Bu eser Ödülü No. W81XWH-13-2-0053 altında, AFIRM II çabayı desteklemek için Kara, Deniz, NIH, Hava Kuvvetleri, VA ve Sağlık İşleri tarafından desteklenmiştir. ABD Ordusu Tıbbi Araştırma Toplama Etkinliği, 820 Chandler Street, Fort Detrick MD 21702-5014 ödüllendirme ve yönetmek edinme bürosu oldu. Görüşler, yorumlar, sonuçlar ve öneriler yazara aittir ve ille de Savunma Bakanlığı tarafından onaylanmış değildir. Yazarlar bu çalışma sırasında mükemmel veteriner destek için Jessica Izzi, DVM, Caroline Garrett, DVM ve Julie Watson, DVM&#39;yi teşekkür etmek istiyorum.

Bütün deneyler Bakım ve Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH) Laboratuvar Hayvanları Kullanım Kılavuzu uyarınca yapılmıştır ve Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (JHUACUC) tarafından onaylanmıştır. Belirli prosedürler onaylı ACUC protokol MO13M108 altında gerçekleştirildi. 1. Donör Operasyonu <ol><li> her cerrahi işlem öncesinde farmakolojik formülasyon için uygun zaman noktasında analjezi yönetmek. 0.1 mg buprenorfin subkutan / kg BW 1 saat önce cilt kesisi ile onaylanan hayvan bakımı ve kullanımı protokol kullanımı başı olarak. </li><li> izofluran ile sakin donör% 4 bir izofluran buharlaştıncıya bağlı bir bölme yoluyla uygulanan; Bir burun konisi ile% 2 sedasyon ve anestezi korumak. prosedürün başlatılması öncesinde anestezi derinliği izlemek için ayak tutam çekilme yansıma gerçekleştirin. </li><li> maskeler, tek kullanımlık izolasyon önlük ve eldiven giyin. </li><li> Cerrahi ar Tıraşea,% 10 Povidon özellikle arka bacak ve kasık ve hazırlık içinde - İyot. </li><li> steril bir alan drape, otoklava aletleri ve yüksek büyütme mikroskobu (40X) kullanın. </li><li> orta uyluk bölgesine proksimale makas kullanılarak kasık deri kesi yapmak ve çevresel fare vücudun geri kalanından arka ekstremite ayırmak için kesi bağlayın. </li><li> Belirlemek ve femoral arter, ven ve sinir teşrih. forseps ve mikro-makas kullanılarak her üç yapıları ayırın. </li><li> Vasküler pedikül disseke edildikten sonra mikro makas kullanarak inguinal ligament seviyesinde gemileri bölün. </li><li> Sonraki, makas kullanılarak donör hayvandan grefti ayırmak için orta uyluk düzeyinde proksimale bireysel ventral (gracilis ve medial uyluk kasları) ve dorsal kas gruplarını 20 bölünmeye devam. </li><li> femur transect ve makas kullanılarak femur şaftının orta kesilir. </li><li> izofluran doz aşımı fol tarafından hayvan Euthanizeservikal dislokasyon ile izin verilmelidir. kalp atışı ve solunum durması onaylayın. </li><li> bir şırınga üzerine monte edilmiş bir 33 G iğne kullanılarak temizleme ile heparinize 2 ml (30 IE) soğuk (4 ° C) tuzlu su ile uzvu yıkayın (Malzeme Tablo). </li><li> sırasıyla, femoral ven ve arter üzerinde bir poliimid manşet yerleştirin. </li><li> içerlek kadar 4 ° C&#39;de petri ve mağaza ıslak pamuk gazlı bez, yerine greft sarın. </li></ol> 2. Alıcı Operasyonu <ol><li> Arka bacak çıkarılması <ol><li> her cerrahi işlem öncesinde farmakolojik formülasyon için uygun zaman noktasında analjezi yönetmek. onaylanmış hayvan bakım ve kullanım protokolü kullanımı Buprenorfin SC 1 saat önce cilt kesisi 0.1 mg / kg BW başı olarak. </li><li> izofluran ile sakin donör% 4 bir izofluran buharlaştıncıya bağlı bir bölme yoluyla uygulanan; Bir burun konisi ile% 2 sedasyon ve anestezi korumak. borç izlemek için ayak tutam çekilme yansıma gerçekleştirinprosedürünün başlamasından önce anestezi H. </li><li> anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için fare gözleri veteriner merhem kullanın. </li><li> Özellikle,% 10 Povidon ile arka uzuv ve kasık ve hazırlık cerrahi alan tıraş - İyot. </li><li> orta uyluk bölgesine proksimale makas kullanılarak kasık deri kesi yapmak ve çevresel fare vücudun geri kalanından arka ekstremite ayırmak için kesi bağlayın. </li><li> forseps ve mikro-makas kullanılarak her üç yapıların belirlenmesi ve femoral arter, ven ve sinir incelemek ve ayırın. </li><li> Vasküler pedikül disseke sonra, inguinal ligament seviyesinde femoral damarlar kelepçe. </li><li> yüzeyel epigastrik arter düzeyinde uzak gemileri kesin. </li><li> Sonraki, yerli arka li ayırmak için proksimal orta uyluk düzeyinde bireysel ventral (gracilis ve medial uyluk kasları) ve dorsal kas gruplarını 20 bölünmeye devammakas kullanılarak alıcı hayvanlardan mb. </li><li> makas kullanarak femur şaft ortasında femur transect. </li><li> Diseksiyon sitenin kanama ve böylece alıcı kan kaybını önlemek için önceden kesilen uyluk kasları dağlamak. </li></ol></li><li> aşılama <ol><li> ılık serum fizyolojik (37 ° C) ile ameliyat alanını sulama ve daha önce 0.3 ml ılık tuzlu enjekte edilerek ve ameliyat sonrası sıvı kaybını en aza indirmek. </li><li> Alıcının ve greft femur kemiği hizalayarak ve bir intramedüller rod olarak 20 G spinal iğne kullanarak bağlayın tarafından yerli arka bacak doğru anatomik pozisyonunu yansıtacak şekilde greft yerleştirin. </li><li> Coapt emilebilir sütür materyali (6-0 polisorb) kullanılarak ventral ve dorsal kas gruplarını. </li><li> olmayan dikiş manşet tekniği kullanılarak femoral damarlar bağlayın; manşetler önce geminin üzerine monte üzerinde ayrıntılı olarak, graf uçları geminin alıcı tarafını çekint. Bir 10-0 Naylon sütür kullanın ve manşet üzerine alıcı gemi düzeltmek için bir çevresel kravat gerçekleştirin. </li><li> Sonraki mandalları. Bu aşamada görsel manşet rotasyon ve gemilerin yanlış dönme ve bükülmesini önlemek için en uygun konumlandırma doğrulayın. </li><li> kas alıcı verici arayüzü ve kemik uçlarında özel bir odaklanma ile elektro koter kullanılarak titiz hemostaz gerçekleştirin. </li><li> emilmeyen Naylon dikişler (6-0 etilon) kullanarak cilt kapatın. </li><li> hayvan bir ısıtma lambası altında kafes içinde kurtarmak için izin vererek normotermik koşulları kurmak. konut tesisine dönmeden önce en az 4 saat süreyle düzenli izleme devam edin. </li><li> 3 gün boyunca 0.1 mg / kg SC 6-8 saat arasında bir dozda buprenorfin ile ameliyat sonrası analjezi sağlar. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Khalifian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facial+transplantation%3A+the+first+9+years%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Facial transplantation: the first 9 years.</a> Lancet. , (2014).</li>
<li>Petruzzo, P., Dubernard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Registry+on+Hand+and+Composite+Tissue+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transpl%22%5BJournal%5D)">The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation.</a> Clin. Transpl. , 247-253 (2011).</li>
<li>Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+and+Upper+Extremity+Transplantation%3A+An+Update+of+Outcomes+in+the+Worldwide+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Hand and Upper Extremity Transplantation: An Update of Outcomes in the Worldwide Experience.</a> Plast. Reconstr. Surg. , (2014).</li>
<li>Levi, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+abdominal+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the abdominal wall.</a> Lancet. 361, 2173-2176 (2003).</li>
<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22N.Engl.J.+Med%22%5BJournal%5D)">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> N.Engl.J. Med. 344, 1676-1679 (2001).</li>
<li>Rose, K. G., Sesterhenn, K., Wustrow, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+allotransplantation+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Tracheal allotransplantation in man.</a> Lancet. 1, 433(1979).</li>
<li>Hofmann, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+vascularized+transplantation+of+human+femoral+diaphyses+and+total+knee+joints--first+clinical+experiences%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Allogeneic vascularized transplantation of human femoral diaphyses and total knee joints--first clinical experiences.</a> Transplant. Proc. 30, 2754-2761 (1998).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preliminary+report+of+penile+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">A preliminary report of penile transplantation.</a> Eur. Urol. 50, 851-853 (2006).</li>
