We thank James Maeda and Aaron Cooke for assistance with the filming and editing of this video. Funding was provided by the National Science Foundation (OCE-0550468, 1029515).

הערה: שלב 3 של פרוטוקול זה כרוך נושאי בעלי חיים בעלי חוליות. ההליך תוכנן כך שבעלים חיים מקבלים הטיפול ההומני ביותר אפשריות ואושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) באוניברסיטת צפון קרוליינה ווילמינגטון. 1) הפקת רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ברקמות שנמצאות במצב הטבעי של לחות ולא לחץ, מיובש או מדי רטובה כמו זה יהיה לשנות את ריכוז הנפח של מטבוליטים משתיים. לחתוך או לקצוץ רקמה לחתיכות או פרוסות שיכולות להיות מוכנסת לתוך צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר. הערה: רקמה טרי ניתן להשתמש בחלק ממקרים, אבל זה לעתים קרובות יותר כדי לחתוך או לקצוץ רקמה קפוא, שאינה כפוף לסחיטה כאשר חתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף חתיכות רקמה 30 מיליליטר של 1: 1 תערובת של dichloromethane (DCM) ומתנול (MeOH) בצינור צנטריפוגות סיים עד נפח סופי של 40 מיליליטר הוא הגיע. הקפד לבצע את כל השלבים כרוכים בהעברהממס במנדף עם אוורור מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שווי הצינור ולהפוך אותו כמה פעמים, ואז להתסיס שוב ושוב במהלך תקופת חילוץ 4 שעות. הערה: בתקופה זו, מים משלבים עם MeOH וMeOH וכתוצאה מכך: שלב מים מפריד בין שלב DCM. הרקמה חשופה לסירוגין לDCM וMeOH: מים כתחליב כצינורות נסערים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את תמצית DCM לבקבוק מסביב לתחתית ולהתאדות עד יובש על מאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (&lt;40 ° C). שימוש בממס מינימאלי, להעביר את התמצית יבשה לבקבוקון נצנץ 20 מיליליטר. התאם את הבקבוקון עם מתאם מאייד סיבובי ושוב להתאדות ליובש במאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (&lt;40 ° C). הערה: השלב הבא מחייב שימוש במכשיר דחיסת תוצרת בית שעשוי להיות מורכב על ידי הברגה את הפריטים הבאים לפי סדר על סוף המוט מושחל: (1) אגוז, (2) ומכונת כביסה, ו- (3) אגוז בלוט. או מכונת הכביסה חייבת להיות או מחוררתמצויד כך שזה פחות מהקוטר הפנימי של צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוזר לצינור צנטריפוגות סיים המכיל רקמות וMeOH: תמצית המים, לסחוט את מדיום החילוץ מתוך הרקמה באמצעות דחיסה. העבר את MeOH: תמצית מים לאותו בקבוק עגול התחתון ולאחסן מצונן (&lt;10 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף MeOH לצינור צנטריפוגות סיים עד הרקמה עכשיו מיובשת היא שקועה לחילוץ שני של 2-6 משך שעה, ולאחר מכן להעביר MeOH החדשה לחלץ לבקבוק מסביב לתחתית המצונן המכיל MeOH: תמצית המים. אם יש חשש שהרקמה לא חולצו באופן מלא, לחזור על 2-6 שעות חילוץ MeOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתנגב MeOH על מאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (&lt;40 ° C). העבר את התמצית המימית שנותרה מהבקבוק העגול תחתונה לבקבוקון הנצנץ המכיל את התמצית הפולרית המיובש, באמצעות נפח מינימאלי של MeOH לשטוף את הבקבוק העגול התחתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Evaporate התמצית המימית ליובש באמצעות חום נמוך (&lt;40 ° C) על רכז ואקום. בקבוקון הנצנץ עכשיו מכיל תמצית הכוללת היבשה אורגנית הגולמי של 10 מיליליטר של רקמה. לפנות את שטח הראש של הבקבוקון עם N 2 גז כדי למנוע חמצון, לאטום היטב, וחנות קפוא (-20 ° C). </li></ol> 2) הכנת מזון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אבקת מעטפת דיונון המיובש בהקפאה. הערה: מעטפת קלמארי מספקת מקור של תזונה שהוא דומה לזה של חסרי חוליות אחרות של קרקעית ים, וישמש כמרכיב בsubsteps של 2.2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טבעות קפוא הפשרה של מעטפת דיונון במים ללא יונים חמים (DI), ואז רסק אותם בבלנדר במהירות גבוהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שפכו שכבה דקה של מעטפת דיונון מחיה על נייר אפייה רדודה והקפאה (-20 ° C), ואז לשבור את גיליון של פירה דיונון הקפוא לחתיכות קטנות כדי להיות lyophilized. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Lyophilize פירה מעטפת דיונון הקפוא הבאים נהלי ההפעלה של freeze-יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכתוש את חתיכות lyophilized של פירה מעטפת דיונון בבלנדר במהירות גבוהה כדי ליצור אבקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> , במנדף לשפוך מעטפת דיונון האבקה לתוך נפת קמח סיבובית ולנפות להפריד נתחים גדולים של רקמה מהאבקה דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את מעטפת דיונון אבקת הקנס למכל סגר. לפנות את שטח ראש המכל עם N 2 גז כדי למנוע חמצון ולאחסן קפוא (-20 ° C). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את תערובת מזון. הערה: בעת הפעלת מבחני רצופים מרובים, זה מעשי להכין ~ של תערובת מזון 100 מיליליטר, אולם המתכון הזה יכול להיות מדורגים לכמויות קטנות יותר במידת צורך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלב תערובת של חומצת alginic 3 g ואבקת 5 גרם מיובשת הקפאת דיונון מעטפת עם המים DI 100 מיליליטר בכוס 150 מיליליטר. מערבבים נמרצות עם microspatula במשך כמה דקות עד שהאבקה היא התייבשות באופן מלא וקבלת התערובת הומוגנית. הערה: אם תרצה, צבעי מאכל ניתן להוסיף בst זהep: קל יותר להוסיף צבע לתערובת המזון שתפיק שני תערובות השליטה טופלו ו( מיסוך פיגמנט הטבעי של התמצית בתערובת שטופלה תמצית) ולא מנסה להתאים את הצבע של התערובת שטופלה על ידי הוספת התמצית לצבוע לתערובת השליטה. צבע מזון ירקרק או חום הוא לעתים קרובות רצוי כדי להסוות כל פיגמנטים בתמצית הגולמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטעון מיליליטר בדיוק 10 של תערובת מזון למזרק סיים. תשמור על עצמך, כדי למנוע את הכללתו של בועות אוויר בתהליך זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בקבוקון נצנץ 20 מיליליטר עם תמצית אורגנית גולמי יבשה מהמקפיא. הוסף טיפה או שתיים של MeOH, מוסיף התמצית לתוך תערובת הומוגנית עם microspatula. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא את מזרק 10 מיליליטר הטעון של מטריצת מזון לבקבוקון נצנץ 20 מיליליטר ומערבבים עם microspatula לhomogenize תערובת מזון שטופל תמצית. הערה: זה עשוי לעזור כדי להוציא את המזרק במרווחים קטנים יותר (כלומר, להוציא 2 מיליליטר וhomogenize, אז r.EPEAT עד שכל 10 מיליליטר כבר הומוגני). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כדורי assay. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטעון נפח קטן מאוד של תערובת התמצית (~ 1 מיליליטר) לתוך מזרק, ולהטביע את קצה המזרק בתמיסה של 0.25 M CaCl 2. הוצא את תכולת המזרק כדי ליצור גדיל ארוך, כמו ספגטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כמה דקות, להסיר את הגדיל הקשוח, לקצוץ אותו לכדורים ארוכים 4 מ&quot;מ בחיתוך זכוכית לוח עם סכין גילוח, ולאחר מכן לשטוף במי ים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.3.1 ו2.3.2 ללא כולל תמצית רקמה לעשות כדורי שליטה. הקפד לטפל כדורי שליטה עם נפח שווה של ממס (ראה תוספת של MeOH לתערובת טופלה בשלב 2.2.3) כדי לשלוט על בנוסף ממס. אם ביקורת שלילית היא רצויה כדי לאשר שדגי assay יכולים להירתע מהאכלה, להוסיף בנזואט denatonium בריכוז של 2 מ&quot;ג מיליליטר -1 לתערובת המזון הגולמית 27. </li></ol></li></ol> 3) את הטעםBioassays <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע מבחני האכלה עם wrasse הניצוד צהוב-שלב bluehead, bifasciatum Thalassoma, המשיך בקבוצות של שלושה בתאים אטומים-צדדיים של אקווריום מעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק כדורי מזון מכוס של מי ים בעזרת פיפטה זכוכית עם הנורה גומי. הערה: זה עלול לקחת כמה ימים כדי להכשיר דגים לקבל מזון בצורה זו. גירוי אוויר (למשל כמה דפיקות של פיפטה על זכוכית האקווריום) שמקדים את המסירה של מזון עשוי להיות מועיל להכשיר את הדג לצפות תוספת של כדורי מזון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניקוד כדורים. לשקול גלולה מקובלת אם נצרך בקלות על ידי הדגים. לשקול גלולה דחתה אם לא אכל לאחר מינימום של שלושה ניסיונות של דג אחד או יותר כדי לקחת אותו לחלל הפה שלהם, או אם גלולה הוא התקרב והתעלמה אחרי ניסיון אחד כזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות ניקוד. הערה: הליך assay מתואר כתרשים זרימה באיור 1 קבוצות של דגים שמסרבים לאכול.כדורי שליטה בשלב כלשהו בפרוטוקול אינם נחשבים נוסף. ישנן שתי תוצאות אפשריות של ריצה אחת של assay: המדגם או האם לאשר או לדחות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל עם גלולה שליטה כדי לוודא שהקבוצה של דגים היא שיתופית. להציע גלולה שטופלה. אם הדגים קיבלו את הכדור טופל, להבקיע המדגם כמקובל. אם הדגים לדחות את גלולה טופלה, להציע גלולה שליטה שלאחר מכן כדי לקבוע אם הדגים הפסיקו האכלה. אם הדגים קיבלו את כדור שליטה שלאחר מכן, להבקיע המדגם נדחה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכפול. חזור על הליך assay עם עשר קבוצות עצמאיות של דגים לכל תמצית. </li></ol> 4) משמעות הערכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את החשיבות של הבדלים בצריכה של שליטה לעומת כדורים שטופלו בגרסה שונה של המבחן המדויק של פישר 26. שנה את הבדיקה כדי שהסיכומים השוליים לשליטה וכדורים טופלו קבועים, טיפול בשניהם דגימות אקראיות. הערה: זה מספק p = 0.057, כאשר 7 כדורים נאכלים; לכן, כל תמצית נחשבת הרתעה אם 6 או פחות כדורים נאכלים, וטעים אם 7 או יותר כדורים נאכלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשוות את הטעם היחסי בקרב קבוצות של תמציות, לחשב מספר ממוצע של כדורים אכלו בתוך כל קבוצה. שמור את הסף בשעה 6 כדורים כל כך קבוצה של תמציות לשכפל נחשבות הרתעה אם המספר הממוצע של כדורים אכל + שגיאה סטנדרטית (SE) ≤6. הערה: תמציות בתוצאות הנציג, משימת הקבוצה היא מינים, כך לשכפל מגיעות מאנשים שונים ואת הטעם ביחס ניתן להשוות בין מינים. </li></ol>

