We would like to thank Alex Miller for manuscript revisions. This work was supported with the research grants awarded to M.G. from Cure CMD, Struggle Against Muscular Dystrophy (SAM) and Muscular Dystrophy Association (218938).

1. Doku Hasat ve kas Dokuların Donma <ol><li> Izofluran (2-kloro-2- (diflorometoksi) -1,1,1-trifloro-etan) aşırı dozda fare öldürülür. Davlumbaz bu adımı gerçekleştirin ve böyle bir kurutucuda veya izofluran batırılmış bir pamuklu çubuk içeren bir fanus gibi bir ikincil çevreleme yöntemini kullanın. </li><li> Sıkıca Kapkaççı sıkarak ölümü onaylayın. Böyle servikal dislokasyon olarak ötenazi ikincil yöntemi kullanın. </li><li> Kaslar gevşek saç tellerinin yapışmasını azaltmak için% 70 alkol ile kürk ıslatın. Böyle 5. olarak ince bir forseps kullanarak uzuv kapalı cilt soyma. </li><li> Dikkatle, altından kemiklerden (bu durumda tibialis anterior (TA)) ilgi kas ayrı tendonu başlayarak çıkarın. </li><li> , Kas tüketim OCT (Optimum Kesme Sıcaklığı bileşik) onu karşılamak ve etiketli atılabilir dondurma kalıp üzerinde düz yatıyordu. Kas tai için normal fizyolojik oryantasyon (başında olduğundan emin olungermeden l). Alternatif olarak, küçük strafor karelere kas dondurmak ve kasların doğru uzunluğunu sağlamak için böcek işaretçilerine kullanarak pin. </li><li> Sıvı azot kullanılarak çelik beherglasta 2-metilbütan (izopentan) soğutun. 5 dakika - Bu ortalama 3 alır. Beyaz çökeltiler beher alt ve duvarlarında oluşturmak başlayana kadar aralıklı karıştırarak tutun. NOT: Bu durumda, izopentan uygun donma sıcaklığına ulaşmıştır (-150 ° C) </li><li> Soğutulmuş 2-metilbütana kasları içeren kalıpları batırın. 20 sn - 15 gastroknemius soleus (GS) ve triceps gibi 12 sn ve daha büyük kaslar - Böyle diyafram ve ekstansör digitorum longus 6 (EDL) gibi küçük kasları dondurun. Çok uzun bu çatlama neden olabileceğinden için kasları donma yok. </li><li> Kuru buz üzerinde donmuş dokuları aktarın ve izopentan buharlaşması (bu işlem etrafında ortalama 15 alır unutmayın - 20 dakika) izin verin. Alüminyum folyo dokuları sarın ve u saklayınlökotrien antagonistlerinin düşük sıcaklık kesit kadar (-70 ° C ila -80 ° C). </li></ol> 2. Doku Blok Hazırlanır OCT Dokuları katıştırma <ol><li> Kuru buz üzerinde Taşımacılık dokuları çözülme önlemek için cyrostat için. Doku transferi ve bunları, 30 dakika için dengelenmeye bırakın (doku tam çözülme önlemek için -20 -24 ° C&#39;ye ayarlanmış) bölme kriostada. </li><li> Peltier defne soğutma açın. Kriyostat bu soğutma yoksa, hızlı OCT dondurmak için aerosol soğutma sprey kullanın. Bu donma hasara yol açabilir olarak gömme sırasında herhangi bir noktada kas çözülme izin vermeyin. </li><li> Örnek diskte Ekim düzgün bir ince katman ekleyin ve soğumaya bırakın. OCT en durumdayken sıvı üst alt donmuş zaman, (boyuna kesitler için OCT enine kesitler ve paralel için OCT dik) doğru yönde de doku yerleştirin. Hızlı OCT dondurmak için aerosol soğutma sprey kullanın. Isı ext ile doku unembeded bölümünü dokununreaktöre verilmiş ve 45 saniye bekleyin. </li><li> , Kas çevresinde Ekim başka ince bir tabaka ekleyin aerosol soğutma sprey ile sprey ve bir önceki adımda olduğu gibi ısı ayıklayın. </li><li> Bütün kas kaplıdır kadar sprey ve ısı çıkarıcı soğutma aerosol bir arada kullanarak Ekim dondurmak hızla küçük artışlarla Ekim ekleyerek tutun. </li><li> Doku bloğun üstünde ısı çıkarıcı koyun ve 5 dakika bekleyin. </li></ol> 3. Bölüm hazırlanması ve Kasların Orta göbek Bölgesi&#39;nden Bölümler belirlenmesi <ol><li> Numune kafasına örnek monte edin. Diski sabitlemek için topuzu sıkın. Numune disk numune kafası ile iyi temas halinde olduğundan emin olun. </li><li> ° -21 ila -24 ° C&#39;ye odası sıcaklığını ayarlamak ve ayarlanan sıcaklık elde edilene kadar bekleyin. </li><li> Kalınlık ayarlarını (7 mikron) ayarlayın; ilerleyen ya da kaba ve ince ayarlarını kullanarak bloğu geri çekilmeden tarafından blok kırpın. </li><li> Bölümleri toplayınüzerinde slayt kesme bölümlerinin yapışmasını kolaylaştırmak için zıt ücretleri arasındaki cazibe kullanarak bölümleri üzerine slayt üst basarak pozitif yüklü mikroskop slaytlar önceden ısıtılmış. </li><li> Bölümlerin enine kesit alanı (CSA) ölçerek orta göbek bölümleri tanımlamak. Mikroskop bağlı olduğu bilgisayarda bu kullanarak görüntüleme yazılımı yapın. NOT: Faz kontrastlı görüntüler alınır ve tüm kas çevresi yazılım programına bir izleme fonksiyonu üzerinden ölçülür. Bu, her iki CSA ve asgari gelincik çapı ölçümleri (bir tanecik karşıt taraflarında iki paralel teğet arasındaki en küçük mesafe olarak ifade edilir lif enine kesit boyutunun ölçü) ürün elde edilir. Not: CSA ve minimum gelincik çap ölçümleri plato başladığınızda, orta göbek ulaşıldı. </li><li> Envanter gelecekteki boyama -80 ° C&#39;de slaytlar arşivlemek ve. NOT: lekelenme için Ekim öncesinde kaldırılması gerekmezg işlemleri. Slaytlar kaplandı sonra, hemen boyanabilir hazırız. </li></ol> 4. Boyama NOT: Ayrıntılı adım adım prosedürleri ürün veri sayfasında bulunabilir ve boyama işlemleri için takip edilmesi gerekirken, kişisel optimizasyon optimum boyama elde etmek için gerekli olabilir. <ol><li> Ortam (tabloya bakınız), montaj, su ile karışmayan olduğu için, (% 70,% 95 ve% 100 etanol içinde 2 dk) alkol artan sınıflar üzerinde kaydığı dihidrat ve ksilen (5 dakika için% 100) sağlamak için bunları temizlemek slaytlar zamanla opak olmazlar. </li><li> Bölümleri lamel ve kurumaya bırakın. Mikroskop ile görüntü görüntüleme yazılımı ile donatılmış. </li></ol>

