We thank James Maeda and Aaron Cooke for assistance with the filming and editing of this video. Funding was provided by the National Science Foundation (OCE-0550468, 1029515).

NOT: Bu protokolün 3. Adım omurgalı hayvan denekleri içerir. Prosedür hayvanlar mümkün olan en insancıl tedavi böylece dizayn edilmiştir ve Kuzey Carolina Wilmington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1) Doku Ekstraksiyon <ol><li> Bu ikincil metabolitlerin hacimsel konsantrasyonunu değiştirecek gibi hidrasyon ve sıkılmış, kurutulmuş-out veya aşırı ıslak doğal haliyle olduğu doku kullanın. Kesilmiş veya 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içine sokulabilir parçaları veya dilimleri için doku kıyılır. Not: Taze doku bazı durumlarda kullanılabilir, ancak, cut sıkma tabi değildir dondurulmuş doku, kesme veya kesmek için, genellikle daha iyidir. </li><li> Bir 1 30 ml doku parçaları ekleyin: 40 ml&#39;lik bir son hacme kadar dereceli bir santrifüj tüpüne 1 diklorometan (DKM) ve metanol (MeOH) ulaşılır. Transfer ile ilgili tüm adımları doğru yaptığınızdan emin olunYeterli havalandırma ile bir davlumbaz içinde solvent. </li><li> Tüp kap ve bunu birkaç kez ters, sonra 4 saat çıkarma döneminde art arda çalkalayın. Not: Bu süre içinde, su, MeOH ile birleştirilir ve elde edilen MeOH: su fazı DCM fazı ayrılır. doku alternatif olarak DCM ile MeOH maruz: su bir emülsiyon halinde tüpleri çalkalanır gibidir. </li><li> Yuvarlak tabanlı bir şişeye DCM özü aktarın ve düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde kuruluğa kadar buharlaşmasına (&lt;40 ° C). En az bir çözücü kullanılarak, bir 20 mL sintilasyon şişesine kurutularak özü aktarın. Bir döner buharlaştırıcı adaptörü ile şişe yerleştirin ve daha düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde kuruluğa kadar buharlaşmasına (&lt;40 ° C). Not: (1) somun (2) yıkayıcı ve (3) palamut somun: Bir sonraki adım, bir dişli çubuğun ucuna sırayla aşağıdaki öğeleri vidalanarak monte edilebilir bir ev yapımı sıkıştırma aracının kullanılmasını gerektirmektedir. yıkayıcı ya delikli olmalı veyabir 50 ml santrifüj tüpüne iç çapından daha küçük olacak şekilde donatılmış olabilir. </li><li> Doku ve MeOH içeren mezun santrifüj tüpüne dönersek: Su özü, sıkıştırma yoluyla doku dışarı çıkarma orta sıkmak. MeOH transfer: Aynı yuvarlak dipli bir şişeye su ekstraktı ve soğutulmuş depolamak (&lt;10 ° C). </li><li> Su ekstraktı: daha sonra, yeni MeOH MeOH ihtiva eden soğutulmuş yuvarlak dipli bir şişeye özü transferi, hemen susuz doku 2-6 saat bir süre için bir ikinci çıkarma için batık kadar dereceli santrifüj tüpüne MeOH ekleyin. Doku tam ekstre edilmediğini herhangi bir endişe varsa, 2 saat 6 MeOH çıkarma tekrarlayın. </li><li> Düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde MeOH kurutun (&lt;40 ° C). Yuvarlak tabanlı bir şişeye yıkamak için MeOH, minimal hacim ile yıkandı, kurutuldu polar olmayan özü ihtiva eden sintilasyon şişesine yuvarlak dipli bir şişede kalan Sulu ekstraktı aktarın. </li><li> Ebir vakum yoğunlaştırıcısı düşük ısı (&lt;40 ° C) kullanılarak kuruyana dek Sulu ekstraktı Vaporate. sintilasyon şişesi hemen doku içinde 10 ml toplam kuru ham organik özü içerir. , Oksidasyonunu önlemek için N2 gazı ile şişenin üst boşluğunu tahliye sıkı bir şekilde yapışması ve depolamak dondurulmuş (-20 ° C). </li></ol> 2) Gıda Hazırlama <ol><li> Dondurularak kurutulmuş kalamar manto tozu hazırlayın. Not: Squid manto diğer bentik omurgasız ile karşılaştırılabilir, ve 2.2 aşağıdaki alt-etapları bir terkip maddesi olarak kullanılacak olan bir beslenme kaynağı içerir. <ol><li> Sıcak deiyonize (DI) su kalamar mantonun çözülme dondurulmuş halkaları, daha sonra yüksek hızlı karıştırıcı onları püresi. </li><li> Sığ çerez levha ve dondurularak (-20 ° C) üzerine püre kalamar manto ince bir tabaka dökün, daha sonra küçük parçalar halinde liyofilize edilecek dondurulmuş kalamar püresi sayfasını kırmak. </li><li> Fr işletim prosedürleri takip dondurulmuş kalamar manto püresi lyophilizeeeze-kurutucu. </li><li> Bir toz oluşturmak üzere yüksek hızlı bir karıştırıcı içinde kalamar manto püresi liyofilize parçaları toz haline. </li><li> Bir çeker ocak içinde, bir döner un elek toz halinde kalamar manto dökün ve ince ebatlı tozun bir doku büyük boyutta ayrı eleyin. </li><li> Bir yapışmalı kaba ince toz kalamar manto aktarın. Oksitlenmesini önlemek ve dondurulmuş depolama N2 gazı ile kap üst boşluğunu tahliye (-20 ° C). </li></ol></li><li> Gıda karışımı hazırlayın. Not: Gerekirse birden fazla ardışık deneyleri çalıştırırken, o ~ gıda karışımı 100 ml hazırlamak için pratik, ancak bu tarifi daha küçük birimlere ölçekli olabilir. <ol><li> 150 ml&#39;lik bir cam kap içinde, 3 g alginik asit ve Dİ su, 100 ml 5 g dondurulup kurutulmuş kalamar manto bir toz karışımını bir araya getirin. Toz tamamen hidratlanmış ve karışım homojen olana kadar bir kaç dakika için bir microspatula ile kuvvetli bir şekilde karıştırın. Arzu edildiği takdirde, gıda boyası bu st ilave edilebilir: Notep: daha ziyade ekleyerek özü ile tedavi edilen karışımın rengi maç çalışırken daha (özü ile tedavi edilen karışımda özü doğal pigment maskeleme) hem tedavi ve kontrol karışımları üretecek gıda karışıma boya eklemek için kolay Kontrol karışımına boya. Yeşilimtırak veya kahverengimsi gıda boyası ham ekstre herhangi bir pigment maskelemek için genellikle arzu edilir. </li><li> Bir dereceli enjektöre gıda karışımı tam 10 ml yükleyin. Bu işlem sırasında hava kabarcıklarının oluşumunu önlemek için dikkat edin. </li><li> Dondurucu kuru ham organik ekstre 20 ml sintilasyon flakonu çıkarın. Bir damla ekleme veya MeOH iki, daha sonra bir microspatula homojen bir karışım halinde özü karıştırın. </li><li> 20 mi sintilasyon şişesine içine gıda matris yüklenen 10 ml şırınga çıkarma ve ekstre ile muamele edilmiş gıda karışımı homojenleştirmek için bir microspatula ile karıştırın. R, sonra bu küçük artışlarla (yani şırıngayı çıkarmak için yardımcı olabilir 2 ml çıkarmak ve homojenize:. Not10 ml kadar EPEAT) homojenize edilmiştir. </li></ol></li><li> Tahlil pelet hazırlayın. <ol><li> Bir şırınga içine ekstre karışımı (~ 1 mi) içindeki bir çok küçük bir hacim yük ve 0.25 M CaCI2 çözeltisi içinde bir şırınga ucunu daldırın. Uzun, spagetti benzeri lifi oluşturmak üzere şırınga içeriğini çıkarın. </li><li> Birkaç dakika sonra, daha sonra, bir jilet ile bir cam kesme tahtası üzerinde 4 mm uzunluğunda pelet içine doğrayın, sertleştirilmiş iplikçik kaldırmak deniz suyu ile durulayın. </li><li> Tekrar kontrol pelet yapma doku özü dahil edilmeden 2.3.1 ve 2.3.2 adımları. Çözücü, eşdeğer hacimde kontrol pelet tedavisi için emin olun çözücü ilave kontrol etmek için (adım 2.2.3 tedavi karışımına MeOH ilave bakınız). Negatif kontrol, bu deney, balık besleme vazgeçirtecek teyid 2 mg ml bir konsantrasyonda denatonyum benzoat ilave -1 işlenmemiş gıda karışımına 27 isteniyorsa. </li></ol></li></ol> 3) LezzetBiyoanalizler <ol><li> Vahşi yakalanmış sarı-fazlı bluehead wrasse, Thalassoma bifasciatum ile beslenme deneyleri gerçekleştirmek, laboratuvar akvaryumlarda opak taraflı bölümlerinde üçlü gruplar halinde tutulur. </li><li> Bir lastik ampul ile bir cam pipet kullanarak deniz suyu bir bardağa gıda pelet sunun. Not: Bu şekilde yiyecek almak için balık yetiştirmek için birkaç gün sürebilir. Gıda teslim önündeki bir klima uyaran (akvaryum camına pipet gibi birkaç musluklar) gıda pelet eklenmesini beklemek balık yetiştirmek için yararlı olabilir. </li><li> Pelet Puanlama. Kolayca balık tarafından tüketilen eğer bir pelet kabul düşünün. Onların ağız boşluğuna almak için bir veya daha fazla balık üç girişimleri en az sonra yenen değilse bir pelet reddetti düşünün, pelet yaklaştı ve böyle bir denemeden sonra göz ardı edilir ya da eğer. </li><li> Skor örnekleri. Not: Tahlil prosedürü Şekil 1&#39;de bir akış şeması olarak tasvir edilir yemek reddediyorum balık Grupları.protokolünde herhangi bir aşamada kontrol pelet daha kabul edilmez. Tahlil tek bir vadede iki potansiyel sonuçları vardır: Örnek kabul veya red edilir ya. <ol><li> Balık grubu kooperatif olduğunu doğrulamak için bir kontrol pelet ile başlayın. Tedavi edilen bir pelet teklif. Balık tedavi pelet kabul ederseniz kabul edilen, örnek puan. Balık tedavi pelet reddederseniz, balık besleme durdurdu olup olmadığını belirlemek için bir sonraki kontrol pelet sunuyoruz. Balık sonraki kontrol pelet kabul ederseniz reddedilmiş gibi, örnek puan. </li></ol></li><li> Çoğaltma. Her ekstresi için balık on bağımsız gruplar ile tahlil işlemi tekrarlayın. </li></ol> 4) değerlendirilmesi Önemi <ol><li> Fisher testi 26 değiştirilmiş bir versiyonu ile tedavi pelet vs kontrol tüketimi farklılıkların önemini değerlendirir. Kontrolü için marjinal toplamları ve tedavi pelet sabit böylece testi değiştirinOnlara hem de rastgele örnekler tedavi. Not: Bu p = 0.057 sağlar 7 pelet yemiş zaman; 7 veya daha fazla pelet yenir eğer dolayısıyla, herhangi bir özü 6 veya daha az pelet yenir eğer caydırıcı kabul ve lezzetli olduğunu. </li><li> Ekstrelerinin gruplar arasında nispi lezzetini karşılaştırmak için, her grup içinde yenen pelet ortalama sayısını hesaplamak. Pelet ortalama sayısı + yenirse o kadar çoğaltmak özler bir grup caydırıcı olarak kabul edilir 6 pelet eşiği tutun standart hata (SE) ≤6. Not: temsilcisi sonuçları, grup atama türdür, yani çoğaltmak özler farklı bireylerden gelen ve göreli lezzet türler arasında karşılaştırılabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Paul, V. J., ed, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological roles of marine natural products. , (1992).