Bu çalışma Sağlık Araştırma ve Kalp ve M.Ö. &amp; Yukon İnme Vakfı (KİK) Kanada Enstitüleri hibe ile desteklenmiştir.

Bu çalışmada tüm protokoller gözden ve Simon Fraser Üniversitesi hayvan bakım etik kurul tarafından onaylandı. Kullanım Balb / cYJ (H2 d) donör fare ve C57BL / 6 (H2 b) alıcı fareler allojenik tepkilerini incelemek. Fareler 8-12 haftalık yaş arası deneyler için kullanılır. Kadın ya da erkek ya fareler kullanın. Singenik kontroller C57Bl / 6 alıcıya içine C57Bl / 6 donörden aort kesimleri oluşmaktadır. 1. Donör ve Alıcı Hazırlık Not: donör ve alıcı Hem anestezi ve greft iskemi en aza indirmek için ameliyattan önce hazırlanır. Enjekte anestezikler inhale anestezik teslimat için gerekli ekipman ile hayvanın tıkanıklığı önlemek için protokolde kullanılır. Bununla birlikte, eğer arzu edilirse, inhalasyon anestezi uygun bir alternatiftir. Anestezik ilk enjeksiyon, tüm prosedür tamamlamak için yaklaşık 90 dakika sürer. Greft İskemik zaman daha az than 30 dakika. <ol><li> Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Fare 10 ila 15 dakika içinde sedasyon edilecektir. Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Gerektiği gibi hayvan çekme refleksi sergilemek değil dek, anestezik kokteyl orijinal dozunun 1/3 yönetme. Her kokteyl uygulanır yakından sonra solunum hızını izleyin. Ameliyat sırasında, forseps bir çift ile karın ön duvarı sıkıştırarak anestezi seviye her 15 dakika değerlendirmek. fareler derinden 60 ila 90 dakika süreyle anestezi kalmalıdır. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için bir göz merhemi ile farenin gözleri yağlayın. </li><li> Pubis ortalarından toraks karın ventral bölgeye mümkün olduğunca cilde yakın saçları tıraş. Herhangi bir cilt nick özellikle dikkatli olun. Bu i absorbe edilebilir çünkü tüy dökücü krem ​​kullanmayınCildi nto ve inflamatuar olabilir. </li><li> Isıtma tablo veya ped üzerinde bir havlu üzerine yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. </li><li> % 2 kloroheksidinler ile bir ön fırçalama ile cerrahi siteyi temizleyin. Cerrahi alan en üst düzeye çıkarmak için geniş bir çalışma alanı hazırlayın. Cerrahi bölge merkezinde ovma başlatın ve bir doğrusal ya da dairesel bir şekilde dışarıya hareket eder. Gazlı atınız. Bu işlemi en az 5 kez daha tekrarlayın. Aynı bölgede bir alkol hazırlık pad uygulayın. Alkol kuruduktan sonra, steril gazlı bez ile Betadinede çözüm ve örtü ile temiz alanı hazırlamak. </li></ol> 2. Uçtan uca anastomoz Prosedürü <ol><li> Donör Operasyonu <ol><li> Işlem boyunca aseptik teknik koruyun. Kullanmadan önce% 0.5 hızlandırılmış hidrojen peroksit solüsyonu ile tüm tezgah ve cerrahi masa yüzeylerini temizleyin. Sarın ve kullanmak için önce tüm cerrahi aletler, Gauzes, perdeler ve önlük otoklav. Bir buhar ile araçların sterilite doğrulamaHer pakette yer sterilizatör gösterge şeridi. Steril cerrahi eldiven kullanılır ve ameliyatlar arasında atılmaktadır. Birden ameliyatlar için sıcak cam boncuk sterilizatör ile kullanımlar arasındaki cerrahi aletler sterilize edin. </li><li> 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış temiz, ince pleksiglas gemide yatar pozisyonda donör fare yerleştirin. </li><li> Bölüm 1.1 belirtildiği gibi yeterli cerrahi anestezi olduktan sonra, cerrahi ile devam edin. </li><li> Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak. </li><li> Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak. </li><li> Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve inferior vena kava (IVC) bulun. Moisperiyodik tuzlu su çözeltisi ile on maruz dokular. </li><li> Tıbbi No. 5 forseps kullanarak, çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Aorta yakın küçük dalları Arter 10-0 polyamid monofilament sütür kullanın. </li><li> Donörün aort IVC ayrılır sonra, nemli bir gazlı bez ile maruz kalan boşluğu kapsamaktadır, tuzlu su ile kap doyurulması ve steril bir alanı üzerine bir kenara donör ayarlayın. Donör (solunum ve kardiyovasküler fonksiyon ve anestezi derinliği) her 15 dakikada durumunu kontrol edin. (Adımlar 2.2.7 2.2.1) aşağıda tarif edildiği gibi aort izole, alıcı işletim başlayın. </li><li> Alıcı aort IVC ayrılmış ve bir kenara edildikten sonra, mikroskop altında donör dönün. Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) donör aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm. </li><li> Vannas-Tübingen Microscissors kullanılarak,abdominal aorta küçük bir greft parçası (uzunluk olarak 3-4 mm) transeksiyonu. </li><li> Bir şırıngaya bağlanmış bir 25 G 5/8 iğne kullanarak, Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Kap ile temas etmez iğne ucu sağlanması. </li><li> Heparinli yerleştirin aort (100 U / ml) tuz buz üzerinde çözüm ve bir kenara koyun. Hala derin anestezi altında, mikrovasküler kelepçeler serbest iken. Kansız bırakılarak donör Euthanize. </li><li> Eksizyonun 30 dakika içinde donör gemi implante. Bu aort daha büyük bir uzunluğa kesilmesiyle birden çok alıcı için bir donör kap kullanmak mümkün olsa da, en az 30 dakika iskemi zaman tutun. </li></ol></li><li> Alıcı Operasyonu <ol><li> Donör operasyonda olduğu gibi, operasyon boyunca aseptik teknik koruyun. </li><li> 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış ince bir pleksiglas gemide yatar pozisyonda alıcı fare yerleştirin. </li><li> AfHayvan çekilme refleksi sergilemek olmadığında yeterli anestezi sağlanması ter, cerrahi ile devam edin. </li><li> Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak. </li><li> Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak. </li><li> Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve IVC bulun. Tuzlu su çözeltisi ile periyodik maruz kalan dokuların nemlendirin. </li><li> Çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Gerekirse, aort yakın küçük dalları Arter 10-0 poliamid monofilament sütür kullanın. </li><li> Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm. </li><li> Vannas-Tübingen microscissors kullanarak, tek bir yatay aortatomi yapmak ve donör aort greft karşılamak için abdominal aorta küçük bir kesimini (en fazla 0,5 mm) rezeke. </li><li> Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Donör aort greft alıcının transeksiyon aort uçları bağlamak için uygun uzunlukta olmalıdır. </li><li> Ortotopik pozisyonda donör aort greft yerleştirin ve alıcının bununla ilgili greft anatomik oryantasyon uyan, alıcının sonuna kadar vericinin greft ucunu anastomoz. </li><li> Yavaşça kabın tunika eksterna kavramak ve hafif tıbbi No.5 forseps kullanılarak da tersine çevrilmesi. Forseps kullanarak, alıcının rezeke gemiye donör aort greft güvence altına almak için damar duvarının tam kalınlığı boyunca 10-0 poliamid monofilament sütür bağlı iğne sürücü. Damar açma kapama nedeniyle t kapalı olmadığından emin olmak için özenGeminin arka duvarının o yanlışlıkla dikiş. </li><li> Sürekli dikişler için, greft, üst ve alt uçları, hem de 9:00 kalmak sütür koyun. 