<ol>
	<li>Paul, V. J., ed, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological roles of marine natural products. , (1992).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+invertebrate+chemical+defenses.">Marine invertebrate chemical defenses.</a> Chemical Reviews. 93 (5), 1911 (1993).</li><li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+chemical+ecology:+what&#39;s+known+and+what&#39;s+next.">Marine chemical ecology: what&#39;s known and what&#39;s next.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).</li><li>McClintock, J. B., Baker, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Marine Chemical Ecology. , (2001).</li><li>Amsler, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Algal Chemical Ecology. , (2008).</li><li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+chemical+ecology:+Chemical+signals+and+cues+structure+marine+populations,+communities,+and+ecosystems.">Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems.</a> Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+ecology+of+sponges+on+Caribbean+reefs:+Natural+products+shape+natural+systems.">The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems.</a> BioScience. 61 (11), 888 (2011).</li><li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antipredatory+Defensive+Roles+of+Natural+Products+from+Marine+Invertebrates.">Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates.</a> Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).</li><li>Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+Chemical+Ecology:+A+Science+Born+of+Scuba.+.">Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. .</a> Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).</li><li>Randall, J. E., Hartman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sponge-feeding+fishes+of+the+West+Indies.">Sponge-feeding fishes of the West Indies.</a> Marine Biology. 1, 216-225 (1968).</li><li>Bakus, G. J., Green, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+in+sponges+and+holothurians+&#8212;+geographic+pattern.">Toxicity in sponges and holothurians &#8212; geographic pattern.</a> Science. 185, 951-953 (1974).</li><li>Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish.+1.+Chemical+deterrency.">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency.</a> Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).</li><li>Schulte, B. A., Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+deterrence+in+marine+sponges+&#8212;+laboratory+versus+field+studies.">Predation deterrence in marine sponges &#8212; laboratory versus field studies.</a> Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).</li><li>Jackson, J. B. C., Buss, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allelopathy+and+spatial+competition+among+coral+reef+invertebrates.">Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).</li><li>Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+mechanisms+on+the+great+barrier+reef.">Chemical defense mechanisms on the great barrier reef.</a> Australia. Science. 211, 497-499 (1981).</li><li>Gemballa, S., Schermutzki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+haplosclerid+sponges+preferred:+a+field+study+on+the+diet+of+the+dotted+sea+slug+Peltodoris+atromaculata+(doridoidea:+nudibranchia).">Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia).</a> Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).</li><li>Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relating+species+traits+to+environmental+variables+in+Indonesian+coral+reef+sponge+assemblages.">Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages.</a> Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).</li><li>Mollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+promoting+marine+invasions:+a+chemolecological+approach.">Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).</li><li>Randall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+habits+of+reef+fishes+of+the+West+Indies.">Food habits of reef fishes of the West Indies.</a> Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).</li><li>O'Neal, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reappraisal+of+the+chemical+and+physical+defenses+of+Caribbean+gorgonian+corals+against+predatory+fishes.">A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes.</a> Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).</li><li>Hines, D. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+antipredatory+defensive+strategies+of+Caribbean+non-scleractinian+zoantharians+(Cnidaria):+is+the+sting+the+only+thing.">Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing.</a> Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).</li><li>Walters, K. D., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+there+a+trade-off+between+wound-healing+and+chemical+defenses+among+Caribbean+reef+sponges.">Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges.</a> Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).</li><li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+resource+trade-off+between+growth+and+chemical+defenses+among+Caribbean+coral+reef+sponges.">Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges.</a> Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).</li><li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+reproductive+patterns+among+7+Caribbean+sponge+species+does+not+reveal+a+resource+trade-off+with+chemical+defenses.">Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).</li><li>Pawlik, J. R., Loh, T. -. L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sponge+Communities+on+Caribbean+Coral+Reefs+Are+Structured+by+Factors+That+Are+Top-Down,+Not+Bottom-Up.">Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up.</a> PLoS ONE. 8 (5), e62573 (2013).</li><li>Loh, T. -. L., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defenses+and+resource+trade-offs+structure+sponge+communities+on+Caribbean+coral+reefs.">Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).</li><li>Miller, A. M., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+coral+reef+fish+learn+to+avoid+unpalatable+prey+using+visual+cues.">Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues.</a> Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).</li><li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+re-evaluation+of+the+ichthyodeterrent+role+of+prostaglandins+in+the+Caribbean+gorgonian+coral,+Plexaura+homomalla.">A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla.</a> Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).</li><li>Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensive+properties+of+secondary+metabolites+from+the+Caribbean+gorgonian+coral+Erythropodium+caribaeorum.">Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum.</a> Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).</li><li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+Pterogorgia+anceps,+a+Caribbean+gorgonian+coral.">Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral.</a> Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+skeleton+of+a+sponge+provide+a+defense+against+predatory+reef+fish.">Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish.</a> Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+the+Caribbean+sponge+Agelas+clathrodes+(Schmidt).">Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt).</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).</li><li>Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+defense+of+the+Caribbean+reef+sponge+Axinella+corrugata+against+predatory+fishes.">Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes.</a> Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).</li><li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish+II.+Spicules,+tissue+toughness,+and+nutritional+quality.">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality.</a> Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).</li><li>Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphitoxin,+a+new+high+molecular+weight+antifeedant+pyridinium+salt+from+the+Caribbean+sponge+Amphimedon+compressa.">Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa.</a> Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).</li><li>Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., K&#246;ck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).</li><li>Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+antifeedant+triterpene+glycosides+from+the+Caribbean+sponge+Erylus+Formosus.">New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus.</a> Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).</li><li>Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+odor+from+sponges+of+the+genus+Ircinia+protect+them+from+fish+predators.">Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators.</a> Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).</li><li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defenses+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+I.+Assays+with+hermit+crabs.">Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).</li><li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defense+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+II.+Assays+with+sea+stars.">Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).</li><li>Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+anti-predatory+defenses+of+Red+Sea+and+Caribbean+sponges.+I.+Chemical+defense.">Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense.</a> Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).</li><li>Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+defensive+synergy+in+Caribbean+sponges:+Bad+taste+or+glass+spicules.">Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67 (2005).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