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+invertebrate+chemical+defenses.">Marine invertebrate chemical defenses.</a> Chemical Reviews. 93 (5), 1911 (1993).</li><li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+chemical+ecology:+what&#39;s+known+and+what&#39;s+next.">Marine chemical ecology: what&#39;s known and what&#39;s next.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).</li><li>McClintock, J. B., Baker, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Marine Chemical Ecology. , (2001).</li><li>Amsler, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Algal Chemical Ecology. , (2008).</li><li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+chemical+ecology:+Chemical+signals+and+cues+structure+marine+populations,+communities,+and+ecosystems.">Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems.</a> Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+ecology+of+sponges+on+Caribbean+reefs:+Natural+products+shape+natural+systems.">The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems.</a> BioScience. 61 (11), 888 (2011).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antipredatory+Defensive+Roles+of+Natural+Products+from+Marine+Invertebrates.">Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates.</a> Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).</li><li>Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+Chemical+Ecology:+A+Science+Born+of+Scuba.+.">Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. .</a> Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).</li><li>Randall, J. E., Hartman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sponge-feeding+fishes+of+the+West+Indies.">Sponge-feeding fishes of the West Indies.</a> Marine Biology. 1, 216-225 (1968).</li><li>Bakus, G. J., Green, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+in+sponges+and+holothurians+&#8212;+geographic+pattern.">Toxicity in sponges and holothurians &#8212; geographic pattern.</a> Science. 185, 951-953 (1974).</li><li>Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish.+1.+Chemical+deterrency.">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency.</a> Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).</li><li>Schulte, B. A., Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+deterrence+in+marine+sponges+&#8212;+laboratory+versus+field+studies.">Predation deterrence in marine sponges &#8212; laboratory versus field studies.</a> Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).</li><li>Jackson, J. B. C., Buss, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allelopathy+and+spatial+competition+among+coral+reef+invertebrates.">Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).</li><li>Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+mechanisms+on+the+great+barrier+reef.">Chemical defense mechanisms on the great barrier reef.</a> Australia. Science. 211, 497-499 (1981).</li><li>Gemballa, S., Schermutzki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+haplosclerid+sponges+preferred:+a+field+study+on+the+diet+of+the+dotted+sea+slug+Peltodoris+atromaculata+(doridoidea:+nudibranchia).">Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia).</a> Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).</li><li>Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relating+species+traits+to+environmental+variables+in+Indonesian+coral+reef+sponge+assemblages.">Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages.</a> Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).</li><li>Mollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+promoting+marine+invasions:+a+chemolecological+approach.">Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).</li><li>Randall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+habits+of+reef+fishes+of+the+West+Indies.">Food habits of reef fishes of the West Indies.</a> Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).</li><li>O'Neal, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reappraisal+of+the+chemical+and+physical+defenses+of+Caribbean+gorgonian+corals+against+predatory+fishes.">A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes.</a> Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).</li><li>Hines, D. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+antipredatory+defensive+strategies+of+Caribbean+non-scleractinian+zoantharians+(Cnidaria):+is+the+sting+the+only+thing.">Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing.</a> Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).</li><li>Walters, K. D., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+there+a+trade-off+between+wound-healing+and+chemical+defenses+among+Caribbean+reef+sponges.">Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges.</a> Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).</li><li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+resource+trade-off+between+growth+and+chemical+defenses+among+Caribbean+coral+reef+sponges.">Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges.</a> Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).</li><li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+reproductive+patterns+among+7+Caribbean+sponge+species+does+not+reveal+a+resource+trade-off+with+chemical+defenses.">Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).</li><li>Pawlik, J. R., Loh, T. -. L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sponge+Communities+on+Caribbean+Coral+Reefs+Are+Structured+by+Factors+That+Are+Top-Down,+Not+Bottom-Up.">Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up.</a> PLoS ONE. 8 (5), e62573 (2013).</li><li>Loh, T. -. L., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defenses+and+resource+trade-offs+structure+sponge+communities+on+Caribbean+coral+reefs.">Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).</li><li>Miller, A. M., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+coral+reef+fish+learn+to+avoid+unpalatable+prey+using+visual+cues.">Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues.</a> Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).</li><li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+re-evaluation+of+the+ichthyodeterrent+role+of+prostaglandins+in+the+Caribbean+gorgonian+coral,+Plexaura+homomalla.">A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla.</a> Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).</li><li>Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensive+properties+of+secondary+metabolites+from+the+Caribbean+gorgonian+coral+Erythropodium+caribaeorum.">Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum.</a> Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).</li><li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+Pterogorgia+anceps,+a+Caribbean+gorgonian+coral.">Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral.</a> Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+skeleton+of+a+sponge+provide+a+defense+against+predatory+reef+fish.">Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish.</a> Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+the+Caribbean+sponge+Agelas+clathrodes+(Schmidt).">Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt).</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).</li><li>Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+the+Caribbean+reef+sponge+Axinella+corrugata+against+predatory+fishes.">Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes.</a> Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish+II.+Spicules,+tissue+toughness,+and+nutritional+quality.">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality.</a> Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).</li><li>Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphitoxin,+a+new+high+molecular+weight+antifeedant+pyridinium+salt+from+the+Caribbean+sponge+Amphimedon+compressa.">Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa.</a> Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).</li><li>Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., K&#246;ck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).