<li>Brannstrom, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. , (2014).</li>
<li>Sarhane, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosing+skin+rejection+in+vascularized+composite+allotransplantation%3A+advances+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Diagnosing skin rejection in vascularized composite allotransplantation: advances and challenges.</a> Clin. Transplant. 28, 277-285 (2014).</li>
<li>Schneeberger, S., Khalifian, S., Brandacher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+and+monitoring+of+rejection+in+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Tech.+Hand+Up.+Extrem.+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression and monitoring of rejection in hand transplantation.</a> Tech. Hand Up. Extrem. Surg. 17, 208-214 (2013).</li>
<li>Lee, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+antigenicity+of+components+of+a+vascularized+limb+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Relative antigenicity of components of a vascularized limb allograft.</a> Plast. Reconstr. Surg. 87, 401-411 (1991).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemiface+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Hemiface allotransplantation in the mouse.</a> Plast. Reconstr. Surg. 129, 867-870 (2012).</li>
<li>Ibrahim, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+heterotopic+swine+hind+limb+transplant+model+for+translational+vascularized+composite+allotransplantation+%28VCA%29+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (VCA) research.</a> J Vis Exp. , (2013).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hind+limb+transplantation%3A+a+new+composite+tissue+allotransplantation+model+using+nonsuture+supermicrosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery.</a> Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141, 682-689 (2007).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+heterotopic+arterialized+liver+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse.</a> J. Surg. Res. 93, 97-100 (2000).</li>
<li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+limb+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse limb transplantation model.</a> Microsurgery. 19, 209-213 (1999).</li>
<li>Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-extremity+transplantation+using+a+cell-based+protocol+to+minimize+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Upper-extremity transplantation using a cell-based protocol to minimize immunosuppression.</a> Ann. Surg. 257, 345-351 (2013).</li>
<li>Azari, K., Brandacher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+composite+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vascularized composite allotransplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 631-632 (2013).</li>
<li>Pomahac, B., Gobble, R. M., Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facial+and+hand+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Facial and hand allotransplantation.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, (2014).</li>
<li>Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+and+limits+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Lessons and limits of mouse models.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, a015495(2013).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neck+as+a+preferred+recipient+site+for+vascularized+composite+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse.</a> Plast. Reconstr. Surg. 133, 133e-141e (2014).</li>
<li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J. Surg. Res. 24, 501-506 (1978).</li>
<li>Leto Barone, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gracilis+myocutaneous+free+flap+in+swine%3A+an+advantageous+preclinical+model+for+vascularized+composite+allograft+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research.</a> Microsurgery. 33, 51-55 (2013).</li>
<li>Mathes, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+canine+model+for+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">A preclinical canine model for composite tissue transplantation.</a> J. Reconstr. Microsurg. 26, 201-207 (2010).</li>
<li>Barth, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+composite+facial+allografts+in+non-human+primates+associated+with+posttransplant+lymphoproliferative+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of composite facial allografts in non-human primates associated with posttransplant lymphoproliferative disorder.</a> Transplantation. 88, 1242-1250 (2009).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 96, 39-50 (2012).</li>
<li>Foster, R. D., Liu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hindlimb+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hindlimb transplantation in the mouse.</a> J. Reconstr. Microsurg. 19, 49(2002).</li>
<li>Tung, T. H., Mohanakumar, T., Mackinnon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Mouse+Model+for+Heterotopic+Limb+and+Composite-Tissue+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Development of a Mouse Model for Heterotopic Limb and Composite-Tissue Transplantation.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 267-274 (2001).</li>
<li>Zhang, F., Shi, D. Y., Kryger, Z., Moon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+limb+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse limb transplantation model.</a> Microsurgery. 19 (5), 209-213 (1999).</li>
<li>Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+acute+rejection+after+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Atypical acute rejection after hand transplantation.</a> Am. J. Transplant. 8, 688-696 (2008).</li>
<li>Mathes, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+mixed+hematopoietic+chimerism+permits+tolerance+of+vascularized+composite+allografts+across+a+full+major+histocompatibility+mismatch+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Int%22%5BJournal%5D)">Stable mixed hematopoietic chimerism permits tolerance of vascularized composite allografts across a full major histocompatibility mismatch in swine.</a> Transpl. Int. 27, 1086-1096 (2014).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+CTLA4Ig+for+induction+of+mixed+chimerism+and+renal+allograft+tolerance+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Use of CTLA4Ig for induction of mixed chimerism and renal allograft tolerance in nonhuman primates.</a> Am. J. Transplant. 14, 2704-2712 (2014).</li>
<li>Sachs, D. H., Kawai, T., Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+through+mixed+chimerism%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance through mixed chimerism.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, a015529(2014).</li>
<li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> N. Engl. J. Med. 358, 353-361 (2008).</li>
<li>Kawai, T., Sachs, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+induction%3A+hematopoietic+chimerism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Tolerance induction: hematopoietic chimerism.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 402-407 (2013).</li>
<li>Kawai, T., Sachs, D. H., Sykes, M., Cosimi, A. .B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> N. Engl. J. Med. 368, 1850-1852 (2013).</li>
<li>Leventhal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimerism+and+tolerance+without+GVHD+or+engraftment+syndrome+in+HLA-mismatched+combined+kidney+and+hematopoietic+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Chimerism and tolerance without GVHD or engraftment syndrome in HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation.</a> Sci. Transl. Med. 4, 124-128 (2012).</li>
<li>Cendales, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Banff+2007+working+classification+of+skin-containing+composite+tissue+allograft+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">The Banff 2007 working classification of skin-containing composite tissue allograft pathology.</a> Am. J. Transplant. 8, 1396-1400 (2008).</li>
</ol>