ההליך המתואר במסמך זה מספק פרוטוקול פשוט יחסית, רלוונטי מבחינה אקולוגית מעבדה להערכת הגנות כימיות antipredatory ביצורים ימיים. כאן אנו סוקרים את הקריטריונים החשובים שמרוצים מקבוצה זו של שיטות: (1) הטורף מתאים. Assay זה ההאכלה מעסיק wrasse bluehead, bifasciatum Thalassoma, אחד מהדגים הנפוצים ביותר על שוניות אלמוגים ברחבי האיים הקאריביים. Bluehead הוא טורף generalist הידוע לדגום מגוון רחב של חסרי חוליות של קרקעית ים 19. טורפי Generalist הם הבחירה הטובה ביותר עבור מבחני הראשוניים אלה משום שרוב דגי טורפים על שוניות הם generalists, וזה שניתן היה לצפות כי ההגנות antipredatory תופנינה באופן כללי נגדם, בניגוד לטורפים מומחה שעשוי היה להתפתח מנגנונים לעקוף את ההגנות. סקרי מעבדה של הגנות כימיות באמצעות טורף פוטנציאלי יחיד הם שלעשר ואחריו עוד ניסויי זמן רבים ומסובך שדה המסתמכים על התגובות של השלמה מלאה של טורפים פוטנציאליים בתנאי שדה 28-33. (2) הליך הפקה. צעד מיצוי הרקמה הראשון, אשר עושה שימוש בתערובת ממס של dichloromethane שווה חלקים (DCM) ומתנול (MeOH), במהירות מחלחל רקמה, solubilizing קרומים והתייבשות חומר תאי. הרקמה היא מיובשת לאחר שלב זה, כך השלבים הבאים לחלץ מטבוליטים הנותרים של כל הקטבים בMeOH. חוזר על החילוץ בMeOH עד הרקמה מופק באופן מלא מהווה הליך מיצוי ממצה. הבדלים מזעריים בתכנית חילוץ זה מקובלים, כגון החלפה של ממס חילוץ אחד לאחר מאותו הקוטביות, אבל מיצוי רקמה עשוי להיות חלקי אם נעשה שימוש בממס שאינו הולם. חסרונות פוטנציאליים של נהלי חילוץ רקמה לא תקינה הם דנו בפירוט במקום אחר &lt;sup&gt; 8. הכנת מזון ניסיוני (3). מטריצת המזון המלאכותית חייבת לדמות את הרקמות של האורגניזם היעד הן באיכות והריכוז של מטבוליטים משתיים התזונתיות. סביר להניח כי אותם התהליכים חושיים שטורפים להשתמש בו כדי לדחות מטבוליטים האכלה-הרתעה גם מעורבים בתפיסת האיכות התזונתית של מזון. מזונות עם איכות תזונתית נמוכה עשויים להידחות ברמות נמוכות בהרבה של הגנה כימית, ולחלופין, מטבוליטים משניים יכולים להיות רק הרתעה בריכוזים גבוהים מטבעי אם מטבוליטים אלה מופיעים במזון מלאכותי שהוא מזין יותר מהרקמה שממנו זה נגזר. מעטפת של האבקה, מיובשת בהקפאת דיונון היא תחליף תזונתי מועיל משום שהוא זמין, קל למדידה, והמאפיינים התזונתיים שלה כבר נקבעו 34. השיקול השני בהכנה<html> מזון ניסיוני נוגע לקביעת הריכוז של התמצית, אשר חייב להיעשות על בסיס הנפח, לא המוני. טורפים לאכול רקמות רטובות, והרקמות של יצורים ימיים להשתנות במידה רבה בתוכן מים. מנקודת המבט של טורף, נשיכה של כלנית מדוזה או ים הייתה להכיל באופן משמעותי יותר מים למסה יבשה יחידה מאשר אותו הביס בגודל של קליע דיונון או ים. לרקמות hydrated מאוד, הריכוז של המטבוליט ליחידת מסה יבשה יהיה גבוה בהרבה ליחידת נפח, אבל נפח (עקיצות) הוא המדד שהוא רלוונטי מבחינה אקולוגית. יתר על כן, רקמות של יצורים ימיים יכולות להיות צפיפויות שונות מאוד בגלל אלמנטי שלד מינרלים. קביעת ריכוז המטבוליט לפי נפח פותרת את שני הבעיות והיא המדד הרלוונטי ביותר מנקודת המבט של הצריכה של רקמה על ידי טורף פוטנציאלי. נושא זה, כולל דוגמאות מהספרות, נדון בפירוט במקום אחר 8. .. תוכן &quot;&gt; (4) עיצוב ניסיוני וגישה סטטיסטית תכנון ניסוי מתאים וניתוחים סטטיסטיים של נתונים חשובים למבחני התנהגות כמו לכל מחקר מדעי אחר שיש בו קביעת החשיבות של הבדלים בתוצאות ניסוי הניתוח המתוארים כאן הוא פשוט: הבדלים נקבעים עם שולחן מגירה שונה. השיטה דורשת שכל הנפקות מזון השליטה לצרוך משום שהחוקר לא ישתמש טורפים ניסיוניים שלא להאכיל במזון שליטה 8. למרות שימוש המבחן המדויק של פישר שונה משלה ראשוני להשתמש בPawlik et al. 12, ערך הסף של 6 כדורים טופלו אכל נותר ללא שינוי. במרוצת השנים, מבחנים סטטיסטיים אחרים כבר הציעו כתחליף, אבל נזרקו לאחר התייעצות עם משתף פעולה ג&#39;יימס א &#39;בלום (UNCW מחלקה למתמטיקה וסטטיסטיקה ). לדוגמא, הבדיקה של McNemar כבר הציעה,אבל הוא לא מתאים, הן משום שאין לו סט תואם של נתונים, וכי שורה אחת של השולחן המגירה קבועה בכדורי 10 שליטה אכל. למרות הניסיון שלנו ששיטת assay זה מספק תוצאות ברורות להפליא, בכל זאת מסתמכת על תגובה התנהגותית. אם דגים רעבים לתקופה של זמן עד שassay, הם עלולים לאכול כדורים טופלו יותר ממה שהם הייתם אם דגים הואכלו היטב, במיוחד אם המטבוליט הגנתי נוכח בכדורי המזון שטופלו בריכוז ליד-סף של פעילות. מסיבות אלה, תוצאות של מבחני האכלה לא צריכים להיות פרשו מעל. לדוגמא, הבדל בין שתי דגימות רקמה של 1/10 לעומת 9/10 כדורים אכלו מציין את הדוגמא הראשונה היא הרתעה והשנייה הוא לא, אבל הבדל של 3/10 vs 5/10 כדורים אכלו יכול להיות בגלל וריאציה התנהגות בין מבחני, והדוגמא הראשונה הוא לא בהכרח יותר הרתעה מאשר השני. Applicat מפתחיון של המבדק זה הוא השימוש בו בחלוקה מודרכת המבדק, לפיה מחיצות רצופות של התמצית הגולמי נבדקות על דגים כדי לבודד את התרכובות כימיות אחראית לפעילות האכלה-ההרתעה 29,32-33,35-38. ברגע שהנוכחות של הגנה כימית כבר הובררה, התמצית האורגנית הגולמי מופרדת chromatographically לקבוצות משנה קטנה יותר של תרכובות המרכיבות את התערובת, ותת אלה מוזנים לדוג באותו assay ההאכלה. שוב, זה צריך להיעשות על בסיס נפח, באמצעות &quot;שווה מיליליטר&quot; של תמצית רקמה ולא שווה המוני. כתמורת הפרדה, שברים הם assayed הטוב ביותר בהמשכי דילול ביחס לריכוז הנפח הטבעי: 4 ×, 2 ×, ו1 ×. תוחלת זו של ריכוזים לוקחת בחשבון את ההפחתה הצפויה בפעילות הרתעה שמגיעה מפיצול מטבוליטים הפעילים ב שניים או יותר שברי chromatographic או מאובדן של מטבוליטים פעילים throuפירוק, תגובה, או קובץ מצורף GH לזיהוי תכונות תקשורת. ברגע שמטבוליטים הפעילים היו מבודדים על ידי חלוקה מודרכת המבדק, החוקר עשוי לזהות אותם תוך שימוש בטכניקות ספקטרוסקופיות סטנדרטיים וגם צריך לעשות את אותו הדבר לשברים פעילים אשר עשוי להיות לי מטבוליטים משניים. זה חשוב לא פחות לדעת שמשני מטבוליטים פעילים בניסויים רלוונטיים מבחינה אקולוגית כלדעת שמטבוליטים אינם 8. גם אלמנטים של הליך זה עשויים לשמש לעיצוב ניסיוני בטכניקות חדשות. לדוגמא, המבדק זה הותאם לטורפים חסרי חוליות (למשל סרטני 39 וseastars 40), לאזורים גיאוגרפיים אחרים 41, ואף להתייחס לשאלות מחקר אחרות (למשל הגנות מבניות 31,34,42 וצבעי אזהרה 27). ארבעה קריטריונים צריכים לשמש כמדריך לעיבודים עתידיים של שיטה זו. לסיכום, יחסי ציבור הליך המבדק זהovides יותר מבחינה אקולוגית רלוונטי שיטה להערכת הגנות כימיות antipredatory מרקמות של יצורים ימיים. מחקרים באמצעות הליך זה קידמו את ההבנה של הגורמים המשפיע על התפוצה והשפע של חסרי חוליות ימיות על שוניות אלמוגי האיים הקריביים (למשל לאחרונה, Loh וPawlik 26) חקירות ועשויות להודיע ​​בתחומים מגוונים של חקירה, כוללים פרמקולוגיה, ביוטכנולוגיה, ושלנו אקולוגיה אבולוציונית.