</li><li>Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+antifeedant+triterpene+glycosides+from+the+Caribbean+sponge+Erylus+Formosus.">New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus.</a> Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).</li><li>Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+odor+from+sponges+of+the+genus+Ircinia+protect+them+from+fish+predators.">Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators.</a> Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).</li><li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+I.+Assays+with+hermit+crabs.">Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).</li><li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defense+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+II.+Assays+with+sea+stars.">Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).</li><li>Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+anti-predatory+defenses+of+Red+Sea+and+Caribbean+sponges.+I.+Chemical+defense.">Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense.</a> Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).</li><li>Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+defensive+synergy+in+Caribbean+sponges:+Bad+taste+or+glass+spicules.">Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67 (2005).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Burada tarif edilen prosedür, deniz organizmalarında antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için nispeten basit ve ekolojik olarak uygun laboratuar protokolü sağlar. Burada yöntemler bu set ile memnun olan önemli kriterleri gözden: (1) Uygun yırtıcı. Bu beslenme deneyi bluehead akya, Thalassoma bifasciatum, Karayipler genelinde mercan resifleri üzerinde en bol balıklar birini kullanır. bluehead bentik omurgasızlar 19 geniş bir ürün yelpazesine örnek bilinen bir kültürlü etobur olduğunu. Genelci yırtıcı resifleri üzerinde yırtıcı balıkların çoğunluğu pratisyen çünkü bu ilk tahliller için en iyi seçimdir, ve savunma aşmak için mekanizmalar evrimleşmiş olabilir uzman predatör aksine antipredatory savunmalar geniş, onlara karşı yönlendirilmiş olacağını beklenir. Tek bir potansiyel yırtıcı kullanılarak kimyasal savunma laboratuvar araştırmaları vardırOn saha koşullarında 28-33 potansiyel yırtıcı tam bir tamamlayıcı yanıtları güveniyor fazla zaman alıcı ve karmaşık alan deneyleri izledi. (2) ekstraksiyon prosedürü., Eşit parça diklorometan (DKM) ve metanol (MeOH), bir çözücü madde karışımı kullanılır hızla membranlar çözündürücü ve hücresel malzemenin suyunun sıkılması, doku nüfuz ilk doku çıkarma aşaması. Doku Bu adımdan sonra susuz olduğunu, bu nedenle sonraki adımlar MeOH tüm kutupları kalan metabolitleri ayıklamak. Tam ekstre edilir doku kapsamlı bir ekstraksiyon prosedürü teşkil kadar MeOH çıkarma tekrarlamak. Bu ekstre düzeni küçük varyasyonlar, örneğin, aynı polaritede bir başka için, bir özütleme çözücüsü ikame olarak kabul edilebilir, ancak uygun olmayan bir çözücü kullanıldığı takdirde, doku çıkarma eksik olabilir. Yanlış doku çıkarma prosedürlerinin potansiyel tuzaklar başka ayrıntılı olarak ele alınmıştır &lt;sup&gt; 8. (3) Deneysel gıda hazırlanması. Yapay gıda matris besin kalitesi ve ikincil metabolitlerin konsantrasyonu hem de hedef organizmanın doku taklit gerekir. Bu yırtıcı besleme-caydırıcı metabolitleri reddetmek için kullandığınız aynı duyusal süreçler de gıdaların besin kalitesi algılamasında rol olasıdır. Düşük besin kalitesi ile Gıdalar kimyasal savunma çok daha düşük seviyelerde reddedilebilir ve bu metabolitler dokuya göre daha besleyici bir yapay gıda sunulmaktadır eğer tersine, sekonder metabolitler, sadece daha yüksek doğal konsantrasyonlarda caydırıcı olabilir hangi Bu elde edilmiştir. Ölçmek kolay, hazır, çünkü Toz, dondurularak kurutulmuş kalamar manto yararlı bir besin yerini tutamaz, ve besin özellikleri zaten 34 tespit edilmiştir. hazırlanmasındaki ikinci husus<html> Deneysel Gıda hacmi değil, kitle bazında yapılmalıdır özü konsantrasyonu, belirlenmesini ilgilidir. Predators ıslak mendil yemek ve deniz organizmalarının dokular su içeriği büyük ölçüde değişmektedir. Bir avcı açısından bakıldığında, bir denizanası ya da deniz anemon bir lokma, bir kalamar ya da deniz salyangozu aynı büyüklükte ısırık daha birim kuru kütle başına önemli ölçüde daha fazla su ihtiva edecektir. Yüksek hidratlı dokuları, birim kuru kütle başına metabolitin konsantrasyonu birim hacmi başına çok daha yüksek olduğu, ancak hacim (sokması) ekolojik açıdan uygun bir ölçüsüdür. Ayrıca, deniz organizmalarının dokular nedeniyle maden iskelet elemanlarının çok farklı yoğunluklarına sahip olabilir. Hacimce metabolit konsantrasyonunun belirlenmesi hem sorunları çözer ve potansiyel avcı tarafından dokusunun tüketimi açısından en uygun ölçüdür. Literatürden örnekler de dahil olmak üzere bu konu, detaylı başka 8 tartışılmıştır. .. İçerik &quot;&gt; (4) Deneysel tasarım ve istatistiksel bir yaklaşım uygun deneysel tasarım ve verilerin istatistiksel analizleri, deneysel sonuçların farklılıkların önemini belirleyen içerir başka bir bilimsel araştırma gibi davranışsal tahliller için önemli olan burada açıklanan analiz basit: farklılıklar modifiye kontenjan tablosu ile belirlenir. yöntem tüm kontrol gıda teklifleri araştırmacı kontrol gıdalar 8 beslenen değil, deneysel yırtıcı kullanarak olmaz çünkü tüketilen gerektirir. Fisher&#39;in kesin testi kullanımı ilk değiştirilmiş olmasına rağmen Pawlik tarafından kullanımı ve ark. 12, yemiş 6 tedavi pelet eşik değeri değişmeden kalır. Yıllar geçtikçe, diğer istatistiksel testler ikame olarak önerilen, ancak işbirlikçi James E. Blum (Matematik ve İstatistik Bölümü UNCW ile görüştükten sonra iptal edildi ). Örneğin, McNemar testi öne sürülmüştür,bu verilerin bir eşleştirilmiş dizi yoksun, ve acil tablonun bir satır 10 kontrol pelet sabit çünkü yemiş hem çünkü, uygun değildir. Bu deney yöntemi oldukça net sonuçlar sağlar bizim deneyim rağmen, yine de bir davranış tepkisi üzerine dayanır. Balık analizden önce bir süre aç bırakıldı, bunlar daha çok muamele edilmiş peletler balık savunma metabolit aktivitesi yakın bir eşik konsantrasyonu tedavi edilen gıda pelet içinde mevcut olan, özellikle çok iyi beslenen halinde elde edileceğinden daha harcayabilir. Bu nedenlerden dolayı, besleme deneylerin sonuçları aşırı yorumlanmamalıdır. Örneğin, yemiş 1/10 9/10 vs pelet iki doku örneklerinin arasında bir fark ilk örnek caydırıcı ve ikinci değil, ancak yemiş 3/10 5/10 vs pelet fark davranışsal değişim nedeniyle olabilir gösterir deneyleri, ilk numune arasındaki mutlaka saniyeden daha fazla caydırıcı değil. Önemli bir ApplicatBu biyo-deney iyon ham ekstre ardışık bölümler besleme-caydırıcı aktivitesi 29,32-33,35-38 sorumlu olan kimyasal bileşikleri izole etmek için balık test edilir, böylece biyo-deney kılavuzlu fraksiyonasyon bölgesi kullanımıdır. Bir kimyasal savunma varlığı tespit edildikten sonra, ham organik özüt kromatografik karışımı oluşturan bileşiklerin küçük alt-grup halinde parçalandı ve bu alt-gruplar aynı besleme deneyinde balık beslenir. Yine, bu doku özü ziyade kitlesel eşdeğer &quot;ml&#39;lik eşdeğer&quot; seçeneğini kullanarak, bir hacimsel olarak yapılmalıdır. 4 × 2 × ve 1 ×: ayırma ilerledikçe, kesirler en iyi doğal hacimsel konsantrasyonuna bir seri seyreltme göreceli olarak analiz edilir. Konsantrasyonlarının, açıklık dikkate iki veya daha fazla kromatografik fraksiyonları üzerinde ya da aktif metabolitler kaybı Throu aktif metabolitleri bölme gelen caydırıcı aktivitesinde olası bir azalma alırgh ayrışma, reaksiyon, veya ek medya kromatografik. Aktif metabolitler bioassay-güdümlü fraksiyonlaşması ile izole edildikten sonra, araştırmacı, standart spektroskopik teknikleri kullanarak bunları tespit edebilir ve aynı zamanda ikincil metabolitleri olabilir inaktif kesirler için aynı şeyi yapmalı. Bu 8 değil hangi metabolitleri bilmek gibi ekolojik ilgili deneylerde aktif ikincil metabolitler hangi bilmek aynı derecede önemlidir. Bu prosedürün elemanları yeni deneysel teknikler tasarlamak için de kullanılabilir. Örneğin, bu biyoanaliz (örn yapısal savunmaları 31,34,42 ve aposematism 27), diğer coğrafi bölgelere 41, (örneğin 39 ve 40 Seastars yengeçler) omurgasız yırtıcılar için uyarlandı, ve hatta diğer araştırma soruları için. Dört kriter bu yöntemin gelecekte uyarlamaları için bir rehber olarak hizmet etmelidir. Özet olarak, bu biyodeney prosedürü PRdeniz organizmalarının dokulardan antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için daha ekolojik ilgili yöntem ovides. Bu yordamı kullanarak çalışmalar Karayip mercan resifleri (örneğin en son, Loh ve Pawlik 26) farmakoloji, biyoteknoloji dahil olmak üzere soruşturma çeşitli alanlarda, ve bilgilendirebilir araştırmalar ve üzerine dağılımını ve deniz omurgasız bereket kontrol faktörleri anlayışımızı gelişmiş evrimsel ekoloji.