The authors declare that they have no competing financial interest.

Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon, bu tür yıkıcı doku defektlerinin rekonstrüksiyonu için üst ekstremite ve yüz naklinin olarak, geleneksel rekonstrüktif prosedürlere amendable değil hastalar için geçerli bir tedavi seçeneği olarak ortaya çıkmıştır. Rekonstrüktif mikrocerrahi alanında teknik gelişmeler yanı sıra güçlü bağışıklık baskılayıcı ve solid organ transplantasyonu, bağışıklık düzenleyici tedaviler ile geniş bir deneyim, şimdi bu eşsiz hasta popülasyonunda 3,21 uzun vadeli allogreft sağkalımı sağlar. Ancak, allogreft bakım ve yaşam için gerekli olan uzun süreli bağışıklık önemli yan etkileri hala artırılması değil rekonstrüktif yöntemleri 3,22,23 hayat kurtarıcı bu hayatın geniş bir uygulama sınırlamak. Ayrıca, katı organ nakilleri aksine VCA&#39;ların başarısı, motor fonksiyon hem kas innerve yeniden yanı şekilde allogreft içine alıcı sinirleri zamanında rejenerasyon bağlıdırdokunma ve sıcaklık hissi için duyusal bileşenlerin işlevini yeniden kazanmak için. Immunolojik açıdan bakıldığında, transplantasyon tıbbın her gibi, rekonstrüktif naklinde herkesin ortak hedefi uzun vadeli bakım immünsupresyon 23 gerek kalmadan bir allogreftin kabulü için izin operasyonel hoşgörü bir devlet elde etmektir. Bu bağlamda, bir fare, bir sağlam bağışıklık sisteminin belirli tolerans Alloantijen elde yollarını araştırmak için nakil immünoloji araştırma in vivo model sisteminde ana temsil şekilde gelişmiştir. Ayrıca, fare H2 kompleksi yakından insan MHC kompleksi andırıyor. Böylece, doğuştan ve genotip fare soyları tamamen allojenik gerilme kombinasyonuna genden gelen mismatching Alloantijen çeşitli derecelerde kullanılarak ilgili ve ilişkili olmayan yaşam ve kadavra donör ayarları klinik senaryoları modellemek için izin verir. Transgenik hayvanların ve spesifik nakavt hayvanların elde hazır mevcut ilaveten tümseçici aktivasyonu veya hücre veya protein bileşenlerinin tükenmesi olasılığını sağlayarak rolleri ve bağışıklık kabul ve ret bireysel moleküler yollar ve düzenleyici mekanizmaların etkilerinin akımları incelenmesi. Bu teşhis ve tedavi edici ajanlar (örn., Antikorlar) benzersiz in vitro fare sistemi için geliştirilmiş geniş bir durumu ile paralel ve in vivo olarak 24 çalışmalarıdır. Genel olarak, bu yönleri fare sistemi temel nakli immünoloji araştırmaları için &quot;altın standart&quot; olun. Son zamanlarda Brandacher ark tarafından gözden olarak VCA için açıklanan çeşitli 13,16,18,20,25,26 küçük ve büyük hayvan 14,27-29 modelleri olmasına rağmen. 30 sadece çok az aslında temel mekanik immünolojik araştırmalar 16 için geçerlidir , 24,30. Nedeniyle fare femoral arter ve ven küçük damar çapı, gelişmiş cerrahi ve süper-mi gerektirircrosurgical eğitim ve beceri ortotopik arka uzuv naklinin temel bileşeni olarak başarılı anastomoz uygulamak için. Anatomik yapıların titiz ve dikkatli bir diseksiyon önce yayınlanmış modeller 20,31,32 gibi bu modelde olduğu gibi kritik alakalı iken, manşet tekniği alt milimetre gemilerin 16,25 ve dikiş anastomoz kıyasla daha az dik bir öğrenme eğrisi göstermiştir titiz günlük uygulama ile bir kaç ay eğitim elde edilebilir. bizim deneyime dayalı, eğitimsiz bir microsurgeon yüksek başarı oranları ile bu modeli gerçekleştirmek için yeterli ve güvenilir becerileri kazanmaları için 30 -50 usul girişimleri gerekir. Deneyimli ve eğitimli microsurgeon için 15-30 girişimleri modelinde Burada sunulan prosedür karmaşıklığı daha da bu yaklaşım sınırlı damar uzunluğu ve dolayısıyla diseksiyon gerektirmesi ile yansıtılır azaltılmış bu manşet tabanlı fare arka uzuv nakli ana yeterli olacaktır. Biz t alarak bulunduO inguinal ligament donör damarları ve manşet tekniği geçerli olmak üzere kapsamlı bir ek uzunluğu gerektirir ortak fikri rağmen, yeterli uzunlukta sağlayan yüzeysel epigastrik damarların seviyesinde alıcı gemiler. Örneğin, bir daha önce yayınlanmış bir yaklaşım popliteal damar 32 seviyesinde iliak damarlarının ve alıcı kaplar, dış düzeyinde hasat donör kaplara gerekliliğini açıklar. Ayrıca, manşet tekniği ile, anastomoz performans sütür tekniği ile karşılaştırıldığında daha az zaman gerektirir ve genel azaltılmış çalışma süresi yol açar. Deneyimli ellerde, hem donör ve alıcı prosedürleri 90 dakika ortalama içinde tamamlanabilir. Bu alıcı anestezi süresi başarısı ve perioperatif hayatta kalmak için önemli bir belirleyici olduğunu genişletilmiş olan daha önce bildirilen yöntemlere kıyasla önemli bir gelişmedir; İki cerrahın gerekliliği bir önkoşul 31-33 yaklaşım yapma.Ayrıca, anastomoz ayrıca katkıda kanama hiçbir minimal ölçüde kan kaybı azalır ve bu modelde 33 başarı için başka belirleyici olarak daha önce açıklandığı gibi, böylece alıcılar sıvı