אקולוגיה כימית שפותחה באמצעות שיתוף הפעולה של כימאים ואקולוגים. בעוד subdiscipline אקולוגיה כימית יבשתית בסביבה כבר זמן מה, זה של אקולוגיה כימית הימית הוא רק בן כמה עשרות שנים, אך סיפק תובנות חשובות מבנה האקולוגיה והקהילה האבולוציונית של יצורים ימיים 1-8. מנצל את הטכנולוגיות המתהוות של צלילה וספקטרוסקופיה NMR, כימאים אורגניים במהירות שנוצרו מספר רב של פרסומים המתארים רומן מטבוליטים מחוליות ימיות של קרקעית ים ואצות בשנתי ה -1970 ו -1980 9. בהנחה שמטבוליטים משניים צריכים לשרת כמה מטרות, שרבים מהפרסומים אלה מיוחסים מבחינה אקולוגית תכונות חשובות לתרכובות חדשות ללא ראיות אמפיריות. בערך באותו הזמן, אקולוגים היו גם מנצלים את כניסתו של צלילה ומתארים את ההפצות ושכיחותם של בעלי חיים וצמחים של קרקעית ים הידוע בעבר הלוך ושובמ &#39;שיטות דגימה יחסית לא יעילות כמו חפירה. ההנחה של חוקרים אלה הייתה שכל דבר הנייח ורך-גוף חייב להיות מוגן כימי כדי למנוע הצריכה על ידי טורפים 10. במאמץ להציג את האמפיריציזם למה שהייתה עבודה אחרת תיאורים על שכיחות מינים, כמה אקולוגים החלו אקסטרפולציה הגנות כימיות ממבחני רעילות 11. רוב מבחני הרעילות מעורבים החשיפה של דג שלם או אורגניזמים אחרים להשעיות מימיות של תמציות אורגניות גולמיים של רקמות חסרי חוליות, בנחישות הבאה של ריכוזי מסה היבש של תמציות אחראים להריגת מחצית אורגניזמים assay. עם זאת, מבחני רעילות לא לחקות את האופן שבו תופסים את טרף טורפים פוטנציאליים בתנאים טבעיים, ומחקרים עוקבים לא מצאו קשר בין רעילות ואת הטעם 12-13. אין זה מפתיע כי פרסומים בכתבי עת יוקרתיות השתמשו בטכניקות שיש ecologica קטן או לארלוונטי l 14-15 והיום שמחקרים אלה עדיין מצוטטים בהרחבה. זה אפילו יותר מדאיג לציין כי מחקרים המבוססים על נתונים רעילות יוסיפו להתפרסם 16-18. שיטת המבדק המתוארת כאן פותחה בשלהי 1980 על מנת לספק גישה רלוונטית מבחינה אקולוגית לאקולוגים כימיים ימיים להעריך הגנות כימיות antipredatory. השיטה דורשת טורף מודל לדגום תמצית אורגנית גולמי מאורגניזם היעד בריכוז טבעי במטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית, המספקת נתונים את הטעם, כי הם יותר מבחינה אקולוגית משמעותית מנתוני רעילות. הגישה הכללית להערכת פעילות antipredatory של הרקמות של יצורים ימיים כוללת ארבעה קריטריונים חשובים: (1) טורף generalist מתאים יש להשתמש במבחני האכלה, (2) מטבוליטים אורגניים של כל הקטבים חייבים להיות מופקים באופן ממצה מהרקמות של יעד האורגניזם, (3) מטבוליטים חייבים bהדואר מעורב לתוך מזון ניסוי מתאים מבחינה תזונתית באותו הריכוז הנפח כפי שנמצא באורגניזם שממנו הם מופקים, ו- (4) עיצוב הניסיון והגישה סטטיסטית חייבים לספק משמעותי מטרי כדי לציין distastefulness היחסי. ההליך המתואר להלן תוכנן במיוחד כדי להעריך את ההגנות כימיות antipredatory בחסר חוליות ימיות באיים הקריביים. אנו מעסיקים wrasse bluehead, bifasciatum Thalassoma, כדגים טורפים מודל כי מין זה הוא נפוץ על שוניות אלמוגי האיים הקאריביים, והוא ידוע לדגום מגוון רחב של חסרי חוליות של קרקעית ים 19. רקמה מאורגניזם היעד מופק ראשונה, ולאחר מכן בשילוב עם תערובת מזון, ולבסוף הציעה לקבוצות של ט &#39; bifasciatum להתבונן אם הם דוחים את המזונות שטופל בתמצית. נתוני assay שימוש בשיטה זו סיפקו תובנות חשובות הכימיה ההגנתית של יצורים ימיים 12,20-21, lהיסטורית ife פשרות 22-24, ואקולוגיה קהילת 25-26.