Kimyasal ekoloji kimyagerler ve ekolojist işbirliği ile geliştirdi. Karasal kimyasal ekoloji subdiscipline bir süre için yaklaşık edilmiş olsa da, deniz kimyasal ekoloji sadece bir kaç yıl eski ama deniz organizmalarının 1-8 evrimsel ekoloji ve toplum yapısına önemli bilgiler sağlamıştır. Aletli dalış ve NMR spektroskopisi acil teknolojileri yararlanan, organik kimyacılar hızla 1970&#39;lerde ve 1980&#39;lerde 9 bentik omurgasız deniz ve yosun gelen yeni metabolitleri anlatan yayınların çok sayıda üretti. Sekonder metabolitler ampirik kanıt olmadan yeni bileşikler ekolojik önemli özellikleri atfedilen bu yayınların çoğu bazı amaca hizmet etmelidir varsayarsak. Hakkında aynı zamanda, ekolojistler de dağılımları ve daha önce sağa sola bilinen bentik hayvanların ve bitkilerin zengindi SCUBA dalış gelişiyle yararlanarak ve açıklayan edildiBöyle tarama gibi nispeten etkisiz örnekleme yöntemleri m. Bu araştırmacıların varsayım sesil şey ve yumuşak gövdeli kimyasal avcılardan 10 tarafından tüketimini önlemek için savunulması gerektiğini oldu. Türler bolluk aksi açıklayıcı bir işti ne ampirizmi tanıtmak için bir çaba, bazı ekolojistler toksisite deneyleri 11 kimyasal savunma extrapolating başladı. Çoğu toksisite deneyleri yarım tahlil organizmaları öldürmekten sorumlu özleri kuru kütle konsantrasyonlarının sonraki kararlılıkla, bütün balık veya omurgasız dokuların ham organik özler sulu süspansiyonlar diğer organizmaların poz çıkıyor. Ancak, toksisite deneyleri, potansiyel saldırganları doğal şartlar altında av algıladıkları hangi şekilde taklit değil, ve daha sonraki çalışmalar toksisite ve lezzet 12-13 arasında hiçbir ilişki bulduk. Bu prestijli dergilerde yayınlar çok az ya da hiç Ecologica olan teknikleri kullanılan şaşırtıcıdırl alaka 14-15 ve bu çalışmalar hala yaygın atıf bugün. Bu toksisite verilerine dayalı çalışmalar 16-18 yayınlanmaya devam unutmayın daha da endişe verici olduğunu. Burada açıklanan biyodeney yöntemi antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için deniz kimyasal ekolojistler için bir ekolojik ilgili yaklaşım sağlamak için 1980&#39;lerin sonlarında geliştirilmiştir. yöntem daha ekolojik anlamlı toksisite verilerine göre olan lezzet veri sağlayan, bir beslenme karşılaştırılabilir gıda matrisi içinde doğal bir konsantrasyonda hedef organizmadan bir ham organik özü örnek bir modeli yırtıcı gerektirir. (1) uygun bir kültürlü yırtıcı besleme deneylerinde kullanılabilir olmalıdır, (2) her polarizasyona organik metabolitleri etraflıca dokusundan ekstre edilmelidir: deniz organizmalarının dokuların antipredatory aktivitesinin değerlendirilmesi için genel bir yaklaşım, dört önemli kriterler içerir organizmayı hedef, (3) metabolitleri b gerekirAynı hacimsel konsantrasyonda bir beslenme uygun deneysel gıda içine karışık bir e onlar çıkarıldı, ve (4) deneysel tasarım ve istatistiksel bir yaklaşım anlamlı bir metrik göreceli distastefulness göstermek için sağlaması gerekir hangi organizmada bulunduğu gibi. Aşağıda belirtilen prosedür Karayip deniz omurgasız antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için tasarlanmıştır. Bu tür Karayip mercan resifleri üzerinde yaygındır ve bentik omurgasızlar 19 geniş bir ürün yelpazesine örnek bilinmektedir çünkü bir örnek yırtıcı balık gibi bluehead akya, Thalassoma bifasciatum, istihdam. Hedef organizmadan alınan dokular, ilk önce, ekstre bir gıda karışımı ile bir araya getirilmiş ve son olarak T. gruplarına sunulmaktadır bifasciatum onlar özü ile tedavi edilen gıdalar reddetmek olmadığını gözlemlemek için. Bu yöntemi kullanarak tahlil verileri deniz organizmalarının 12,20-21, l savunma kimya önemli bilgiler sağladıife geçmişi ticaret-off 22-24, ve toplum ekolojisi 25-26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D37-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A41220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhydrous Calcium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C614-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryocool Heat Transfer Fluid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>20-548-146</td>
			<td>For vacuum concentrator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic Acid Sodium Salt High Viscosity</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>154723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Squid mantle rings</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Can be purchased at grocery store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denatonium benzoate</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>D5765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml graduated centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 ml scintillation vial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bulbs for Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red bulbs for pellet delivery</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 ml round-bottom flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-067E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation vial adapter for rotavap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>K747130-1324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weightboats</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21-401-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml graduated syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-817-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml graduated syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-817-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S17302</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a fish-feeding laboratory bioassay to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with the goal of examining the ecological functions of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. The result has been a progression of protocols that have increasingly refined the ecological relevance of the experimental approach. Here we present the most up-to-date version of a fish-feeding laboratory bioassay that enables investigators to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. Organic metabolites of all polarities are exhaustively extracted from the tissue of the target organism and reconstituted at natural concentrations in a nutritionally appropriate food matrix. Experimental food pellets are presented to a generalist predator in laboratory feeding assays to assess the antipredatory activity of the extract. The procedure described herein uses the bluehead, Thalassoma bifasciatum, to test the palatability of Caribbean marine invertebrates; however, the design may be readily adapted to other systems. Results obtained using this laboratory assay are an important prelude to field experiments that rely on the feeding responses of a full complement of potential predators. Additionally, this bioassay can be used to direct the isolation of feeding-deterrent metabolites through bioassay-guided fractionation. This feeding bioassay has advanced our understanding of the factors that control the distribution and abundance of marine invertebrates on Caribbean coral reefs and may inform investigations in diverse fields of inquiry, including pharmacology, biotechnology, and evolutionary ecology.