<ol>
	<li>Bonnemann, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+approach+to+the+congenital+muscular+dystrophies.">Diagnostic approach to the congenital muscular dystrophies.</a> Neuromuscular disorders : NMD. 24, 289-311 (2014).</li><li>Caughey, J. E., Pachomov, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diaphragm+in+dystrophia+myotonica.">The diaphragm in dystrophia myotonica.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 22, 311-313 (1959).</li><li>Fetterman, G. H., Wratney, M. J., Donaldson, J. S., Danowski, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscular+dystrophy.+I.+History,+clinical+status,+muscle+strength,+and+biopsy+findings.">Muscular dystrophy. I. History, clinical status, muscle strength, and biopsy findings.</a> AMA J Dis Child. 91, 326-338 (1956).</li><li>Platzer, A. C., Chase, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histologic+Alterations+in+Preclinical+Mouse+Muscular+Dystrophy.">Histologic Alterations in Preclinical Mouse Muscular Dystrophy.</a> The American journal of pathology. 44, 931-946 (1964).</li><li>Mercuri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+magnetic+resonance+imaging+involvement+in+muscular+dystrophies+with+rigidity+of+the+spine.">Muscle magnetic resonance imaging involvement in muscular dystrophies with rigidity of the spine.</a> Ann Neurol. 67, 201-208 (2010).</li><li>Tasca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+molecular+signatures+in+magnetic+resonance+imaging-staged+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy+muscles.">Different molecular signatures in magnetic resonance imaging-staged facioscapulohumeral muscular dystrophy muscles.</a> PloS one. 7, e38779 (2012).</li><li>Girgenrath, M., Dominov, J. A., Kostek, C. A., Miller, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+apoptosis+improves+outcome+in+a+model+of+congenital+muscular+dystrophy.">Inhibition of apoptosis improves outcome in a model of congenital muscular dystrophy.</a> The Journal of clinical investigation. 114, 1635-1639 (2004).</li><li>Kumar, A., Yamauchi, J., Girgenrath, T., Girgenrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle-specific+expression+of+insulin-like+growth+factor+1+improves+outcome+in+Lama2Dy-w+mice,+a+model+for+congenital+muscular+dystrophy+type+1A.">Muscle-specific expression of insulin-like growth factor 1 improves outcome in Lama2Dy-w mice, a model for congenital muscular dystrophy type 1A.</a> Human molecular genetics. 20, 2333-2343 (2011).</li><li>Mehuron, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+matricellular+proteins+is+an+early+signature+of+pathology+in+laminin-deficient+muscular+dystrophy.">Dysregulation of matricellular proteins is an early signature of pathology in laminin-deficient muscular dystrophy.</a> Skeletal muscle. 4, 14 (2014).</li><li>Yamauchi, J., Kumar, A., Duarte, L., Mehuron, T., Girgenrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+regeneration+and+tackling+apoptosis:+a+combinatorial+approach+to+treating+congenital+muscular+dystrophy+type+1+A.">Triggering regeneration and tackling apoptosis: a combinatorial approach to treating congenital muscular dystrophy type 1 A.</a> Human molecular genetics. 22, 4306-4317 (2013).</li><li>Sheriffs, I. N., Rampling, D., Smith, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+wax+embedded+muscle+is+suitable+for+the+diagnosis+of+muscular+dystrophy.">Paraffin wax embedded muscle is suitable for the diagnosis of muscular dystrophy.</a> Journal of clinical pathology. 54, 517-520 (2001).</li><li>Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde+fixation.">Formaldehyde fixation.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 33, 845-853 (1985).</li><li>Maccarty, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Diagnostic+Reliability+of+Frozen+Sections.">The Diagnostic Reliability of Frozen Sections.</a> The American journal of pathology. 5, 377-380 (1929).</li><li>Shi, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+value+of+frozen+tissue+section+used+as+'gold+standard'+for+immunohistochemistry.">Evaluation of the value of frozen tissue section used as 'gold standard' for immunohistochemistry.