resüsitasyon ihtiyacı azaltır. Son olarak, manşet tekniği 11-0 mikro-dikiş materyali yüksek maliyetleri ile karşılaştırıldığında önemli bir maliyet avantajı ile bir yöntem temsil eder. Böylece, sigara dikiş manşet tekniği yatan protokolün en kritik adımı temsil etmektedir. Tung tarafından şık bir çalışmada, et al., Çeşitli miyokard ve vaskülarize kasık deri flebi dahil osteomyocutaneous flep açıklanan fare femur damar pedikül 32 kapalı tabanlı edilmiştir. Burada sunulan yöntem, tüm fare arka bacak nakli odaklanmaktadır ederken, sunulan ilkeler kolayca tercüme ve diğer çeşitli anatomik flep tasarımlar kullanılabilir. Kayda değer bir gerçektir önceki yazarlar automutilation rapor ederken buya da bu bizim deneyim gözlenmemiştir ameliyat sonrası sağkalım 31,32 sırasında önemli bir komplikasyon olarak greft otofaji. Ayrıca, hızlı iyileşme ve besleme ve damat hayvanın yeteneği sınırlı bozulma nakledilen bacak ortotopik içerlek sadece asgari alıcı morbidite uğratan altını çiziyor. Bu videonun yayında açıklanan model ayrıca daha önce yayınlanmış tekniklere göre fare ayarına farklı avantajlar getirmektedir. Grubumuz 16 tarafından, daha önce rapor edildiği gibi, her şeyden önce, manşon tekniğinin arka bacak allograft ortotopik transplantasyon için izin veren bir lümen çapına 1&#39;den küçük milimetre olan damarlarda kullanılabilir. Bu yaklaşım, hem immünolojik hem de VCA 16,25 ilgili sinir rejenerasyonu fonksiyonel çalışmalarda Birleştirilen Bu model kullanılarak için bir temel sağlar. Sinir rejenerasyonu f önem taşıyorrekonstrüktif transplantasyon ield, bu başarı öncelikle fonksiyonel ve estetik kusurların restorasyonu ile belirlenir dışı hayat kurtarıcı prosedürleri gibi. Arka bacak kaynaklanan bir osteomyocutaneous flep heterotopik ek cerrah 15 mevcut ek bir modeldir. Bununla birlikte, bu yaklaşımda, çiviler ve ayak arasında tüysüz deri gibi potansiyel ilgi yapıları, cerrahi olarak çıkarılması, bir anatomik değiştirilmemiş arka bacak allograft ortotopik transplantasyon ile karşılaştırıldığında bu yöntemin çok yönlülüğünü sınırlar. Bu yapılar elde allogreft 34 mekanik stres vermekten hastalarda, tipik olmayan reddedilmesi süreçlerinin hedef olarak tarif edilmiştir gibi bu rekonstrüktif nakli özellikle ilgi çekicidir. vaskülarize kemik canlı kemik iliği içeren ve bir Constantl olduğu gibi vaskülarize kompozit doku allogreft doğasında benzersiz kemik bileşeni,y bileşenleri ve donör bağışıklık sisteminin öncüleri kaynağını yenilemek. Bu dikkatli bir konakçı hastalığı (GVHD) için olası bir kaynak olarak kabul edilmiştir, ancak bu, hem hayvan modellerinde 35,36 hem de insanlarda 37 gözlenmemiştir. 36 öncesi ve klinik çalışmalarda 38-40 gösterildiği gibi aksine çok aslında, donör kemik iliği transplantasyonu ile organ transplantasyonu kombinasyonu veya seçilen kemik iliği kaynaklı hücre ürünlerinin transfüzyon aslında immünsüpresyonun miktarı 21 ihtiyaç konusunda avantajlı etkiler göstermektedir ; Bazı protokoller bile ilaç tabanlı immünosupresyon 41 için gerek kalmadan operasyon toleransı göstermiştir. Alıcı kombinasyonları (Şekil 1) yanı sıra gösterildiği gibi greft accepta bir iyi karakterize desenleri - Bu yayında gösterilen modeli ve metodoloji% 100 uzun süreli hayvan sinjenik donör hayatta kalma vermiştirallojenik gerilme kombinasyonları nce ve ret Şekil 2 ve 3&#39;te belirtilen. Ayrıca, VCA içinde ret görünür bir birincil hedef olarak cilt, insan VCA için olanlar ile ilişkilendirilmesi ret 4 farklı klinik senaryolar çoğaltılabilir modelini izler tarafından belirtildiği gibi Banff 2007 çalışma sınıflandırma cilt içeren, VCA 42 bu model özellikle çevrilebilir adrestir. Böylece, her şeyden önce rekonstrüktif transplantasyon için bu son derece güvenilir fare modeli, klinik VCA translati- etkisi ile tanısal ve girişimsel çalışmalar için imkanlar açılır genetik olarak tanımlanmış kendilenmiş ve transgenik fare suşlarının çok yönlü bir immünolojik model sistem kullanılabilirliğini tanıtır. açıklanan tekniği mastering başlamadan önce temel mikrocerrahi becerileri ihtiyacı bu modele bir sınırlama olarak kabul edilebilir, ancak herhangi bir fare mikrocerrahi modeli aynı ana engeldir. Pers, bu video protokolü esas vaskülarize kompozit alotransplantasyon için in vivo model bir murin mikrovasküler anastomoz için alternatif bir yaklaşım görmüş microsurgeon sağlamak için tasarlanmıştır. Model ayrıca sağlam bir vaskülarize kemik iliği bileşeninin nakli, hem de sinir rejenerasyonu araştırma fonksiyonel modelinin kullanılmasına olanak sağlar. Sonuç olarak, VCA herhangi bir yönü ile ilgili temel mekanik kapı yanı sıra translasyonel araştırma açar olmayan bir dikiş manşet tekniği kullanılarak ortotopik arka uzuv nakli için bir roman, çok yönlü ve güvenilir fare modeli kurdu.

