential therapies. The current model employs the combined effect of physical and drug-induced hepatic injury and provides a suitable time window to study the potential of novel therapies.

%70 Parsiyel Hepatektomi ve Asetaminofen birleştirerek Akut Karaciğer Yetmezliği Bir Sıçan Modeli Nin Üretimi

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Fare Kolin eksikliği, Ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet kronik karaciğer yaralanma modeli

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Biyoloji

Using Nicotine in a Silica-Exposed Mouse Model to Promote Lung Epithelial-Mesenchymal Transition

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role of nicotine, the primary addictive ingredient in cigarettes, in silicosis development is unclear. The mouse model employed in this study was simple and easily controlled, and it effectively simulated the effects of chronic nicotine ingestion and repeated exposure to silica on lung fibrosis through epithelial-mesenchymal transition in human beings. In addition, this model can help in the direct study of the effects of nicotine on silicosis while avoiding the effects of other components in cigarette smoke.
After environmental adaptation, mice were injected subcutaneously with 0.25 mg/kg nicotine solution into the loose skin over the neck every morning and evening at 12 h intervals over 40 days. Additionally, crystalline silica powder (1-5 &#181;m) was suspended in normal saline, diluted to a suspension of 20 mg/mL, and dispersed evenly using an ultrasonic water bath. The isoflurane-anesthetized mice inhaled 50 &#181;L of this silica dust suspension through the nose and were awoken via chest massage. Silica exposure was administrated daily on days 5-19.
The double-exposed mouse model was exposed to nicotine and then silica, which matches the exposure history of workers who are exposed to both harmful factors. In addition, nicotine promoted pulmonary fibrosis through epithelial-mesenchymal transformation (EMT) in mice. This animal model can be used to study the effects of multiple factors on the development of silicosis.

This study describes a mouse model to study the synergistic effect of nicotine on the progression of pulmonary fibrosis in experimental silicosis mice. The dual-exposure mouse model simulates the pathological progression in the lung after simultaneous exposure to nicotine and silica. The methods described are simple and highly reproducible.

Akciğer Epitelyal-Mezenkimal Geçişini Desteklemek için Silikaya Maruz Kalan Bir Fare Modelinde Nikotin Kullanılması

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role ...