</a> Am J Clin Pathol. 129, 358-366 (2008).</li><li>Turan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+frozen+sections+for+intraoperative+diagnosis+of+complex+atypical+endometrial+hyperplasia.">Accuracy of frozen sections for intraoperative diagnosis of complex atypical endometrial hyperplasia.</a> Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP. 13, 1953-1956 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Histoloji ve immünohistokimya çeşitli nöromüsküler bozukluklar tezahürü ve patoloji ilerlemesini anlamada anahtar bir araç olarak kullanılmıştır. Klasik kas biyopsileri ilk formaldehit sabit ve daha sonra parafin mumu ile gömüldü. Formaldehit tespit mimari dokusu koruyan ve oda sıcaklığında doku depolama ve taşıma izin verirken, aynı zamanda doğru immün elde etmek için daha ileri adımlar gerektiren enzimler ve çapraz bağlarının proteinleri inaktive eder. Bu sorun donmuş kesitlerin kullanımı ile elimine edilir ancak bu yöntem en iyi boyama sonuçları ve doğru yorumlama 14,15 elde eşsiz teknik zorluklar sunar. İlk olarak, otoliz ve ayrıştırma vücuttan çıkarıldıktan hemen sonra başlar başlamaz numuneler cerrahi eksizyon hemen sonra dondurulabilir esastır. Dokular ayrıca boyutuna bağlı olarak değişir zaman uygun bir miktarı için hızlı bir şekilde ve iyice dondurulabilir/ Dokunun kalınlığı. Bu doğru yapılmadığı takdirde, histolojik değerlendirme için yararsız doku render oluşacak hasarı dondurma. Dondurma sonra, dokular hemen kesit kadar ultra düşük sıcaklıkta (-80 ° C), dondurucu aktarılır, daha sonra kuru buz üzerinde saklanır ve olmalıdır. Bu dokular donma-çözülme doku mimarisi zarar verir, çünkü kuru buz üzerinde olmadan dondurucudan çıkarıldı gerektiğini dikkat etmek önemlidir. Önemi bir başka not zaman histolojik analiz yapmak her zaman analiz arasındaki bütünlüğü sağlamak için ilgi doku aynı bölümünü analiz özen etmektir. Bu midbelly analizi yaparak kas bölümleri için yapılabilir. Bu en büyük kesit alanına sahiptir ve dolayısıyla kalın olduğu ve kas parçasıdır. Eğer gerçekten midbelly kesit sağlamak için, daha sonraki bölümlerde CSA histolojik görüntüleme yazılımı kullanılarak ölçülmelidir. Measuremkesit alanı plato başlayıncaya kadar hastalar yapılmaya devam edilmelidir. Bu durumda bir kez, orta göbek ulaşıldı; Sadece doku bu kısmı karşılaştırmalar arasında bütünlüğü sağlamak için histolojik analiz için kullanılmalıdır. 2 saat - kesit tamamlanmış ve slaytlar hazırlanmıştır sonra, 1, oda sıcaklığında kurumaya bırakıldı edilmelidir. Kurutma slayt bölümün düzgün yapışması için izin verir ve aynı zamanda ° C derin dondurucuda -80 transfer aşağıdaki kristalize aşırı su engeller. Bu donma-çözülme döngüleri önlemek için analiz için slaytlar seçerken slaytlar da sadece kuru buz üzerinde ele alınması gerektiğine dikkat etmek önemlidir. Slaytlar boyama için seçilmiştir kez optimum sonuçlar elde edilene kadar leke deneme amaçlı olarak ilk uyulmalıdır ile protokoller dahil. Immün yaparken, o emin slaytlar işlem boyunca kurumasını yok yapmak önemlidir. Slaytlar kurutulması geçici etkileşimi neden olabilirs inkübasyon aşağıdaki bozulmadan kalması için. Bu etkileşimler, yıkama sırasında çıkarılır ve spesifik olmayan boyama neden olamaz. Kurutma nemli bir atmosferde slaytlar tutarak önlenebilir. Küçük bir slayt kutusuna mühürlü nemli bir kağıt havlu üzerine parafilm ve slaytlar ile kaplı bölümleri ile inkubasyon gerçekleştirme işlemi sırasında herhangi bir noktada olacak değil kuru slaytlar sağlamak için yeterlidir. Histoloji morfolojisi ve patoloji çeşitli yönleriyle görselleştirmek önemli bir araçtır. Biraz önemsiz olsa da, dokuların hazırlanmasında histoloji için kullanılacak büyük bir özen büyük önem taşımaktadır. Donma eksizyon, kesit ve boyanması itibaren, dokular dondurma zarar görmemesi ve en doğru görüntüler mümkün verecek şekilde ele alınmalıdır. Uygun koruma olmadan, boyama doğru fizyolojisini yansıtmaz ve bu nedenle yanlış yorumlanmasına yol açar.