Burada ortak Karayip sünger altı türün (Şekil 2) Bu biyoassay sonuçlarını rapor. Bu veriler başlangıçta Pawlik ark. 12 tarafından 1995 yılında yayınlanan ve ortak meydana takson arasında kimyasal savunma stratejileri farklılıkları araştırmak için bu yaklaşımın gücünü göstermek edildi. Sonuçlar standart hata (SE) her tür için + yemiş gıda pelet ortalama sayısı olarak rapor edilmiştir. Hemen hemen hiç peletler Agelas clathrodes, Amphimedon compressa ve Aplysina cauliformis ham organik ekstraktlar deneylerde yenilmiştir. Buna karşılık, Callyspongia vaginalis, Geodia gibberosa ve Mycale laevis&#39;ten özleri ile yapılan topaklar kolayca tahlil 12 tüketilen bulundu. En az altı pelet ilk üç tür için yemiş, bu yüzden onlar üzerinde önemli caydırıcı edildi. Buna karşılık, ikinci üç tür kontrollerden anlamlı farklı değildi, ve vardılezzetli kabul. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52429/52429fig1.jpg" /> Şekil 1:. Tahlil prosedürünün şematik bütün aşamalarında, bir kontrol pelet reddi tahlil balık bu seti yapmayan veya tok ve daha fazla kullanılamaz gösterir. protokol tedavi pelet ardından balık bir kontrol pelet her kümesi sunarak başlar. Kabul edilen Sonraki tedavi pelet kabul edilirse örnek atılırsa. Tedavi pelet reddedilir ancak sonraki kontrol pelet kabul edilirse reddedilmiş gibi, örnek atılırsa. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52429/52429fig2.jpg" /> Şekil 2: Gıda pelet Thalassoma bifasciatum tarafından Tüketim ilk Pawlik tarafından 1995 yılında bildirilen doğal konsantrasyonlarda sünger ham organik özler içeren (SE + ortalama) <em&gt; ve ark. 12 Balık tüm durumlarda 10 kontrol pelet tüketilen. Her tür adından sonra, çoğaltmak numune sayısı (her sünger doku coğrafi ayrı numunenin ayrı çıkarılmasından çoğaltmak) belirtilir. Grafikteki noktalı çizgi ile gösterildiği gibi, herhangi bir birey tahlili için, ekstreler yemiş pelet sayısı daha az ya da 6 eşit ise (p = 0.057, Fisher kesinlik testi değiştirilmiş) caydırıcı kabul edildi.