03:00 den greft üst ucunda başlayarak, 2 koşu dikişlerle rezeke uçları anastomoz ve fiyatının dikişine dikiş sabitleyin. <ol><li> Üzerinde greft çevirin ve menşe fiyatının dikiş toplantı geminin parçası dorsal çalışan dikiş devam ediyor. Gemide fazla baskı uygulamadan sabitleyin. Alt anastomoz için dikilmesi tekrarlayın. Not: kesintiye dikişler damar kalmak ameliyat dikiş iplikleri arasında üç ayrı dikişlerle anastomoz olduğu dışında sürekli bir dikiş ile aynı şekilde başlar. Anastomoz süresi genellikle 20 dakikadır. </li></ol></li><li> Anastomoz tamamlandıktan sonra, retrograd kan akış ve anastomoz sitelerin sızıntı kontrol etmek için izin uzak mikrovasküler kelepçe bırakın. Bir kaçak, immediatel varsay kusurlu siteyi kapatmak için bir dikiş yerleştirin. Sitelerde hiçbir kanama yoksa, o zaman yakın kelepçe bırakın. </li><li> Nakli inceleyin ve greft kan tıkanıklığı ve proksimal ve alıcının geminin distal kısmı olup olmadığını kontrol edin. Vericinin ve alıcının hem kap içinde Dinç darbe desen kan serbestçe akan olduğunu birincil göstergesidir. Forseps çifti kullanarak, yavaşça kalmak sütür bir ucunu kavramak ve biraz geminin arka duvarını incelemek için gemi ters çevrilecek. Not: anastomoz sitelerinin her iki ucunda damar duvarının bir kırışma olmalıdır. Kelepçeler çıkarıldıktan sonra fakir kan akımı tromboz bir işaretidir. </li><li> Pamuk uçlu aplikatörler kullanarak, karın boşluğuna bağırsakları dönün. </li><li> Castroviejo iğne tutucu ve Graefe forseps ile sürekli dikiş kullanarak 5-0 polipropilen sütür ile karın duvarı kapatın. Aynı cilt katmanı kapatınsubkütiküler kapatma kullanarak dikişler. </li><li> Transplant tamamlanmasından hemen Torbugesic (1 mg / kg) im uygulayın. </li><li> Amacıyla, hemen, atipamezol (1 mg / kg), ketoprofen (5 mg / kg) vermek ve Laktatlı Ringer çözeltisi deri altına ısıtılmıştır. </li><li> Ameliyattan hemen sonra, bir su battaniye gecede (12 saat) altında ısıtılmış bir kafes fareler yerleştirin. Anestetik-iyileşme döneminde, temiz ve kuru bir engelsiz alanda yalnız hayvanları yerleştirin. Çizgi temiz bir kağıt havlu ile (otoklav) kafes ve yaklaşık 20 ° C ile 22 su battaniye sıcaklığını ayarlamak. Kafes katta kuru ve ıslak tanecikleri ad libitum sağlayın. Not: Ameliyat sonrası bakımın önemli bir bileşeni anestezi ve cerrahi kurtarma sırasında, gerektiği gibi, hayvan ve uygun müdahale gözlemdir. izlenmesi gerekli yoğunluğu hayvanla değişecektir ve eş olarak derhal anestezik iyileşme döneminde daha olabilirDaha sonra ameliyat sonrası iyileşme için mpared. </li><li> Sürekli tamamen kurtarmak kadar izlenen geçirmiş anestezi sahip hayvanların izlemek. Hayvan yardımsız sternal yatma korumak gerekir ve gözetimsiz bırakılmamalıdır önce bu sakin ve ağrı serbest görünmesi gerekir. </li><li> Her iki deri altından, üç günlük bir süre için buprenorfın (0.1 mg / kg BID) ve ketoprofen (5 mg / kg SID) verin. </li><li> Üç gün en az anestezi kurtarma sırasında kardiyovasküler ve solunum fonksiyon, vücut ısısı ve postoperatif ağrı veya rahatsızlık izleyin. Ek bakımı gibi dehidrasyon ve elektrolit kaybı en aza indirmek için analjezikler ve diğer ilaçlarla ve parenteral sıvı idaresi olarak, gerekli olabilir. </li><li> Arka bacaklarda motor fonksiyonunu gözlemleyerek nakli ameliyatı başarı değerlendirin. Nakli tam bir başarı hayvanlardaki kurtarma üzerine derhal olmalı arka bacak ve kuyruk, engelsiz kan akışını içerirEl ve ikinci gününde arka bacaklarda hiçbir felç ile tam iyileşme </li></ol></li></ol> 3. Doku Toplama Not: Önceden belirlenmiş bitiş noktaları istenen analizin tipi ve antijen uyumsuzluğu doğasına bağlı olarak 3-60 gün arasında değişir. Genellikle, intimal kalınlaşma tam MHC uyumsuz fare suşları arasında naklinden sonra günde 30 sağlamdır. <ol><li> Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Hayvan çekilme refleksi sergilemek vermediğinde cerrahi ile devam edin. </li><li> Su ve% 70 alkol ile biten cerrahi siteyi temizleyin. </li><li> Emici ped ile kaplı bir tepsi üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. </li><li> Büyük bir orta hat boyuna kesi ile karın boşluğuna açın. Boşluğu ortaya çıkarmak için bir öz-istinat retraktör yerleştirin, IVC birabdominal aorta d. </li><li> Yavaşça tıbbi No. 5 forseps bir çift kullanarak komşu IVC nakledilen donör aort segmenti ayırın. Nakledilen geminin adventisya şerit değil, özellikle dikkatli olun. </li><li> Tüm yol torakal girişine torakal her iki yanında kaburga ile keserek göğüs boşluğu Açığa. Perikard ortaya çıkarmak ve hemostat bir çift göğüs kafesi sabitlemek için superiorda göğüs ön duvarı Reflect. </li><li> Kalp ortaya çıktığında, 25 G 5/8 sol ventrikül içine (bir şınngaya bağlanmış) iğne ve heparinize 0.1 ml (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile aynı hizada yerleştirin. </li><li> Makas kullanarak, kan, heparinize tuzlu ve fiksatif perfüzyon sırasında vücudu terk etmesi için sağ atrium kaldırın. % 4 paraformaldehid 5 ml veya sıvı çalışır berrak kadar hayvan serpmek. Ötenazi sağlamak için kalbin çıkarın. </li><li> Vergi damar segmentini nakledilen ve% 4 para sokmakBir saat daha fazlası için formaldehid. Nakledilen Ekim gemiyi (optimum kesim sıcaklık) matrisi ve flaş dondurma ayarlayın. Bölüm 8 um kalınlığında ayarlanmış bir kriyostat altında gemi. Hematoksilen Eozin ve ve / veya Verhoeff-van Gieson (van Gieson) elastik boyası ile Leke bölümleri. </li></ol> Greft 4. Morfolojik Analizi Not: TA intimal kalınlaşma 13 ile karakterizedir. Bu modelde, intimal kalınlaşma ve lümen boyutunda bir azalma elde edilen bağışıklık aracılı vasküler yaralanma şiddetine yansıtıcıdır. Syngraft kontrol allojenik bağışıklık tepkilerinin yokluğunda damarların temel özelliklerini belirlemek için kullanılır. Bu kontroller, aynı zamanda, cerrahi prosedürün bir sonucu olarak ortaya çıkar arteriyal hasar değerlendirme izin verir. Syngrafts hiçbir intimal kalınlaşma olmalıdır. <ol><li> Endotel hücre içinde alanı ölçmek, intimal kalınlaşma ve lümen tıkanıklığı incelemek içintabaka, internal elastik lamina (IEL) ve bir görüntü analiz yazılımı ile elastik van Gieson lekeli arter segmentlerinde harici elastik lamina (EEL). Aşağıdaki parametreler TA yansıtıcı arter değişiklikleri