<table><tbody><tr><td>Dichloromethane</td><td>Fisher Scientific</td><td>D37-20</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A41220</td><td></td></tr><tr><td>Anhydrous Calcium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>C614-500</td><td></td></tr><tr><td>Cryocool Heat Transfer Fluid</td><td>Fisher Scientific</td><td>20-548-146</td><td>For vacuum concentrator</td></tr><tr><td>Alginic Acid Sodium Salt High Viscosity</td><td>MP Biomedicals</td><td>154723</td><td></td></tr><tr><td>Squid mantle rings</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Can be purchased at grocery store</td></tr><tr><td>Denatonium benzoate</td><td>Aldrich</td><td>D5765</td><td></td></tr><tr><td>50 ml graduated centrifuge tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>20 ml scintillation vial</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-7</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Pasteur pipets</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>Rubber bulbs for Pasteur pipets</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-24</td><td></td></tr><tr><td>Red bulbs for pellet delivery</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-27</td><td></td></tr><tr><td>250 ml round-bottom flask</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-067E</td><td></td></tr><tr><td>Scintillation vial adapter for rotavap</td><td>Fisher Scientific</td><td>K747130-1324</td><td></td></tr><tr><td>Weightboats</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202B</td><td></td></tr><tr><td>Microspatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-401-10</td><td></td></tr><tr><td>5 ml graduated syringe</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-53</td><td></td></tr><tr><td>10 ml graduated syringe</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td><td></td></tr><tr><td>Razor blade</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17302</td><td></td></tr></tbody></table>