Watch this Scientific Journal Video about A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms at JoVE.com

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Bu biyo-deney, bir besleyici olarak benzer gıda matris kullanılarak, doğal konsantrasyonlarda deniz organizmalarının dokuların Organik özütlerden besleme-caydırıcı metabolitlerinin varlığını değerlendirmek için bir model yırtıcı balık kullanmaktadır.

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

a-fish-feeding-laboratory-bioassay-to-assess-antipredatory-activity

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

9.4K Görüntüleme.  University of North Carolina Wilmington.  Bu biyo-deney, bir besleyici olarak benzer gıda matris kullanılarak, doğal konsantrasyonlarda deniz organizmalarının dokuların Organik özütlerden besleme-caydırıcı metabolitlerinin varlığını değerlendirmek için bir model yırtıcı balık kullanmaktadır. 

Video: A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Unraveling the Unseen Players in the Ocean - A Field Guide to Water Chemistry and Marine Microbiology

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling protocols include the assessment of resources available to the microbial community (dissolved organic carbon, particulate organic matter, inorganic nutrients), and a comprehensive description of the viral and bacterial communities (via direct viral and microbial counts, enumeration of autofluorescent microbes, and construction of viral and microbial metagenomes). We use a combination of methods, which represent a dispersed field of scientific disciplines comprising already established protocols and some of the most recent techniques developed. Especially metagenomic sequencing techniques used for viral and bacterial community characterization, have been established only in recent years, and are thus still subjected to constant improvement. This has led to a variety of sampling and sample processing procedures currently in use. The set of methods presented here provides an up to date approach to collect and process environmental samples. Parameters addressed with these protocols yield the minimum on information essential to characterize and understand the underlying mechanisms of viral and microbial community dynamics. It gives easy to follow guidelines to conduct comprehensive surveys and discusses critical steps and potential caveats pertinent to each technique.

Here, we present a comprehensive protocol to assess the organic and inorganic nutrient availability and the abundance and structure of microbial and viral communities in remote marine environments.

Su Kimya ve Deniz Mikrobiyoloji A Field Guide - Okyanusu&#39;nda gaybı Oyuncular çözülüyor

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling ...

Çevre

A Small Volume Bioassay to Assess Bacterial/Phytoplankton Co-culture Using WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) Fluorometry

Conventional methods for experimental manipulation of microalgae have employed large volumes of culture (20 ml to 5 L), so that the culture can be subsampled throughout the experiment1&#8211;7. Subsampling of large volumes can be problematic for several reasons: 1) it causes variation in the total volume and the surface area:volume ratio of the culture during the experiment; 2) pseudo-replication (i.e., replicate samples from the same treatment flask8) is often employed rather than true replicates (i.e., sampling from replicate treatments); 3) the duration of the experiment is limited by the total volume; and 4) axenic cultures or the usual bacterial microbiota are difficult to maintain during long-term experiments as contamination commonly occurs during subsampling.
The use of microtiter plates enables 1 ml culture volumes to be used for each replicate, with up to 48 separate treatments within a 12.65 x 8.5 x 2.2 cm plate, thereby decreasing the experimental volume and allowing for extensive replication without subsampling any treatment. Additionally, this technique can be modified to fit a variety of experimental formats including: bacterial-algal co-cultures, algal physiology tests, and toxin screening9&#8211;11. Individual wells with an alga, bacterium and/or co-cultures can be sampled for numerous laboratory procedures including, but not limited to: WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) fluorometry, microscopy, bacterial colony forming unit (cfu) counts and flow cytometry. The combination of the microtiter plate format and WATER-PAM fluorometry allows for multiple rapid measurements of photochemical yield and other photochemical parameters with low variability between samples, high reproducibility and avoids the many pitfalls of subsampling a carboy or conical flask over the course of an experiment.

A Small Volume Bioassay to Assess Bacterial/Phytoplankton Co-culture Using WATER-Pulse-Amplitude-Modulated WATER-PAM Fluorometry

The goal of this procedure is to demonstrate the reproducibility and adaptability of using a microtiter plate format for microalgal screening. This rapid screen combines WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) fluorometry to measure photosynthetic yield as an indicator of Photosystem II (PSII) health with small volume bacterial-algal co-cultures.