Kas histoloji incelenmesi nöromüsküler bozuklukların 1-4 farklı anlamada kritik bir rol oynamaktadır. Diğer tekniklerle birlikte, bu araştırmacıların patoloji tezahürü ve ilerlemesinin daha iyi bir fikir almak için ve aynı zamanda bir terapötik müdahale 5-10 etkinliğini değerlendirmek için gerekli olabilir izin verir. Eksizyon hemen önce fizyolojik durumunu korumak amacıyla Ancak, doğru olması için, dokular uygun şekilde korunması gerekir. Bu kaldırma, koruma, kesit ve boyama esnasında büyük dikkat gerektirir. Dokular, ışık mikroskobu çalışma için iki farklı yolla hazırlanabilirler. (FFPE) bölümleri, gömülü ilk yöntem, formalin sabit parafin dokularının parafin mumu 11,12 ile gömülü önce% 10 doğal tamponlu formaldehit sabit gerektirir. tespit aşaması aynı zamanda çapraz bağlantılar endojen pr daha iyi morfolojisi korumak için yardımcı oluroteins böylece immün için karmaşık antijen alma prosedürleri gerektiren ve bu bölümlerde 12 enzimatik boyama olasılığını ortadan kaldırır. Dondurulmuş kesitler, diğer taraftan, önceden sabit veya işlenmesine gerek yoktur; Bu nedenle, proteinler doğal biyolojik konformasyonlar 13,14 muhafaza edebiliyoruz. Bundan başka, dondurulmuş kesitler de bazen sarkomlar ve diğer cerrahi biyopsi 15, ameliyat tanısında, örneğin gerekli olan hızlı gerçekleştirme süresi, izin verir. Düzgün yapılmazsa Ancak, bu yöntem histolojik inceleme için bölümler elverişsiz hale kas mimarisi değişiklikleri tanıtır zararı, don eğilimli. Bu kağıt düzgün muayene için en uygun boyama elde etmek için kas biyopsi hazırlamak için en etkili yöntem açıklayacağım.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica CM 1850&#160;</td>
			<td>Leica Microsystems Inc.</td>
			<td>Buffalo Grove, IL 60089 United States, office phone 1-800 248 0123 
			Richard Allen Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon Eclipse 50i&#160;</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td>1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A. 
			Phone: +1-631-547-8500 
			Olympus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image analysis software</td>
			<td>Nikon Imaging Software Basic Research</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td>1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A. 
			Phone: +1-631-547-8500 
			Image J, Metamorph</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>14043-220-05</td>
			<td>JD Medical Dist. Co., Inc.</td>
			<td>JD Medical Distrubuting Co., Inc 1923 West Peoria Avenue Phoenix, Arizona 85029</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>4583</td>
			<td>Sakura Inc.</td>
			<td>Sakrua Fintek, USA, Torrence, CA 90501, USA 
			Leica Microsystem</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze It</td>
			<td>23-022524</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable tissue mold</td>
			<td>22-363-554</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorfrost plus slides</td>
			<td>9991001</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>650501-4L</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3050 Spruce Street, St.Louis MO, 63103 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol</td>
			<td>HC-1300-1GL</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methyl butane</td>
			<td>M 32631-SL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3050 Spruce Street, St.Louis MO, 63103 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>HC-7001GA</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 280</td>
			<td>8311-4</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill #3</td>
			<td>CS402-1D</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>6766007</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 
			VWR Scientific</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