a fish-feeding laboratory bioassay to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with the goal of examining the ecological functions of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. The result has been a progression of protocols that have increasingly refined the ecological relevance of the experimental approach. Here we present the most up-to-date version of a fish-feeding laboratory bioassay that enables investigators to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. Organic metabolites of all polarities are exhaustively extracted from the tissue of the target organism and reconstituted at natural concentrations in a nutritionally appropriate food matrix. Experimental food pellets are presented to a generalist predator in laboratory feeding assays to assess the antipredatory activity of the extract. The procedure described herein uses the bluehead, Thalassoma bifasciatum, to test the palatability of Caribbean marine invertebrates; however, the design may be readily adapted to other systems. Results obtained using this laboratory assay are an important prelude to field experiments that rely on the feeding responses of a full complement of potential predators. Additionally, this bioassay can be used to direct the isolation of feeding-deterrent metabolites through bioassay-guided fractionation. This feeding bioassay has advanced our understanding of the factors that control the distribution and abundance of marine invertebrates on Caribbean coral reefs and may inform investigations in diverse fields of inquiry, including pharmacology, biotechnology, and evolutionary ecology.

כאן אנו מדווחים תוצאות המבדק זה במשך שישה מינים של ספוגים הקריביים נפוצים (איור 2). נתונים אלה בתחילה פורסמו בשנת 1995 על ידי Pawlik et al. 12 ולהפגין את כוחה של גישה זו לסקור את ההבדלים באסטרטגיות הגנה כימיות בין מיני שיתוף המתרחש. תוצאות דווחו כמספר ממוצע של כדורי מזון נאכלו + שגיאה סטנדרטית (SE) עבור כל מין. כמעט ולא כדורים נאכלו במבחנים עם תמציות אורגניות גולמיים מclathrodes Agelas, Amphimedon compressa, וcauliformis Aplysina. בניגוד לכך, פלטות עם תמציות מCallyspongia vaginalis, gibberosa Geodia, וMycale laevis נאכלו בקלות בassay 12. פחות משישה כדורים נאכלו במשך שלושה המינים הראשונים, ולכן הם נחשבו באופן משמעותי הרתעה. בניגוד לכך, שלושת המינים שני לא היו שונים באופן משמעותי מהבקרות, והיונחשב טעים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52429/52429fig1.jpg" /> איור 1:. סכמטי של הליך assay בכל השלבים, הדחייה של גלולה שליטה מצביעה על כך שזו קבוצה של דגי assay היא לא משתפת פעולה או שבעה ולא ניתן להשתמש בם עוד יותר. הפרוטוקול מתחיל על ידי מתן כל סט של דגי גלולה שליטה ואחרי גלולה שטופלה. בשלב הבא, אם גלולה המטופלים קיבלה את המדגם הוא הבקיע כמקובל. אם גלולה טופלה נדחתה אבל גלולה שליטה שלאחר מכן הוא קיבלה, המדגם הוא הבקיע כנדחה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52429/52429fig2.jpg" /> איור 2: הצריכה על ידי bifasciatum Thalassoma של כדורי מזון (ממוצע + SE) המכיל תמציות אורגניות גולמיים של ספוגים בריכוזים טבעיים, שפורסמו לראשונה בשנת 1995 על ידי Pawlik <eמ &#39;&gt; et al. 12 דגים צרכו את כל 10 כדורי שליטה בכל המקרים. אחרי כל שם מין, מספר הדגימות לשכפל מצוין (כל לשכפל ממיצוי הנפרד של מדגם שונה מבחינה גיאוגרפית של רקמה ספוג). לכל assay בודד, תמציות נחשבו הרתעה אם מספר כדורים אכלו היה פחות או שווה ל 6 (p = 0.057, שונו המבחן המדויק של פישר), כפי שצוינה על ידי הקו המקווקו בגרף.

Watch this Scientific Journal Video about A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms at JoVE.com

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

המבדק זה מעסיק דגים טורפים מודל כדי להעריך את הנוכחות של מטבוליטים האכלה-הרתעה מתמציות אורגניות של הרקמות של יצורים ימיים בריכוזים טבעיים באמצעות מטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית.

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

a-fish-feeding-laboratory-bioassay-to-assess-antipredatory-activity

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

9.4K Views.  University of North Carolina Wilmington.  המבדק זה מעסיק דגים טורפים מודל כדי להעריך את הנוכחות של מטבוליטים האכלה-הרתעה מתמציות אורגניות של הרקמות של יצורים ימיים בריכוזים טבעיים באמצעות מטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית. 

Video: A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Laboratory Estimation of Net Trophic Transfer Efficiencies of PCB Congeners to Lake Trout (Salvelinus namaycush) from Its Prey

A technique for laboratory estimation of net trophic transfer efficiency (&#947;) of polychlorinated biphenyl (PCB) congeners to piscivorous fish from their prey is described herein. During a 135-day laboratory experiment, we fed bloater (Coregonus hoyi) that had been caught in Lake Michigan to lake trout (Salvelinus namaycush) kept in eight laboratory tanks. Bloater is a natural prey for lake trout. In four of the tanks, a relatively high flow rate was used to ensure relatively high activity by the lake trout, whereas a low flow rate was used in the other four tanks, allowing for low lake trout activity. On a tank-by-tank basis, the amount of food eaten by the lake trout on each day of the experiment was recorded. Each lake trout was weighed at the start and end of the experiment. Four to nine lake trout from each of the eight tanks were sacrificed at the start of the experiment, and all 10 lake trout remaining in each of the tanks were euthanized at the end of the experiment. We determined concentrations of 75 PCB congeners in the lake trout at the start of the experiment, in the lake trout at the end of the experiment, and in bloaters fed to the lake trout during the experiment. Based on these measurements, &#947; was calculated for each of 75 PCB congeners in each of the eight tanks. Mean &#947; was calculated for each of the 75 PCB congeners for both active and inactive lake trout. Because the experiment was replicated in eight tanks, the standard error about mean &#947; could be estimated. Results from this type of experiment are useful in risk assessment models to predict future risk to humans and wildlife eating contaminated fish under various scenarios of environmental contamination.

Laboratory Estimation of Net Trophic Transfer Efficiencies of PCB Congeners to Lake Trout Salvelinus namaycush from Its Prey

A technique for laboratory estimation of net trophic transfer efficiency of polychlorinated biphenyl (PCB) congeners to piscivorous fish from their prey is presented. To maximize applicability of the laboratory results to the field, the piscivorous fish should be fed prey fish that are typically eaten in the field.

הערכת מעבדה של יעילות העברה הנקי התזונתית של קרוב בPCB לאגם פורל (<em&gt; Salvelinus namaycush</em&gt;) מטרפו

A technique for laboratory estimation of net trophic transfer efficiency (&#947;) of polychlorinated biphenyl (PCB) congeners to piscivorous fish from ...