The late nineties heralded the pioneering days of reconstructive transplantation with the first successful hand transplant performed in France in 1998. Since then, the use of VCAs for reconstruction of devastating tissue defects has been successfully employed in a wide spectrum of patients. To date, the world counts 76 recipients of 112 upper extremities as well as 31 faces 1-3. In addition, several other types of VCAs such as abdominal wall 4, larynx 5, trachea 6, vascularized joints 7, and even penis 8 have been performed. Furthermore, the live birth of a baby was recently reported after uterus transplantation 9. This growing world experience is indicative for how reconstructive transplantation has become a valid therapeutic option for patients suffering of significant functional tissue defects not amendable to conventional reconstructive and restorative surgery and treatment. 
While the idea of replacing "like with like" sparked clinical enthusiasm, initial skepticism still prevails with regards to side effects of conventional high-dose immunosuppression required to maintain allografts and their function 10,11. However, as shown by seminal work of Lee et al., these composite grafts are less likely to reject than its individual components, and furthermore, some of the tissue components such as the vascularized bone compartment have fueled optimism as they might exert unique immunological effects onto the balance of immune acceptance and rejection 12. 
Our group pioneered several microsurgical animal models for solid organ transplantation, as well as vascularized composite allotransplantation 13-19. Here we describe a novel surgical procedure using a non-suture cuff technique to perform super micro-vascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. This transplant model provides a useful tool for investigating immune acceptance and rejection mechanisms, as well as the role of individual tissue components, such as the vascularized bone marrow compartment, towards tolerance induction in the immunologically versatile setting of the mouse species. Additionally, the orthotopic placement of the limb opens the possibilities for nerve regeneration and functional outcome studies, which are critically important to the setting of VCA.