belirlemek için kullanılabilir. <ol><li> Mutlak intimal alanını ölçün: internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakasının içinde bölgede. Bu ta işaretidir intimal genişleme, mutlak bir ölçüm sağlar. </li><li> Internal elastik lamina içinde alan - alan dış elastik lamina içinde: Mutlak medial alan ölçün. Bu arada bir damar duvarının bu bölgeye immün aracılı değişikliklerin bir sonucu olarak ortaya çıkabilir, medial veya bozunma büyüme mutlak ölçüm sağlar. </li><li> Dış elastik lamina içinde alan olarak toplam damar alanını ölçün. Bu immünolojik hasar sonucunda genişleme veya daralma arter içeren damar yeniden bir ölçüm sağlar. </li><li> Tedbir(internal elastik lamina içinde alan - endotel hücre tabakası içinde bölge) / (dış elastik lamina içinde alan - internal elastik lamina içinde bölge): intima / Medya. Bu intimal genleşme göreceli bir ölçümünü sunar ve damar boyutunda farklılıklar için normalleştirir. </li><li> % Luminal daralması ölçün: [(internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakası içinde alan) internal elastik lamina ile / alan)] * 100. Bu intimal genişlemesi ve damar duvarının yeniden (içe veya dışa doğru) bir kombinasyonu kaynaklanan lümen oklüzyon ölçüde, bir ölçü sağlar. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+coronary+disease:+the+lesions+and+the+patients.">Graft coronary disease: the lesions and the patients.</a> Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).</li><li>Foegh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection--graft+arteriosclerosis.">Chronic rejection--graft arteriosclerosis.</a> Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circulation research. 100, 622-632 (2007).</li><li>Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spectrum+of+coronary+artery+pathologic+findings+in+human+cardiac+allografts.">The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts.</a> The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).</li><li>Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+coronary+vascular+disease+in+the+heart+transplant+patient:+coronary+arteriographic+findings.">Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings.</a> Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).</li><li>Mennander, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+in+rat+aortic+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis.">Chronic rejection in rat aortic allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb. 11, 671-680 (1991).</li><li>Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granzymes+and+perforin+in+solid+organ+transplant+rejection.">Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection.</a> Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).</li><li>Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+cells+form+the+intimal+proliferative+lesion+in+the+rat+aortic+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis.</a> Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Yu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+interferon-gamma-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Circ Res. 109, 418-427 (2011).</li><li>Miller, C., DeWitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+humoral+responses+to+major+and+minor+histocompatibility+antigens.">Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens.</a> Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).</li><li>Tsutsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumen+loss+in+transplant+coronary+artery+disease+is+a+biphasic+process+involving+early+intimal+thickening+and+late+constrictive+remodeling:+results+from+a+5-year+serial+intravascular+ultrasound+study.">Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 104, 653-657 (2001).</li><li>Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bim+regulates+allogeneic+immune+responses+and+transplant+arteriosclerosis+through+effects+on+T+cell+activation+and+death.">Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).</li><li>Ho, M. K., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution,+structural+characterization,+and+biosynthesis+of+Mac-3,+a+macrophage+surface+glycoprotein+exhibiting+molecular+weight+heterogeneity.">Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity.</a> J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).</li><li>Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+against+macrophages+that+overlap+in+specificity+with+fibroblasts.">Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts.</a> Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+basis+of+transplant-associated+arteriosclerosis.">Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).</li><li>Skaro, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+mediate+aortic+allograft+vasculopathy+by+direct+killing+and+an+interferon-gamma-dependent+indirect+pathway.">CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway.</a> Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).</li><li>Tellides, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Soulez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perlecan+fragment+LG3+is+a+novel+regulator+of+obliterative+remodeling+associated+with+allograft+vascular+rejection.">The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection.</a> Circ Res. 110, 94-104 (2012).</li><li>Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perforin+mediates+endothelial+cell+death+and+resultant+transplant+vascular+disease+in+cardiac+allografts.">Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts.</a> Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).</li><li>Choy, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granzyme+B+induces+endothelial+cell+apoptosis+and+contributes+to+the+development+of+transplant+vascular+disease.">Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease.</a> Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).</li><li>Reis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+remodeling+of+advanced+atherosclerotic+plaques+of+the+apolipoprotein+E-deficient+mouse+in+a+novel+transplantation+model.">Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model.</a> Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).</li><li>Potteaux, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressed+monocyte+recruitment+drives+macrophage+removal+from+atherosclerotic+plaques+of+Apoe-/-+mice+during+disease+regression.">Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression.</a> J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).</li></ol>