do's and don'ts in the preparation of muscle cryosections for histological analysis

Kas biyopsi histolojik değerlendirilmesi nöromüsküler bozuklukların patoloji gelişimi ve ilerlemesinde anlamada vazgeçilmez bir araç olarak hizmet vermiştir. Ancak, bunu yapmak için, uygun bakım eksize ve optimum boyama elde etmek için dokular korunması sırasında alınması gerekir. Doku koruma yöntemlerinden biri parafin mumu ile gömerek sonra formaldehit dokuları tamir ve kapsar. Bu yöntem de morfoloji koruyan ve oda sıcaklığında uzun süreli depolama için izin verir, ancak hantal ve toksik kimyasalların kullanımını gerektirir. Bundan başka, etkili bir immün için antijen alma protokolleri gerektiren antijeni çapraz bağlayabilen, formaldehit tespit sonuçları. Aksine, dondurulmuş kesit tespiti gerektiren ve bu nedenle, biyolojik antijen yapısını muhafaza etmez. Bu yöntem aynı zamanda intraopera gibi hızlı histolojik değerlendirme gerektiren durumlarda özellikle yararlıdır hale sefer hızlı sırayla ayrı bir avantaj sağlarCerrahi biyopsi tive. Burada farklı histolojik ve immünolojik lekeleri ile görselleştirme için kas biyopsisi hazırlamak en etkili yöntem tarif.