<table><tbody><tr><td>Suture, 6-0 Nylon</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 6-0 Polysorb</td><td>MWI</td><td>72667</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 10-0 Nylon</td><td>Aero Surgical</td><td>TK-107038</td><td></td></tr><tr><td>Polyimide Tubing, Size 25</td><td>Vention Medical</td><td>141-0023</td><td></td></tr><tr><td>Polyimide Tubing, Size 27</td><td>Vention Medical</td><td>141-0015</td><td></td></tr><tr><td>Microvascular Clamps (Single)</td><td>Synovis</td><td>00396</td><td></td></tr><tr><td>Microvascular Clamps (Double)</td><td>Synovis</td><td>00414</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Scissors</td><td>Synovis</td><td>SAS-18</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Forceps</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Dilators</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8d.1</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Needledriver</td><td>Synovis</td><td>C-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Clamp Applicator</td><td>Synovis</td><td>CAF-4</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Flushing Needle</td><td>Hamilton</td><td></td><td>10MM, 30&amp;deg;, 33G</td></tr><tr><td>Lactated Ringers Solution</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9968051</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td>DEA Number required; Obtained from hosptial pharmacy.</td></tr><tr><td>Enrofloxacin; Baytril</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td></td><td></td><td>Obtained from hosptial pharmacy</td></tr></tbody></table>