Immün aracılı vasküler reddi ve TA araştırılması için de faydalıdıdr farelerde aşılama aort araya yerleştirilmesi için bir protokol tanımlamışlardır. Bu model TA nedenleri olarak, yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini araştırmak için kullanılabilir. Bu TA 14,17-21 adaptif bağışıklık, sitotoksik T hücre yanıtları, sitokinin aracılık ettiği bir CD4 T hücre yanıtlarının efektör ve antikor-aracılı greft hasarının önemli bir rol oluşturulması için geçmişte kullanılmıştır. Farelerde Arter nakli nedeniyle hayvanın bariz küçük boyutu zordur; Ancak, uygulama ve durum tespiti ile, başarılı ameliyatlar yapılabilir. Başarı damarın açıklığı bağlıdır. Bu greft yanlış, damar lümeninin forseps ile gemi, daralma taşıma kabının arka duvarını ve aynı sitede tekrarlayan dikilmesi dikilerek hasarlı olup olmadığını sağlamayı içerir. Geminin Kaçak de sorunludur ve e bakım gerektiririlmek sayısı ve pozisyon damar duvarı etrafında eşit bölünmüş şekilde almalarının sağlanması. Bu greft iskemi az 30 dakika en aza indirecek de esastır. Bu sayede,% 95&#39;ten daha fazla bir başarı oranı elde edilebilir. aort fare büyük arter yüzden bu prosedür bu model hayvan vasküler ret araştırmak için en basit mikrocerrahi yaklaşım olmasıdır. Ayrıca, aort kademeli fizyolojik ilgili bir konumda aşılanır, normal kan akışını karşılaşır ve intimal kalınlaşma hızla gelişir. vasküler ret ve TA değerlendirilmesinde kullanılan diğer ana model, koroner arterlerde ve TA için en uygun klinik senaryo kalp nakli bağlamında TA gelişimini inceleyerek avantajı vardır heterotopik kalp nakli olduğunu. Bununla birlikte, heterotopik kalp nakilleri vücut içindeki fizyolojik olmayan bir konumda yerleştirilir (genellikle vena kava anastamosed vekarın aort) ve kalp nedeniyle nakledilen kalbin içine kan akımı retrograd doğasına ventriküller aracılığıyla kan pompalamak değildir. Bu nedenle, koroner ağacın içinden kan akışının doğası normalde koroner damar sistemine 22,23 yaşadığı ne farklı olabilir. Ayrıca, stratejiler kalbin akut rejeksiyon arter değişiklikleri değerlendirmek amacıyla dahil edilmelidir üstesinden gelmek için. Her iki modelde de, dikkatli uygun damar reddi ve TA ile ilgili özel soruları edebilmek amacıyla kullanılan antijen uyumsuzluğu türünü seçmek önemlidir. Özetle, aort interpozisyon grefti immün aracılı arteriyel hasar ve TA araştırmak için güçlü bir tekniktir. Bu rutin araştırmacı adına uygulama ve titizlikle hakim olabilir. Bir kez hakim, bu prosedür böyle karotid arter, inci gibi diğer arter segmentlerinin, interpozisyonu aşılaması için modifiye edilebilirek bilimsel soruların incelenmesini sağlayabilir. Ayrıca, bu modelin kullanımı naklinin çalışma ötesine genişletilebilir. Tadil edilmiş arterlerin interpozisyonu aşılama arter parçalarının tanıtmak için kullanılabilir (örneğin, transjenik veya lipit beslenmiş) modifiye edilmemiş karşılıklarına fareler, ya da tam tersi olmayan damar duvarı hücreleri 24 karşı arter duvarı hücrelerinde moleküllerin biyolojik etkilerini izole etmek için , 25.