hasat ve dokuların dondurulması için set-up Şekil 1&#39;de görülebilir. Kesilen dokular kurutma (Şekil 1A) önlemek için PBS batırılmış bir gazlı bez üzerine saklanmalıdır. Dokular da doğru morfolojisi (Şekil 1B) sağlamak için Ekim batırılmış ve cryo kalıp düzenlendiği doğru yönde ve mümkün olduğunca fizyolojik uzunluğuna yakın olmalıdır histolojik analiz için kullanılmak üzere seçildiğinde. Bir doku dondurma için müsait izopentan Çamur daha sonra sıvı azot içinde izopentan soğutulur ve küçük beyaz çökeltiler altta görünen kadar karıştırılarak elde edilebilir. Bu noktada, ortam (Şekil 1C) dondurma için uygundur. Dokular, doku (Şekil 1D) büyüklüğü / kalınlığına bağlı olarak soğutulmuş izopentan içinde 6-15 sn arasında dondurulmuş olmalıdır. Donma ardından, kas -80 &lt;kuru buz üzerinde muhafaza edilmelidir bu noktada kireçli beyaz görünmesini ve daha sonra transfer olacakstrong&gt; ° C dondurucu. Giderek Ekim doku gömme kas kalıbın hazırlanması için gereken Kriyostat ayarı ve katkı maddeleri, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Kriyostat -20 ve -24 ° C (Şekil 2A) arasında ayarlanmalıdır. OCT ve Freeze-It kesit için uygun blok oluşturmak için hazır olmalıdır. Kriyostat içi manipüle ve doku sağlamak ellerle temas asla çünkü slayt yapma yanı sıra doku bloğu taşınması için cımbız için kesilmiş bölümleri düzleştirmek için küçük fırçalar olmalıdır donmuş (Şekil 2B) kalır. Ekim kesit bloğu oluşturmak için dokuya ilave edilmelidir ama Freeze-It sprey ve daha sonra Resimdeki ısı çıkarıcı (Şekil 2C) ile soğutulan hemen dondurulmalıdır. Enine kesitler için, doku bu bıçak (Şekil 2D) dik yönlendirilmiştir, böylece numune başına yerleştirilmelidir. Sehazrl istenilen kesit kalınlığı (5-10 um dokuya bağlı olarak) elde etmek için ayarlanmalıdır. Doğru donmuş ise doku yüz montaj işlemi sırasında yanlış dondurulmuş ve çözülmüş bir doku kırmızı / pembe gözükecektir. Kireçli beyaz olmak 3 yanlış ele numuneler için temsili dokular (Şekil 3A) ve düzgün ele örnekleri göstermektedir gerekir (Şekil 3B) . ortası göbek bölgesi Faz kontrast optik ve görüntü analizi yazılımı ile donatılmış bir mikroskop kullanılarak CSA ve minimum gelincik çapları ölçülerek tespit edilir. Analiz yazılımı temsili bir ekran görüntüsü. Şekil 4&#39;te gösterilen Hematoksilen ve bir dondurarak zarar biyopsi ile birlikte uygun bir şekilde donduruldu ve kesitli biyopsi boyanan görüntü eosin tibialis anterior (TA) kasları, Şekil 5&#39;te gösterilmektedir. Doğru olacaktır işlenir Bölümler Tutarlı morfolojik özelliklerinigy ve hatta boyunca boyama (Şekil 5A). Yanlış. Donma hasarlı veya zamanından önce morfoloji birden molalar ve &quot;parçalanmış buğday&quot; (Şekil 5B) görünüme sahip görünür çözdürülen kasları işlenen optimum immün için 6 görünen programları nemlendirilmiş odasına Şekil. Slaytlar, parafilm ile kaplı ıslak kağıt havlu üzerine tuttu ve immün sırasında bölümlerin kurumasını önlemek için küçük bir kutu içinde mühürlü olmalıdır. 7 düzgün hazırlanmış ve lekeli olan örnek bir immünohistokimyası slayt tasvir Şekil. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/52793/52793fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1. Hazırlık ve uygun doku dondurulması için kurulmuş. (A) Kesilen dokular PBS batırılmış gazlı bez üzerine saklanmalıdır. (B) histolojik seçilenler dokularınAnaliz Ekim batırılmış ve mümkün olduğunca fizyolojik uzunluğuna yakın (tendonu karnından itibaren) uygun yönde cryo kalıp üzerinde ortaya koydu. Doku için müsait izopentan (C) içermiştir. Not: küçük beyaz çökeltiler altında görüntülenir. (D), izopentan içinde bekletildikten sonra Dondurulmuş doku. Not:. Kireçli beyaz görünüm <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig1highres.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52793/52793fig2highres.jpg" width="500" /> Kesit için gerekli 2. Cryostat ayarları ve malzemeyi Şekil. (A) Cryostat -20 -24 ° C ile Ekim ve aerosol sprey soğutma hazır arasında ayarlayın. Küçük fırçalar ile tam kriyostat kurulumu içinde (B) işlemek ve kesim secti düzleştirmek içinslayt doku bloğun kullanım için yapım yanı sıra cımbız için ons. (C) Dondurulmuş doku bloğu hazır ısı çıkarıcı (beyaz ok) ile soğutulacak. Kesilecek hazır kafa montaj ayarlanmış (D) Doku bloğu. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52793/52793fig3highres.jpg" width="500" /> Şekil doğru ve yanlış korunmuş kasların 3. Temsilcisi dokular. (A) Yanlış donmuş veya ele (B) Düzgün donmuş ve kas ele. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig3highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt= &quot;Şekil 4&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52793 / 52793fig4highres.jpg&quot; width = &quot;500&quot; /&gt; Nikon görüntüleme yazılımı kullanarak TA kas kesit alanı Şekil 4. belirlenmesi. CSA ve min gelincik çapının ölçümü için yazılım hayal kullanılarak çember olmuştur kas bölümünün faz kontrast görüntü ekran görüntüsü. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig4highres.jpg" target="_blank">Bu daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız rakam.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52793/52793fig5highres.jpg" width="700" /> Düzgün ve yanlış hazırlanmış H &amp; E lekeli kasların Şekil 5. Temsilcisi görüntüler. (A) Düzgün bölümü işlenmiş. (B) Yanlış işlenmiş donma hasarlı kas bölümü. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig5highres.jpg" target="_blank">Lütfen cli</a>Bu rakamın büyük halini görmek için buraya ck. <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/52793/52793fig6highres.jpg" width="600" /> Şekil 6. immün için uygun Nemlendirilmiş odası. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig6highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/52793/52793fig7highres.jpg" width="350" /> Düzgün hazırlanmış ve lekeli slayt. Slide Şekil 7. Örnek immünohistokimyası slayt Fibronektin (yeşil) ve DAPI (mavi) ile boyandı edilmiştir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52793/52793fig7highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis at JoVE.com