orthotopic hind limb transplantation in the mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

Olmayan bir ameliyat dikiş ipliği manşon tekniğiyle bir fare modelinde vaskülarize kompozit allotransplantasyon ve ototransplantasyon gerçekleştirme Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, çok iyi ve uzun süreli greft ve hayvan yaşam elde sağlar. Ayrıca, vaskülarize kompozit kademeli allogreft reddinin tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için güvenilir bir yöntem temsil allotransplantasyon Şekil 2&#39;de gösterilen görüntü ile belirtildiği gibi. reddi daha bu fare modelinde allograft reddinin tekrarlanabilir dinamiklerini (Şekil 3) altını uygulanan hayvanlardan elde edilen dokuların H &amp; E histolojisi. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53483/53483fig1.jpg" /> Bir Fully H2-eşleşmeyen Fare Gerginlik Kombinasyon Şekil 1. Allogreft Survival [C57BL6 (H2K b) içine Balb / c (H2K d)]. Tüm Singeneik naklinde iken9 gün - karıncaların (n = 10), uzun süreli, muamele edilmemiş allograft (n = 10) akut içerisinde itiraz 8 arasında ortalama kabul edilmiştir. Banff kriterlerine göre cilt ret 3. sınıf Bu çalışmada tam ret kabul edildi. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53483/53483fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53483/53483fig2.jpg" /> Şekil 2. Klinik Reddetme Özellikleri ve Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli bir tam H2-eşleşmeyen [C57BL6 (H2K b) içine Balb / c (H2K d)] Dinamikleri. (A) Klinik Sınıf 0, (B) Klinik 1. Sınıf ( C) costimul ile tedavi edilen klinik sınıf 2, (D), klinik sınıf 3, ve (E) klinik sınıf 4 reddi, (F), uzun vadeli hayatta allogreft (POD 100)tirme blokajı (antiCD40 mAb + CTLA4lg) esaslı rejim. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53483/53483fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53483/53483fig3.jpg" /> Şekil 3. POD 8 yanı sıra on Deri ve kas bir singenik nakli (A) ve allojenik Nakli (B) H &amp; E Boyama POD 8 bir singenik nakli (C) ve allojenik Nakli içinde Kapkaççı Deri ve Kası H &amp; E Boyama (D ) (Ölçek çubuğu:. 0.1 mikron) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53483/53483fig3large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse at JoVE.com

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar.