Geçtiğimiz 30 + yıl içinde, immunsupresif ilaçların gelişmeler nedeniyle akut ret greft reddi azalmış fakat kronik ret ana sorun olmaya devam etmektedir. Kronik kalp transplant reddi ana tezahürü nakli damar sertliği (TA) 1,2 olduğunu. Bu durum, intimal hiperplazi ve allogreft arterlerin vazomotor disfonksiyon ile karakterizedir ve alıcı bağışıklık sisteminin endotel ve düz kas hücrelerinin imünolojik hedefleme bir sonucu olarak gelişir. konak gemiler 3 tutumlu iken sebebiyle yabancı peptit-majör histokompatibilite kompleksi (MHC) tanınması greft damar spesifik hedefleme sadece greft arterlerde ta gelişmesi ile vurgulanır. Buna uygun olarak, alıcı verici veya alıcı T ve B hücreleri 4 yoksun için genetik olarak özdeş olduğu zaman ta deneysel oluşmaz gözlemdir. İmmün aracılı vasküler yaralanma ve disfonksiyonunn, TA 5 intimal kalınlaşma ve fibroz gelişimi, hem de lipid ve ECM proteinleri olarak anormal birikimi neden olur. Iç tabakasındaki kalınlaşma belirgin tüm arteryel ağaç 4-6 boyunca eş olma eğilimindedir. Greft kaybı ve ölüm genellikle allogreft arterlerin 4 lümen tıkanıklığı sonucu ilerleyici iskemi sonucu meydana gelir. 1991 yılında, Mennander ve ark., 7 TA model sıçanlarda aort interpozisyon modeli öncülük etmiştir. Çeşitli gruplar, daha sonra farelerde kullanım için bu prosedürü adapte edilmiştir. Bu modelde, allogreft aort segmentleri TA karşılaştırılabilir özellikler, klinik nakli gözlenen olan lezyonlar gelişir. Bu düz kas-benzeri hücreler ve alıcı lökositlerin 7 birikimi ile karakterize edilen, intimal kalınlaşma içerir. Son 2 yılda bu model, vasküler yaralanma, reddedilme ve TA mekanizmalarına önemli fikir üretmek için kullanılır olmuştur. Bizi olabilired arteriyel patoloji sırasında bağışıklık ve vasküler yanıtlarına ilişkin soruları incelemek. antijen uyumsuzluğu etkileri seçimi uygun bu sorulara cevap yeteneği. Tam MHC bariyerleri boyunca nakli, organ transplant reddi dahil olmak üzere bilinen immün cevapların kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu greft türetilmiş hücreler tarafından sunulan doğrudan CD4 ve CD8 T hücresi tanıma ve yabancı peptit-MHC hedef içerir, dolaylı CD4 (ve muhtemelen CD8), T hücresi tanınması ve sunucu hücreler alıcının antijen tarafından sunulan greft türetilen alloantijenlere hedeflenmesi ve antikor vasküler hücre yüzeylerinde 8 alloantijenlere aracılı tanınması. Bununla birlikte, tam bir MHC-uyumsuz deneylerde yaralanması vasküler müdahale, klinik olarak gözlenenden daha farklı olabilir. Johnson ve ark. 9 gösterdi, bu en iyi şekilde tam bir MHC uyumsuzluğu bariyer boyunca nakledilen aort interpozisyon greft bölgesineointimal Hücreler, alıcı kökenli olup donör kökenlidir. Bu en intimal düz kas hücreleri, donor kaynaklı 9,10 insan nakli gözlenenden farklıdır. Bu sınırlama için hesap için, küçük doku uygunluk antijeni uyumsuzlukları genelinde aşılama barındırır alternatif deneysel modeller daha yakından klinik transplantasyon 11 gözlenen benzeyen vasküler yanıtları tetikleyen geliştirilmiştir. Bu alternatif modeller önemli sonuçlar için izin yaparken TA, tamamen klinik ortamda meydana olanlar yeniden teslim olmayan küçük histokompatabilite antijen uyumsuz greft vasküler ret neden immünolojik süreçlerin gelişimini sürücü damar yanıtları ile ilgili yapılacak. Örneğin, küçük doku uygunluk antijenleri aşı reaktif antikorlar 12 ile kötü tanınır. Yukarıdaki hususlar göz önüne alındığında, patolojik sorunlarınızda dikkate almak önemlidiraort interpozisyonu modelinde kullanılan antijen uyumsuzluğu türünü seçerken üzerinde incelenen. Burada fare aort interpozisyon aşılama için ayrıntılı bir protokol açıklar. Biz tam MHC-uyumsuz farelerde aynı protokolü diğer antijen uyumsuz fare suşları arasında aşılama için kullanılan arasındaki interpozisyonu aşılama açıklar.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Strain# 000664</td><td></td></tr><tr><td>Balb/cBYJ</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Strain# 001026</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine Hydrochloride Injection USP 100 mg/ml</td><td>Ketalean</td><td>DIN 00612316</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine Injection 20 mg/ml</td><td>Rompum</td><td>DIN 02169592</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen Injection 100 mg/ml</td><td>Anafen</td><td>DIN 01938126</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol Tartrate&amp;nbsp;injection 10 mg/ml</td><td>Torbugesic</td><td>DIN 008450000</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine Injection 0.3 mg/ml</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>B.N. 5241</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole hydrochloride sterile injectable solution</td><td>Antisedan</td><td>DIN 02237744</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium Injection, USP, 1,000 units/ml</td><td>McKesson Distribution</td><td>DIN 02264315</td><td></td></tr><tr><td>Tears naturale ophthalmic ointment</td><td>Alcon</td><td>DIN 02082519</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride, sterile</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer&amp;rsquo;s solution, sterile</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride Injection, sterile, 10 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pads</td><td>Loris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Povidone Iodine</td><td>Betadine</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorohexidine Gluconate 4% w/v</td><td>Germi-Stat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Black Polyamide Monofilament</td><td>AROSurgical Instruments</td><td>T4A10Q07</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 10-0 suture, 70 microns</td><td>Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blue monofilament suture 5-0, P3 needle</td><td>Ethicon</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>1cc TB insulin syringe with 28 G 1/2</td><td>BD</td><td>REF 309309</td><td></td></tr><tr><td>25 G 7/8, hypodermic needle</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1/2, hypodermic needle</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Retractor- 1.5 cm spread 4 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>S&amp;amp;T CAF-4 Clip applying forceps, without lock</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Supergrip forceps, S&amp;amp;T</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Medical No.5 forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Lexer Baby Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro Adson forceps serrated</td><td>Fine Science Tools</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen microscissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Micro clamps, b-1; 3.5mm x 1mm; 7mm length</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>Graefe-forceps, 10cm 1x2 teeth</td><td>Fine Science Tools</td><td>11054-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo with lock and tungsten jaws</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Hot glass bead sterilizer</td><td>Inotech 250</td><td>IS-250 - Steri-250</td><td></td></tr><tr><td>Non-woven gauzes</td><td>Progene</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicators</td><td>Puritan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beard Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Sunbeam</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mouse model of alloimmune-induced vascular rejection and transplant arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