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including Pristionchus pacificus display complex behaviors, the most striking of which is the predation of other nematode larvae. However, as these behaviors are absent in the model organism Caenorhabditis elegans, they have thus far only recently been described in detail along with the development of reliable behavioral assays 1. These predatory behaviors are dependent upon phenotypically plastic but fixed mouth morphs making the correct identification and categorization of these animals essential. In P. pacificus there are two mouth types, the stenostomatous and eurystomatous morphs 2, with only the wide mouthed eurystomatous containing an extra tooth and being capable of killing other nematode larvae. Through the isolation of an abundance of size matched prey larvae and subsequent exposure to predatory nematodes, assays including both "corpse assays" and "bite assays" on correctly identified mouth morph nematodes are possible. These assays provide a means to rapidly quantify predation success rates and provide a detailed behavioral analysis of individual nematodes engaged in predatory feeding activities. In addition, with the use of a high-speed camera, visualization of changes in pharyngeal activity including tooth and pumping dynamics are also possible.

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Behavioral assays provide powerful tools for understanding neuronal function. Here we present several protocols for quantifying predatory feeding behavior found in the model nematode Pristionchus pacificus and its relatives. Additionally, we provide methods for analyzing predatory feeding adaptations including mouth structures and teeth.

Assaying הרגלי התזונה הם טורפים ב<em&gt; Pristionchus</em&gt; נמטודות אחרים

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food webs. Toxicity testing based on microorganisms are widely used because they are relatively quick, reproducible, cheap, and are not associated with ethical issues. Here, we describe an ecotoxicological method to evaluate the biological response of the marine bacterium Vibrio anguillarum. This method assesses the acute toxicity of chemical compounds, including new contaminants such as nanoparticles, as well as environmental samples. The endpoint is the reduction of bacterial culturability (i.e., the capability to replicate and form colonies) due to exposure to a toxicant. This reduction can be generally referred to as mortality. The test allows for the determination of the LC50, the concentration that causes a 50% decrease of bacteria actively replicating and forming colonies, after a 6 h exposure. The culturable bacteria are counted in terms of colony forming units (CFU), and the &#34;mortality&#34; is evaluated and compared to the control. In this work, the toxicity of copper sulphate (CuSO4) was evaluated. A clear dose-response relationship was observed, with a mean LC50 of 1.13 mg/L, after three independent tests. This protocol, compared to existing methods with microorganisms, is applicable in a wider range of salinity and has no limitations for colored/turbid samples. It uses saline solution as the exposure medium, avoiding any possible interferences of growth medium with the investigated contaminants. The LC50 calculation facilitates comparisons with other bioassays commonly applied to ecotoxicological assessments of the marine environment.

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

This work describes a new protocol to assess the ecotoxicity of pollutants, including emerging contaminants such as nanomaterials, using the marine bacterium Vibrio anguillarum. This method allows for the determination of the LC50, or mortality, the concentration that causes a 50% decrease in bacteria culturability, after a 6 h exposure.

שיטה אקוטוקסיקולוגית עם חיידקים ימיים<em&gt; תזונת ויבריו</em&gt; כדי להעריך את רעילות חריפה של מזהמים סביבתיים

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and identification of an active pheromone compound. This method has resulted in the successful characterization of the chemical signals that function as pheromones in a wide range of animal species. Sea lampreys rely on olfaction to detect pheromones that mediate behavioral or physiological responses. We use this knowledge of fish biology to posit functions of putative pheromones and to guide the isolation and identification of active pheromone components. Chromatography is used to extract, concentrate, and separate compounds from the conditioned water. Electro-olfactogram (EOG) recordings are conducted to determine which fractions elicit olfactory responses. Two-choice maze behavioral assays are then used to determine if any of the odorous fractions are also behaviorally active and induce a preference. Spectrometric and spectroscopic methods provide the molecular weight and structural information to assist with the structure elucidation. The bioactivity of the pure compounds is confirmed with EOG and behavioral assays. The behavioral responses observed in the maze should ultimately be validated in a field setting to confirm their function in a natural stream setting. These bioassays play a dual role to 1) guide the fractionation process and 2) confirm and further define the bioactivity of isolated components. Here, we report the representative results of a sea lamprey pheromone identification that exemplify the utility of the bioassay-guided fractionation approach. The identification of sea lamprey pheromones is particularly important because a modulation of its pheromone communication system is among the options considered to control the invasive sea lamprey in the Laurentian Great Lakes. This method can be readily adapted to characterize the chemical communication in a broad array of taxa and shed light on waterborne chemical ecology.

Here, we present a protocol to isolate and characterize the structure, olfactory potency, and behavioral response of putative pheromone compounds of sea lampreys.

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Biochemistry

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Identification of Hemolytic and Phospholipase Activity in Crude Extracts from Sea Anemones by Straightforward Bioassays

Sea anemone venom composition includes polypeptide and non-proteins molecules. Cytolytic components have a high biotechnological and biomedical potential for designing new molecular tools. Sea anemone venom locates in glandular cells from ectoderm and sub-cellular structures called nematocysts, both of which are distributed throughout the sea anemone body. This characteristic implies challenges because the cells and nematocyst must be lysed to release the venom components with other non-toxic molecules. Therefore, first, the venom is derived from a crude extract (mixture of different and diverse molecules and tissue debris). The next step is to detect polypeptides with specific bioactivities. Here, we describe an efficient strategy to obtain the sea anemone crude extract and bioassay to identify the presence of cytolysins. The first step involves inexpensive and straightforward techniques (stirred and freeze-thaw cycle) to release cytolysins. We obtained the highest cytolytic activity and protein (~500 mg of protein from 20 g of dry weight). Next, the polypeptide complexity of the extract was analyzed by SDS-PAGE gel detecting proteins with molecular weights between 10 kDa and 250 kDa. In the hemolytic assay, we used sheep red blood cells and determined HU50 (11.1 &plusmn; 0.3 &#181;g/mL). In contrast, the presence of phospholipases in the crude extract was determined using egg yolk as a substrate in a solid medium with agarose. Overall, this study uses an efficient and inexpensive protocol to prepare the crude extract and applies replicable bioassays to identify cytolysins, molecules with biotechnological and biomedical interests.

Here, we describe a protocol to obtain crude venom extract from sea anemone and detect its hemolytic and phospholipase activity.

זיהוי פעילות המוליטית ופוספוליפאזה בתמציות גולמיות מתוך שושנות ים על ידי מאמרים ביו-אסים פשוטים

Sea anemone venom composition includes polypeptide and non-proteins molecules. Cytolytic components have a high biotechnological and biomedical potential ...