Küçük Hacim Biyodeneyler SU-Pulse-Genlik Modülasyonlu (SU-PAM) fluorometri Kullanma Bakteriyel / Fitoplankton Co-kültür değerlendirilmesi için

Conventional methods for experimental manipulation of microalgae have employed large volumes of culture (20 ml to 5 L), so that the culture can be ...

Automated Gel Size Selection to Improve the Quality of Next-generation Sequencing Libraries Prepared from Environmental Water Samples

Next-generation sequencing of environmental samples can be challenging because of the variable DNA quantity and quality in these samples. High quality DNA libraries are needed for optimal results from next-generation sequencing. Environmental samples such as water may have low quality and quantities of DNA as well as contaminants that co-precipitate with DNA. The mechanical and enzymatic processes involved in extraction and library preparation may further damage the DNA. Gel size selection enables purification and recovery of DNA fragments of a defined size for sequencing applications. Nevertheless, this task is one of the most time-consuming steps in the DNA library preparation workflow. The protocol described here enables complete automation of agarose gel loading, electrophoretic analysis, and recovery of targeted DNA fragments. 
In this study, we describe a high-throughput approach to prepare high quality DNA libraries from freshwater samples that can be applied also to other environmental samples. We used an indirect approach to concentrate bacterial cells from environmental freshwater samples; DNA was extracted using a commercially available DNA extraction kit, and DNA libraries were prepared using a commercial transposon-based protocol. DNA fragments of 500 to 800 bp were gel size selected using Ranger Technology, an automated electrophoresis workstation. Sequencing of the size-selected DNA libraries demonstrated significant improvements to read length and quality of the sequencing reads.

This manuscript describes an automated gel size selection approach for purifying DNA fragments for next-generation sequencing. The Ranger Technology provides complete automation of the entire process of agarose gel loading, electrophoretic analysis, and recovery of targeted DNA fragments allowing for high-throughput and high quality next-generation sequencing libraries.

Otomatik Jel Boyut Seçimi Çevre Su Örneklerinden hazırlanmıştır nesil Sıralama Kütüphaneler Kalitesi Geliştirmek için

Next-generation sequencing of environmental samples can be challenging because of the variable DNA quantity and quality in these samples. High quality DNA ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and detritus, and excreting particulate and dissolved compounds, they serve as important agents for benthic-pelagic coupling. Accurately measuring the compounds removed and excreted by suspension feeders (such as sponges, ascidians, polychaetes, bivalves) is crucial for the study of their physiology, metabolism, and feeding ecology, and is fundamental to determine the ecological relevance of the nutrient fluxes mediated by these organisms. However, the assessment of the rate by which suspension feeders process particulate and dissolved compounds in nature is restricted by the limitations of the currently available methodologies. Our goal was to develop a simple, reliable, and non-intrusive method that would allow clean and controlled water sampling from a specific point, such as the excurrent aperture of benthic suspension feeders, in situ. Our method allows simultaneous sampling of inhaled and exhaled water of the studied organism by using minute tubes installed on a custom-built manipulator device and carefully positioned inside the exhalant orifice of the sampled organism. Piercing a septum on the collecting vessel with a syringe needle attached to the distal end of each tube allows the external pressure to slowly force the sampled water into the vessel through the sampling tube. The slow and controlled sampling rate allows integrating the inherent patchiness in the water while ensuring contamination free sampling. We provide recommendations for the most suitable filtering devices, collection vessel, and storing procedures for the analyses of different particulate and dissolved compounds. The VacuSIP system offers a reliable method for the quantification of undisturbed suspension feeder metabolism in natural conditions that is cheap and easy to learn and apply to assess the physiology and functional role of filter feeders in different ecosystems.

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

We introduce the VacuSIP, a simple, non-intrusive, and reliable method for clean and accurate point sampling of water. The system was developed and evaluated for the simultaneous collection of the water inhaled and exhaled by benthic suspension feeders in situ, to cleanly measure removal and excretion of particulate and dissolved compounds.

VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için<em&gt; In Situ</em&gt; Partikül Ölçümü ve Çözünmüş bileşikler Aktif Süspansiyon besleme üniteleri İşlenmiş

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Laboratory Simulation of an Iron(II)-rich Precambrian Marine Upwelling System to Explore the Growth of Photosynthetic Bacteria

A conventional concept for the deposition of some Precambrian Banded Iron Formations (BIF) proceeds on the assumption that ferrous iron [Fe(II)] upwelling from hydrothermal sources in the Precambrian ocean was oxidized by molecular oxygen [O2] produced by cyanobacteria. The oldest BIFs, deposited prior to the Great Oxidation Event (GOE) at about 2.4 billion years (Gy) ago, could have formed by direct oxidation of Fe(II) by anoxygenic photoferrotrophs under anoxic conditions. As a method for testing the geochemical and mineralogical patterns that develop under different biological scenarios, we designed a 40 cm long vertical flow-through column to simulate an anoxic Fe(II)-rich marine upwelling system representative of an ancient ocean on a lab scale. The cylinder was packed with a porous glass bead matrix to stabilize the geochemical gradients, and liquid samples for iron quantification could be taken throughout the water column. Dissolved oxygen was detected non-invasively via optodes from the outside. Results from biotic experiments that involved upwelling fluxes of Fe(II) from the bottom, a distinct light gradient from top, and cyanobacteria present in the water column, show clear evidence for the formation of Fe(III) mineral precipitates and development of a chemocline between Fe(II) and O2. This column allows us to test hypotheses for the formation of the BIFs by culturing cyanobacteria (and in the future photoferrotrophs) under simulated marine Precambrian conditions. Furthermore we hypothesize that our column concept allows for the simulation of various chemical and physical environments &#8212; including shallow marine or lacustrine sediments.

Laboratory Simulation of an IronII-rich Precambrian Marine Upwelling System to Explore the Growth of Photosynthetic Bacteria

We simulated a Precambrian ferruginous marine upwelling system in a lab-scale vertical flow-through column. The goal was to understand how geochemical profiles of O2 and Fe(II) evolve as cyanobacteria produce O2. The results show the establishment of a chemocline due to Fe(II) oxidation by photosynthetically produced O2.

Prekambriyen Deniz upwelling Sistemi Fotosentetik Bakteri Büyüme Keşfet bakımından zengin bir Demir (II) Laboratuar Simülasyonu

A conventional concept for the deposition of some Precambrian Banded Iron Formations (BIF) proceeds on the assumption that ferrous iron [Fe(II)] upwelling ...