Bu modelde, bir Balb / cYJ fare abdominal aort, bir C57BL / 6 alıcı infrarenal aort içine yerleştirilir. Bu allogreft arterler hedef Alloimmün tepkilerin kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu modelde immün aracılı vasküler yaralanma intimal kalınlaşma, luminal daralmasının ve immün hücre toplanmasından sonuçlanan vasküler onarım yanıtları başlatır (Şekil 1 ve 2). Bu kriterler daha sonra Alloimmün tepkilerin şiddeti, vasküler ret, ve TA için bir okuma olarak hizmet vermektedir. Prosedürün başarısı allogreft arter parçalarının sağlam bir intimal kalınlaşma geliştirilmesi ve syngraft kontrolleri intimal kalınlaşma yokluğu ile değerlendirilebilir. Klinik olarak ilgili immünosupresyon daha yakından klinik nakli benzemeye bu model ile kullanılabilmektedir. Bu model aynı zamanda Alloimmün yanıtlarında spesifik proteinlerin / yolların etkisini araştırmak için transgenik hayvanlar ile kullanılabilen birs biz 14 yaptık. Allogreft aort segmentleri intimal kalınlaşma geliştirmek immün aracılı allogreft vasküler hasar miktarı gün 30 post-transplantasyon de aşılı aort segmentlerinde intimal kalınlaşma ve lümen daralması miktarının incelenmiştir. Allogreft arter segmentleri önemli intimal kalınlaşma ve lümen tıkanıklığı geliştirmek ve hiçbir değişiklik syngraft kontrol arter segmentlerinin (Şekil 1) görülmektedir. Allogreft aort segmentlerinde lökositlerin birikimi. allogreft arterlerde lökositlerin toplanması CD4 T hücreleri, CD8 + T hücreleri ve makrofajlar (Mac-3) immünohistokimya ile 15 sayısını nicelleştirilmesiyle incelenmiştir. Mac-3 gibi F4 / 80, gibi diğer belirteçler de 16 kullanılabilir, ancak bu çalışmada makrofajlar için leke için kullanılmıştır. CD4 + T hücreleri, CD8 + T hücreleri ve makrofajlar saptandı<html> allogreft arterlerin intima (Şekil 2) <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/52800/52800fig1.jpg" /> Şekil 1: aşılanmış arterlerin Histolojik analiz (A), sinjeneik farelerden alınan ve allojenik abdominal aorta segmentleri C57BL / 6 farelerinin rezeke karın aorta içine yerleştirilmiş edilmiştir.. aşılı arterler gün 30 post-transplant hasat edildi. Elastik van Giesen lekeli arterlerin Temsilcisi fotomikrografı gösterilir. Ölçek çubuğu = 0.1 mm = 100 geminin farklı katmanları, L nasıl ölçüldüğünü anlatan um (B) Diyagram: lümen, E: endotel tabakası, ben: intima, M: medya, A.:. Adventitia (C) Kantitasyonu İntima / medya oranı ve 30 günlük singeneik daralan% lümen (n = 3) ve allojenik (n = 6) nakli, * p &lt;0.05.= &quot;_ Blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52800/52800fig2.jpg" /> Şekil 2: allogreft arterlerde Bağışıklık hücre birikimi. Allogreft aort bölümlerinin Temsil edici fotomikrografikler immünohistokimyasal (A) CD4, (B) CD8, ve (C) Mac-3 boyanmış ve gösterilmiştir hematoksilin ile karşı. Ölçek çubuğu = 0.1 mm = 100 mikron. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52800/52800fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