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

Histolojik Analiz kas cryosections Hazırlanmasında Yapılması ve Yapılmaması Gerekenler

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

do-s-don-ts-preparation-muscle-cryosections-for-histological

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

31.7K Görüntüleme.  Boston University. Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

Video: Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

İzole İskelet Kası Myo-mekanik Analizi

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Tıp

In Vivo Canine Muscle Function Assay

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
contractions. The pelvic limb of an anesthetized dog is immobilized in a stereotactic frame to align the tibia at a right angle to the femur. Adhesive wrap affixes the 
paw to a pedal mounted on the shaft of a servomotor to measure torque. Percutaneous nerve stimulation activates pelvic limb muscles of the paw to either push (extend) or 
pull (flex) against the pedal to generate isometric torque. Percutaneous tibial nerve stimulation activates tibiotarsal extensor muscles. Repeated eccentric (lengthening) 
contractions are induced in the tibiotarsal flexor muscles by percutaneous peroneal nerve stimulation. The eccentric protocol consists of an initial isometric contraction 
followed by a forced stretch imposed by the servomotor. The rotation effectively lengthens the muscle while it contracts, e.g., an eccentric contraction. During 
stimulation flexor muscles are subjected to an 800 msec isometric and 200 msec eccentric contraction. This procedure is repeated every 5 sec. To avoid fatigue, 4 min rest 
follows every 10 contractions with a total of 30 contractions performed.

In Vivo Canine Muscle Function Assay

We describe a minimally-invasive and painless method to measure canine hindlimb muscle strength and muscle response to repeated eccentric contractions.

Vivo Köpek Kas Fonksiyon Testi

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases in children and adults. These antibodies have been used to guide diagnosis and treatment. Cell-based assays have improved the detection of antibodies in patient serum. They are based on the surface expression of brain antigens on eukaryotic cells, which are then incubated with diluted patient sera followed by fluorochrome-conjugated secondary antibodies. After washing, secondary antibody binding is then analyzed by flow cytometry. Our group has developed a high-throughput flow cytometry live cell-based assay to reliably detect antibodies against specific neurotransmitter receptors. This flow cytometry method is straight forward, quantitative, efficient, and the use of a high-throughput sampler system allows for large patient cohorts to be easily assayed in a short space of time. Additionally, this cell-based assay can be easily adapted to detect antibodies to many different antigenic targets, both from the central nervous system and periphery. Discovering additional novel antibody biomarkers will enable prompt and accurate diagnosis and improve treatment of immune-mediated disorders.

Over the recent years, live cell-based assays have been used successfully to detect antibodies against surface and conformational antigens. Here, we describe a method using high-throughput flow cytometry enabling the analysis of large cohorts of patients. Detection of novel antibodies will improve diagnosis and treatment of immune-mediated disorders.

İnsan Serum içinde N-metil-D-aspartat reseptör ya da dopamin-2 reseptör antikorları algılamak üzere yüksek verimli Flow Cytometry hücre bazlı bir deneyde

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality DNA. However, DNA extraction from saliva can yield high quality DNA with little to no degradation/fragmentation that is suitable for a variety of DNA assays without the expense of a phlebotomist and can even be acquired through the mail. However, at present, no saliva DNA collection/extraction protocols for next generation sequencing have been presented in the literature. This protocol optimizes parameters of saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for DNA assays with the highest standards, including microarray genotyping and next generation sequencing.

DNA extraction from saliva can provide a readily available source of high molecular weight DNA, with little to no degradation/fragmentation. This protocol provides optimized parameters for saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for downstream DNA assays with high quality requirements.