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

orthotopic-hind-limb-transplantation-in-the-mouse

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.7K Görüntüleme.  Johns Hopkins University School of Medicine.  Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar. 

Video: Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

Sıçanlarda Ortotopik Hind-Ekstremite Nakli

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Biyoloji

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Tıp

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities after a complex tissue defect. Face and hand transplantations have changed disfigured patients' lives, giving them a new aesthetic and functional social organ. Despite promising outcomes, VCA is still underperformed due to life-long immunosuppression comorbidities and infectious complications. The rat is an ideal animal model for in vivo studies investigating immunological pathways and graft rejection mechanisms. Rats are also widely used in novel composite tissue graft preservation techniques, including perfusion and cryopreservation studies. Models used for VCA in rats must be reproducible, reliable, and efficient with low postoperative morbidity and mortality. Heterotopic limb transplantation procedures fulfill these criteria and are easier to perform than orthotopic limb transplants. Mastering rodent microsurgical models requires solid experience in microsurgery and animal care. Herein is reported a reliable and reproducible model of partial heterotopic osteomyocutaneous flap transplantation in rats, the postoperative outcomes, and the means of prevention of potential complications.

This paper presents a partial heterotopic osteomyocutaneous flap transplantation protocol in rats and its potential outcomes in the mid-term follow-up.

Sıçanlarda Kısmi Heterotopik Hindlimb Transplantasyon Modeli

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ transplantation. While the heterotopic vascularized murine cardiac transplantation model was initially utilized in studies of graft rejection using combinations of mismatched inbred mouse strains, access to genetically modified strains and therapeutic modalities can provide powerful new preclinical insights. Fundamentally, the surgical methodology for this technique has not changed since its development, especially with respect to important factors such as aseptic technique, anesthesia, and analgesia, which make material impacts on postsurgical morbidity and mortality. Additionally, improvements in perioperative management are expected to provide improvements in both animal welfare and experimental outcomes. This paper reports upon a protocol developed in collaboration with a subject matter expert in veterinary anesthesia and describes the surgical technique with an emphasis on perioperative management. Additionally, we discuss the implications of these refinements and provide details on troubleshooting critical surgical steps for this procedure.

The present paper describes a modified technique for heterotopic vascularized cardiac transplantation with updated aseptic technique, analgesia, and anesthesia.

Çağdaş Aseptik Teknik, Anestezi ve Analjezi Standartlarına Uygun Modifiye Murin Heterotopik Kalp Nakli Protokolü

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current limitations in immunosuppression and functional neuromotor recovery. Many animal models have been developed for studying unique features of VCA, but here we present a robust reproducible model of orthotopic hind limb transplant in rats designed to simultaneously investigate both aspects of current VCA limitation: immunosuppression strategies and functional neuromotor recovery. At the core of the model rests a commitment to meticulous, time-tested microsurgical techniques such as hand sewn vascular anastomoses and hand sewn neural coaptation of the femoral nerve and the sciatic nerve. This approach yields durable limb reconstructions that allow for longer lived animals capable of rehabilitation, resumption of daily activities, and functional testing. With short-term treatment of conventional immunosuppressive agents, allotransplanted animals survived up to 70 days post-transplant, and isotransplanted animals provide long lived controls beyond 200 days post-operatively. Evidence of neurologic functional recovery is present by 30 days post operatively. This model not only provides a useful platform for interrogating immunological questions unique to VCA and nerve regeneration, but also allows for in vivo testing of new therapeutic strategies specifically tailored for VCA.

This protocol presents a robust, reproducible model of vascularized composite allotransplant (VCA) geared toward simultaneous study of immunology and functional recovery. The time invested in meticulous technique in a right mid-thigh hind limb orthotopic transplant with hand sewn vascular anastomoses and neural coaptation yields the ability to study functional recovery.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the established technique for a modified blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal heart transplantation model is presented. This method uses the intrathoracic inferior vena cava (IIVC) instead of the pulmonary artery of the donor heart for the anastomosis to the inferior vena cava of the recipient. It is facilitating and improving success rates for abdominal heart transplantation in mice.

A novel technique for blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal mouse heart transplantation model is demonstrated.

Abdominal Fare Kalp Nakli Modelinde Kan Devresi Rekonstrüksiyonu

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...