mouse-model-alloimmune-induced-vascular-rejection-transplant

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.4K Görüntüleme.  Simon Fraser University. We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure. 

Video: Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Tıp

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Graft arteriosclerois (GA), also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over months to years in transplanted organs characterized by diffuse, circumferential stenosis of the entire graft vascular tree. The most critical component of GA pathogenesis is the proliferation of smooth muscle-like cells within the intima. When a human coronary artery segment is interposed into the infra-renal aortae of immunodeficient mice, the intimas could be expand in response to adoptively transferred human T cells allogeneic to the artery donor or exogenous human IFN-&gamma; in the absence of human T cells. Interposition of a mouse aorta from one strain into another mouse strain recipient is limited as a model for chronic rejection in humans because the acute cell-mediated rejection response in this mouse model completely eliminates all donor-derived vascular cells from the graft within two-three weeks. We have recently developed two new mouse models to circumvent these problems. The first model involves interposition of a vessel segment from a male mouse into a female recipient of the same inbred strain (C57BL/6J). Graft rejection in this case is directed only against minor histocompatibility antigens encoded by the Y chromosome (present in the male but not the female) and the rejection response that ensues is sufficiently indolent to preserve donor-derived smooth muscle cells for several weeks. The second model involves interposing an artery segment from a wild type C57BL/6J mouse donor into a host mouse of the same strain and gender that lacks the receptor for IFN-&gamma; followed by administration of mouse IFN-&gamma; (delivered via infection of the mouse liver with an adenoviral vector. There is no rejection in this case as both donor and recipient mice are of the same strain and gender but donor smooth muscle cells proliferate in response to the cytokine while host-derived cells, lacking receptor for this cytokine, are unresponsive. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, both models can be used to assess the effect of specific genes on GA progression. Here, we describe detailed protocols for our mouse GA models.