Yeni Nesil dizinleri için Toplama ve Tükrük DNA çıkarımı

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow reserve (CFR) in humans. Reduced CFR is accompanied by marked intramyocardial and pericoronary fibrosis and is used as an indication of the severity of dysfunction. This study explores, step-by-step, the real-time changes measured in the coronary flow velocity, CFR and systolic to diastolic peak velocity (S/D) ratio in the setting of an aortic banding model in mice. By using a Doppler transthoracic imaging technique that yields reproducible and reliable data, the method assesses changes in flow in the septal coronary artery (SCA), for a period of over two weeks in mice, that previously either underwent aortic banding or thoracotomy. 
During imaging, hyperemia in all mice was induced by isoflurane, an anesthetic that increased coronary flow velocity when compared with resting flow. All images were acquired by a single imager. Two ratios, (1) CFR, the ratio between hyperemic and baseline flow velocities, and (2) systolic (S) to diastolic (D) flow were determined, using a proprietary software and by two independent observers. Importantly, the observed changes in coronary flow preceded LV dysfunction as evidenced by normal LV mass and fractional shortening (FS). 
The method was benchmarked against the current gold standard of coronary assessment, histopathology. The latter technique showed clear pathologic changes in the coronary artery in the form of peri-coronary fibrosis that correlated to the flow changes as assessed by echocardiography. 
The study underscores the value of using a non-invasive technique to monitor coronary circulation in mouse hearts. The method minimizes redundant use of research animals and demonstrates that advanced ultrasound-based indices, such as CFR and S/D ratios, can serve as viable diagnostic tools in a variety of investigational protocols including drug studies and the study of genetically modified strains.

Coronary flow reserve (CFR) is useful for assessment of myocardial oxygen demand and evaluation of cardiovascular risk. This study establishes a step-by-step transthoracic Doppler echocardiographic (TTDE) method for longitudinal monitoring of the changes in CFR, as measured from coronary artery in mice, under the experimental pressure overload of aortic banding.

Farelerde Basınç Aşırı Modeli Koroner Arter Akış ve Koroner Akım Rezervi Ultrason Dayalı Değerlendirme

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and well tolerated technique. The Weil-Blakesley conchotome has a sharp biting tip with a 4 - 6 mm wide hollow. It is inserted through a 5 - 10 mm skin incision and can be maneuvered for controlled tissue penetration. The tip is opened and closed within the tissue and then rotated through 90 -180&#176; to cut the muscle. The amount of muscle obtained following repeated sampling can vary from 20 mg to 290 mg which can be processed for both histology and molecular studies. The wound needs to be kept dry and vigorous physical activity kept to a minimum for approximately 72 hr although normal levels of activity can restart immediately following the procedure. This procedure is safe and effective when close attention is paid to the selection of subjects, full asepsis and post procedure care. &#160;Both right and left vastus lateralis are suitable for biopsy dependent on participant preference.

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

This video demonstrates the technique of percutaneous muscle biopsy of the human vastus lateralis using the Weil-Blakesley conchotome.

İnsan<em&gt; Vastus lateralis</em&gt; Weil-Blakesley Conchotome kullanılması İskelet Kası Biyopsi

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Aort Kalsifikasyon ve Enflamasyon Vasküler düz kas hücrelerinin ve Görüntüleme Kalsifikasyon

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed in mice is high. Phenotypic characterization of these mouse models also requires the examination of cardiac function and morphology. Echocardiography and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used approaches to characterize cardiac function and morphology in mice. Echocardiographic and MRI equipment specialized for use in small rodents is&#160;expensive and requires a dedicated space. This protocol describes cardiac measurements in mice using a clinical echocardiographic system with a 15 MHz human vascular probe. Measurements are performed on anesthetized adult mice. At least three image sequences are recorded and analyzed for each animal in M-mode in the parasternal short-axis view. Afterwards, cardiac histological examination is performed, and cardiomyocyte diameters are determined on hematoxylin-eosin- or wheat germ agglutinin (WGA)-stained paraffin sections. Vessel density is determined morphometrically after Pecam-1 immunostaining. The protocol has been applied successfully to pharmacological studies and different genetic animal models under baseline conditions, as well as after experimental myocardial infarction by the permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD). In our experience, echocardiographic investigation is limited to anesthetized animals and is feasible in adult mice weighing at least 25 g.

Echocardiographic examination is frequently used in mice. Expensive high-resolution ultrasound devices have been developed for this purpose. This protocol describes an affordable echocardiographic procedure combined with histological morphometric analyses to determine cardiac morphology.

Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...