Lethality Bioassay Using Artemia salina L.

Natural products have been used since ancient times to produce medicines. Nowadays, there are plenty of chemotherapeutic drugs obtained from natural sources and used against a plethora of diseases. Unfortunately, most of these compounds often display systemic toxicity and adverse effects. In order to better evaluate the tolerability of selected potentially bioactive samples, brine shrimp (Artemia salina) is generally used as a model in lethality studies. The A. salina test is based on the ability of the studied bioactive compounds to kill the microcrustaceans in their larval stage (nauplii). This method represents a convenient starting point for cytotoxicity studies, as well as for the general toxicity screening of synthetic, semisynthetic, and natural products. It can be considered a simple, quick, and low-cost assay, compared to many other assays (in vitro cells or yeast strains, zebrafish, rodents) generally suitable for the aforementioned purposes; moreover, it can be easily performed even without any specific training. Overall, A. salina assay represents a useful tool for the preliminary toxicity evaluation of selected compounds and the bio-guided fractionation of natural product extracts.

Lethality Bioassay Using Artemia salina L.

This work aims to evaluate and review the Artemia salina lethality bioassay procedure, also identified as brine shrimp lethality assay. This simple and cheap method gives information about the general toxicity (considered as a preliminary toxicity evaluation) of samples, namely, natural products.

קטלניות ביואסאי באמצעות ארטמיה סלינה L.

Natural products have been used since ancient times to produce medicines. Nowadays, there are plenty of chemotherapeutic drugs obtained from natural ...

Chemistry

Avidity-based Extracellular Interaction Screening (AVEXIS) for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Extracellular protein:protein interactions between secreted or membrane-tethered proteins are critical for both initiating intercellular communication and ensuring cohesion within multicellular organisms. Proteins predicted to form extracellular interactions are encoded by approximately a quarter of human genes1, but despite their importance and abundance, the majority of these proteins have no documented binding partner. Primarily, this is due to their biochemical intractability: membrane-embedded proteins are difficult to solubilise in their native conformation and contain structurally-important posttranslational modifications. Also, the interaction affinities between receptor proteins are often characterised by extremely low interaction strengths (half-lives &lt; 1 second) precluding their detection with many commonly-used high throughput methods2. 
Here, we describe an assay, AVEXIS (AVidity-based EXtracellular Interaction Screen) that overcomes these technical challenges enabling the detection of very weak protein interactions (t1/2 &le; 0.1 sec) with a low false positive rate3. The assay is usually implemented in a high throughput format to enable the systematic screening of many thousands of interactions in a convenient microtitre plate format (Fig. 1). It relies on the production of soluble recombinant protein libraries that contain the ectodomain fragments of cell surface receptors or secreted proteins within which to screen for interactions; therefore, this approach is suitable for type I, type II, GPI-linked cell surface receptors and secreted proteins but not for multipass membrane proteins such as ion channels or transporters.
The recombinant protein libraries are produced using a convenient and high-level mammalian expression system4, to ensure that important posttranslational modifications such as glycosylation and disulphide bonds are added. Expressed recombinant proteins are secreted into the medium and produced in two forms: a biotinylated bait which can be captured on a streptavidin-coated solid phase suitable for screening, and a pentamerised enzyme-tagged (&beta;-lactamase) prey. The bait and prey proteins are presented to each other in a binary fashion to detect direct interactions between them, similar to a conventional ELISA (Fig. 1). The pentamerisation of the proteins in the prey is achieved through a peptide sequence from the cartilage oligomeric matrix protein (COMP) and increases the local concentration of the ectodomains thereby providing significant avidity gains to enable even very transient interactions to be detected. By normalising the activities of both the bait and prey to predetermined levels prior to screening, we have shown that interactions having monomeric half-lives of 0.1 sec can be detected with low false positive rates3.

Avidity-based Extracellular Interaction Screening AVEXIS for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

AVEXIS is a high throughput protein interaction assay developed to systematically screen for novel extracellular receptor-ligand pairs involved in cellular recognition processes. It is specifically designed to detect transient protein interactions that are difficult to identify using other high throughput approaches.

הלהיטות מבוסס אינטראקציה הקרנת תאיים (AVEXIS) לאיתור Scalable זיקה נמוכה קולטן ליגנד אינטראקציות תאיים

Extracellular protein:protein interactions between secreted or membrane-tethered proteins are critical for both initiating intercellular communication and ...

Biology

מקבץ בדיקות התנהגותיות להערכת השפעות נוירוטוקסיות בדגי זברה בוגרים

Neurotoxicity Assessment in Adult Danio rerio using a Battery of Behavioral Tests in a Single Tank

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. However, in the last 50 years, the effects of chemicals on the behavior of model species have been actively investigated. Progressively, behavioral endpoints were incorporated into neurotoxicological screening protocols, and these functional outcomes are now routinely used to identify and determine the potential neurotoxicity of chemicals. Behavioral assays in adult zebrafish provide a standardized and reliable means to study a wide range of behaviors, including anxiety, social interaction, learning, memory, and addiction. Behavioral assays in adult zebrafish typically involve placing the fish in an experimental arena and recording and analyzing their behavior using video tracking software. Fish can be exposed to various stimuli, and their behavior can be quantified using a variety of metrics. The novel tank test is one of the most accepted and widely used tests to study anxiety-like behavior in fish. The shoaling and social preference tests are useful in studying the social behavior of zebrafish. This assay is particularly interesting since the behavior of the entire shoal is studied. These assays have proven to be highly reproducible and sensitive to pharmacological and genetic manipulations, making them valuable tools for studying the neural circuits and molecular mechanisms underlying behavior. Additionally, these assays can be used in drug screening to identify compounds that may be potential modulators of behavior.
We will show in this work how to apply behavioral tools in fish neurotoxicology, analyzing the effect of methamphetamine, a recreational drug, and glyphosate, an environmental pollutant. The results demonstrate the significant contribution of behavioral assays in adult zebrafish to the understanding of the neurotoxicological effects of environmental pollutants and drugs, in addition to providing insights into the molecular mechanisms that may alter neuronal function.

מחבר זרקור: הערכה של שינויים סביבתיים והתנהגותיים הנגרמים על ידי תרופות בדגי זברה בוגרים 

Here, we present a comprehensive behavioral test battery, including the novel tank, Shoaling, and social preference tests, to effectively determine the potential neurotoxic effects of chemicals (e.g., methamphetamine and glyphosate) on adult zebrafish using a single tank. This method is relevant to neurotoxicity and environmental research.

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

הערכת מעבדה של יעילות העברה הנקי התזונתית של קרוב בPCB לאגם פורל (

Assaying הרגלי התזונה הם טורפים ב

שיטה אקוטוקסיקולוגית עם חיידקים ימיים