We describe protocols for our mouse graft arteriosclerois (GA) models which involve interposition of a mouse vessel segment into a recipient of the same inbred strain. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, the model can assess the effect of specific genes on GA.

Greft damar sertliği için fare modelleri

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms requires reliable models. Here, we describe models of tolerance to cardiac allograft in rat, induced by blockade of costimulation signals or by upregulation of immunoregulatory molecules through gene transfer. Each of these models allowed in vivo generation of regulatory cells such as regulatory T cells (Tregs), regulatory B cells (Bregs) or regulatory myeloid cells (RegMCs). In this manuscript, we describe two complementary protocols that have been used to identify and define in vitro and in vivo regulatory cell activity to determine their responsibility in tolerance induction and maintenance. First, an in vitro suppressive assay allowed rapid identification of cells with suppressive capacity on effector immune responses in a dose dependent manner, and can be used for further analysis such as cytokine measurement or cytotoxicity. Second, the adoptive transfer of cells from a tolerant treated recipient to a newly irradiated grafted recipient, highlighted the tolerogenic properties of these cells in controlling graft directed immune responses and/or converting new regulatory cells (termed infectious tolerance). These methods are not restricted to cells with known phenotypic markers and can be extended to any cell population. Furthermore, donor directed allospecificity of regulatory cells (an important goal in the field) can be assessed by using third party donor cells or graft either in vitro or in vivo. Finally, to determine the specific tolerogenic capacity of these regulatory cells, we provide protocols to assess the humoral anti-donor antibody responses and the capacity of the recipient to develop humoral responses against new or former known antigens. The models of tolerance described can be used to further characterize regulatory cells, to identify new biomarkers, and immunoregulatory molecules, and are adaptable to other transplantation models or autoimmune diseases in rodent or human.

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Here, we present a protocol to induce tolerance in transplantation, and assess in vitro and in vivo the suppressive capacity of distinct cell subsets from the recipient and the immune status of the recipient toward donor or exogenous antigens.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand and face transplants and, more recently, abdominal wall, uterus, and urogenital transplants. Functional outcomes have exceeded initial expectations, and most recipients enjoy an improved quality of life. However, as clinical experience accumulates, chronic rejection and complications from the immunosuppression must be addressed. In many cases where grafts have failed, the causative pathology has been ischemic vasculopathy. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">The biological mechanisms of the acute and chronic rejection associated with VCA, especially ischemic vasculopathy, are important areas of research. However, due to the very small number of VCA patients, the evaluation of proposed mechanisms is better addressed in an experimental model. Multiple groups have used animal models to address some of the relevant unsolved questions in VCA rejection and vasculopathy. Several model designs involving a variety of species are described in the literature. Here we present a reproducible model of VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap in the rat that can be utilized for translational VCA research. This model allows for the serial evaluation of the graft, including biopsies and different imaging modalities, while maintaining a low level of morbidity.

Vascularized composite allograft offers life-altering benefits to transplant recipients, but the biological causes of graft rejection and vasculopathy remain poorly understood. The rodent surgical model presented here offers a reproducible, clinically relevant model of transplantation, allowing researchers to evaluate rejection events and potential therapeutic strategies to prevent their occurrence.

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

Modifiye Dikişsiz Manşet Tekniği Kullanılarak Murine Servikal Aort Transplantasyon Modeli

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

A Rat Orthotopic Renal Transplantation Model for Renal Allograft Rejection

Renal allograft rejection limits the long-term survival of patients after renal transplantation. Rat orthotopic renal transplantation is an essential model to investigate the mechanism of renal allograft rejection in pre-clinical studies and could aid in the development of novel approaches to improve the long-term survival of renal allografts. Donor kidney implantation in rat orthotopic renal transplantation is commonly performed by end-to-side anastomosis to recipients' aorta and inferior vena cava. In this model, the donor's kidney was implanted using end-to-end anastomosis to the recipients' renal artery and renal vein. The donor's ureter was anastomosed to the recipient's bladder in an end-to-side 'tunnel' method. This model contributes to better healing of ureter-bladder anastomosis and increases the recipients' survival by avoiding interference with blood supply and venous reflux of the lower body. This model can be used to investigate the mechanisms of acute and chronic immune and pathologic rejection of renal allografts. Here, the study describes the detailed protocols of this orthotopic renal transplantation between rats.

The rat orthotopic renal transplantation model contributes to investigating the mechanism of renal allograft rejection. The current model increases the recipients' survival without interference with blood supply and venous reflux of the lower body using an end-to-end anastomosis of kidney implantation and an end-to-side "tunnel" method of ureter-bladder anastomosis.

Renal Allogreft Rejeksiyonu için Sıçan Ortotopik Böbrek Transplantasyonu Modeli

Renal allograft rejection limits the long-term survival of patients after renal transplantation. Rat orthotopic renal transplantation is an essential ...