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food webs. Toxicity testing based on microorganisms are widely used because they are relatively quick, reproducible, cheap, and are not associated with ethical issues. Here, we describe an ecotoxicological method to evaluate the biological response of the marine bacterium Vibrio anguillarum. This method assesses the acute toxicity of chemical compounds, including new contaminants such as nanoparticles, as well as environmental samples. The endpoint is the reduction of bacterial culturability (i.e., the capability to replicate and form colonies) due to exposure to a toxicant. This reduction can be generally referred to as mortality. The test allows for the determination of the LC50, the concentration that causes a 50% decrease of bacteria actively replicating and forming colonies, after a 6 h exposure. The culturable bacteria are counted in terms of colony forming units (CFU), and the &#34;mortality&#34; is evaluated and compared to the control. In this work, the toxicity of copper sulphate (CuSO4) was evaluated. A clear dose-response relationship was observed, with a mean LC50 of 1.13 mg/L, after three independent tests. This protocol, compared to existing methods with microorganisms, is applicable in a wider range of salinity and has no limitations for colored/turbid samples. It uses saline solution as the exposure medium, avoiding any possible interferences of growth medium with the investigated contaminants. The LC50 calculation facilitates comparisons with other bioassays commonly applied to ecotoxicological assessments of the marine environment.

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

This work describes a new protocol to assess the ecotoxicity of pollutants, including emerging contaminants such as nanomaterials, using the marine bacterium Vibrio anguillarum. This method allows for the determination of the LC50, or mortality, the concentration that causes a 50% decrease in bacteria culturability, after a 6 h exposure.

Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem<emVibrio anguillarum</em&gt; Çevresel Kirleticilerin Akut Zehirliliğini Değerlendirmek

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment during manufacturing and transport. Because of their environmental persistence, they are widely distributed in the oceans and on beaches all over the world. They can act as a vector of potentially toxic organic compounds (e.g., polychlorinated biphenyls) and might consequently negatively affect marine organisms. Their possible impacts along the food chain are not yet well understood. In order to assess the hazards associated with the occurrence of plastic pellets in the marine environment, it is necessary to develop methodologies that allow for rapid determination of associated organic contaminant levels. The present protocol describes the different steps required for sampling resin pellets, analyzing adsorbed organochlorine pesticides (OCPs) and identifying the plastic type. The focus is on the extraction of OCPs from plastic pellets by means of a pressurized fluid extractor (PFE) and on the polymer chemical analysis applying Fourier Transform-InfraRed (FT-IR) spectroscopy. The developed methodology focuses on 11 OCPs and related compounds, including dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) and its two main metabolites, lindane and two production isomers, as well as the two biologically active isomers of technical endosulfan. This protocol constitutes a simple and rapid alternative to existing methodology for evaluating the concentration of organic contaminants adsorbed on plastic pieces.

Microplastics act as vector of potentially toxic organic contaminants with unpredictable effects. This protocol describes an alternative methodology for assessing the levels of organochlorine pesticides adsorbed on plastic pellets and identifying the polymer chemical structure. The focus is on pressurized fluid extraction and attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy.

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Adherence of Bacteria to Plant Surfaces Measured in the Laboratory

This manuscript describes a method to measure bacterial binding to axenic plant surfaces in the light microscope and through the use of viable cell counts. Plant materials used include roots, sprouts, leaves, and cut fruits. The methods described are inexpensive, easy, and suitable for small sample sizes. Binding is measured in the laboratory and a variety of incubation media and conditions can be used. The effect of inhibitors can be determined. Situations that promote and inhibit binding can also be assessed. In some cases it is possible to distinguish whether various conditions alter binding primarily due to their effects on the plant or on the bacteria.

An easy method for measuring and characterizing bacterial adhesion to plants, particularly roots and sprouts, is described in this article.

Laboratuvarda ölçmek yüzeyler bitki bakterilerin bağlılık

This manuscript describes a method to measure bacterial binding to axenic plant surfaces in the light microscope and through the use of viable cell ...

Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and estimating fish abundance. We developed and implemented a rotating stereo-video camera tool that covers a full 360 degrees of sampling, which maximizes sampling effort compared to stationary camera tools. A variety of studies have detailed the ability of static, stereo-camera systems to obtain highly accurate and precise measurements of fish; the focus here was on the development of methodological approaches to quantify fish density using rotating camera systems. The first approach was to develop a modification of the metric MaxN, which typically is a conservative count of the minimum number of fish observed on a given camera survey. We redefine MaxN to be the maximum number of fish observed in any given rotation of the camera system. When precautions are taken to avoid double counting, this method for MaxN may more accurately reflect true abundance than that obtained from a fixed camera. Secondly, because stereo-video allows fish to be mapped in three-dimensional space, precise estimates of the distance-from-camera can be obtained for each fish. By using the 95% percentile of the observed distance from camera to establish species-specific areas surveyed, we account for differences in detectability among species while avoiding diluting density estimates by using the maximum distance a species was observed. Accounting for this range of detectability is critical to accurately estimate fish abundances. This methodology will facilitate the integration of rotating stereo-video tools in both applied science and management contexts.

We describe a new method for counting fishes, and estimating relative abundance (MaxN) and fish density using rotating stereo-video camera systems. We also demonstrate how to use distance from camera (Z distance) to estimate species-specific detectability.

Sualtı Stereo video araçları kullanarak balık yoğunluğu miktarının için yeni yöntemler geliştirilmesi

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly relevant as a model for the studies of osmoregulatory mechanisms because of its extreme tolerance to low salinity. It is also widely used as a model of settling biology, in particular in relation to antifouling research. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae for studies. A protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus has been developed and a detailed description of all steps in the production line is outlined (i.e., the establishment of adult cultures on panels, the collection and rearing of barnacle larvae, and the administration of feed for adults and larvae). The description also provides guidance on troubleshooting and discusses critical parameters (e.g., the removal of contamination, the production of high-quality feed, the manpower needed, and the importance of high-quality seawater). Each batch from the culturing system maximally yields roughly 12,000 nauplii and can deliver four batches in a week, so up to almost 50,000 larvae per week can be produced. The method used to culture B. improvisus is, probably, to a large extent also applicable to other marine invertebrates with free-swimminglarvae. Protocols are presented for the dissection of various tissues from adults as well as the production of high-quality RNA for studies on gene expression. It is also described how cultured adults and reared cyprids can be utilized in a wide array of experimental designs for examining gene expression in relation to external factors. The use of cultured barnacles in gene expression is illustrated with studies of possible osmoregulatory roles of Na+/K+ ATPase and aquaporins.

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is a model for studying osmoregulation and antifouling. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae. Here, a protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus is described, including the production of larvae. The use of cultured barnacles in gene expression studies is illustrated.

Deniz bir Model - olarak Barnacle Balanus improvisus kültür ve gen ekspresyonu

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...